Инструкция и методические указания по клинической и лабораторной диагностике, лечению и профилактике сибирской язвы у людей

(утв. Минздравом СССР 14.10.1969)

Утверждена заместителем министра здравоохранения Союза ССР П. Н. Бургасовым 14 октября 1969 года

ИНСТРУКЦИЯ И МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ПО КЛИНИЧЕСКОЙ И ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ, ЛЕЧЕНИЮ И ПРОФИЛАКТИКЕ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ У ЛЮДЕЙ

В подготовке к настоящей инструкции приняли участие: Молдавский институт гигиены и эпидемиологии, Институт эпидемиологии и микробиологии им. Гамалеи АМН СССР, IV Главное управление Министерства здравоохранения СССР, Государственный контрольный институт медицинских биологических препаратов им. Тарасевича, Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии Министерства здравоохранения СССР, Всесоюзный научно-исследовательский институт дезинфекции и стерилизации Министерства здравоохранения СССР, Центральный научно-исследовательский институт санитарного просвещения Министерства здравоохранения СССР, Противочумная лаборатория Министерства здравоохранения СССР, Отдел особо опасных инфекций Министерства здравоохранения СССР.

С выходом в свет настоящей инструкции и методических материалов считать утратившей силу «Инструкцию по клинической и лабораторной диагностике, лечению и профилактике сибирской язвы у людей», утвержденную Министерством здравоохранения СССР 23 июня 1959 г.

I. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ О ВОЗБУДИТЕЛЕ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ

Сибирская язва или антракс — типичный представитель группы зоонозов — является острым инфекционным заболеванием домашних и диких животных и людей.

Морфология и окрашивание. Возбудитель сибирской язвы — B. anthracis представляет собой неподвижную, грамположительную, спорообразующую палочку. В мазках из жидкой среды бациллы располагаются, как правило, парами или длинными цепочками; в мазках с плотной среды — короткими цепочками.

Особенностью сибиреязвенной бациллы является ее способность в определенных условиях образовывать капсулы и споры. Различают ее вегетативную и споровую формы. Различия биологических свойств указанных форм возбудителя резко выражены.

В неокрашенной капле крови, взятой от животного, павшего от сибирской язвы, под микроскопом видны крупные, неподвижные прозрачные палочки размером 1 — 1,5 x 6 — 8 - 10 р. с округленными концами. В окрашенном виде концы представляются обрубленными. Бациллы располагаются одиночно или попарно, реже в виде цепочек, все они окружены прозрачной капсулой.

В окрашенном мазке из культуры, выросшей на искусственной питательной среде палочки выглядят прямыми, с обрубленными или вогнутыми концами, часто располагаются нитями или цепочками. Цепи палочек напоминают бамбуковую трость с коленчатыми сочленениями. Споры располагаются центрально, имеют овальную форму, не превышают диаметра тела микроба, не деформируют его.

Вегетативная форма хорошо окрашивается по Граму и всеми анилиновыми красками. Однако в очень молодых и в старых культурах встречаются грамотрицательные особи. Капсула хорошо воспринимает краску Романовского, метиленовую синьку, сафранин. При окраске толуидинблау наблюдается явление метахромазии. Споры окрашиваются одним из специальных методов (см. ниже).

Культуральные свойства. Температурный оптимум роста палочки сибирской язвы 35 — 37 °C. Оптимум pH 7,2 — 7,6, но рост может наблюдаться при колебаниях pH от 7,0 до 8,0.

Сибиреязвенная бацилла на обычных питательных средах дает характерный рост, который может в совокупности с другими служить дифференциальным признаком в лабораторной диагностике (приложение 7 — не приводится);

а) на мясопептонном агаре или агаре Хоттингера в аэробных условиях развиваются крупные шероховатые матовые колонии с бахромчатой периферией, которая состоит из нитей сибиреязвенных палочек, отходящих от центральной части колонии, что придает краю колоний при малом увеличении вид локонов волос или «львиной гривы». Это обычная R-форма роста;

б) в бульоне культура сибирской язвы в R-форме растет на дне в виде хлопчатого осадка, похожего на комочек ваты, при этом бульон остается прозрачным. Рост культуры в S-форме в бульоне дает равномерное помутнение;

в) в столбике 10 — 12% мясопептонной желатины при посеве уколом и выращивании при 22° рост напоминает елочку, опрокинутую вниз вершиной; на 3 — 5-й день желатина, начиная с поверхности, разжижается в виде воронки (пептонизация) и на дне ее скапливается беловатый хлопок;

г) на мясопептонном агаре или бульоне с добавлением 0,5 и 0,05 ед./мл пенициллина сибиреязвенные палочки через 3 — 6 часов инкубирования при 37° растут в виде шаров, соединенных в цепочки («жемчужное ожерелье»);

д) на кровяных средах гемолиза не наблюдается, либо он происходит очень редко и медленно (в бульоне), чем отличается от сапрофитных бацилл, дающих быстрый гемолиз (10 — 12 часов при 37 °C);

е) при нанесении капли сибиреязвенного бактериофага на газон культуры палочки сибирской язвы на мясопептонном агаре через 5 — 8 часов инкубирования при 37° наблюдается лизис в месте нанесения бактериофага;

ж) при посеве на жидкую яичную среду бациллы сибирской язвы, как правило, не свертывают желток в течение 5 — 6 суток инкубирования при 37 °C. Сапрофитные бациллы свертывают желток в течение 6 — 10 часов;

з) палочка сибирской язвы не образует фосфатазы и не способна, следовательно, разлагать фосфаты, входящие в состав питательной среды. Салрофитные бациллы в большинстве своем разлагают фосфаты в течение нескольких часов.

Капсулообразование. Капсульные формы бацилл характерны для патогенных штаммов возбудителя сибирской язвы и обычно обнаруживаются в организме восприимчивых и неимунных больных животных и человека и в свежих трупах. Однако способностью к калсулообразованию обладают и некоторые вакцинные штаммы (вторая вакцина Ценковского, Пастера и др.).

Капсулы могут также наблюдаться при росте на питательной среде с примесью крови, сыворотки, яичного белка или мозговой ткани. При выращивании возбудителя сибирской язвы на обычных питательных средах капсулообразование не проявляется.

Капсула более устойчива к действию гнилостной флоры, чем микробное тело. Поэтому в материале, добытом из разложившихся трупов животных, павших от антракса, можно часто найти одни лишь пустые капсулы, лишенные микробного тела («тени» микробов).

Токсинообразование. За последние десять лет было установлено, что палочка сибирской язвы в организме восприимчивых и неиммунизированных животных вырабатывает токсин, выявляемый также в определенных условиях, в фильтратах культур. Сибиреязвенный токсин является комплексом, состоящим из трех факторов: 1-воспалительный или отекотворный, 2-иммуногенный (протективный антиген) и 3-летальный.

Бескапсульные палочки сибирской язвы, применяемые в качестве вакцинных, вырабатывают в основном первые два фактора, обеспечивающие иммунитет у восприимчивых животных и человека.

Сибиреязвенный токсин играет большую роль в патогенезе и патологической физиологии сибиреязвенной инфекции, а также участвует в образовании специфического иммунитета.

Спорообразование. Вегетативная форма сибиреязвенного возбудителя может превращаться в спору. Спора имеет овальную форму и размеры до 1,5 \mu в длину и 0,8 — 1 \mu в поперечнике, сильно переломляет свет. В каждой бацилле образуется одна спора.

Споры образуются очень легко в средах, небогатых питательными веществами, при достаточном доступе кислорода воздуха, даже в дистиллированной воде или в нефиксированном мазке. Последнее обстоятельство надо иметь в виду во время работы в лаборатории с возбудителем сибирской язвы. Споры никогда не образуются в организме животных и человека, а также в невскрытом трупе.

На плотных средах спорообразование идет быстрее, чем в жидких. При 37°, в среднем, через 30 — 40 часов наблюдается почти полное спорообразование, при 30° — за 30 часов, при 18 — 20° за 2 — 3 дня. При 15° и ниже спорообразование прекращается так же, как и при 42 — 43°.

При попадании спор в благоприятную среду — соответствующие условия влажности, аэрации, температуры и набора питательных веществ в почве, либо в восприимчивый организм, либо при посеве на питательную среду — из спор образуются вегетативные формы. Скорость прорастания спор зависит от оптимума температуры (37°) и возраста спор. Недавно образованные споры прорастают при этой температуре за 60 — 90 минут, старые споры — за 2 — 7 часов.

Лучшей питательной средой для образования спор у сибиреязвенных бацилл является слабощелочной агар, приготовленный на мясном бульоне без добавления пептона или на среде из казеинового перевара. В этих целях также можно использовать пшеничный агар (приложение 1).

Устойчивость. Вегетативная форма возбудителя сибирской язвы гибнет, не проявляя высокой устойчивости. Она погибает в невскрытом трупе в течение 1 — 3 суток; в желудочном соке животных при температуре 38 °C — в течение 30 минут. Вегетативные формы гибнут при нагревании до 55° за 40 минут, до 60° — за 15 минут, до 75° — за 1 минуту; прямой солнечный свет и обычные дезинфицирующие средства (креолин, формалин) легко убивают палочку. К низким температурам (до минус 110°) вегетативная форма проявляет устойчивость.

Несравненно устойчивые споры. Прямой солнечный свет и обычные дезинфицирующие растворы (сулемы 1:1000, карболовой кислоты 5%, хлорамина 5 — 10%) убивают споры в течение длительного срока, обычно исчисляющегося часами и даже сутками. Этиловый спирт в концентрациях от 25% до абсолютного убивает споры в течение 50 дней и более.

Споры гибнут в сухом жару при 120 — 140° лишь в течение 2 — 3 часов, в автоклаве при 120° — в течение 5 — 10 минут, при кипячении — в течение 60 минут, при температуре в 400° — в течение 20 — 30 секунд. Замораживание в жидком воздухе (минус 190°) не нарушает их жизнеспособности.

Споры отличаются необычайно длительной сохраняемостью по внешней среде, большей, чем всех известных патогенных микробов.

II. ЭПИЗООТОЛОГИЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ

Основным источником возбудителя сибирской язвы являются больные домашние животные, в первую очередь, травоядные. Иногда болеют и дикие животные.

Дополнительным местом накопления возбудителя сибирской язвы служит инфицированная почва. Имеются данные о том, что в почве споры не только переживают длительное время, но при определенных благоприятных условиях (температура, влажность) могут прорастать и накапливаться, поддерживая существование почвенного очага. При проведении сейсмических, гидромелиоративных и других земляных работ, а также с ливневыми и паводковыми водами споры могут быть вынесены на поверхность.

Животные, больные сибирской язвой, являются заразными в течение всего периода болезни, выделяя возбудителя во внешнюю среду с мочой, калом, кровянистыми выделениями из легких, слюной и другими выделениями. После их гибели заразными являются все органы и ткани, в том числе шкуры, шерсть, кости, рога, копыта, кровь и т.п.

Наиболее восприимчивыми к сибирской язве являются овцы, коровы, буйволы, верблюды, козы, лошади, ослы, олени и травоядные дикие животные. Менее восприимчивы свиньи. Большую резистентность к инфекции проявляют собаки и кошки. Дикие хищные животные и грызуны также могут заразиться сибирской язвой.

Из лабораторных животных весьма чувствительны к сибирской язве белые мыши, морские свинки, кролики, сирийские хомяки и обезьяны, причем заражение их удается любым парентеральным способом.

Белые мыши и морские свинки погибают в течение 1 — 2 суток; кролики — течение 1,5 — 3 суток.

У восприимчивых животных инфекционный процесс носит септический характер с метастазами во внутренние органы. У более резистентных видов животных (свиньи) процесс приобретает локализованную форму в виде серозно-геморрагического или некротического воспаления лимфатических узлов зева и глотки.

Пути передачи инфекции среди животных различны. В основном различают алиментарный трансмиссивный пути передачи сибиреязвенной инфекции.

Алиментарный путь передачи инфекции наиболее распространен. Заражение животных происходит главным образом через корм и питьевую воду, загрязненные спорами сибирской язвы. Хищные животные и собаки могут заражаться при поедании трупов сибиреязвенных животных.

Трансмиссивный путь передачи более распространен в лесостепной зоне. Заражение может происходить через укусы мух-жигалок, слепней, которые переносят инфекцию от больных животных, зараженных трупов и зараженных объектов внешней среды. В ротовом аппарате слепня возбудитель сибирской язвы сохраняется до 5 дней, в зобе и желудке — до 2 дней.

Возможность заражения животных через дыхательные пути, а также через непосредственный контакт здоровых животных с больными в естественных условиях незначительна.

Сезонность в развитии заболеваний сибирской язвой ярко выражена. Заболевания наблюдаются в основном в июне — августе. На этот период приходится 60 — 80% годовой заболеваемости.

III. ЭПИДЕМИОЛОГИЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ

Пути заражения человека сибирской язвой разнообразны. В подавляющем большинстве случаев заражение возникает в результате внедрения возбудителя через поврежденную кожу при контакте с источниками или факторами передачи инфекции, например в процессе ухода за больными животными, при вынужденном убое и разделке туш, при снятии шкур, утилизации и захоронении трупов павших животных, при контакте с инфицированным мясом, шкурами, кожами, шерстью и другой продукцией животноводства.

В дореволюционный период часто наблюдались случаи заражения людей воздушно-пылевым и алиментарным путем, приводившие к заболеваниям легочной и кишечной формами сибирской язвы, обычно с летальными исходами. В связи с улучшением материальных и санитарно-гигиенических условий жизни и труда в нашей стране заболевания людей этими формами сибирской язвы регистрируются в очень редких случаях. Случаи заражения людей через инфицированные кисти для бритья, меховую и шерстяную одежду, имевшие в прошлом широкое распространение, встречаются редко. Нередки случаи заражения человека через почву или предметы, загрязненные инфицированной почвой. Больной человек сможет служить потенциальным источником возбудителя инфекции, при кишечной, легочной или септической формах.

Заболеваемость сибирской язвой среди людей носит спорадический характер, однако имеют место и групповые заболевания.

Сезонность заболеваемости людей в определенной мере повторяет сезонность, отмеченную в эпизоотологии сибирской язвы. Наиболее частыми причинами заражения людей сибирской язвой являются:

В бытовых условиях:

а) осуществление (без предварительного ветеринарного осмотра) подворного убоя больных животных, разделка туш и утилизация трупов без соблюдения ветеринарно-санитарных правил;

б) употребление в пищу мяса или мясных продуктов (колбас, фарша), полученных от больных животных;

в) покупка на рынках с рук шерсти, шкур, кож, волоса, щетины и другой продукции животноводства, не проверенных на зараженность сибирской язвой;

г) нарушение правил личной гигиены при уходе за больными животными.

