---
title: "\"Инструкция по применению \"Набора для выявления антител к вирусу синдрома снижения яйценоскости-76 в реакции торможения гемагглютинации\""
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/instruktsiya-po-primeneniyu-nabora-dlya-2"
---
## "Инструкция по применению "Набора для выявления антител к вирусу синдрома снижения яйценоскости-76 в реакции торможения гемагглютинации"
# "Инструкция по применению "Набора для выявления антител к вирусу синдрома снижения яйценоскости-76 в реакции торможения гемагглютинации"
(утв. Минсельхозом России, Россельхознадзором 29.12.2006)
Утверждена
29 декабря 2006 года
**ИНСТРУКЦИЯ**
**ПО ПРИМЕНЕНИЮ "НАБОРА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ**
**К ВИРУСУ СИНДРОМА СНИЖЕНИЯ ЯЙЦЕНОСКОСТИ-76**
**В РЕАКЦИИ ТОРМОЖЕНИЯ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ"**
## I. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ
1. "Набор для выявления антител к вирусу синдрома снижения яйценоскости-76 в реакции торможения гемагглютинации".
2. В состав набора входят иммуноспецифические и неспецифические компоненты.
Иммуноспецифические компоненты.
N 1 - антиген специфический вируса синдрома снижения яйценоскости-76 (ССЯ-76), лиофилизированный, 4,0 см3 - 2 флакона.
N 2 - сыворотка крови кур к вирусу ССЯ-76 гипериммунная (положительный контроль), цельная, лиофилизированная, 0,5 см3, или нативная, 0,5 см3 - 1 флакон.
N 3 - сыворотка крови кур нормальная (отрицательный контроль), не содержащая антител к вирусу ССЯ-76, сухая, лиофилизированная, 0,5 см3, или нативная, 0,5 см3 - 1 флакон.
Неспецифические компоненты.
N 4 - набор солей для приготовления забуференного физиологического раствора: натрий хлористый, натрий фосфорнокислый двузамещенный и калий фосфорнокислый однозамещенный - порошок, 20,4 г - 1 флакон.
N 5 - соль натрия лимоннокислого - порошок, 3,0 г - 1 флакон.
N 6 - микропанели полистироловые круглодонные для иммунологических реакций, 96-луночные - 4 шт.
3. Описание:
 антиген специфический вируса ССЯ-76 - сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета;
 сыворотка крови кур к вирусу ССЯ-76 гипериммунная (положительный контроль), в высушенном виде - сухая пористая масса светло-желтого или красноватого цвета, в нативном виде - прозрачная жидкость желтого или красноватого цвета;
 сыворотка крови кур нормальная (отрицательный контроль), не содержащая антител к вирусу ССЯ-76, в высушенном виде - сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета, в нативном виде - прозрачная жидкость светло-желтого цвета;
 набор солей для приготовления забуференного физиологического раствора - порошок белого цвета;
 соль натрия лимоннокислого - порошок белого цвета.
Растворимость в воде высушенных компонентов набора - в пределах 4 мин.
4. Компоненты набора расфасовывают в пластиковые и стеклянные флаконы.
На флаконы с каждым компонентом наклеивают или наносят несмываемой краской по стеклу этикетки с указанием наименования организации-производителя, ее адреса и товарного знака, названия компонента, объема во флаконе, номера серии, контроля, даты изготовления (месяц, год) и рабочего разведения препарата.
Флаконы с компонентами набора и планшеты упаковывают в картонные коробки с наличием гнезд или перегородок, обеспечивающих целостность препаратов.
На коробку наклеивают этикетку, в которой указывают наименование, адрес и товарный знак организации-производителя, название набора, перечень и количество его компонентов, номера контроля и серии набора, дату изготовления (месяц, год), срок годности, условия хранения, обозначение СТО, знак соответствия системы сертификации ГОСТ Р и надпись "Для животных".
В каждую коробку вкладывают инструкцию по применению набора. Набор рассчитан на проведение 500 анализов.
5. Компоновка набора допускает возможность дробного использования компонентов для проведения исследований по мере поступления биологического материала.
Срок годности набора - 12 мес. с даты изготовления при хранении в сухом защищенном от света месте и температуре от 2 °C до 8 °C.
Компоненты вскрытого набора рекомендуется использовать в течение одного месяца при соблюдении условий хранения (см. [пп. 9](#p100041), [10](#p100044)).
Набор по истечении срока годности применяться не должен.
6. Компоненты набора не токсичны, утилизация наборов, не прошедших контроль, а также с истекшим сроком годности не требует специальных мер безопасности.
## II. БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА
7. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на способности антител нейтрализовать гемагглютинирующую активность гомологичного вируса. К смеси вирус + сыворотка после предварительной инкубации добавляют эритроциты, которые при отсутствии специфических антител в сыворотке будут агглютинированы вирусом.
