Методические рекомендации по проведению бактериологических исследований при пищевых отравлениях
Актуально на 11.11.2026.
Как цитировать: "Методические рекомендации по проведению бактериологических исследований при пищевых отравлениях". https://bukva.ai/docs/metodicheskie-rekomendatsii-po-provedeniyu-minzdrav-rsfsr-ministerstvo
(утв. Минздравом РСФСР 17.08.1990)
Примечание
По вопросу, касающемуся применения данного документа, см. письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 № 01/14262-8-32
Утверждаю
Начальник Главного управления
эпидемиологии и гигиены
Министерства здравоохранения РСФСР
Р. И. Халитов
17 августа 1990 года
МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
ПО ПРОВЕДЕНИЮ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ПРИ ПИЩЕВЫХ ОТРАВЛЕНИЯХ <*>
<*> Разработаны специалистами Красноярской краевой санэпидстанции и одобрены Лабораторным Советом при Главном управлении эпидемиологии и гигиены Минздрава РСФСР 28.05.90.
Настоящие Методические рекомендации разработаны на основании нормативно-технических документов:
1. Инструкция о порядке расследования, учета и проведения лабораторных исследований в учреждениях санитарно-эпидемиологической службы при пищевых отравлениях, утв. МЗ СССР 20 декабря 1973 г. № 1135-73.
2. Методические указания по диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями, утв. МЗ СССР 17 декабря 1984 г. № 04-23/3-84.
3. Письмо ГСЭУ МЗ РСФСР по количественному определению стафилококков в пищевых продуктах, № 08 с/б-3-1310 от 14.06.75.
4. ГОСТ 10444.7-86 «Продукты пищевые. Методы выявления ботулинических токсинов и C. botulinum».
5. ГОСТ 10444.9-88 «Продукты пищевые. Метод определения C. perfringens».
6. ГОСТ 10444.8-88 «Продукты пищевые. Метод определения B. cereus».
Настоящие Методические рекомендации имеют цель при ограниченных возможностях лабораторий выполнить максимальный объем исследований по сокращенной схеме на все потенциально опасные, известные виды микроорганизмов — возбудителей пищевых отравлений (при наличии методик исследований) качественно или количественно. Для эффективного использования результатов бактериологических исследований при пищевых отравлениях необходимо иметь в виду:
1. Не следует направлять на бактериологическое исследование продукты и другие материалы, неблагоприятные по своей природе для развития микроорганизмов (продукты, содержащие высокие концентрации сахара, соли, а также крупы, хлеб, сало, при подозрении на ботулизм — продукты, хорошо аэрируемые и т.п.).
2. В сопроводительном документе к материалам, направляемым на бактериологическое исследование, необходимо указать предполагаемый диагноз (этиологию отравления) и цель исследования (на какие группы возбудителей проводить исследование).
3. Материалы от пострадавших забирают и направляют на бактериологическое исследование в соответствии с клиникой заболевания и его патогенезом: так при подозрении на стафилококковую этиологию от пострадавших нецелесообразно забирать кровь на гемокультуру и серологические исследования; при подозрении на ботулизм — нецелесообразно направлять материалы для исследования на патогенные и условно-патогенные энтеробактерии и т.д.
4. Определение абсолютных патогенов (шигелл, сальмонелл, возбудителей ботулизма и др.) во всех материалах проводят качественно: определение условно-патогенных возбудителей (энтеробактерии, стафилококк, B. cereus, Cl. perfringens и др.) в некоторых материалах от больных (фекалии, мазки из зева и носа на стафилококковое носительство) и пищевых продуктах — количественно; в смывах — качественно.
5. Исследование проб воды, пищевых продуктов целесообразно проводить на соответствие ГОСТов, др. НТД (при соблюдении правил хранения и реализации) и параллельно на патогенную и условно-патогенную микрофлору в зависимости от цели исследования, указанной в направлении. Суточные пробы пищевых продуктов исследуют только на патогенную микрофлору.
Отбор проб, их доставку и подготовку к исследованию проводят по Инструкции МЗ СССР ... № 1135-73.
6. При выделении однотипных культур из материалов от больных и из внешней среды проводят их углубленное изучение с целью установления идентичности (определяют серо-, био-, фаго-, колициновары, антибиотикорезистентность, термоустойчивость и другие эпид. маркеры).
7. Обращаем внимание, что предлагаемые схемы рассчитаны на проведение бактериологических исследований. Поэтому необходимость проведения серологических исследований устанавливается в каждом конкретном случае по показаниям.
Настоящие Рекомендации включают 2 раздела:
1. Исследование проб пищевых продуктов (Приложение № 1).
2. Исследование материалов от пострадавших (Приложение № 2).