В производственных условиях:

а) нарушение правил личной гигиены при разделке туши или при манипуляции с инфицированной продукцией животноводства;

б) несоблюдение правил по технике безопасности, установленных для предприятий, на которых производят заготовку, обработку, хранение и транспортировку продукции животноводства;

в) несоблюдение режима в лабораториях научно-исследовательских и практических учреждений, на предприятиях биологической промышленности и других учреждениях, проводящих работу с возбудителем сибирской язвы.

У человека заболевание сибирской язвой проявляется в виде кожной, кишечной, легочной и первично-септической форм. Первые три формы могут осложниться сибиреязвенным сепсисом. Кожная форма встречается чаще, чем кишечная или легочная (свыше 98% случаев).

Заражение происходит при попадании возбудителя сибирской язвы на незначительно поврежденные (царапины, ссадины, мелкие порезы) наружные покровы тела при вскрытии трупов и разделке туш больных животных; при соприкосновении с различными видами сырья, получаемого от больных животных; при уходе за больными животными.

Кишечная форма может возникнуть при употреблении в пищу инфицированного мяса и мясных продуктов, не подвергшихся достаточной термической обработке (копченая, вареная, ливерная колбасы, фарш и т.д.).

Легочная форма сибирской язвы у человека наблюдается крайне редко и является результатом вдыхания пыли, содержащей споры. Подобное заражение человека раньше наблюдалось при обработке шерсти, снятой с пораженных сибирской язвой животных, а также при сортировке и обработке инфицированного утильсырья («болезнь тряпичников»).

Переболевание сибирской язвой влечет за собой появление у переболевшего иммунитета. Случаи повторного заболевания человека сибирской язвой чрезвычайно редки. Иммунитет к сибирской язве также может быть вызван введением здоровому (не болевшему) человеку сибиреязвенных вакцин.

IV. КЛИНИКА СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ

Инкубационный период у человека при сибирской язве продолжается от нескольких часов до 6 — 8 дней, чаще всего бывает 2 — 3 дня.

Кожная форма. Эта форма сибирской язвы у человека протекает в основном в виде сибиреязвенного карбункула и значительно реже — в виде злокачественного отека. Карбункулы локализуются обычно на открытых частях тела (на лице, шее, верхних, реже нижних конечностях) и гораздо реже на частях тела, закрытых одеждой.

В месте проникновения возбудителя сначала появляется красноватое пятно, переходящее в папулу медно-красного цвета. Через несколько часов папула превращается в зудящий пузырек (везикулу) с серозно-геморрагическим содержимым, на месте которого Образуется быстро чернеющий струп. Вокруг струпа может образоваться кольцо или «ожерелье» из новых мелких пузырьков, которые через 1 — 2 дня сливаются с областью центрального некроза в общий крупный, черный и плотный струп до 5 — 6 и более сантиметров в диаметре. Окружающая кожа и клетчатка отечны и инфильтрированы на значительном протяжении, особенно в местах с рыхлой подкожной клетчаткой.

Для сибиреязвенного поражения характерно отсутствие болезненности в области струпа и окружающего его отека. Температура у больного, как правило, высокая, но в легких случаях может быть и субфебрильной и даже нормальной.

При благоприятном исходе через 5 — 6 дней температура снижается, отек постепенно уменьшается, через 2 — 2,5 недели от начала заболевания струп отпадает, эпителизация под струпом проходит с образованием рубца. В тяжелых случаях болезни развивается сепсис с образованием металлических очагов, ведущих обычно к смерти.

Кишечная форма. У людей кишечная форма сибирской язвы встречается редко и протекает в виде тяжелой общей интоксикации с катаральными геморрагическими явлениями со стороны пищеварительной системы. Заболевание чаще начинается общим недомоганием, тошнотой, рвотой с примесью крови, кровавым поносом, повышением температуры. Иногда наблюдаются острые режущие боли в животе и в большинстве случаев постоянные боли в пояснице. Живот у больных вздут, напряжение брюшной стенки отсутствует. Деятельность сердечно-сосудистой системы резко нарушена. Болезнь длится в среднем 2 — 4 дня, чаще всего оканчиваясь смертью при явлениях острой прогрессирующей слабости сердца и сибиреязвенного сепсиса.

Легочная форма. Эта форма сибирской язвы встречается редко. Заболевание развивается очень быстро и протекает по типу бронхопневмонии с выраженной общей интоксикацией; часто присоединяется выпотной плеврит. Начало заболевания характеризуется катаром дыхательных путей, болями и стеснением в груди, общим недомоганием при высокой температуре. Кашель вначале бывает со слизистой мокротой, позже с кровянистой. Мокрота нередко свертывается, напоминая «малиновое» желе. Заболевание вскоре принимает септический характер. Смерть больного наступает на 2 — 3-й день при явлениях упадка сердечной деятельности.

Септическая форма. Первичная септическая форма сибирской язвы, возбудитель которой заносится в организм чаще через слизистые покровы, развивается в случаях массивного заражения высоковирулентным возбудителем и недостаточности защитных сил макроорганизма. При этой форме заболевания какие-либо первичные местные поражения отсутствуют. Септическая форма может развиваться и как осложнение любой другой формы сибирской язвы (см. выше). Процесс характеризуется быстрым и крайне тяжелым течением с обилием геморрагических проявлений и наличием большого количества палочек сибирской язвы в крови, спинномозговой жидкости и в паренхиматозных органах больного человека.

V. ДИАГНОСТИКА СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ

Диагностика сибирской язвы у человека основывается на эпидемиологических, клинических и лабораторных данных.

Клиническая дифференциальная диагностика

Кожную форму дифференцируют с фурункулом, карбункулом, рожей, укусом насекомых, сапом, язвенно-железистой формой туляремии, кожной формой чумы:

а) при фурункуле и карбункуле банальной этиологии наблюдается резкая болезненность пораженного участка, кожа красная, окружность фурункула сильно воспалена, отсутствует характерный струп; слабо выражена отечность; для стафилококкового карбункула типично выделение гноя из нескольких отверстий;

б) для рожи характерны болезненный валик по периферии зоны поражения, краснота, местная чувствительность и болезненность в воспаленных участках, резкое отграничение пораженного участка от здоровой кожи;

в) при укусе насекомых главный симптом — это быстрое развитие отека. При дифференциации анамнестические данные играют большую роль, в частности при злокачественном отеке быстрое нарастание последнего является ведущим симптомом;

г) при сапе клиническая картина отличается многочисленностью сапных узелков и резкой болезненностью пораженных участков, характерным развитием заболевания;

д) язва туляремийного происхождения отличается от сибиреязвенного поражения болезненной чувствительностью. При туляремии, как правило, нет черного струпа и отечности в прилежащих тканях;

е) при кожной форме чумы отмечается резкая болезненность пораженных участков кожи, отсутствие отечности, темная окраска струпа и лимфангоиты.

Легочную форму сибирской язвы дифференцируют с воспалением легких различной этиологии:

а) для воспаления легких при легочной форме чумы характерно отсутствие катаральных явлений со стороны дыхательных путей (нет насморка, хрипоты, слезотечения и т.д.) и мало перкуторных и аускультативных данных;

б) при пневмониях и бронхопневмониях любой другой этиологии такие явления, как быстрое развитие клинических симптомов, крайне тяжелое общее состояние больного и выделение серозно-геморрагической мокроты, наблюдаются значительно реже, чем при сибирской язве;

Кишечную форму дифференцируют с отравлениями различными химическими и пищевыми продуктами, с дизентерией, а также с инвагинацией и перфорацией кишечника, острым панкреатитом, заворотом кишок, тромбозом сосудов брыжейки.

При дифференциации учитываются характерные отличия каждой из перечисленных болезней, а также эпидемиологические данные. Результаты лабораторных исследований испражнений имеют решающее значение.

Септическую форму дифференцируют с сепсисом любой этиологии. Распознаванию сибиреязвенного сепсиса способствуют эпидемиологические данные и наличие вторичных явлений со стороны кожи. Решающее значение имеет лабораторное исследование крови.

Лабораторные исследования при сибирской язве

Лабораторные исследования применяются в медицинской практике для текущей (прижизненной или посмертной) дифференциальной диагностики заболевания человека, для установления ретроспективного диагноза, для обнаружения палочки сибирской язвы на различных по характеру и степени загрязненности объектах внешней среды.

Для лабораторной диагностики сибирской язвы у человека проводятся:

1. бактериологическое исследование, состоящее из трех последовательных этапов: микроскопии (бактериоскопии) мазков из патологического материала; получения и изучения свойств чистой культуры на питательных средах; биологической пробы на лабораторных животных;

2. кожно-аллергическая проба;

3. серологические исследования (реакция термопреципитации и люминесцентно-серологический анализ).

1. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Порядок взятия материала для исследований

В случаях кожной формы заболевания исследуется содержимое везикул, карбункулов, отделяемого язвы или отторгнутый струп. Перед взятием материала у постели больного (желательно до начала лечения) нужно осторожно очистить спиртом кожу вокруг пораженного места и поверхность карбункула. Содержимое берут стерильной пипеткой, шприцем стерильным тампоном или же наносят его на стерильную фильтровальную бумагу. При наличии у больного некротической язвы ее необходимо предварительно осторожно очистить от гноя (если имеется) и взять тканевую жидкость на границе со здоровой тканью, не травмируя последней.

При подозрениях на легочную форму сибирской язвы исследуется мокрота, на кишечную форму — испражнения больного или моча (1 — 2 л), на септическую форму — кровь. Кровь исследуют также при подозрениях на легочную и кишечную формы.

Мокроту собирают в стерильные баночки и делают два мазка на предметных стеклах. Кровь (в случае подозрения на сибиреязвенный сепсис) засевают непосредственно на питательную среду (например, на бульон Хоттингера), а также делают два тонких мазка на предметных стеклах.

Сырье животного происхождения — шерсть, волос, щетину — направляют для исследования в количестве не менее 20 — 30 г; почву — в количестве не менее 200 г. причем пробы берут из разных мест исследуемой территории и помещают каждую в отдельный сосуд; воду направляют в объеме 1 — 3 л.

При исследовании (в случае необходимости) материала от павшего животного категорически запрещается вскрытие трупа. Для исследования берут часть уха, туго перевязанного шпагатом ближе к основанию в двух местах и отрезанного между лигатурами. Место отреза уха на трупе прижигается. Кусочек уха со шпагатом помещается в стерильную банку.

Порядок направления материала на лабораторные исследования

Материал, подлежащий исследованию, помещают в стерильные пробирки, банки или другую лабораторную посуду. Высушенные мазки кладут в чашки Петри или обертывают плотной бумагой и на чашке или бумаге делают надпись «мазок не фиксирован».

На сопроводительной этикетке указывают место и время взятия материала и наименование его, предположительный диагноз (на материале, взятом от больного человека, указывают фамилию, имя, отчество больного).

Затем материал помещают в деревянный или железный ящик, который обвязывают, пломбируют или опечатывают сургучом. На крышке ящика делают надпись: «Верх, осторожно!» и в таком виде направляют в лабораторию с нарочным.

К ящику с материалом для исследования обязательно прилагают сопроводительный документ, в котором перечисляют объекты исследования и все данные, отмеченные на этикетке каждой банки, пробирки и т.д.

Бактериоскопия. Исследование доставленного материала начинают с бактериоскопии. Готовят несколько мазков из исследуемого субстрата. Окраску производят по Граму или другими анилиновыми красителями, раствором Ребигера и по Пешкову (для обнаружения спор).

Примечание: бактериоскопию можно сдавать с люминесцентно-серологическим анализом (см. «Сигнальные методы исследования»).

При микроскопии мазка из свежего материала от больного или трупа выявляются расположенные короткими цепочками характерные крупные палочки, окруженные капсулами.

Для обнаружения капсул готовят раствор Ребигера. Берут 15 — 20 г генцианвиолета и растворяют в 100 мл 40% формалина. Раствор выдерживают при комнатной температуре в течение нескольких часов, затем фильтруют. Указанный раствор одновременно фиксирует и красит. В краске нефиксированный мазок выдерживают 15 — 20 секунд, затем промывают водой и высушивают. Капсулы окрашиваются в красно-фиолетовый цвет, бактерии — в темно-фиолетовый.

Для обнаружения спор по Пешкову мазок фиксируют на пламени горелки, затем окрашивают кипящей Леффлеровской синькой (над пламенем горелки) в течение 15 — 20 секунд. Затем мазок промывают водой и докрашивают 0,5% водным раствором нейтральрота в течение 30 секунд, краску смывают водой и мазок высушивают.

Споры окрашиваются в голубой или синий цвет, протоплазма вегетативных форм — в розовый.

В некоторых мазках споры выявляются в виде овальных или круглых образований, резко преломляющих свет.

Посев на питательные среды. Перед исходным посевом доставленного материала на питательные среды необходимо провести ряд манипуляций в зависимости от характера материала.

Патологический материал от больного (содержимое везикул, струп, кровь, мокрота, испражнения, кусочки тканей и органов и т.п.) после бактериоскопии подвергается при необходимости измельчению в стерильных условиях и заливается 5 — 10-кратным количеством стерильной воды или физиологического раствора. Суспензия делится на 2 пробирки, из которых одна прогревается на водяной бане при 80° 10 минут. Прогревание производится с целью уничтожения вегетативных форм микробов.

Шерсть, волос, щетину, почву измельчают, заливают 5 — 10-кратным объемом стерильной воды или физиологического раствора. Половину суспензии обрабатывают прогреванием (см. выше), вторую половину подвергают обработке мочевиной по методу Дольда. С этой целью суспензию насыщают кристаллами мочевины (для уничтожения вегетативных форм микробов), прогревают на водяной бане при 37° в течение 5 — 10 мин., а затем остаток засевают на питательные среды.

Исходный посев материала производят: 1) на агар, приготовленный на переваре Хоттингера (аминный азот 100 — 110 мг%, pH 7,2 — 7,6) в чашке Петри. Через 24 часа выращивания в термостате при 37° получают матовые шероховатые колонии с ворсистыми краями, которые при малом увеличении имеют вид «львиной гривы»; 2) в бульон, приготовленный на той же основе. Через 18 — 24 часа инкубирования в термостате (37°) при росте сибиреязвенной культуры бульон остается прозрачным; на дне пробирки отмечается рост в виде комочка ваты.

Выделение чистых культур сибирской язвы необходимо для дифференциации их с сапрофитными бациллами, которые морфологически очень сходны с сибиреязвенными, и для определения патогенности.

Заражение лабораторных животных (биопроба)

Одновременно с посевом обработанного материала на питательные среды производят заражение лабораторных животных (белые мыши, морские свинки или кролики).

