--- title: "\"Методические указания по диагностике парвовирусной болезни свиней\"" issuer: "Министерство сельского хозяйства СССР" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/metodicheskie-ukazaniya-po-diagnostike-minselhoz-sssr-ministerstvo-3" --- ## "Методические указания по диагностике парвовирусной болезни свиней" # "Методические указания по диагностике парвовирусной болезни свиней" (утв. Минсельхозом СССР 21.01.1989) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 N 02-03-48/563). > Взамен Методических указаний по диагностике парвовирусной болезни свиней, утв. Главным управлением ветеринарии Госагропрома СССР 19.02.1986. Утверждены 21 января 1989 года ## МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ДИАГНОСТИКЕ ПАРВОВИРУСНОЙ БОЛЕЗНИ СВИНЕЙ 1. Общие положения. 1.1. Парвовирусная болезнь свиней - контагиозное вирусное заболевание, сопровождающееся нарушением воспроизводительной функции свиноматок. Возбудитель болезни - парвовирус свиней. 1.2. Диагноз на парвовирусную болезнь свиней устанавливают на основании характерных клинических признаков болезни у свиноматок (прохолосты, малоплодные пометы, мумифицированные плоды) и обнаружение вирусного антигена в суспензии внутренних органов плодов или специфических антител в сыворотке крови новорожденных поросят до приема молозива. 1.3. Для исследования в ветеринарную лабораторию направляют абортированные плоды длиной не более 15 см, сыворотки крови (по 2...5 см3) от свиноматок с нарушением воспроизводительной функции и по 2...3 новорожденных поросенка до приема молозива от каждой из этих свиноматок. 2. Лабораторные исследования. 2.1. Специфические антитела в сыворотке крови свиней и новорожденных поросят до приема молозива определяют в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с помощью диагностического набора, состоящего из специфического инактивированного антигена парвовируса свиней, специфической и нормальной сывороток свиней. Все компоненты набора расфасованы по 1 см3 в инсулиновые флаконы, лиофилизированы и пригодны в течение двух лет. Перед постановкой реакции каждый компонент набора растворяют в 1 см3 дистиллированной воды. 2.2. В РТГА используют рабочее разведение антигена, содержащее в 0,025 см3 8 гемагглютинирующих единиц (ГАЕ). Для этого антиген разводят фосфатно-буферным раствором во столько раз, сколько получают от деления гемагглютинирующего титра антигена, указанного на этикетке флакона, на 8. 2.3. Сыворотки крови перед постановкой реакции разводят в 32 раза фосфатно-буферным раствором, прогревают на водяной бане при (56 +/- 1) °C в течение 30 мин и обрабатывают эритроцитами морской свинки. К 0,2 см3 инактивированной сыворотки добавляют 2 капли осадка эритроцитов и выдерживают 1 ч при температуре (20 +/- 2) °C в течение 1 ч. Эритроциты осаждают центрифугированием 20 мин при 2000 об/мин и сыворотки используют для постановки РТГА. 2.4. РТГА ставят микрометодом в лунках полистироловых пластин с U-образным дном с использованием 0,6%-ной суспензии эритроцитов морской свинки. В лунки пластины вносят по 0,025 см3 фосфатно-буферного раствора и готовят двукратные разведения сывороток. В каждую лунку добавляют 0,025 см3 рабочего антигена (8 ГАЕ) и выдерживают 1 ч при температуре (20 +/- 2) °C. Затем в каждую лунку вносят 0,025 см3 0,6%-ной суспензии эритроцитов морской свинки. Пластину осторожно встряхивают и оставляют при температуре (6 +/- 2) °C в течение 2...3 ч. За титр антител принимают предельное разведение сыворотки, полностью подавляющее гемагглютинирующую активность антигена (8 ГАЕ). При обнаружении в сыворотках специфических антител в разведении 1:64 и выше реакцию считают положительной. 2.5. В РТГА ставят контроль эритроцитов на спонтанную агглютинацию в фосфатно-буферном растворе, контроль рабочей дозы антигена (8 ГАЕ) и контроль специфичности антигена с гипериммунной и нормальной сыворотками свиней. Для контроля эритроцитов на спонтанную агглютинацию в 3 лунки вносят по 0,025 см3 фосфатно-буферного раствора и добавляют равный раствор 0,6%-ной суспензии эритроцитов морской свинки. Эритроциты в фосфатно-буферном растворе не должны спонтанно агглютинироваться. Для контроля рабочей дозы антигена в 5 лунок пластины вносят по 0,025 см3 фосфатно-буферного раствора. В первую лунку добавляют 0,025 см3 рабочего разведения антигена и после смешивания 0,025 см3 жидкости переносят во вторую лунку и т.