Готовят исходное разведение продукта 1:10 (для твердых продуктов: 15 г продукта + 135 мл 0,1-процентной пептонной воды или физ. раствора, для жидких продуктов: 10 мл продукта + 90 мл 0,1-процентной пептонной воды или физ. раствора) и из него в 9 мл 0,1-процентной пептонной воды или физ. -3 -5 раствора два дополнительных разведения 10 и 10 . При целенаправленном исследовании на C. perfringens дополнительно -8 -9 -10 готовят разведения 10 , 10 , 10 .
Посев в среды обогащения проводят в больших объемах: 25 мл/г цельного продукта (для твердых продуктов необходимо предварительно размельчить в ступке) в 100 мл хлористо-магниевой среды обычной концентрации или 25 мл хлористо-магниевой среды двойной концентрации.
5 мл/г — в 25 мл желчного бульона, 30 мл/г — в 120 — 150 мл среды Китт-Тароцци и т.д.
Исследование на C. botulinum и C. perfringens проводят по клинико-эпидемиологическим показаниям.
Дальнейший ход исследования и идентификацию на все виды возбудителей проводят в соответствии с вышеперечисленной НТД.
Твердый продукт Жидкий продукт
<pre class="legal-pre"> ││ ││
┌───────────┐ 25 гр ││ ││ 25 мл ┌────────────┐
│100 мл │<─────────┤│ │├───────>│ 100 мл ХМ │
│хлористо- │ ││ ││ │ обычн. │
│магниевой │ ││ ││ │концентрации│
│обыч. конц.│ 15 гр продукта + 135 мл 10 мл прод. + 90 мл │ или 25 мл │
└───────────┘ 0,1-процентного ПВ 0,1-процентного ПВ │ двойной │
или физ. р-ра или физ. р-ра └────────────┘
┌──────────────┐ ││ ││ 5 мл ┌──────────────┐
│ 5 мл │ 5 гр ││ │├──────>│ 25 мл │
│10-процентного│<──────┘│ │└────┐ │10-процентного│
│ желч. бульона│ \/ \/ │ │ желч. б-на │
└──────────────┘ ┌────┐ 0,1 мл 0,1 мл ┌────┐ │ └──────────────┘
┌───────────┤ -1├─────────┬──────────┤ -1│ │
│ │10 │ │ │10 │ │
│ по 0,1 мл └────┘ │ └────┘ │ по 0,1 мл
\/ │ \/
──┬─────┬─────┬─── │ ──┬─────┬─────┬───
\/ \/ \/ ┌──┴─┐ \/ \/ \/
┌────┐┌─────┐┌───┐ ┌──────┤ │ ┌────┐┌─────┐┌───┐
│Эндо││Плоск││ВСА│ │ ├────┤ │Эндо││Плоск││ВСА│
└────┘└─────┘└───┘ │ │ -3│ └────┘└─────┘└───┘
по 0,1 мл │ │10 │
┌─────────────┘ └──┬─┘
\/ │ 9,9 мл 0,1-процентного
──┬─────┬───┬────┬────┬──── │ ПВ или физ. р-ра
\/ \/ \/ \/ \/ │
┌────┐┌───┐┌──┐┌───┐┌─────┐ │ 0,1 мл
│Эндо││ЖСА││КА││МИС││ЖАМПФ│ │
└────┘└───┘└──┘└───┘└─────┘ \/
┌────┐ по 0,1 мл
│ ├────────────────┐
├────┤ \/
│ -5│ ──┬─────┬───┬────┬────┬────
│10 │ \/ \/ \/ \/ \/
9,9 мл 0,1-процентного└────┘ ┌────┐┌───┐┌──┐┌───┐┌─────┐
ПВ или физ. р-ра │Эндо││ЖСА││КА││МИС││ЖАМПФ│</pre>
└────┘└───┘└──┘└───┘└─────┘
Примечание: 1. При отсутствии среды МИС идентификацию энтерококков возможно проводить со среды КР.
2. При отсутствии среды ЖАМПФ (желточный агар с маннитом, полимиксином и феноловым красным) идентификацию B. cereus возможно проводить со среды ЖСА.
1. Кровь засевают в питательную среду (Раппопорт и др.) в соотношении 1:10 (5 мл на 45 мл среды).
Термостатируют 10 дней при 37 °С, делая высевы на среду Эндо через 18 — 24 часа, на 3, 4, 6, 10 сутки. При наличии роста работают по общепринятой методике.
2. Мочу центрифугируют, засевают осадок в 5 мл хлористо-магниевой среды обычной концентрации (или 10 мл мочи на 10 мл среды двойной концентрации), через 18 — 20 часов инкубации при 37 °С делают высев петлей на ВСА (48 часов при 37 °С).
При наличии подозрительного роста идентификацию проводят по общепринятой методике.