Белых мышей заражают подкожно в заднюю часть спины (по 0,1 — 0,2 мл). Они погибают от сибирской язвы через 1 — 2 суток с явлениями отека и общего сепсиса. Кроликов и морских свинок заражают подкожно в области живота (по 0,2 — 0,5 мл). Гибнут они через 2 — 3 суток при тех же явлениях.

Наблюдение за опытными животными длится до 10 дней. Павших животных вскрывают; делают мазки и производят посевы из крови сердца, селезенки и из инфильтрата на месте инъекции инфицированного материала.

В мазках, приготовленных из крови, сердца и селезенки, бактериоскопически устанавливается присутствие микробов сибирской язвы в виде коротких цепочек, палочек, окруженных капсулой. Посевы из сердца и селезенки дают на агаре колонии R-формы, а на бульоне — рост с образованием хлопьев на дне пробирки и с просветлением бульона. При вскрытии лабораторных животных, павших от сибирской язвы, обнаруживается типичная патологоанатомическая картина. В дальнейшем порученные культуры подлежат идентификации (см. ниже).

Сигнальные методы исследования

В качестве сигнальных (экстренных) методов бактериологического исследования направленного материала используются люминесцентно-серологический метод, метод выявления капсулообразования in vitro и метод выявления капсулообразования in vivo. Эти методы позволяют судить о наличии в исследуемом материале B. anthracis лишь ориентировочно (сигнально) и требуют обязательного дальнейшего исследования с выделением чистой культуры и изучением ее свойств, т.е проведения окончательной дифференциации палочки сибирской язвы.

Люминесцентно-серологический метод

Люминесцентно-серологический метод может быть использован как для обнаружения спор сибиреязвенного микроба непосредственно в исследуемом материале, так и вегетативных бескапсульных клеток:

а) для выявления спор B. anthracis из исследуемой суспензии делают мазок на предметном стекле, ближе к краю стекла. Мазок подсушивают и фиксируют в течение 10 — 15 минут погружением в метанол, налитый в стеклянные стаканчики высотой 5 — 6 см. После высыхания препараты окрашивают люминесцирующей споровой сибиреязвенной сывороткой;

б) для выявления вегетативных бескапсульных клеток B. anthracis в исходном материале или после подращивания делают препараты способом, описанным в пункте «а».

Препараты окрашивают люминесцирующей адсорбированной сибиреязвенной сывороткой.

Сухую люминесцирующую сыворотку растворяют в указанном на этикетке ампулы объеме дистиллированной воды. Разведенную сыворотку хранят в пробирке с резиновой пробкой или в запаянной ампуле при 4 °C.

Перед использованием каждой серии конъюгата рекомендуется опытным путем проверить рабочее разведение люминесцирующей сыворотки, указанное на этикетке ампулы. С этой целью микроскопируют мазки из вакцинных сибиреязвенных штаммов, окрашенные в течение 10 — 15 минут конъюгатом, взятым в разных разведениях (обязательно на 1 — 2 разведения выше и ниже рабочего разведения, указанного на этикетке).

То максимальное разведение, которое обеспечивает яркое (на + + + + и + + +) иммунофлуоресцентное окрашивание микробных клеток, называют красящим титром. В качестве рабочего разведения принимают удвоенный красящий титр. Необходимость опытного определения рабочего разведения обусловлена тем, что оно зависит не только от качества люминесцирующего конъюгата, но и от освещения препарата в люминесцентном микроскопе. Поэтому при работе с различными аппаратами для люминесцентной микроскопии (МЛ-1, МЛ-2, МЛД-1 и т.д.) рабочее разведение люминесцирующей сыворотки может отличаться от указанного в паспорте.

Непосредственно перед окраской препарата люминесцирующую сыворотку разводят забуференным 0,15 М раствором NaCl (pH = 7,2 — 7,4) до рабочего разведения в необходимом для работы объеме. Разведенную до рабочего разведения сыворотку хранить не следует. Забуференный 0,15 М NaCl (pH = 7,2 — 7,4) готовят следующим образом: к 1000 мл 0,15 М NaCl добавляют 10 мл фосфатного буфера, составленного из 90 мл 0,15 М раствора Na2HPO4 (1 г 620 мг на 100 мл дистиллированной воды) и из 10 мл 0,15 М раствора KH2PO4 (2 г 230 мг на 100 мл дистиллированной воды) и проверяют pH.

Фиксированные препараты помещают во влажную камеру (чашки Петри, кюветы, эксикаторы с каплями 0,15 М NaCl или увлажненной фильтровальной бумагой) и наносят на них пастеровской пипеткой каплю люминесцирующей сыворотки в рабочем разведении. Окраску производят в течение времени, указанного на этикетке, при комнатной температуре. Затем мазки два раза тщательно промывают раствором 0,15 М NaCl по 10 минут в стеклянных стаканчиках или под текущей струей из пластмассового баллона и подсушивают на воздухе.

Препараты, приготовленные непосредственно из нативных материалов, окрашивают методом контрастирования. С этой целью на мазки наносят смесь люминесцирующей сыворотки и бычьего альбумина, меченного родамином. Смесь этих сывороток готовят в удвоенном рабочем разведении (например; рабочее разведение люминесцирующей сыворотки (1) 1:16, а бычьего альбумина (2) 1:8, смесь составляют из разведения (1) 1:8 и (2) 1:4 и наносят на мазок. Дальнейшую обработку мазков проводят так же, как и при окраске люминесцирующей сывороткой.

Перед просмотром на препараты наносят каплю раствора, содержащего 1 часть 0,15 М NaCl (pH = 7,2 — 7,4) и 9 частей глицерина и накрывают покрывным стеклом. Препараты можно просматривать и без покровных стекол. Мазки микроскопируют в падающем свете люминесцентного микроскопа с системой светофильтров под иммерсионным объективом. При работе с иммерсионным объективом необходимо пользоваться нефлуоресцирующим иммерсионным маслом.

Для получения наиболее яркого свечения бактерий следует тщательно центрировать осветительную систему микроскопов и подбирать соответствующие светофильтры.

Целесообразно сочетать просмотр препаратов одного и того же поля зрения одновременно в люминесцентном микроскопе (освещение сверху) и в фазово-контрастном устройстве (освещение снизу) для определения наличия в препарате клеток бактерий, не окрашенных примененной люминесцирующей сывороткой.

Наблюдение проводят при увеличениях 5 x 90, 7 x 90, 10 x 90. Споры и бактерии, окрашенные люминесцирующей сывороткой, дают яркое свечение периферии клетки, имеющей характерную для исследуемого вида морфологию. Такое свечение называется специфическим в отличие от неспецифического, характеризующегося равномерным свечением всего тела клетки. (Следует иметь в виду, что в препаратах из органов животных и культуры тканей обычная морфология клеток микроорганизмов может быть изменена).

Для оценки интенсивности свечения используется четырехкрестовая система:

+ + + + — очень яркая флуоресценция по периферии микробной клетки, четко контрастируемая с темным телом клетки;

+ + + — яркая флуоресценция периферии клетки;

+ + или слабое свечение периферии клетки, не контрастируемое с телом клетки.

Положительным результатом считается люминесценция клеток, оцениваемая на + + + + и + + + при наличии 2 — 5 специфически светящихся клеток в каждом поле зрения.

в) Если в препаратах, при обработке их люминесцирующими сибиреязвенными сыворотками, обнаружатся ярко светящиеся по периферии микробные клетки (на + + + + и + + +), что характерно для спор или вегетативных клеток B. anthracis, это говорит о подозрениях на наличие в исследуемой пробе B. anthracis и может рассматриваться как ориентировочный сигнальный ответ. Такая проба подлежит дальнейшему исследованию.

Метод выявления капсулообразования in vitro

Для изучения капсулообразования in vitro делают посевы нескольких капель исходной испытуемой взвеси в среду Государственного контрольного института медицинских биологических препаратов им. Тарасевича (ГКИ) и ставят в термостат при 37 °C.

Эта среда состоит из раствора Хенкса, используемого для поддержания культур тканей, с добавлением 40% стерильной бычьей сыворотки, предварительно инактивированной при 56° в течение 30 минут. Если не имеется жидкости Хенкса, можно пользоваться бульоном, изготовленным на переваре Хоттингера, к которому добавляют стерильно 40% инактивированной бычьей сыворотки. Среду доводят с помощью двууглекислой соды до pH = 7,2 — 7,4, пробирки закрывают стерильными резиновыми пробками. Через 30 — 120 минут начинается капсулообразование in vitro. Следует считать, что через 16 — 18 часов все или абсолютное большинство B. anthracis, если таковые находятся в исследуемом материале, образуют на среде ГКИ капсулу.

Для наблюдения за капсулообразованием мазки из культур со среды ГКИ после подсыхания и в течение 15 минут фиксации метанолом окрашивают 5 — 10 минут синькой Леффлера и просматривают в микроскоп (x900). Микробы окрашиваются в синий цвет, а капсула — в розовый.

В случае обнаружения капсульных клеток в препаратах со среды ГКИ дается положительный сигнальный ответ, а полученная культура подлежит дальнейшему исследованию для выделения из нее чистой культуры и изучения ее свойств (см. раздел «Идентификация палочки сибирской язвы в лаборатории»).

Метод выявления капсулообразования in vivo (ускоренная биологическая проба)

Исходный свежий материал после его механической обработки (см. раздел «Посев на питательные среды») и после осаждения грубых частиц во взвеси, вводят до 0,5 мл внутрибрюшинно 6 белым мышам. Если исследуемый материал несвежий или заведомо споросодержащий, рекомендуется до введения мышам засеять его на МПБ и инкубировать при 37° в течение 3 часов.

После введения исследуемого материала животным одну пару мышей оставляют под наблюдением на 10 суток, как при классической биологической пробе. Остальных мышей забивают (по 2 на срок) через 1 и 2 часа. Забитых мышей вскрывают. Из перитонеального эксудата и крови сердца делают мазки, из селезенки, почек, легких, печени делают мазки-отпечатки, нефиксированные мазки окрашивают по Ребигеру, а фиксированные — леффлеровской синькой и микроскопируют на предмет выявления капсульных палочек сибирской язвы.

Обнаружение в мазках типичных капсульных палочек позволяет лаборатории дать положительный сигнальный ответ и продолжить анализ для выделения из органов животных культур и дальнейшего их изучения (см. раздел «Идентификация палочки сибирской язвы в лаборатории»). Если в мазках из эксудата органов забитых мышей не обнаруживаются капсульные палочки, то продолжают наблюдение за контрольной парой. При отсутствии необходимого для данного метода количества мышей, заражают только по одной белой мыши на срок.

Идентификация палочки сибирской язвы в лаборатории

Подозрительные колонии, выделенные на питательных средах, дифференцируют как сибиреязвенные по следующим опорным признакам: специфическая (патогенность, капсулообразование, тест жемчужного ожерелья; лизабильность бактериофагом; люминесцентно-серологический метод; и по дополнительным признакам: лецитиназная активность; неподвижность; отсутствие гемолиза.

Специфическая патогенность — определяется проведением биологической пробы на белых мышах и степенью вирулентности выделенных культур.

Биологическая проба на белых мышах: 2 — 3 белым мышам весом не более 18 — 20 г вводят внутрибрюшинно или подкожно исследуемую пробу в объеме 0,2 мл. Наблюдение за животными ведут до их гибели. Из селезенки и печени погибших животных делают посевы и тонкие мазки, которые после фиксации окрашивают синькой Леффлера или люминесцирующими капсульными сыворотками. Нахождение в мазках капсульных клеток позволяет сделать заключение о специфической патогенности возбудителя, обнаруженного в исследуемой пробе.

Определение вирулентности выделенных культур. Для этой цели необходимо приготовить споровую культуру на среде из казеинового перевара (приложение № 1). Культуру, подлежащую исследованию, засевают на эту среду и на четвертые сутки инкубирования в термостате при 37° получают в посеве до 95 — 100% спор. Процесс спорообразования контролируют просмотром мазков, неокрашенных — в фазовом контрасте или окрашенных по Циль-Нильсену. Затем споровая культура смывается с агара и заключается в 50%-ный глицерин или лиофилизируется.

Вирулентность определяется так: берут кроликов весом 2 — 2,5 кг, вводят им подкожно в область живота в объеме 1 мл три дозы споровой культуры — 100, 1000 и 10000 спор. Предварительно споровая культура разводится 0,15 М NaCl до стандарта мутности ГКИ № 10, который соответствует примерно 100 мл сибиреязвенных спор. Из последующих разведений получают необходимые дозы. Каждая доза вводится 2 кроликам. Всего для определения вирулентности одной культуры требуется 6 кроликов.

Наблюдение за животными длится до 10 суток. Из органов павших животных делают мазки для бактериоскопии и посевы на соответствующие среды для установления специфичности гибели животных.

В ответе лаборатории указывают, что испытуемая культура вирулентна для кроликов в испытанной дозе (или — апатогенна для кроликов).

Капсулообразование устанавливается либо в результате изучения мазков из посевов на среду Государственного контрольного института медицинских биологических препаратов им. Тарасевича или на сывороточный бульон (инкубация при 37° в течение 16 — 18 часов), либо в результате исследования мазков из крови и мазков-отпечатков из органов биопробных животных, окрашенных одним из вышеописанных методов для выявления капсул.

Неподвижность B. anthracis определяется при исследовании в висячей капле.

Отсутствие гемолиза определяется при посевах на МПА с добавлением 5 — 10% дефибринированной крови барана, посевы инкубируются при 35 — 37° в течение 18 — 20 часов, после чего производится учет.

Лецитиназная активность определяется по интенсивности свертывания куриного желтка на жидкой яичной среде Дрожевкиной. Среду готовят путем смешивания в стерильной бутылочке со стеклянными бусами одной части куриного желтка, извлеченного асептически, двух частей стерильного 0,85% раствора хлористого натрия. Среду разливает по 5 мл в пробирки, засевают петлей испытуемой суточной культуры, инкубируют при 37°. B. anthracis, как правило, желток не свертывает даже в течение нескольких суток инкубирования, в то время как, например, B. cereus свертывает среду в течение 6 — 10 часов.

Тест жемчужного ожерелья. Перед постановкой пробы 2% МПА разливают по 10 мл в пробирки. Готовят 3 чашки 2% МПА, наливая в каждую из них агар из одной пробирки; предварительно к агару первой пробирки, после его расплавления и охлаждения, добавляют пенициллин из расчета 0,5 ед./мл, к агару второй — 0,05 ед./мл, третья — контрольная. На каждой чашке после застывания агара обратной стороной пробирки делают насечки агара, которые на обратной стороне чашки обозначают номером анализа.

