Инструкция по применению набора для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота

(утв. Минсельхозом России, Россельхознадзором 07.05.2010)

(ред. от 21.06.2011)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["Наставление по применению набора... (от 03.02.1997 N 13-7-2/846)"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/nastavlenie-13-7-2846" "Наставление по применению набора для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота (утв. Минсельхозпродом России 03.02.1997 N 13-7-2/846)"
  n1["Инструкция по применению набора... (от 07.05.2010)"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/instruktsiya-po-primeneniyu-nabora-dlya" "Инструкция по применению набора для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота (утв. Минсельхозом России, Россельхознадзором 07.05.2010)"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

Утверждена 7 мая 2010 года

ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

I. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

1. Набор для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота (КРС).

2. Состав набора.

Набор выпускают в четырех вариантах комплектации. Варианты I и III рассчитаны на проведение 1000 исследований, вариант II на 250 исследований, вариант IV рассчитан на 4000 исследований. Комплектация наборов по вариантам осуществляется по согласованию с потребителем.

3. Антиген вируса лейкоза — лиофилизированная гомогенная аморфная масса светло-коричневого цвета с красноватым оттенком. При добавлении разбавителя в объеме, соответствующем объему антигена до высушивания, содержимое флакона полностью растворяется в течение 10 мин без хлопьев и осадка и представляет собой опалесцирующую жидкость темно-красного цвета.

Специфическая преципитирующая сыворотка (СПС) — прозрачная слегка опалесцирующая жидкость светло-желтого цвета или с розоватым оттенком. Допускается наличие небольшого осадка белка, легко разбивающегося при встряхивании.

Разбавитель антигена вируса лейкоза КРС — прозрачная бесцветная жидкость без механических примесей.

Контрольные сыворотки: ОКС, ПКС, СПКС и ПКСр24 представляют собой прозрачные жидкости светло-желтого цвета или бесцветные, образующие пену при встряхивании.

Смесь солевая агаровая (ССА) представляет собой сухую смесь, содержащую два типа частичек: порошок агара и кристаллы хлористого натрия.

Разбавитель ССА — прозрачная бесцветная жидкость.

4. Антиген вируса лейкоза КРС и разбавитель антигена вируса лейкоза расфасовывают по 5 см3, а СПС — по 10 см3 во флаконы вместимостью 10 см3. Смесь солевую агаровую и разбавитель смеси солевой агаровой расфасовывают соответственно по 18,6 г и по 20 см3 во флаконы вместимостью 20 см3. Флаконы плотно закрывают резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками.

Контрольные сыворотки (ОКС, ПКС, СПКС и ПКСр24) расфасовывают по 0,5 см3 во флаконы вместимостью 10 см3 или в ампулы вместимостью 2 см3. Ампулы запаивают, флаконы укупоривают резиновыми пробками и обкатывают колпачками.

5. Маркированные флаконы устанавливают в маркированные картонные коробки с разделительными перегородками или любые другие, обеспечивающие их целостность.

Срок годности набора — 2 года с даты выпуска при соблюдении условий хранения.

Хранить набор в сухих, закрытых и темных помещениях при температуре от 2 до 8 °C.

Транспортируют набор всеми видами крытого транспорта в условиях, исключающих замораживание и перегрев выше 25 °C.

В каждую коробку вкладывают инструкцию по применению набора.

По истечении срока годности препарат не должен применяться.

II. ПРИНЦИП МЕТОДА

6. Принцип реакции иммунодиффузии заключается в том, что антигены и антитела, помещенные в лунки, диффундируют в геле агара и при взаимодействии образуют комплекс, который проявляется в виде линии преципитации.

III. ПОРЯДОК ПРИМЕНЕНИЯ

7. Набор для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота применяется для исследования сывороток крови в реакции иммунодиффузии (РИД) в геле агара с целью выявления антител против гликопротеидного антигена вируса лейкоза (ВЛ) крупного рогатого скота.

