---
title: "\"Методические указания по лабораторной диагностике столбняка\""
issuer: "Министерство сельского хозяйства СССР"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/metodicheskie-ukazaniya-po-laboratornoy-minselhoz-sssr-ministerstvo-11"
---
## "Методические указания по лабораторной диагностике столбняка"
# "Методические указания по лабораторной диагностике столбняка"
(утв. Минсельхозом СССР 02.02.1983)
> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 N 02-03-48/563).
Утверждены
Главным управлением ветеринарии
Минсельхоза СССР
2 февраля 1983 года
**1. Общие положения.**
1.1. Столбняк - острая инфекционная болезнь животных, вызываемая токсином возбудителя Cl. tetani и характеризующаяся судорожными сокращениями мускулатуры.
Возбудитель - строгий спорообразующий анаэроб, представляет собой тонкую грамположительную палочку с закругленными концами и концевым расположением спор.
1.2. Диагноз на столбняк ставят на основании клинических признаков, а также результатов лабораторных исследований.
1.3. Для исследования в лабораторию направляют раневой секрет, кусочки ткани, которые берут из глубоких слоев мест поражения. Для этого подозрительные места освобождают от грязи, обрабатывают спиртом, затем стерильными инструментами делают глубокий разрез и извлекают кусочки пораженной ткани.
От павших животных, кроме материала из мест поражения, берут кровь (5 - 10 мл), кусочки печени и селезенки.
1.4. Лабораторные исследования проводят в двух направлениях - обнаружение токсина и выделение культуры возбудителя с последующей проверкой ее токсичности.
**2. Обнаружение токсина.**
2.1. Исследуемый материал растирают со стерильным песком в стерильной ступке, заливают физиологическим раствором в двойном объеме и делят на две части. Одну часть используют для выделения возбудителя; вторую оставляют при комнатной температуре на 1 ч для экстрагирования токсина, после чего ее фильтруют через ватно-марлевый или бумажный фильтр.
2.2. Фильтратом заражают подкожно в заднюю лапку 2 - 3 белых мышей массой 16 - 18 г в дозе 0,5 - 1 мл или двух морских свинок массой 300 - 350 г в дозе 3 - 5 мл.
2.3. При наличии в исследуемом материале столбнячного токсина через 48 - 96 ч у зараженных животных развиваются признаки заболевания, характеризующиеся тетаническими сокращениями мышц, вначале отдельных групп, затем всей мускулатуры. Животные погибают в характерной позе с вытянутыми лапками и искривлением позвоночника в сторону лапки, в которую вводили материал.
#### 2.4 Срок наблюдения за зараженными животными - до 10 дн.
2.5. При обнаружении в исследуемом материале столбнячного токсина дальнейшую работу по выделению культуры не проводят.
**3. Выделение культуры возбудителя.**
3.1. Патологический материал, подготовленный, как указано в [п. 2.1](#p100011), высевают на среду Китта - Тароцци (pH 7,2 - 7,4) с добавлением 0,5% глюкозы. Среду перед посевом и добавлением глюкозы подвергают регенерации, для этого ее прогревают в кипящей водяной бане в течение 15 - 30 мин, после чего быстро охлаждают до 45 - 50 °C.
Посевы лучше делать во флаконы емкостью 100 - 250 мл, которые на две трети заполняют питательной средой. Толщина слоя масла должна быть не менее 0,5 см.
Каждый материал высевают не менее чем в две пробирки или два флакона, один из которых после засева прогревают при температуре <...> °C в течение 1 ч. Одновременно делают посев в МПБ и на МПА для контроля на контаминацию материала аэробной микрофлорой.
#### 3.2 Посевы инкубируют в термостате при 37 - 38 °C.
На среде Китта - Тароцци возбудитель столбняка образует интенсивную муть с незначительным газообразованием. Через 48 - 72 ч наступает просветление бульона, на дне пробирки образуется осадок. Культура издает своеобразный запах жженого рога.
В мазках из культур обнаруживают тонкие грамположительные палочки с круглыми концевыми спорами, так называемые барабанные палочки.
3.3. При получении в первичных посевах характерного роста и обнаружении палочек, морфологически сходных с Cl. tetani, культуры выдерживают в термостате и на 4 - 5-е сутки определяют наличие в них токсина. Исследуемую культуру вводят белым мышам или морским свинкам, как указано в [п. 2.2](#p100012).
3.4. При необходимости выделения чистой культуры возбудителя столбняка первичный посев прогревают в течение 20 мин при 80 °C или 2 - 3 мин при 100 °C и делают дробный посев на чашки Петри с кровяным агаром Цейсслера. Чашки помещают в микроанаэростат. Учитывая, что возбудитель столбняка - строгий анаэроб, разрежение воздуха должно быть не выше 4 - 5 мм рт. ст. Через 2 - 4 дня культивирования посевы просматривают и отбирают характерные колонии.
На кровяном агаре Cl. tetani образует нежные колонии с отростками и приподнятым центром, иногда мелкие круглые колонии. Встречаются отдельные колонии, окруженные зоной гемолиза.
4. Диагноз считается установленным:
при обнаружении столбнячного токсина в исследуемом материале (без выделения культуры);
при выделении из патологического материала культуры со свойствами, характерными для возбудителя столбняка, продуцирующей токсин.
5. Срок исследования - до 15 дн.
---