На каждый, полученный таким образом, кружок агара наносят 1 каплю 3-часовой бульонной культуры исследуемого штамма. На одной чашке может быть поставлено 10 — 15 проб. Чашки с закрытыми крышками инкубируют при 37°, через 3 часа просматривают под микроскопом с сильной сухой или иммерсионной системой (в последнем случае каждый кружок агара накрывают покровным стеклом). Рекомендуется использовать фазовоконтрастное устройство.

На среде, содержащей пенициллин, наблюдается распад клеток B. anthracis на отдельные шары — жемчужины, расположенные в виде цепочек. Другие спороносные аэробы имеют обычную форму клеток. В контрольной чашке B. anthracis образует длинные цепи клеток.

Модификация теста жемчужного ожерелья. К бульону на переваре Хоттингера (pH = 7,2 — 7,4) добавляют стерильно 20% инактивированной лошадиной сыворотки и 0,5 ед. пенициллина на 1 мл бульона. Среду разливают с соблюдением стерильности в пробирки по 2 — 3 мл и засевают 2 капли бульонной или петлю агаровой культуры — испытуемого микроба. Пробирки с посевами инкубируют в течение 3 часов при 37°, после чего делают мазки на стекле, фиксируют жидкостью Карнуа (6 частей этилового спирта, 3 части хлороформа и 1 часть ледяной уксусной кислоты) до ее испарения, окрашивают метиленовой синькой 20 — 30 секунд и микроскопируют.

В мазках B. anthracis обнаруживается в виде цепочек шарообразных форм, напоминающих ожерелье из жемчуга или бус.

B. cereus и другие сапрофитные бациллы на среде с пенициллином растут как обычно, и в мазках наблюдаются цепочки палочек. В случае отрицательных результатов инкубацию посевов следует продолжить до 6 часов, и тогда делается заключительный учет теста.

Люминесцентно-серологический метод. Люминесцентно-серологический метод может быть использован как для серологической идентификации чистых культур, так и для обнаружения капсульных форм возбудителя в препаратах из органов больных или экспериментально зараженных животных.

Для идентификации чистых культур используют люминесцируюшие сибиреязвенные адсорбированные сыворотки. Обработка препаратов производится по методике, изложенной в разделе «Сигнальные методы исследования».

Чтобы выявить капсульные формы возбудителя сибирской язвы, готовят тонкие мазки из эксудата брюшной полости через 5 — 6 часов после внутрибрюшинного введения спорового материала; из отечной жидкости — через 10 — 18 часов после подкожного введения и из отпечатков селезенки, печени животных. Мазки фиксируют погружением их в метанол на 15 — 20 минут. Затем мазки обрабатывают капсульной сибиреязвенной сывороткой в рабочем разведении в течение 20 минут во влажной камере (чашки Петри или кюветы с увлажненной бумагой или каплями 0,15 М NaCl). Препараты промывают забуференным раствором 0,15 М NaCl — pH = 7,2 — 7,4 — в течение 10 минут и докрашивают люминесцирующей сывороткой против глобулинов кролика в рабочем разведении, смешанной с бычьим альбумином, меченным родамином в течение 15 минут. Мазки промывают вышеуказанным способом, подсушивают, наносят каплю забуференного глицерина (1 часть забуференного 0,15 М NaCl — pH = 7,2 — 7,4 — и 9 частей глицерина) и закрывают покровным стеклом.

Можно просматривать препараты и без покровных стекол. Препарат готов для просмотра в люминесцентном микроскопе. В препаратах, содержащих капсульные клетки, наблюдается ярко-зеленое свечение капсулы. Учитывая, что капсула сибиреязвенного микроба в организме может разрушаться, необходимо параллельные препараты обрабатывать люминесцирующими адсорбированными сибиреязвенными сыворотками.

Обнаружение капсульных форм в организме мышей позволяет дать положительный ответ о наличии возбудителя сибирской язвы в исследуемом материале. Для определения степени вирулентности культуры необходима постановка специальной пробы.

Лизабильность бактериофагом. В чашки Петри с ровным дном разливают расплавленный и остуженный до 1,5% МПА. Когда агар застынет дно чашки расчерчивают на квадраты со стороной, равной 2 см. После просушивания чашки в термостате, петлей с диаметром 5 мм или пастеровской пипеткой на каждый квадрат наносят каплю 5 — 6-часовой культуры. Чашку с приоткрытой крышкой подсушивают в течение 30 мин. в термостате, а затем в центр подсохшей капли культуры наносят петлей диаметром в 2 мм каплю бактериофага. Результаты учитываются через 5 — 6 часов инкубации при 37°. В случае положительного результата на месте нанесения капли бактериофага отмечается лизис колонии, независимо от степени вирулентности идентифицируемого штамма B. anthracis.

Заключение по бактериологическим исследованиям

Предварительное заключение лаборатория может дать после проведения сигнальных исследований, через 3 — 5 часов после поступления материала.

Окончательное заключение лаборатории о принадлежности выделенного микроорганизма к палочке сибирской язвы может быть дано на основании совокупности по крайней мере 2 — 3 опорных признаков, в числе которых признак специфической патогенности обязателен.

Во время проведения прижизненной бактериологической диагностики сибирской язвы у человека следует учитывать, что за исключением септических случаев не всегда на уровне кожного поражения можно найти возбудителей сибирской язвы, вследствие очень быстрого отмирания их, а в случае уже начатого лечения шансы на выделение возбудителя при кожной форме сибирской язвы из везикул или карбункула резко снижаются. Поэтому отрицательные результаты при бактериологическом исследовании еще не исключают диагноза сибирской язвы у человека.

В этих случаях прибегают к постановке кожной пробы с антраксином (сибиреязвенным аллергеном) и к реакции преципитации с антигеном из струпа или другого патологического материала.

2. КОЖНАЯ АЛЛЕРГИЧЕСКАЯ ПРОБА С АНТРАКСИНОМ

Методика диагностики сибирской язвы с помощью антраксина основывается на способности организма больного отвечать аллергической реакцией в виде гиперемии и инфильтрата кожи на месте введения препарата. Эта способность может появляться уже с первых дней заболевания, достигая почти поголовных положительных ответов с конца первой недели заболевания.

Реакция ставится на внутренней поверхности предплечья. Антраксин вводится с соблюдением правил асептики строго внутрикожно при помощи шприца с тонкой иглой в дозе 0,1 мл. В кожу другого предплечья вводится в той же дозе, другим шприцом с тонкой иглой, стерильный изотонический раствор хлорида натрия.

В месте введения антраксина и изотонического раствора хлорида натрия через 24 и 48 часов учитывается наличие гиперемии и инфильтрата кожи. Окончательный учет и оценку пробы производят через 48 часов, руководствуясь следующей шкалой:

ШКАЛА ДЛЯ ОЦЕНКИ ПРОБ С АНТРАКСИНОМ

Элементы местной реакции		Оценка реакции
через 24 часа	через 48 часов
Инфильтрата нет (гиперемия возможна)	Реакции нет	Отрицательная (-)
Гиперемия и инфильтрат более 8 мм в диаметре	Гиперемия менее 8 м в диаметре	Сомнительная (+/-)
Гиперемия до 15 мм в диаметре с инфильтратом более 8 мм в диаметре	Гиперемия или гиперемия с инфильтратом более 8 мм в диаметре	Слабо положительная (+)
Гиперемия от 16 до 25 мм в диаметре с инфильтратом более 8 мм в диаметре	Гиперемия или гиперемия с инфильтратом более 8 мм в диаметре	Положительная (+ +)
Гиперемия от 25 до 40 мм в диаметре с инфильтратом более 8 мм в диаметре	Гиперемия или гиперемия с инфильтратом более 8 мм в диаметре	Резко положительная (+ + +)
Гиперемия более 41 мм в диаметре с инфильтратом более 8 мм в диаметре	Гиперемия или гиперемия с инфильтратом более 8 мм в диаметре	Резко положительная (+ + + +)

Образование гиперемии и инфильтрата более 8 мм в диаметре в месте введения физиологического раствора дает основание к аннулированию пробы. В случае получения отрицательной или сомнительной реакции, пробу с антраксином следует повторить через 5 — 7 дней.

Аллергическая перестройка организма в результате перенесенного заболевания сибирской язвой может сохраняться в течение многих лет (до 30), в связи с чем проба с антраксином применяется также для постановки ретроспективного диагноза.

3. СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Помимо люминесцентно-серологического анализа (см. раздел «Сигнальные методы исследования») из числа серологических методов для диагностики сибирской язвы можно пользоваться реакцией термопреципитации (по Асколи).

Реакция термопреципитации является специфической и позволяет обнаруживать сибиреязвенный антиген даже в тех случаях, когда бактериологическое исследование оказывается отрицательным. Эту реакцию производят при наличии струпов (кожная форма), несвежего материала, а также при исследовании шкур и органов павшего животного. Для прижизненного диагноза эта реакция преимуществ перед посевом и заражением биопробных животных не имеет.

Для постановки реакции преципитации необходимы: преципитирующая сибиреязвенная сыворотка, антиген из испытуемого материала и сибиреязвенный бактерийный антиген для контроля.

Материал для получения антигена — кусочки отторгнутых струпов, кожи (если труп не вскрыли) или мышц, кусочки шкур и другой — измельчают ножницами, заливают физиологическим раствором из расчета 10 мл раствора на 1 г исследуемого материала и экстрагируют кипячением в течение 5 — 10 минут. Экстракт фильтруют до полной прозрачности через прокаленную асбестовую вату или тальковый фильтр, или через бумагу, предварительно смоченную физиологическим раствором.

В узкие пробирки наливают 0,2 — 0,3 мл прозрачной сибиреязвенной сыворотки, а затем пастеровской пипеткой осторожно наслаивают на нее такое же количество полученного экстракта — антигена.

Если реакция положительная, то на границе соприкосновения жидкостей не позднее чем через 15 минут должно появиться мутно-белое кольцо. Реакция оценивается знаком +. При сомнительной реакции появление кольца наблюдается позднее 15 минут. Если кольцо отсутствует, то реакция оценивается как отрицательная знаком -.

Параллельно необходимо ставить четыре контрольные пробы: преципитирующая сыворотка и экстракт из заведомо сибиреязвенного материала: преципитирующая сыворотка и экстракт из того же органа заведомо здорового животного; преципитирующая сыворотка и физиологический раствор (или дистиллированная вода); нормальная сыворотка и исследуемый экстракт.

Индикация и идентификация палочки сибирской язвы на объектах внешней среды

Для обнаружения возбудителя сибирской язвы на объектах внешней среды применяют сигнальные и заключительные методы исследования. Исследованию подлежат пробы воды, почвы, воздуха и смыва с различных объектов как без концентрирования, так и с использованием физических и биологических методов концентрирования.

К физическим методам концентрирования относится центрифугирование, фильтрование через мембранные фильтры. Центрифугирование проводят в течение 15 мин. при 2000 — 3000 об./мин. При фильтровании используют мембранные фильтры № 3. Для отбора проб воздуха могут быть рекомендованы приборы Кротова, Дьяконова, Речменского, Киктенко, а также каскадные импакторы и растворимые желатиновые фильтры.

С целью биологического концентрирования используют подращивание B. anthracis на питательных средах и введение их лабораторным животным:

а) воду для исследования берут в количестве 1 литра половину ее (500 мл) равными порциями пропускают через 4 мембранных фильтра № 3 без предварительного прогревания. Методы обработки мембранных фильтров даны в приложении 3.

Для люминесцентно-серологического выявления вегетативных клеток после подращивания два фильтра засевают на чашки с 0,7% МПА путем накладывания мембранного фильтра на питательную среду вверх поверхностью, через которую фильтровали исследуемый материал. С двух мембранных фильтров делают смыв в стерильных чашках Петри, нанося их поверхность 1 мл физиологического раствора. Смыв используют для посева на среду ГКИ, введения белым мышам и выявления спор люминесцентно-серологическим методом (см. «Сигнальные методы исследования»).

Вторую порцию воды прогревают при 65 — 70° 30 минут, затем фильтруют и с ней проводят все манипуляции, описанные выше;

б) при исследовании почвы, навеску в 5 — 30 г заливают 50 — 100 мл воды, взбалтывают 5 — 10 мин., после чего дают взвеси отстояться <*>.

---

<*> Рекомендуется при исследовании почвы, пыли надосадочную жидкость обрабатывать по методу Дольда мочевиной (См. раздел «Посев на питательные среды»).

Надосадочную жидкость сливают, доводят до литра стерильным физраствором, делят пополам, одну часть пропускают через мембранные фильтры без прогревания, другую часть предварительно прогревают при 65 — 70° 30 минут или при 80° 10 минут. Посевы производят как описано в пункте «а».

При наличии в надосадочной жидкости выраженной опалесценции или взвешенных частиц, жидкость предварительно фильтруют через стерильную марлю, вату или грубые бумажные фильтры, которые также могут быть подвергнуты исследованиям;

в) для исследования смывов с объектов внешней среды или экстрактов из шерсти, кожи и т.д. рекомендуется получать их в количествах, обеспечивающих проведение всех упомянутых выше анализов, т.е. в объеме 1 литра. В крайнем случае, это количество может быть сокращено до 100 мл с фильтрацией через каждый мембранный фильтр до 10 мл;

г) отбор проб воздуха производят в количестве 50 — 250 литров в зависимости от предполагаемого обсеменения. В большинстве приборов для отбора воздуха улавливание микроорганизмов производится в жидкую среду, поэтому пробы воздуха исследуются как смывы с объектов внешней среды.

Желатиновые фильтры после отбора воздуха переносят во флаконы емкостью 200 мл и заливают 100 мл физиологического раствора с добавлением 20 г крупных стеклянных бус. Флакон помещают на 30 — 40 минут в водяную баню при 37°. После встряхивания образуется гомогенная суспензия, подлежащая дальнейшему исследованию.

Стекла из каскадного импактора подлежат сигнальному исследованию с помощью люминесцирующих споровых сибиреязвенных сывороток. Смыв со стекол (при использовании стерильных влажных тампонов после отбора проб воздуха) подлежит дальнейшему исследованию.

Сигнальные методы, применяемые для обнаружения возбудителя сибирской язвы в объектах внешней среды, проводятся, как описано выше, в разделе «Сигнальные методы исследования», а заключительные методы изучения выделенных чистых культур — в соответствии с порядком, описанным в разделе «Идентификация палочки сибирской язвы в лаборатории».