## III. ПОРЯДОК ПРИМЕНЕНИЯ
8. Набор предназначен для выявления антител, специфических к вирусу ССЯ-76, в сыворотках крови кур в РТГА.
Для постановки РТГА используют:
 пипетки одно- и восьмиканальные, автоматические, фиксированного и переменного объема до 0,02 см3, 0,2 см3 и 1,0 см3, со сменными наконечниками;
 посуда мерная лабораторная;
 термостат с поддержанием температуры (37,0 +/- 0,5) °C;
 холодильник бытовой;
 pH-метр.
9. Приготовление рабочих растворов.
9.1. Раствор N 1. Для приготовления забуференного физиологического раствора содержимое флакона N 4 растворить в 2000 см3 дистиллированной воды. Раствор рекомендуется хранить при температуре от 2 °C до 8 °C.
9.2. Раствор N 2. Для приготовления раствора лимоннокислого натрия, содержимое флакона N 5 растворить в 100 см3 раствора N 1. Раствор рекомендуется хранить при температуре от 2 °C до 8 °C.
10. Подготовка иммуноспецифических компонентов набора.
10.1. Содержимое флакона N 1 со специфическим антигеном вируса ССЯ-76 растворить в 4 см3 раствора N 1. Разведенный антиген рекомендуется хранить при температуре от 2 °C до 8 °C.
10.2. Содержимое флакона N 2 со специфической к вирусу ССЯ-76 сывороткой крови кур растворить в 0,5 см3 раствора N 1. Раствор рекомендуется хранить при температуре -10 °C. Сыворотка в нативном виде готова к использованию. Вскрытый флакон рекомендуется хранить при температуре -10 °C.
10.3. Содержимое флакона N 3 с нормальной сывороткой крови кур растворить в 0,5 см3 раствора N 1. Раствор рекомендуется хранить при температуре -10 °C. Сыворотка в нативном виде готова к использованию. Вскрытый флакон рекомендуется хранить при температуре -10 °C.
10.4. Приготовление 0,8%-ной взвеси эритроцитов петуха на забуференном физиологическом растворе (pH 7,2 ... 7,4).
Кровь берут из подкрыльцовой вены во флаконы с раствором N 2 в соотношении 1:2, трижды отмывают раствором N 1 путем центрифугирования при 1500 об/мин 10 мин. Из осадка эритроцитов на растворе N 1 готовят 0,8%-ную суспензию. Для этого в 99,2 см3 раствора N 1 добавляют 0,8 см3 концентрата эритроцитов (осадок). Хранить суспензию можно при температуре от 2 °C до 8 °C до появления признаков гемолиза эритроцитов.
11. Получение сыворотки крови.
11.1. Кровь берут из подкрыльцовой вены или путем скарификации гребня, собирают в стерильные пробирки, предварительно увлажненные стерильным забуференным физиологическим раствором. Образовавшийся сгусток отделяют от стенок тонким металлическим стержнем или пастеровской пипеткой и выдерживают при комнатной температуре 20 ... 25 °C в течение 12 ... 18 ч или при температуре 37 °C (в термостате) в течение 60 мин, а затем 8 ... 10 ч при температуре от 2 °C до 8 °C. Отстоявшуюся сыворотку сливают в чистые пробирки и исследуют в РТГА.
Для удаления термолабильных ингибиторов сыворотку крови прогревают на водяной бане при 56 °C в течение 30 мин.
12. РТГА проводят в два этапа:
 определение гемагглютинирующего титра антигена в реакции гемагглютинации (РГА) для расчета рабочей дозы;
 определение титра антител в пробах сыворотки крови.
#### 12.1 Постановка реакции гемагглютинации.
Для постановки РГА готовят двукратные разведения антигена от 1:2 до 1:1 048 576. С этой целью во все лунки полистироловой панели пипеткой разливают раствор N 1 (0,05 см3 или 0,025 см3), в первую лунку вносят равный объем антигена, трехкратно пипетируют и переносят по 0,05 см3 или 0,025 см3 во вторую лунку и т.д. Из последней лунки удаляют по 0,05 см3 или 0,025 см3 соответственно.
После разведения антигена во все лунки вносят 0,8%-ную суспензию эритроцитов петуха в объеме, равном исходному объему раствора N 1. Микропанели аккуратно встряхивают и оставляют при комнатной температуре (20 ... 25 °C). Учет реакции проводят после оседания эритроцитов в контроле.
Для контроля эритроцитов на спонтанную гемагглютинацию и определения времени учета реакции в две лунки с раствором N 1 (0,05 см3 или 0,025 см3) добавляют равный объем эритроцитов.
РГА оценивают положительно при оседании эритроцитов в виде хорошо выраженного "зонтика".
*Примечание.* Получение нечетких результатов может быть связано с изменившимся pH забуференного физиологического раствора.
12.2. Для постановки РТГА готовят рабочую дозу антигена (4 ГАЕ), исходя из его титра.