д. Из последней лунки 0,025 см3 жидкости удаляют. Затем во все лунки добавляют по 0,025 см3 0,6%-ной суспензии эритроцитов морской свинки. При правильном приготовлении рабочего разведения антигена в первой, второй и третьей лунках, содержащих соответственно 4, 2 и 1 ГАЕ, должна быть полная агглютинация эритроцитов. В четвертой и пятой лунках агглютинация эритроцитов должна отсутствовать или быть незначительной. Контроль специфичности антигена с гипериммунной и нормальными сыворотками свиней ставят, как описано в [п. 2.4](#p100011). Гипериммунная сыворотка свиней должна полностью подавлять гемагглютинирующую активность антигена в титре, указанном на этикетке флакона. Нормальная сыворотка свиней не должна подавлять гемагглютинирующую активность антигена. 2.6. Парвовирусный антиген в суспензии внутренних органов абортированных плодов определяют в реакции гемагглютинации (РГА). Для постановки реакции из легких, почек, печени и кишечника плодов длиной не более 15 см готовят 30%-ную суспензию на фосфатно-буферном растворе. Суспензию центрифугируют 10 мин при 1000 об/мин и надосадочную жидкость используют в РГА. Плоды старше 70-дневного возраста (длиной более 17 см) непригодны для обнаружения парвовирусного антигена. 2.7. В лунки пластины вносят по 0,025 см3 фосфатно-буферного раствора и готовят двукратные разведения исследуемого материала. Затем в каждую лунку вносят 0,025 см3 0,6%-ной суспензии эритроцитов морской свинки. Пластину осторожно встряхивают и выдерживают при температуре 6...8 °C в течение 2...3 ч. За титр гемагглютинирующего антигена принимают его наибольшее разведение, которое вызывает полную агглютинацию эритроцитов. При обнаружении в испытуемых пробах гемагглютинирующего антигена в разведении 1:32 и выше реакцию считают положительной. 2.8. Идентификацию гемагглютинирующего антигена проводят в РТГА с использованием гипериммунной сыворотки и специфического антигена, входящих в состав диагностического набора. Реакцию ставят с испытуемым гемагглютинирующим и специфическим антигенами в рабочей дозе (8 ГАЕ), как описано в [п. 2.4](#p100011). Готовят двукратные разведения гипериммунной сыворотки параллельно в двух рядах пластины и в лунки каждого ряда добавляют отдельный антиген. Если титр гипериммунной сыворотки с испытуемым гемагглютинирующим антигеном отличается не более, чем в 2 раза, от титра этой же сыворотки со специфическим антигеном, то результат идентификации считают положительным. 2.9. Диагноз на заболевание считается установленным при положительной реакции на наличие парвовирусного антигена в суспензии внутренних органов плодов или специфических антител в сыворотки крови новорожденных поросят до приема молозива и характерных клинических признаков болезни у свиноматок. Обнаружение антител к парвовирусу свиней в сыворотке крови только свиноматок и хряков-производителей недостаточно для постановки диагноза на парвовирусную болезнь свиней и свидетельствует лишь о циркуляции вируса в хозяйстве. С утверждением настоящих методических указаний Методические указания по диагностике парвовирусной болезни свиней, утвержденные Главным управлением ветеринарии Госагропрома СССР 19 февраля 1986 г., отменяются. Директор Всесоюзного ордена Ленина научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко **Г.Ф.КОРОМЫСЛОВ** ## Приложение к "Методическим указаниям по диагностике парвовирусной болезни свиней" 1. Приготовление фосфатно-буферного раствора, pH 7,2. В 1 дм3 дистиллированной воды растворяют 8,0 г натрия хлористого, 2,83 г натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного (или 1,22 г 2-водного) и 0,2 г калия фосфорнокислого однозамещенного. 2. Приготовление раствора Альсевера. В 1,2 см3 дистиллированной воды растворяют 24,6 г глюкозы, 9,6 г натрия лимоннокислого трехзамещенного и 5,04 г натрия хлористого. Раствор стерилизуют на кипящей водяной бане в течение 30 мин. 3. Приготовление эритроцитов морской свинки. Кровь у морской свинки берут стерильно из сердца, помещают в раствор Альсевера в соотношении 1:5 и хранят при температуре 6...8 °C. Эритроциты пригодны для использования в течение 3...4 недель. Смесь крови с раствором Альсевера центрифугируют 20 мин при 2000 об/мин, надосадочную жидкость удаляют и осадок эритроцитов три раза отмывают фосфатно-буферным раствором до получения прозрачной жидкости над осадком эритроцитов. Отмытые неразведенные эритроциты используют для обработки сывороток и приготовления 0,6%-ной суспензии эритроцитов. ---