• * *

Лабораторная работа по выделению и дифференциации палочки сибирской язвы из любого исследуемого материала должна проводиться в условиях, предупреждающих возможность инфицирования персонала и обсеменения возбудителем объектов внешней среды, в строгом соответствии с «Инструкцией по режиму работы с материалом, зараженным или подозрительным на зараженность возбудителем чумы, холеры, сапа, мелиоидоза, натуральной оспы, сибирской язвы, туляремии и бруцеллеза», утвержденной Министерством здравоохранения СССР 21 июня 1967 г.

VI. ЛЕЧЕНИЕ БОЛЬНЫХ СИБИРСКОЙ ЯЗВОЙ

Современное лечение всех клинических форм сибирской язвы является комплексным. Специфическое лечение включает серотерапию и антибиотикотерапию. В качестве серотерапевтического препарата применяется противосибиреязвенный глобулин.

Противосибиреязвенный глобулин изготовляется из гипериммунных сывороток лошадей и выпускается в жидком виде. Жидкий глобулин представляет собой 10% раствор специфического белка (гамма- и бета-глобулиновых фракций).

Терапевтическое введение противосибиреязвенного глобулина начинают немедленно по установлении диагноза сибирской язвы, обычно в сочетании с другими методами лечения. Терапевтические дозы глобулина — 30 — 50 мл внутримышечно. В случае необходимости введение глобулина повторяют в последующие дни в тех же дозах.

Глобулин следует вводить строго асептически внутримышечно в ягодичную область, в подогретом виде, для чего флакон, не открывая, помещают на 10 — 15 минут в теплую воду (не выше 40°).

Противосибиреязвенный глобулин, как и аналогичная сыворотка, будучи гетерогенным белком, может вызвать различной степени анафилактические реакции у лиц, сенсибилизированных к лошадиному белку.

Чтобы предупредить анафилактические реакции, перед введением глобулина необходимо выявить, не получал ли больной ранее какие-либо сыворотки и не страдает ли аллергическими заболеваниями (бронхиальная астма, пищевые и медикаментозные идиосинкразии, тяжелые формы эксудативного диатеза). Обязательно проверяют индивидуальную чувствительность к лошадиному белку с помощью внутрикожной пробы.

Для внутрикожной пробы применяют лечебный глобулин (т.е. 10% белок), разведенный в 100 раз физиологическим раствором. Чтобы получить такой раствор, в пробирку или ампулу с 10 мл стерильного физиологического раствора вводят при помощи шприца 0,1 мл жидкого глобулина. Такой раствор пригоден к применению не более как в течение двух часов после приготовления. Раствор хорошо перемешивают.

При постановке кожной пробы на чувствительность к лошадиному белку в сгибательную поверхность предплечья внутрикожно, строго асептически, вводят 0,1 мл разведенного в 100 раз глобулина и наблюдают за реакцией 20 минут. Проба считается отрицательной, если диаметр папулы на месте инъекции не более 0,9 см и краснота вокруг нее ограничена. При отрицательной пробе неразведенный глобулин (10% белок) вводят подкожно в объеме 0,1 мл. При отсутствии заметной реакции через 30 минут — 1 час вводят внутримышечно всю назначенную дозу глобулина.

Проба считается положительной, если папула на месте введения разведенного в 100 раз глобулина увеличивается в диаметре до 1 — 3 см и более и окружена большой зоной красноты.

При положительной внутрикожной пробе с разведением глобулином или в случае появления анафилактической реакции на подкожную инъекцию глобулин вводят только по безусловным показаниям под наблюдением врача и с особыми предосторожностями: рекомендуется вначале вводить под кожу разведенный глобулин с интервалами 105 — 20 минут в дозах 0,5 — 2,0 и 5 мл; при отсутствии реакции на эти дозы вводят 0,1 мл неразведенного глобулина; если реакция отсутствует, через 30 минут вводят все назначенное количество глобулина. В случае возникновения реакции на малые дозы и безусловных лечебных показаниях рекомендуется вводить глобулин под наркозом (гексанал, пентотал к др.) — При введении глобулина всегда надо иметь наготове шприц с адреналином (1:1000) или эфедрином (5%).

В случае появления симптомов анафилактической реакции под кожу вводят, в зависимости от возраста больного, 0,3 — 1,0 мл адреналина или 0,2 — 1 мл эфедрина. В тяжелых случаях рекомендуется вводить эти препараты внутривенно. Рекомендуется также внутривенное введение 1 — 8 мл раствора новокаина (0,5%), 3 — 10 мл раствора хлористого кальция (10%), 20 — 50 мл раствора глюкозы (20 — 40%), применение кислорода и сердечных средств. При тяжелом шоке показано также медленное внутривенное введение физиологического раствора с добавлением 0,3 — 0,5 мл адреналина (1:1000).

Антибиотикотерапия сочетается с серотерапией и предусматривает применение антибиотиков, обладающих специфическим действием на возбудителя сибирской язвы, а именно пенициллин, биомицин, террамицин, стрептомицин.

Суточная доза пенициллина в зависимости от клинической тяжести колеблется от 500000 до 1500000 ед.; препарат вводится внутримышечно 4 раза в сутки в течение 5 — 7 дней до улучшения состояния больного.

Биомицин назначают вначале по 0,5 г каждые 4 часа, а с улучшением состояния — по 0,5 г каждые 6 часов. В среднем на курс лечения назначают от 8 до 16 г биомицина.

Террамицин назначается до 3 г в сутки (по 0,75 г 4 раза) в первые 3 — 4 дня заболевания, а затем по 0,5 г каждые 6 часов, до 16 — 18 г препарата на курс лечения.

Стрептомицин назначается внутримышечно по 0,5 г 2 раза в сутки в течение 5 — 7 дней.

Специфическое лечение сибирской язвы сочетают с применением симптоматических средств: кордиамина, камфоры, кофеина, эфедрина, адреналина, глюкозы и др. Витамины назначают в обычной дозировке.

VII. МЕРОПРИЯТИЯ ПО БОРЬБЕ С СИБИРСКОЙ ЯЗВОЙ

При проведении мероприятий по борьбе с сибирской язвой необходимо иметь в виду, что основным источником возбудителя сибиреязвенной инфекции являются больные животные, а дополнительным естественным резервуаром — почвенные очаги инфекции.

Следовательно, в борьбе с сибирской язвой главное внимание должно быть направлено на выявление и ликвидацию источников и очагов инфекции, на предупреждение рассеивания сибиреязвенного возбудителя в окружающей среде и на охрану людей от заболевания сибирской язвой.

Профилактические мероприятия среди людей

Комплекс противосибиреязвенных медико-санитарных мероприятий включает:

проведение общесанитарной профилактической работы среди населения, проживающего на территории стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов, а также среди лиц, занятых заготовкой, сбором, хранением, транспортировкой, переработкой и реализацией сырья животного происхождения;

вакцинопрофилактику лиц, подверженных риску заражения сибирской язвой, т.е. лиц, обслуживающих сельскохозяйственных животных в стационарно неблагополучных пунктах, и лиц, имеющих по роду своей деятельности контакт с сырьем животного происхождения, и т.д.;

выявление, учет, паспортизацию, эпидемиологическое обследование и обеззараживание сибиреязвенных очагов;

обязательную госпитализацию и лечение сибиреязвенных больных;

выявление, учет и специфическую профилактику лиц, контактировавших с источником возбудителя инфекции или инфицированными продуктами и предметами;

санитарно-просветительную работу среди населения и др.

Кроме того, органы государственного санитарного надзора обязаны осуществлять контроль за проведением комплекса агротехнических, мелиоративных и ветеринарно-санитарных мер, имея в виду предупреждение заболеваний животных и людей сибирской язвой. Ветеринарно-санитарные мероприятия проводятся органами ветеринарной службы в соответствии с «Инструкцией о мероприятиях против сибирской язвы», утвержденной Министерством сельского хозяйства СССР 28 февраля 1953 года, и «Правилами ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов», утвержденных Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 30 июня 1969 года и согласованных с Главным санитарно-эпидемиологическим управлением Министерства здравоохранения СССР.

Мероприятия по предупреждению заболеваний сибирской язвой животных и людей проводятся в соответствии с конкретными планами по борьбе с ней в республике, области (крае), районе и т.д. План составляется совместно с заинтересованными ведомствами и учреждениями и утверждается Советом Министров союзных и автономных республик, исполкомами Советов депутатов трудящихся.

Профилактическая вакцинация людей против сибирской язвы

Для вакцинации людей против сибирской язвы применяется сибиреязвенная сухая живая вакцина «СТИ». Сибиреязвенная сухая живая вакцина «СТИ» представляет собой высушенную в условиях вакуума взвесь спор вакцинных сибиреязвенных штаммов. Вакцину применяют для создания активного иммунитета против сибирской язвы.

Прививку производят врачи или средний медицинский персонал, который должен быть предварительно тщательно ознакомлен с наставлением по применению вакцины и иметь практический навык проведения прививок под руководством врача.

Вакцинации подлежат лица, занятые сбором, хранением, транспортировкой, переработкой и реализацией сырья животного происхождения, в особенности на предприятиях, перерабатывающих кожевенное сырье и шерсть, а также на мясокомбинатах. Кроме того, вакцинации подлежат лица, работающие с живыми культурами возбудителя сибирской язвы, с зараженными лабораторными животными или производящие исследование материала, зараженного возбудителем сибирской язвы.

В пунктах, стационарно неблагополучных по сибирской язве, прививкам подлежат лица, соприкасающиеся с общественным скотом, а в активных пунктах (в которых заболевания животных или людей регистрировались в течение последних 10 лет) прививаются также лица, соприкасающиеся с индивидуальным скотом.

В прочих случаях прививки проводятся по эпидемическим показаниям.

Привитые лица допускаются к работе через 10 — 14 дней после прививки.

Прививки против сибирской язвы противопоказаны в следующих случаях:

а) наличие острых инфекционных заболеваний или обострений хронических;

б) всякое лихорадочное состояние;

в) диабет;

г) заболевание сердца в стадии декомпенсации;

д) заболевание, сопровождающееся кахексией;

е) язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки в период обострения;

ж) гипертоническая болезнь (III степень);

з) ревматизм в период обострения;

и) острый нефрит;

к) острое поражение и цирроз печени;

л) заболевание щитовидной железы (II — III степени);

м) выраженный артериосклероз мозговых и венечных сосудов; явления коронарной недостаточности;

н) бронхиальная астма, выраженная эмфизема легких;

о) лимфогрануломатоз;

п) кожные заболевания с обширным поражением поверхности кожи;

р) злокачественные новообразования.

Сухую вакцину перед прививкой разводят в 1 мл водного 30% раствора глицерина, прилагаемого в отдельной ампуле. Разведение вакцины производят асептично. Шейку ампулы с вакциной предварительно надпиливают, обтирают спиртом и обжигают на пламени. Обжигание шейки ампулы с вакциной производят осторожно, чтобы не нагрелся корпус ампулы, где находится вакцина. После этого шейку ампулы аккуратно отламывают. Стерильный водный 30% раствор глицерина, находящийся в отдельной ампуле, набирают иглой стерильного шприца и затем вводят в указанном на этикетке объеме (1 мл) в ампулу с вакциной. Ампулу встряхивают до превращения сухой вакцины в равномерную суспензию. Полученной микробной взвесью пользуются для вакцинации.

Перед разведением и после разведения сухой вакцины ампулу и ее содержимое тщательно осматривают. При наличии в ампуле трещин, посторонних включений в вакцине, а также неразбивающихся хлопьев и неравномерной суспензии данную ампулу с вакциной бракуют.

Ампулу с разведенной вакциной тщательно предохраняют от возможного постороннего загрязнения. Разведенной вакциной в ампуле разрешается пользоваться и хранить ее не более 4-х часов. Разведенную и неиспользованную в течение этого срока вакцину уничтожают кипячением в течение двух часов.

Прививки против сибирской язвы живой вакциной «СТИ» проводят однократно накожным методом.

Прививки производят на наружной поверхности средней трети левого плеча. Перед прививкой кожу очищают спиртом, еще лучше вначале протереть ее спиртом, а затем обезжирить эфиром. Когда спирт или эфир испарится насухо, не прикасаясь к коже, на нее наносят по одной капле 0,01 — 0,02 мл разведенной вакцины в двух местах будущих насечек туберкулиновым шприцем с тонкой иглой, располагая эти капли друг от друга на расстоянии 3 — 4 см. Далее, левой рукой охватывают кожу плеча и слегка натягивают ее, а правой — стерильным оспопрививательным пером делают на коже через каждую нанесенную каплю вакцины 4 насечки. При этом обращают внимание на то, чтобы насечки не кровоточили (кровь должна выступать только мелкими росинками). После этого плоской стороной оспопрививательного пера в течение полминуты втирают вакцину в насечки. После втирания 5 — 10 минут вакцина подсыхает.

Примечания: а) оспопрививательное перо перед каждой прививкой необходимо прокипятить или протереть спиртом и обжечь на пламени, после чего дать ему полностью остыть;

б) поверхностное нанесение на коже царапин без появления росинок крови снижает эффективность прививок. При вакцинации запрещается замена оспопрививательного пера какими-либо другими предметами (скальпель, игла и др.).

Ревакцинация проводится ежегодно. При этом применяют ту же технику, что и при первичной вакцинации.

Местная реакция после прививки выражается гиперемией скарификационных полосок, легким набуханием кожи и возможной небольшой отечностью, с последующим образованием желтоватой корочки по ходу скарификаций. Возможно появление мелких узелков в области насечек. Указанные явления стихают в течение 48 — 72 часов. Образовавшиеся корочки отпадают на 4 — 8-й день.

Общая реакция на вакцину возникает лишь в отдельных случаях и выражается в недомогании, головной боли, реже в повышении температуры тела до 38 °C.

Прививаемость вакцины при вакцинации и ревакцинации проверяют через 48, 72, 96 часов и на 8-й день после прививки. Результаты учета местных кожных реакций на прививки отмечаются (+) и (-). Плюсом (+) отмечают положительный результат, когда по ходу насечек на коже имеется выраженная краснота и припухлость. Минусом (-) отмечается отсутствие кожной реакции.

Всех привитых против сибирской язвы регистрируют в журнале учета профилактических прививок, в который заносят фамилию, имя, отчество, род занятий, возраст, домашний адрес, дату вакцинации или ревакцинации, серию и срок годности вакцины, а также дату проверки, результаты вакцинации (или ревакцинации) после проверки на 8-й день, местные и общие явления, фамилию и должность вакцинатора. Журнал учета профилактических прививок хранится постоянно на каждом врачебном, фельдшерско-акушерском или фельдшерском участках.

Неизрасходованные в течение двух лет вакцины «СТИ» (не менее 5000 доз) подлежат переконтролю на продление срока годности в учреждении, выпустившем препарат.