Для этого исходный антиген разводят раствором N 1 во столько раз, сколько получают от деления его титра на 4. Например: титр антигена в РГА 1:8192. Следовательно, для приготовления рабочего разведения антигена необходимо взять 204,7 см3 раствора N 1 и 0,1 см3 исходного антигена (8192:4 = 2048). Объем рабочей дозы антигена определяют, исходя из количества подлежащих исследованию сывороток.
Для постановки РТГА микрометодом на исследование 1 сыворотки в 12 разведениях требуется 0,6 см3 или 0,3 см3 4 ГАЕ антигена (в зависимости от первоначального объема забуференного физиологического раствора).
12.3. Рабочую дозу антигена готовят непосредственно в день постановки реакции с обязательным контролем 4 ГАЕ. Для этого в 4 лунки разливают раствор N 1 в объемах, выбранных для постановки реакции. В первый добавляют равный объем рабочей дозы антигена и титруют согласно [п. 12.1](#p100056).
12.4. Учет реакции проводят после оседания эритроцитов в контроле. При правильном определении рабочей дозы в первой и второй лунках должна быть полная агглютинация ("зонтик"), в третьей - частичная, в четвертой - отсутствие агглютинации ("пуговка"). Полная агглютинация в третьей лунке означает, что доза антигена завышена, а отсутствие агглютинации в первой или во второй лунках свидетельствуют о недостаточном его количестве.
Корректирование рабочей дозы (увеличение или уменьшение) проводят путем добавления антигена или забуференного физиологического раствора с обязательным повторным контролем 4 ГАЕ.
#### 12.5 Постановка РТГА.
12.5.1. Для постановки реакции во все лунки полистиролового планшета вносят раствор N 1 в объеме 0,05 см3 (0,025 см3). Затем в первую лунку добавляют равный объем испытуемой сыворотки, трижды пипетируют и готовят ряд последовательных двукратных разведений (с 1:2 до 1:4096).
После этого во все лунки вносят рабочее разведение антигена в объеме 0,05 см3 (0,025 см3), осторожно встряхивают и после 60 мин контакта сыворотки с антигеном при температуре 37 °C в термостате в каждую лунку добавляют двойной объем (по отношению к объему забуференного физиологического раствора) суспензии эритроцитов.
##### 12.5.2 Контроли.
Сыворотки на изоагглютинацию (сыворотка + раствор N 1 в равных объемах + 0,8%-ная суспензия эритроцитов в двойном объеме). Агглютинация должна отсутствовать.
Эритроцитов на спонтанную агглютинацию (суспензия эритроцитов + раствор N 1 в равных объемах). Агглютинация должна отсутствовать.
Положительная специфическая сыворотка (положительный контроль). Титр контрольной положительной сыворотки указан на флаконе +/- одно разведение.
12.5.3. Реакцию учитывают через 25 ... 40 мин. При наличии в сыворотке антител наблюдают торможение гемагглютинации - эритроциты выпадают в осадок в виде "пуговки". Титром сыворотки считают наибольшее ее разведение, дающее полное торможение гемагглютинации рабочей дозы антигена ССЯ-76.
13. Интерпретация полученных результатов.
По результатам РТГА определяют эффективность иммунизации в партии привитых цыплят путем деления суммарного количества проб с титром антител 1:32 и выше на общее число исследованных сывороток и выражают в процентах.
Птицу считают иммунной к вирусу синдрома снижения яйценоскости при напряженности иммунитета 90 и более процентов.
Обнаружение антител у невакцинированной птицы свидетельствует о возможной циркуляции в стаде полевого вируса ССЯ-76. В таких случаях через 21 ... 30 сут проводят повторное исследование проб сывороток крови, полученных от этих же птиц.
Нарастание титров и (или) увеличение количества птиц с высоким уровнем антител при наличии клинических и патологоанатомических признаков ССЯ-76 является основанием для объявления в хозяйстве неблагополучия по данному заболеванию.
## IV. МЕРЫ ЛИЧНОЙ ПРОФИЛАКТИКИ
14. При работе с набором следует избегать нарушения целостности стеклянных флаконов, в которые расфасованы компоненты набора. При нарушении целостности флаконов и порезах рук стеклом первую помощь оказывают согласно общепринятым методикам.
15. Работу с химическими компонентами набора следует проводить очень осторожно. При попадании их на кожу или слизистые оболочки рекомендуется промывать пораженное место большим количеством водопроводной воды под краном.
16. Запрещается прием пищи и воды, курение в помещении, где проводятся работы с компонентами набора.
17. Набор следует хранить в местах, не доступных для детей.
Инструкция по применению разработана организацией-производителем ФГУ "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ "ВНИИЗЖ"), 600901, Владимирская область, г. Владимир, микрорайон Юрьевец. (Организация-производитель: ФГУ "ВНИИЗЖ", г. Владимир, мкр. Юрьевец).
Рекомендовано к регистрации в Российской Федерации ФГУ "ВГНКИ".
---