8. Для постановки РИД необходимо смесь солевую агаровую, содержащуюся в одном флаконе, перенести в стеклянную колбу вместимостью 500 см3, прилить 20 см3 разбавителя смеси солевой агаровой (содержимое одного флакона) и 180 см3 дистиллированной воды (или воды очищенной). Колбу поставить на кипящую водяную баню и выдержать до полного расплавления агара. В каждую чашку Петри внести по 12,5 см3 расплавленного агара. При комплектации наборов по IV варианту реакцию иммунодиффузии проводить в 1%-ном агаровом геле, приготовленном на фосфатно-буферном растворе с pH 7,2 ... 7,6. Чашки оставить в течение часа с приоткрытыми крышками. При помощи штампа сделать отверстия (лунки) в геле агара, не допуская отслоения геля от дна чашки.

9. В каждой чашке прорезать по 4 фигуры, каждая из которых состоит из 7 лунок (одна в центре, остальные 6 — по периферии). Диаметр каждой лунки 7 мм, расстояние между центральной и периферическими лунками — 3 мм. Образовавшиеся диски геля удалить из лунок канюлей, соединенной с вакуумным насосом (или любым другим способом).

10. Лиофилизированный антиген ВЛКРС во флаконе растворить в 5,0 см3 соответствующего разбавителя (или 0,85% раствор натрия хлорида). Антиген растворяется в течение 10 мин без хлопьев и осадка. Растворенный антиген вносят в центральные лунки каждой фигуры.

11. Заполнение периферических лунок СПС можно проводить по одной из схем, приведенных на рисунках 17 и 18. СПС вносят в две диаметрально расположенные периферические лунки (1-й вариант постановки РИД - рис. 17) или в 3 периферические лунки, расположенные через одну (2-й вариант постановки РИД - рис. 18). При выборе заполнения периферических лунок следует учитывать, что 2-й вариант расположения лунок облегчает выявление слабоположительных испытуемых сывороток, однако количество исследований одним и тем же объемом антигена сокращается на 25% по сравнению с 1-м вариантом.

Рис. 17	Рис. 18

12. Чашки закрыть крышками и инкубировать при температуре (20 ... 26) °C. Через 48 ч осуществить учет реакции.

13. При оценке результатов реакции с испытуемыми сыворотками прежде всего устанавливают специфичность образовавшихся линий преципитации. Специфической считают линию преципитации, которая образуется между лункой с испытуемой сывороткой и антигеном и плавно сливается с контрольной линией, т.е. идентична ей (рис. 19). Неспецифической считают линию преципитации, которая формируется между лунками с испытуемой сывороткой и антигеном, но не сливается с контрольной линией преципитации, а пересекает ее или упирается в нее, образуя иногда шпору (рис. 20) (реакция неидентичности).

Рис. 19	Рис. 20

В зависимости от наличия в испытуемых сыворотках специфических антител против вируса лейкоза крупного рогатого скота и формой образовавшихся линий преципитации реакцию оценивают как отрицательную или как положительную.

IV. МЕРЫ ЛИЧНОЙ ПРОФИЛАКТИКИ

14. Использование препарата не требует специальных мер предосторожности и не представляет опасности для здоровья человека.

15. Препарат следует хранить в местах, не доступных для детей.

V. ПОРЯДОК ПРЕДЪЯВЛЕНИЯ РЕКЛАМАЦИЙ

Контроль набора, поступившего с рекламацией, проводит организация-производитель, а при разногласиях в оценке качества набора между потребителем и производителем контроль проводит профильный отдел ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов».

Организация-производитель — Федеральное государственное унитарное предприятие «Курская биофабрика — фирма БИОК».

Инструкция по применению набора для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота разработана ФГУП «Курская биофабрика» (г. Курск, ул. Разина, 5).

Рекомендовано к регистрации в Российской Федерации ФГУ «ВГНКИ». Регистрационный номер ПВР-1-1.2/00966.