Противоэпидемические мероприятия при заболевании человека сибирской язвой

В случае заболевания людей сибирской язвой, больные кожной формой ее госпитализируются в инфекционные больницы или отделения, а где такой возможности нет, могут помещаться в терапевтические палаты; больные кишечной, легочной и септической формами госпитализируются в отдельные инфекционные или терапевтические палаты, где им оказывается квалифицированная лечебная помощь (см. разделы «Госпитализация», «Лечение»). Ухаживающий персонал в окружении больного проводит текущую дезинфекцию (см. раздел «Методы и способы обеззараживания предметов и объектов, зараженных спорами возбудителя сибирской язвы»).

Если больной умер, то захоронение и вскрытие трупа производят с соблюдением правил, изложенных ниже.

К проведению противоэпидемических мероприятий допускаются медицинские работники и вспомогательный персонал, привитые против сибирской язвы в течение последних 12 месяцев.

Принимаются все необходимые меры для выяснения источника инфекции, проводится тщательное эпидемиологическое обследование. Для выяснения источника заболевания и причин заражения человека необходимо тщательно установить время, место и обстоятельства заражения, используя данные ветеринарно-санитарного надзора, результаты лабораторных исследований различных объектов (см. приложение № 3).

Эпидемиологическое обследование очага проводят, руководствуясь «Картой эпидемиологического обследования больных трансмиссивными заболеваниями и зоонозами» (здрав. уч. форма 171-в). Выявление очага, болезни позволяет правильно и своевременно применять противоэпидемические и профилактические меры путем проведения ветеринарно-санитарных и санитарно-гигиенических мероприятий (в целях предупреждения рассеивания и ликвидации сибиреязвенной инфекции).

Примечания: очагами сибирской язвы являются: а) места содержания животных, больных сибирской язвой (скотные дворы, изоляторы, загоны и т.д.);

б) места убоя и разделки туш сибиреязвенных животных;

в) места захоронения трупов сибиреязвенных животных;

г) помещения предприятий, в которых хранилось или перерабатывалось сырье, полуфабрикаты и продукция, вызвавшие заражение человека;

д) помещения, в которых находились предметы, которыми пользовались больные сибирской язвой.

В очагах болезни проводят заключительную дезинфекцию помещений, оборудования и инвентаря и санитарную обработку лиц, соприкасавшихся с больными животными или их сырьем и продукцией, а также лиц, соприкасавшихся с другим заразным материалом. Этим лицам с профилактической целью вводят противосибиреязвенный глобулин.

Профилактически глобулин следует вводить людям, имевшим прямой контакт с материалом, содержащим сибиреязвенные палочки или споры; принимавшим участие в убое и в разделке туши животного, оказавшегося больным сибирской язвой, а также лицам, ухаживавшим за больными животными и принимавшим участие в захоронении их трупов; приготовлявшим пищу из мяса животного, оказавшегося сибиреязвенным; употреблявшим в пищу мясо такого животного; особо тесно контактировавшим с больным сибирской язвой человеком (общая постель, полотенце и т.п.). Глобулин в указанных случаях следует применять в возможно ранние сроки после контакта. Нецелесообразно применение глобулина, если прошло более 5 суток после употребления в пищу мяса больного животного или более 10 суток после возможного инфицирования кожных покровов в результате контакта.

Профилактически взрослому человеку рекомендуется вводить 20 — 25 мл глобулина, подросткам от 14 до 17 лет — 12 мл, детям, в зависимости от возраста, до 5 — 8 мл. Указанные дозировки могут быть изменены в зависимости от степени контакта с зараженным материалом. Введение глобулина проводится после предварительной пробы на чувствительность к лошадиному белку (см. раздел «Лечение»).

Глобулин можно вводить иногда в сочетании с пенициллином (500000 — 1000000 ед.). Экстренную профилактику тех же контингентов проводят с помощью антибиотиков. За этими лицами устанавливается медицинское наблюдение в течение 8 дней.

О случае заболевания человека сообщают:

а) вышестоящему по подчиненности учреждению по телефону или с нарочным и одновременно направляют экстренное извещение;

б) в виде внесрочного донесения в Министерство здравоохранения союзной республики;

в) участковому ветеринарному врачу (ветеринарному фельдшеру), обслуживающему населенный пункт, хозяйство, предприятие, в котором произошло заражение больного;

г) исполнительному комитету Совета депутатов трудящихся по территориальной принадлежности.

По эпидемическим показаниям, в случае, когда введение противосибиреязвенного глобулина или антибиотиков является недостаточным и остается реальная угроза заражения людей, следует провести профилактические прививки вакциной СТИ.

За очагом болезни проводят наблюдение до полной ликвидации очага.

Госпитализация, режим и порядок выписки больных сибирской язвой

Все больные сибирской язвой, независимо от ее формы, или подозрительные на это заболевание подлежат немедленной госпитализации.

Госпитализацию производят в инфекционные больницы или в инфекционные отделения больниц, а при отсутствии последних (особенно в сельской местности) — в отдельные палаты.

Больному сибирской язвой устанавливают особый режим содержания и ухода. Персонал, обслуживающий больного, должен соблюдать меры личной профилактики. Для ухода за больными легочной, кишечной и септической формой сибирской язвы выделяют отдельный медицинский персонал.

Все манипуляции у постели больного производят в резиновых перчатках и отдельных халатах. При уходе за больными легочной и септической формами заболевания необходимо пользоваться очками-консервами и ватно-марлевой повязкой.

Выздоровевших от кожной формы сибирской язвы выписывают из стационара после отпадания струпьев, эпителизации и рубцевания язв. При септической, легочной и кишечной формах выписку производят после клинического выздоровления и двукратного отрицательного результата бактериологических исследований, производимых с интервалами в 5 дней. В зависимости от формы болезни производят исследования крови, мокроты, испражнений и мочи (см. раздел «Лабораторные исследования при сибирской язве»).

Порядок вскрытия и захоронения трупов умерших от сибирской язвы

Труп умершего от сибирской язвы обертывают в простыню, смоченную 20% хлорноизвестковым молоком, или 10% раствором 2/3 основной соли гипохлорита кальция и затем укладывают в металлический гроб или гроб из плотно сколоченных досок, обитый внутри клеенкой, на слой хлорной извести, толщиной 10 см; труп засыпают хлорной известью со всех сторон. Крышку гроба заколачивают гвоздями и больше не открывают. Если есть возможность, гроб с трупом подвергают кремации (сжиганию). В случае невозможности кремации проводят захоронение на общих кладбищах. Гроб зарывают в могилу на глубину не менее 2 м.

В местностях с высокостоящими подпочвенными водами гроб с трупом устанавливают в плотный просмоленный изнутри и сверху ящик. Пространство между стенками гроба и ящика заполняют сухой хлорной известью, ящик заколачивают плотной просмоленной крышкой.

В тех случаях, когда труп еще не удален из квартиры, труп укладывают в гроб с соблюдением указанных выше правил и приступают к дезинфекции помещения. При этом обработку начинают с гроба, который орошают одним из дезинфицирующих растворов, рекомендуемых для обеззараживания помещений.

Трупы людей, умерших от сибирской язвы, когда диагноз подтвержден бактериологически, вскрытию не подвергаются.

В случае крайней необходимости вскрытие трупа сибиреязвенных больных производит только врач с обязательной последующей заключительной дезинфекцией помещения, всех предметов и инструментария, бывших в употреблении халатов, перчаток, обуви и т.д.

Перевозка трупов сибиреязвенных больных к месту захоронения разрешается только с соблюдением указанных выше правил.

VIII. ДЕЗИНФЕКЦИЯ В ОЧАГЕ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ

В квартире, где находился больной сибирской язвой или больной, подозрительный на это заболевание, проводят тщательную заключительную дезинфекцию помещения, мебели, предметов ухода, постельных принадлежностей, белья и т.п. Заключительную дезинфекцию проводят отряды дезинфекционных или санитарно-эпидемиологических станций под руководством и в присутствии врача.

Перед проведением заключительной дезинфекции на дому у больного врач обязан:

а) выявить все зараженные или подозрительные на заражение сибирской язвой вещи в помещении, где находился больной, и в его окружении;

б) отобрать и направить на дезинфекцию предметы (вещи), подлежащие камерному обеззараживанию;

в) определить способы обеззараживания помещений, предметов и т.д. (см. таблицу «Методы и способы обеззараживания предметов и объектов, зараженных спорами возбудителя сибирской язвы»).

МЕТОДЫ И СПОСОБЫ ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЯ ПРЕДМЕТОВ И ОБЪЕКТОВ, ЗАРАЖЕННЫХ СПОРАМИ ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ

Предметы, материалы, подлежащие обеззараживанию	При текущей дезинфекции	При заключительной дезинфекции
	До начала дезинфекции в помещении необходимо уничтожить мух (см. приложение № 5).
Перевязочный материал (вата, компрессная бумага, бинты, тампоны и т.д.), твердые остатки пищи после больного, мусор и малоценные предметы	После использования собирают в специальную посуду и немедленно уничтожают сжиганием или кипятят в 2% растворе соды в течение 60 минут	Так же, как при текущей дезинфекции
Жидкие остатки пищи больного	Кипятят в течение 60 минут в закрытой посуде, после чего спускают в канализацию, а при отсутствии таковой в дворовую уборную или помойную яму	Так же, как при текущей дезинфекции
Посуда больного	Посуду для питья и еды каждый раз после пользования кипятят в 2% растворе соды в течение 60 минут или погружают в 1% активированный раствор хлорамина, или препарата ХБ на 60 минут или в горячий (50°) 3% раствор перекиси водорода с 0,5% моющего средства «Прогресс» на 40 минут; по окончании экспозиции посуду моют в одном из указанных растворов, а затем ополаскивают в чистой воде	Так же, как при текущей дезинфекции
Грязное белье больного (нательное и постельное), халаты и верхняя одежда окружающих и ухаживающих за больными	Обеззараживание производят на месте путем замачивания в теплом 1% растворе бельевой соды, затем, медленно нагревая, доводят до кипения и кипятят в течение 60 минут. Замачивают в одном из следующих дезинфицирующих растворов: в 1% активированном растворе хлорамина или препарата ХБ при экспозиции 2 часа; в 0,2% растворе формальдегида в смеси с 0,2% раствором мыла или 0,2% ОП-10 при температуре 60° и экспозиции 60 минут; в 3% растворе перекиси водорода с 0,5% моющего средства «Прогресс» при температуре 50 °C и экспозиции 40 минут. Расход дезинфицирующих растворов на 1 кг белья — 5 литров. При невозможности осуществить дезинфекцию перечисленными выше способами на месте, вещи упаковывают в плотную тару и отправляют на дезинфекционный пункт для обеззараживания в паровой или пароформалиновой камере	Так же, как при текущей дезинфекции
Носильные вещи больного, которыми он пользовался в течение 2 — 3 недель до заболевания и в момент заболевания и все другие вещи, соприкасавшиеся с этими вещами или самим больным	Упаковывают в плотную тару и направляют для камерного обеззараживания, где обрабатывают по пароформалиновому методу: норма расхода формалина: 250 мл на 1 м3 камеры, температура 58 — 59°, экспозиция 2 часа 30 минут. При обработке по паровоздушному методу температура 97 — 98°, экспозиция 45 минут	Так же, как и при текущей дезинфекции
Овчинно-шубные изделия		Обеззараживают в пароформалиновых камерах при температуре 62 — 63°, расходе формалина 250 мл на 1 м3 камеры и экспозиции 2 часа 30 минут. Полушубки (2 — 3 штуки) должны быть вывернуты мехом наружу, в рукава вставлены распорки длиной 65 см, чтобы мех рукавов не соприкасался с мехом полушубка
Изделия из синтетических тканей	Погружают в горячий (60 °C) 0,2% раствор формальдегида на 60 минут, при добавлении поверхностно-активных веществ ОП-7 или ОП-10. Соотношение веса вещей и дезинфицирующего раствора должно быть 1:5. При дезинфекции изделий из капрона следят за полным погружением их в дезинфицирующий раствор, не допуская всплывания	Так же, как при текущей дезинфекции
		Упаковывают в плотную тару и направляют для камерной дезинфекции по паровоздушному методу при температуре 98° и экспозиции 45 минут. Норма загрузки камеры — 8 комплектов (48 кг) на 1 кв. м полезной площади камеры
Искусственный мех		Направляют для камерной обработки паровоздушной смесью при температуре 97 — 98°. Норма загрузки 10 комплектов на 1 кв. м полезной площади камеры и экспозиции 30 минут
Постельные принадлежности больного (подушки, матрацы, ватные и шерстяные одеяла, прикроватные коврики и т.д.)	Вещи упаковывают в плотную тару, смоченную в дезинфицирующем растворе, и направляют в паровую камеру для дезинфекции при 110 — 111° в течение 40 минут. Норма загрузки 50 кг на 1 куб. м объема камеры, или в пароформалиновую для дезинфекции при температуре 62 — 63°, расходе формалина 250 мл на 1 куб. м камеры и экспозиции 2 часа 30 минут	Так же, как при текущей дезинфекции
Помещение, где находился больной, а также предметы обстановки	Пол, стены, двери, предметы обстановки и другие поверхности ежедневно не реже 3 раз в день обеззараживают путем 2-кратного протирания одним из следующих растворов: а) 6% раствором перекиси водорода с 0,5% моющего средства «Прогресс»; б) Горячим (60°) 5% раствором формальдегида с 5% раствором мыла; в) 2% осветленным активированным раствором дветретиосновной соли гипохлорита кальция (10 г активного хлора и 1,25 г аммиака или 5 — 10 г сернокислого аммония в 1 л воды); г) 4% активированным раствором хлорамина или препарата ХБ (40 г хлорамина или препарата ХБ и 1,25 г аммиака или 5,0 — 10% хлористого или сернокислого аммония на 1 л воды)	а) двукратное орошение 4% осветленным активированным раствором хлорной извести или 2% осветленным активированным раствором дветретиосновной соли гипохлорита кальция, содержащими 10 г активного хлора и 1,25 г аммиака в 1 л раствора; б) двукратное орошение 4% активированным раствором хлорамина (активатор — хлористый или сернокислый аммоний в дозе 5 — 10 г на 1 л); в) двукратное орошение 20% осветленным раствором хлорной извести или 15% раствором дветретиосновной соли гипохлорита кальция, содержащим не менее 5% активного хлора; г) в помещениях со стенами, покрытыми масляной краской, следует применять горячий (55 °C) 5% раствор формальдегида с добавлением 5% раствора мыла при двукратном орошении; д) двукратное орошение 6% раствором перекиси водорода с 0,5% моющего средства «Прогресс»; е) мебель и другие предметы обстановки в комнате больного тщательно протирают тряпками, смоченными в одном из указанных растворов
Грязные квартиры и помещения, где манипулировали с продуктами (мясо, молоко и др.) и сырьем (шкуры, шерсть и т.д.), полученными от животных, больных сибирской язвой	Обеззараживают одним из способов: а) двукратное орошение 4% активированным раствором хлорамина или препарата ХБ; б) двукратное орошение осветленным активированным раствором хлорной извести или 2% осветленным активированным раствором дветретиосновной соли гипохлорита кальция; в) 20% осветленным раствором хлорной извести или 15% раствором дветретиосновной соли гипохлорита кальция, содержащим не менее 5% активного хлора; г) 6% раствором перекиси водорода с 0,5% моющего средства «Прогресс»	Так же, как при текущей дезинфекции
	Примечание: 1. Орошение производят с 30-минутными интервалами. Дезинфекцию считают законченной через 30 минут после последнего орошения; 2. Обработку помещения лучше производить при открытых окнах; 3. Расход дезинфицирующих жидкостей для пористых поверхностей (кирпича и штукатурки) 900 мл, а для непористых — 500 мл на 1 кв. м орошаемой поверхности, при использовании растворов перекиси водорода с моющими средствами 300 мл на 1 кв. м орошаемой поверхности
Выделения больного (кал, мокрота, рвотные массы)	Смешивают с сухой хлорной известью или с дветретиосновной солью гипохлорита кальция в пропорции 1:2 по отношению к выделениям и тщательно перемешивают их. В таком виде выделения оставляют на 2 часа в закрытой посуде, после чего выливают в канализацию или дворовую уборную	Так же, как при текущей дезинфекции
	Примечание: посуда для сбора выделений должна быть эмалированной или фаянсовой с плотно закрывающейся крышкой
Моча	Добавляют сухую хлорную известь из расчета 100 г на 1 л мочи или дветретиосновную соль гипохлорита кальция из расчета 50 г на 1 л мочи, время контакта 2 часа
Ночные горшки, мочеприемники, подкладные судна, плевательницы	Освобождают от выделений и опускают в специальный хорошо закрывающийся бак с осветленным раствором 20% хлорной извести или в 15% раствор дветретиосновной соли гипохлорита кальция на 60 минут или в 6% раствор перекиси водорода с 0,5% моющего средства «Прогресс» при температуре 60°, экспозиции 60 минут, а затем тщательно промывают горячей водой. Для обслуживания каждого больного должна быть выделена отдельная посуда для сбора выделений	Так же, как при текущей дезинфекции
Надворные уборные, мусорные ящики, помойные ямы	Обильно орошают 20% хлорно-известковым молоком 2 раза с интервалом в 3 часа. Содержимое их засыпают сухой хлорной известью с целью предупреждения залета мух. Оставшийся после дезинфекции мусор, малоценный уборочный материал (тряпки, метелки и т.д.) сжигают	Так же, как при текущей дезинфекции
Транспорт (автомашины, повозки водонепроницаемые ящики), перевозивший инфицированные вещи, сырье, больных животных и т.д.		Орошают два раза 4% раствором хлорамина или препарата ХБ, 4% раствором хлорной извести, 2% раствором дветретиосновной соли гипохлорита кальция, активированным хлористым или серно-кислым аммонием, или аммиаком; 5% раствором формальдегида с 5% раствором мыла при температуре раствора 60° или 6% раствором перекиси водорода с 0,5% моющего средства при температуре раствора 50 — 60°