3. Желчь засевают в количестве 5 мл на 45 — 50 мл МПБ (1:10), помещают на 7 суток в термостат при 37 °С и делают высевы через 18 — 20 часов и 3, 5, 7 сутки на среду Эндо. При наличии подозрительного роста работают по общепринятой методике.
4. Промывные воды желудка после нейтрализации (1 мл 10-процентной соды на 10 мл пробы) засевают по 0,1 мл на плотные чашечные питательные среды Эндо (Левина), Плоскирева, ЖСА, КА и в среды обогащения (хлористо-магниевая, желчный бульон, солевой бульон, сахарный бульон) в соотношении 1:5 — 1:10 (1 мл на 4 — 5 мл среды).
Дальнейшее исследование проводят в зависимости от характера роста по общепринятой методике.
5. Рвотные массы после нейтрализации, испражнения.
Готовят на 0,1-процентной пептонной воде или физ. растворе 10-кратные -1 -3 -5 разведения: 10 , 10 , 10 , для исследования на C. perfringens -8 -9 -10 дополнительно: 10 , 10 , 10 и далее проводят посевы:
5.1 На шигеллы и сальмонеллы:
-1
по 0,1 мл из 10 на среды Эндо (Левина), Плоскирева, ВСА и в среды -1 обогащения: по 0,3 — 1,0 мл из 10 на 2,5 — 5 мл хлористо-магниевой среды (селенитовой).
-3 -5 5.2. На S. aureus: по 0,1 мл из 10 и 10 на ЖСА. -3 -5 5.3. На B. cereus: по 0,1 мл из 10 и 10 на желточный агар с маннитом, полимиксином и феноловым красным (ЖАМПФ), при отсутствии - на
ЖСА.
5.4 На энтерококки:
-3 -5 по 0,1 мл из 10 и 10 на МИС, при отсутствии - на КА. -3 -5 5.5. На условно-патогенные энтеробактерии: по 0,1 мл из 10 и 10 на
Эндо.
-8 -9 -10 5.6. На C. perfringens по 1 мл из 10 , 10 , 10 в пробирки с 8 - 9
мл среды Вильсон — Блера.
5.7 На C. botulinum:
-1
по 3 - 5 мл из 10 в 4 флакона (пробирки) с 30 - 50 мл среды Китт-Тароцци (при отсутствии среды возможно применение среды для контроля
стерильности).
Примечание: посевы на Cl. perfringens и Cl. botulinum проводят только по клинико-эпидемиологическим показаниям, о чем должна быть сделана запись в направлении.
Дальнейший ход исследования и идентификацию на все виды возбудителей проводят по общепринятой методике.
<pre class="legal-pre"> 0,1 мл ┌────┐ 0,3 - 1,0 мл
┌──────────────────────────────┤ -1├────────────────────────┐
│ 0,1 мл │10 │ │
│ ┌─────────────────────┤ ├─────────┐ │
│ │ 0,1 мл │ │ │ │
│ │ ┌─────────────┴─┬──┘ │ │
\/ \/ \/ 1 г/мл материала 10 мл │ \/
┌────┐ ┌─────┐ ┌───┐ 0,1-процентного │ ┌────────────┐
│Эндо│ │Плос.│ │ВСА│ ПВ или физ. р-ра │ │2,5 - 5,0 мл│
└────┘ └─────┘ └───┘ │ │ │хлористо- │
│ │ │магниевой │
│ │ │среды обыч. │
│ │ │конц. │
│ │ └────────────┘
\/ │ 0,3 - 1,0 мл
по 0,1 мл ┌────┐ └──────────────┐ или
┌───────────────────┤ -3│ \/
\/ │10 │ ┌────────────┐
──┬─────┬───┬────┬────┬──── ├────┤ 9,9 мл │2,5 - 5,0 мл│
\/ \/ \/ \/ \/ │ │ 0,1-процентного │селенитовой │
┌────┐┌───┐┌──┐┌───┐┌─────┐ └─┬──┘ ПВ или физ. р-ра │ среды │
│Эндо││ЖСА││КА││МИС││ЖАМПФ│ │ └────────────┘
└────┘└───┘└──┘└───┘└─────┘ │ 0,1 мл</pre>
\/
<pre class="legal-pre"> по 0,1 мл ┌────┐
┌───────────────────┤ -5│
\/ │10 │
──┬─────┬───┬────┬────┬──── ├────┤
\/ \/ \/ \/ \/ │ │ 9,9 мл 0,1-процентного
┌────┐┌───┐┌──┐┌───┐┌─────┐ └────┘ ПВ или физ. р-ра</pre>
│Эндо││ЖСА││КА││МИС││ЖАМПФ│
└────┘└───┘└──┘└───┘└─────┘