Меры по охране здоровья дезинфекторов, работающих в очагах сибирской язвы

К проведению дезинфекционных мероприятий и очистке зараженных сибирской язвой помещений допускаются лица, хорошо обученные правилам дезинфекции по поводу сибирской язвы и вакцинированные против нее в течение последних 12 месяцев. Дезинфекторы и другой персонал, привлеченный к обработке очага сибирской язвы, не допускаются к указанным видам работ при наличии царапин, ссадин и других повреждений кожи лица, рук и других открытых мест тела.

Все работающие в очаге сибирской язвы должны быть обеспечены плотной спецодеждой: капюшонами, комбинезонами, резиновыми перчатками, резиновыми сапогами, а также противогазами.

Дезинфекторы к работе по обеззараживанию очагов сибирской язвы допускаются только в противогазах, так как хлор и формальдегид крайне ядовиты; горячие растворы едкого натра при попадании на кожу вызывают изъязвление, а при попадании в глаз угрожают потерей зрения.

Учитывая трудности работы в противогазе при обеззараживании помещений 20%-ным хлорно-известковым молоком или осветленным раствором его, следует направлять одновременно две бригады дезинфекторов, которые поочередно работают по 1 — 2 часа, заменяя друг друга. По окончании дезинфекционных работ в очаге спецодежда и спецобувь дезинфекторов подлежат обеззараживанию.

Обеззараживание одежды и спецодежды соприкасавшихся с материалом, зараженным или подозрительным на заражение возбудителем сибирской язвы, проводится следующими способами:

а) в текучепаровых камерах при температуре 110 °C в течение 90 минут (если вещи без вреда для качества переносят такую дезинфекцию);

б) в бучильниках, где кипятят их в течение 60 минут в 1 — 2%-ном растворе соды;

в) замачиванием в 1%-ном активированном растворе хлорамина или препарата ХБ в течение 2 часов при температуре 20°, при расходе 5 л дезинфицирующего раствора на 1 кг вещей.

Примечание. Вещи на дезинфекционную станцию направляются в плотной таре.

Резиновые сапоги и резиновые перчатки обеззараживают в течение 4 часов в 4%-ном растворе формальдегида, или в течение 2 часов в 1%-ном активированном растворе хлорамина, или замачивают их в 3%-ном растворе перекиси водорода с 0,5% моющего средства «Прогресс» при температуре раствора 50 °C в течение 40 минут.

Дезинфекция сырья животного происхождения и предприятий по его заготовке, хранению и переработке проводится в соответствии с «Инструкцией по проведению ветеринарной дезинфекции, дезинвазии, дезинсекции и дератизации», утвержденной Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 8 декабря 1968 г.

Ветеринарно-санитарная обработка, включая дезинфекцию грузовых помещений, морских и речных судов (палуб, барж, рефрижераторов и других) после перевозки на них кожевенного сырья не боенского происхождения, не исследованного на сибирскую язву, проводится по 3-й категории в соответствии с «Инструкцией по ветеринарно-санитарной обработке грузовых помещений морских и речных судов после перевозки в них животных, птицы, мяса и сырья животного происхождения», утвержденной Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 10 июля 1967 г.

IX. САНИТАРНОЕ ПРОСВЕЩЕНИЕ

Заболеваемость сибирской язвой, особенно среди сельского населения, в значительной степени поддерживается в результате плохой осведомленности людей в отношении источников и путей передачи этой инфекции, а также мер профилактики. Поэтому в системе мероприятий по борьбе с сибирской язвой среди людей большое значение имеет правильно организованная и целенаправленная работа по санитарному просвещению.

Основными задачами санитарного просвещения по профилактике сибирской язвы являются следующие:

1. Создать у населения четкое представление о возбудителе заболевания и длительности его сохранения в почве; об основных путях заражения человека и животных и первых признаках заболевания; об опасности, которую представляет для людей заболевание сибирской язвой сельскохозяйственных животных.

2. Познакомить население с основными мерами профилактики сибирской язвы, обратив особое внимание:

на разъяснение значения профилактических прививок населению, подлежащему обязательной плановой вакцинации против сибирской язвы;

на необходимость полного учета и охвата плановой профилактической вакцинацией всех колхозных и совхозных сельскохозяйственных животных и скота, находящегося в индивидуальном владении.

3. Добиться ликвидации подворного убоя скота без предварительного ветеринарного осмотра.

Дифференцированная санитарно-просветительная работа должна проводиться как среди широких масс населения, так и среди отдельных групп:

руководителей совхозов и колхозов;

работников животноводства (скотники, доярки, пастухи и др.);

рабочих кожевенно-сырьевых баз и предприятий, обрабатывающих сырье животного происхождения;

владельцев индивидуального скота;

санитарного актива;

школьников;

больных и их родственников.

Основным содержанием пропаганды среди всех групп населения являются следующие вопросы:

1. Сведения о биологических особенностях B. anthracis, что необходимо для понимания как механизма передачи инфекции, так и мер профилактики.

2. Источники инфекции и пути передачи с акцентом на наиболее типичные для данной группы населения.

Так, среди широких масс населения следует разъяснить, насколько опасна покупка с рук мяса и мясных продуктов, животного сырья и изделий из него, не прошедших ветеринарно-санитарного контроля; среди рабочих соответствующих предприятий особенно подробно эти вопросы разъяснить в аспекте специфического характера сырья и технологического процесса на данном предприятии.

Среди сельских жителей главное внимание должно быть обращено на опасность подворного убоя больных животных, разделку туш и утилизацию трупа.

3. Ранние клинические признаки заболевания у людей; тяжесть заболевания и срочная необходимость в госпитализации и лечении больного.

Всем людям, имеющим дело с животными, следует также сообщить сведения о клинических признаках сибирской язвы у животных, обратив особое внимание на опасность заболевания внутренними формами.

4. Меры личной и общественной профилактики с учетом особенностей труда и быта.

Пропаганда научных знаний среди населения будет эффективнее, если использовать конкретные случаи из практики, иллюстрирующие те или иные положения из эпидемиологии и профилактики сибирской язвы, например, при разъяснении опасности подворного убоя скота, о случаях заражения через животное сырье, о необходимости срочного обращения к врачу, а также опасности самолечения.

Методы и формы санитарно-просветительной работы с различными контингентами населения

1. Вводный санитарный инструктаж <*> проводится для: рабочих, поступающих на кожевенно-сырьевые базы и предприятия, связанные со всеми видами работы с сырьем животного происхождения и для рабочих, поступающих на животноводческие фермы, и лиц, привлекаемых к работам, проводимым на территориях стационарно-неблагополучных по сибирской язве пунктов.

---

<*> При проведении прививок против сибирской язвы вновь поступающим рабочим необходимо провести инструктаж и выдать соответствующие памятки.

2. Курсовое гигиеническое обучение по вопросам профилактики «зооантропонозных заболеваний» (сибирской язвы, бруцеллеза, ящура, лептоспироза) и роли личного фактора в их профилактике работников животноводческих ферм; рабочих кожевенно-сырьевых баз и предприятий, связанных со всеми видами работ с сырьем животного происхождения.

3. Курсовая подготовка общественного санитарного актива в неблагополучных по сибирской язве местностях.

4 Подготовка школьников по основным вопросам эпидемиологии сибирской язвы, первым признакам заболевания и его профилактике в процессе учебной работы на уроках зоологии в 7 классе и анатомии, физиологии и гигиены человека в 8 классе, а также при внеклассной работе с учащимися всей школы.

5. Индивидуальная и групповая (профилактическая и по эпидпоказаниям) работа с населением при подворных обходах с обращением особого внимания на содержание индивидуального скота, его вакцинацию, недопустимость подворного убоя без предварительного ветеринарного осмотра и бесконтрольную реализацию мяса, субпродуктов и шкур.

6. Индивидуальная и групповая работа с родственниками и соседями больного в очаге сибирской язвы.

7 Лекции и беседы среди широких масс населения о сибирской язве с приведением конкретных примеров заболевания людей и животных и обсуждения причин возникновения этих заболеваний.

8. Использование массовых каналов пропаганды: радио, печать, кино, телевидение.

9. Использование наглядных санитарно-просветительных материалов (плакаты, выставки и т.д.) и научно-популярной литературы (памятки, листовки и т.д.) по вопросам профилактики сибирской язвы (см. приложение № 6).

Особенности работы общественного санитарного актива

При подворных обходах:

а) выявление лиц, владеющих индивидуальным скотом и не обеспечивших его вакцинацию;

б) выявление случаев подворного убоя скота без предварительного ветеринарного осмотра;

в) помощь медицинским работникам при проведении профилактических прививок и при проведении санитарно-просветительной работы;

г) сигнализация медицинским работникам о заболевании людей и животных.

На животноводческих фермах:

а) наблюдение за правильным гигиеническим поведением работников животноводческих ферм (личная гигиена) и содержанием спецодежды;

На промышленных предприятиях:

а) проверка правильного хранения спецодежды и личной одежды;

б) проверка своевременной смены спецодежды и запрещение выноса спецодежды за пределы предприятия;

в) наблюдение за выполнением рабочими правил личной гигиены (мытье рук после работы, прием гигиенического душа перед уходом домой, снятие спецодежды).

Планирование и учет санитарно-просветительной работы

В комплексных планах мероприятий по борьбе с инфекционными заболеваниями, в том числе и сибирской язвой, составляемых в республиках и утверждаемых соответствующими министерствами и ведомствами, должны быть отражены конкретные для сибирской язвы вопросы санитарного просвещения населения.

Мероприятия по санитарному просвещению в борьбе с сибирской язвой среди людей должны включаться в общие планы работы соответствующего медицинского учреждения с указанием сроков и исполнителей. Учет работы проводится по форме № 38.

При планировании санитарно-просветительной работы по сибирской язве необходимо отражать ее специфику в зависимости от административного деления медицинского участка (город, район, село), так как это определяет контингенты населения и соответственно содержание работы.

Существенное различие должна иметь санитарно-просветительная работа и среди населения на территориях, где заболеваемость сибирской язвой среди животных и людей либо не регистрируется вообще, либо наблюдается крайне редко.

Методическое руководство санитарно-просветительной работой по вопросам сибирской язвы должны осуществлять дома санитарного просвещения и санитарно-эпидемиологические станции. В годовые планы работы ДСП и в планы работы СЭС по борьбе с инфекционными заболеваниями должны быть включены вопросы дифференцированной санитарно-просветительной работы по профилактике сибирской язвы с учетом различных контингентов населения; определены объекты для проведения этой работы и выработаны формы и методы ее.

В санитарно-просветительной работе по профилактике сибирской язвы должны активно участвовать медицинские работники общей сети, особенно сельских участковых больниц и фельдшерско-акушерских пунктов, а также МСЧ, медпунктов и здравпунктов на предприятиях, работающих с сырьем животного происхождения. Медицинские работники сельских врачебных участков и фельдшерско-акушерских пунктов должны активно привлекать к работе среди населения по борьбе с сибирской язвой педагогов школ, санитарный актив, предварительно обучив их.

Ветеринарные работники совместно с медицинскими работниками также должны вести работу среди населения по разъяснению правил содержания и убоя скота в целях профилактики сибирской язвы.

Для обеспечения наибольшей эффективности санитарно-просветительной работы среди населения дома санитарного просвещения и санитарно-эпидемиологические станции должны силами своих специалистов проводить занятия по повышению квалификации в области методики санитарного просвещения работников МСЧ и здравпунктов на предприятиях, перерабатывающих сырье животного происхождения, а также среди медперсонала сельских участковых больниц, амбулаторий и фельдшерско-акушерских пунктов.

Качественные показатели санитарно-просветительной работы

Качественными показателями эффективности санитарно-просветительной работы могут являться следующие:

повышение уровня гигиенических знаний населения по вопросам профилактики сибирской язвы;

ликвидация или резкое уменьшение числа случаев подворного убоя скота без предварительного ветеринарного осмотра;

полный учет и охват профилактической вакцинацией скота, находящегося в индивидуальном владении в стационарно-неблагополучных по сибирской язве местностях;

правильное гигиеническое поведение рабочих, обслуживающих скотомогильники и места захоронения сибиреязвенных животных;

полный охват вакцинопрофилактикой контингентов населения, подлежащих обязательной плановой вакцинации против сибирской язвы;

раннее обращение больных сибирской язвой в лечебные учреждения.

Приложение 1

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ СПОРОВОЙ КУЛЬТУРЫ B. ANTHRACIS

Среда из казеинового перевара pH = 7,2 — 7,4

Основой среды является триптический перевар казеина, к которому добавляют разбавленный водяной экстракт дрожжей и минеральные соли, играющие важную роль в питательных потребностях сибирской язвы.

На этой среде получают спорообразование в 90 — 95%.

Рецепт приготовления казеинового перевара

Состав среды:

Казеин	200,0 г
Натрий углекислый кристаллический (Na2CO3 - 10H2O)	20,0 г
Суспензия размолотой поджелудочной железы	100,0 г
Хлороформ	10,0 мл
Вода	200,0 мл

Изготовление суспензии поджелудочной железы

С трех килограммов поджелудочной железы удаляют жир. Затем ее тонко размалывают, взвешивают, помещают в бутыль, куда добавляют воду в количестве, в три раза превышающем ее вес, резко встряхивают и добавляют алкоголь до 25%. Перед употреблением тщательно взбалтывают.

Приготовление казеинового перевара

Казеин и углекислую соду помещают в колбу или бутыль, добавляют двумя порциями воду, подогретую до 37 °C, после каждого добавления воды содержимое бутыли хорошо взбалтывают, добавляют суспензию размолотой поджелудочной железы и хлороформ, снова хорошо взбалтывают. Устанавливают pH = 7,4 — 7,5. Помещают на 16 дней в термостат при температуре 37 °C, ежедневно взбалтывают. Ежедневно берут образцы и устанавливают pH = 7,4 — 7,5. После удаления из термостата среду два дня отстаивают и отфильтровывают кристаллы тирозина, которые остаются в виде белого осадка.

К двум литрам фильтрата добавляют 15 мл концентрированной соляной кислоты, растворенной в 150 мл воды, и кипятят 60 минут. Полученный перевар охлаждают, профильтровывают и устанавливают реакцию до pH = 7,4 (требуется 6 — 7 мл 40%-ного раствора NaOH). Поместив перевар в колбу или бутыль, добавляют 1% хлороформа, быстро несколько раз взбалтывают его, чтобы хлороформ эмульгировался, и хранят в темном месте.

Водный экстракт дрожжей

Для состава нужно взять пивных дрожжей 125 г, воды дистиллированной 1000 мл. Смешать дрожжи с водой в колбе и кипятить, непрерывно размешивая до прекращения пены; профильтровать на фильтре через пластинки. Добавить 1% хлороформа, хранить в колбах или бутылях в темноте, периодически взбалтывая.

Для массового производства колбы ставят на ночь на холод. Утром прозрачный слой сифонируют в одну емкость, а затем фильтруют.

На изготовление одного литра среды берут:

Среды казеинового триптического перевара	50 мл
Водного экстракта дрожжей	200 мл
7 + калия фосфорнокислого двузамещенного (K2HPO4)	5 г
6 + калия фосфорнокислого однозамещенного (K2H2PO4)	1 г
5 + сернокислого натрия (Na2SO)4	0,3 г
4 + хлористого кальция (CaCl2)	0,1 г
3 + сернокислого марганца (MnSO4·7H2O)	0,03 г
2 + сернокислой магнезии (MgSO4·7H2O)	0,05 г
1 + сернокислого железа (Fe2(SO4)3·9H2O)	0,01 г
Агара	30,0 г
Воды дистиллированной до	1000,0 мл

Примечания: 1. Взамен дрожжевого экстракта можно использовать 0,5%-ный раствор дрожжей «Бакто».

2. Соли, отмеченные знаком +, могут быть опущены.

3. Арабские цифры от 7 до 1 обозначают порядок растворения солей.

4. Натрий фосфорнокислый не следует использовать взамен солей калия.

Среду с помощью фосфатного буфера доводят до pH = 7,2.

Пшеничный агар

1 кг пшеничной крупы «Артек» или «Полтавской» залить 2 л дистиллированной воды. На следующий день воду слить и довести до первоначального объема, добавить 2,5% агар-агара, отделить осадок. Установить pH = 7,4. Стерилизация дробная, в аппарате Коха по 1,5 часа текущим паром в течение 3 дней.

Приложение 2

ОБРАБОТКА МЕМБРАННЫХ ФИЛЬТРОВ

Новые мембранные фильтры в течение суток промывают в проточной водопроводной воде, затем высушивают на фильтровальной бумаге, раскладывая по 1 штуке. Мембранные фильтры перед посевом стерилизуют кипячением в трижды сменяемой дистиллированной воде по 20 — 30 минут. В последней воде мембранные фильтры хранят до следующего употребления.

Приложение 3

СХЕМА АНАЛИЗА ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ И ПРОТИВОЭПИДЕМИЧЕСКИХ МЕРОПРИЯТИЙ В СТАЦИОНАРНО-НЕБЛАГОПОЛУЧНОМ ПО СИБИРСКОЙ ЯЗВЕ ПУНКТЕ, В КОТОРОМ ИМЕЛО МЕСТО ЗАБОЛЕВАНИЕ ЛЮДЕЙ

I. ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ПУНКТА

1. Динамика заболеваемости людей в ходе изучаемой вспышки.

2. Источники инфекции.

3. Заболевания привитых (сколько раз прививались в прошлом; сроки заболеваний после последней прививки).

4. Факторы передачи инфекции и условия заражения людей (продукты животноводства, навоз, почва и др.: контакт с животным или его трупом, разделка туши, укус кровососущих членистоногих и др.).

5. Профессиональный и возрастной контингент заболевших.

6. Клинические формы заболеваний. Летальность.

7. Заболеваемость людей в предыдущие годы и ее краткая характеристика.

II. ПРОТИВОЭПИДЕМИЧЕСКИЕ МЕРОПРИЯТИЯ

1. Сроки выявления и госпитализации больных. Были ли введены антибиотики или сибиреязвенный глобулин до госпитализации.

2. Методы лабораторной диагностики заболеваний и их результаты. Материал взят на исследование и поставлена проба с антраксином до или после введения антибиотиков. Результаты пробы с антраксином.

3. Способ лечения.

4. Методы и объем экстренной специфической профилактики.

5. Дезинфекция в очаге (сроки, способ, проверка эффективности).

III. МЕРОПРИЯТИЯ ПО ПРОФИЛАКТИКЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЛЮДЕЙ В СТАЦИОНАРНО-НЕБЛАГОПОЛУЧНОМ ПУНКТЕ ДО ВСПЫШКИ

1. Профилактические прививки:

а) количество привитых лиц из различных контингентов населения (работников животноводческого хозяйства, зооветработников, работников убойных пунктов и мясокомбинатов, предприятий по сбору, хранению и переработке животного сырья; лиц, обслуживающих животных частного сектора);

б) выполнение плана прививок по месяцам.

2. Санитарное состояние и соблюдение противоэпидемического режима в местах сбора, хранения, переработки и реализации продуктов животноводства.

3. Порядок контроля за продуктами животноводства, поступающими в продажу населению.

IV. ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ПУНКТА

1. Заболеваемость животных в предыдущие годы.

2. Динамика заболеваемости животных в ходе изучаемой вспышки.

3. Заболевания привитых животных (препарат, сроки заболеваний после последней прививки и предшествовавшей).

4. Пути и факторы распространения инфекции и условия, способствовавшие заражению скота (размыв почвы поверхностными или грунтовыми водами, геологические и другие работы, лет кровососущих членистоногих, использование ранее закрытых пастбищ, нарушение правил по ограждению скотомогильника и др.).

V. ПРОТИВОЭПИЗООТИЧЕСКИЕ МЕРОПРИЯТИЯ

1. Сроки выявления заболевших животных.

2. Методы диагностики заболеваний и их результаты.

3. Проведение вынужденных прививок (сроки проведения, объем, препарат).

4. Дезинфекция мест содержания, забоя, и падежа животных и предметов ухода за ними (способ, проверка эффективности).

5. Карантин.

VI. МЕРОПРИЯТИЯ ПО ПРОФИЛАКТИКЕ ЗАВОЕВАНИЙ ЖИВОТНЫХ В СТАЦИОНАРНО-НЕБЛАГОПОЛУЧНОМ ПУНКТЕ

1. Численность зараженных участков почвы (скотомогильников, отдельных сибиреязвенных могил, участков пастбищ и выгонов, дворов, скотобаз, скотопрогонных трактов) и их характеристика:

а) когда и как могло произойти заражение почвы;

б) состояние их учета и наличие паспортов;

в) меры по предупреждению контакта скота с ним;

г) санитарно-гигиеническое состояние;

д) наличие в общем плане хозяйства мелиоративных (по осушке болот, заболоченных пастбищ и сенокосных угодий), а также агротехнических мероприятий, направленных на обезвреживание зараженных сибирской язвой участков почвы и характеристика их исполнения.

2. Профилактические прививки за последние два года:

а) количество привитого общественного и частновладельческого скота (раздельно) по годам с указанием месяцев;

б) препарат.

3. Порядок убоя скота:

а) наличие и санитарное состояние убойных площадок;

б) меры по предупреждению тайного убоя:

в) наличие подворного (без предубойного ветеринарного осмотра) убоя скота.

4. Порядок перевозки и уничтожения трупов животных, павших от сибирской язвы:

а) наличие и состояние транспорта для перевозки трупов;

б) способ уничтожения трупов, наличие и состояние установок для сжигания трупов, дезинфекционные мероприятия при захоронении.

Приложение 4

ДЕЗИНФИЦИРУЮЩИЕ СРЕДСТВА, РЕКОМЕНДУЕМЫЕ ДЛЯ ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЯ ОБЪЕКТОВ И ПРЕДМЕТОВ, ЗАРАЖЕННЫХ СПОРАМИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ

При проведении обеззараживания по поводу сибирской язвы необходимо учитывать высокую устойчивость спор возбудителя.

Пригодны для обеззараживания объектов и предметов, зараженных спорами сибирской язвы, следующие способы и средства:

а) сжигание на огне;

б) водяной пар температуры не ниже 110 °C (в паровых камерах);

в) кипячение в воде при 100 °C и выше (лучше с добавлением 1 — 2% питьевой соды) в течение 1 часа в закрытом сосуде (с узким отверстием в крышке для выхода пара);

г) увлажненный горячий воздух;

д) 20%-ный осветленный и неосветленный раствор, приготовленный из хлорной извести, содержащей не менее 25% активного хлора;

е) 1 — 4%-ные активированные растворы хлорамина или препарата «ХБ», содержащие 1% активного хлора и 1% сернокислого, хлористого или азотнокислого аммония или 0,125% аммиака (активаторы вносятся в раствор после растворения хлорамина);

ж) 10%-ный раствор едкого натра при температуре 60 — 70°;

з) 2,0 — 5%-ный раствор формальдегида (6,25% и 12,5%-ные растворы 40%-ного формалина) при температуре не ниже 40 °C, лучше с 0,5% мыла;

и) 15%-ный осветленный и неосветленный раствор двутретиосновной соли гипохлорита кальция;

к) 4%-ный осветленный раствор хлорной извести при 2%-ном растворе дветретиосновной соли гипохлорита кальция, активированные хлористым или сернокислым аммонием, или аммиаком;

л) 3 — 6%-ные растворы перекиси водорода с 0,5% моющего средства «Прогресс» при температуре растворов 50° и 20° соответственно;

м) 10 — 15%-ные растворы перекиси водорода;

н) 5%-ный однохлористый иод;

о) окись этилена;

п) бромистый метил.

Непригодны для дезинфекции при сибирской язве растворы фенола, крезола и препараты, приготовленные из них, а также известковое молоко.

Приложение 5

БОРЬБА С МУХАМИ

В очагах сибирской язвы проводят одномоментное полное уничтожение мух в помещении, используя инсектицидные аэрозольные баллоны, либо 3%-ные водные растворы хлорофоса, а при необходимости — распылительную аппаратуру. Кроме того, в помещениях и на территории обрабатывают внутренние и наружные стены строений, заборы и т.п. 3%-ной водной эмульсией хлорофоса.

При обработке больших площадей можно применять аэрозоли (ДДТ, гексахлоран) с помощью аэрозольных генераторов.

После одномоментного уничтожения мух на территории уничтожают личинок, используя 0,2%-ную эмульсию трихлорэтана или 0,5%-ную эмульсию карбофоса или 10%-ную эмульсию креолина.

Приложение 6

РЕКОМЕНДУЕМАЯ НАУЧНО-ПОПУЛЯРНАЯ ЛИТЕРАТУРА, НАГЛЯДНЫЕ ПОСОБИЯ И КИНОФИЛЬМЫ ПО ПРОФИЛАКТИКЕ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ

НАУЧНО-ПОПУЛЯРНАЯ ЛИТЕРАТУРА

Ажигалиев Н. Заразные заболевания, передаваемые животными. Алма-Ата, 1962, 40 стр. с илл. (о-во по распространению полит. в научн. знаний Каз. ССР, Республ. ДСП) на каз. яз.

Глазунова М.Г. Сибирская язва. Фрунзе, 1962, 11 стр. с илл. (Респ. ДСП М-ва здравоохр. Кирг. ССР), т. 500.

Данилова К.С. Как предупредить сибирскую язву. Киев, 1962, 12 стр. (М-во здравоохр. УССР, санэпидупр. т. 100000.

НАГЛЯДНЫЕ ПОСОБИЯ

Зооантропонозы (сибирская язва, туляремия, ящур). Серия из 10 таблиц с конспектом лекции (лекторская папка). М., ин-т сан. просвещения, 1966, т. 5000.

Делайте прививку против сибирской язвы. Баку, 1963 (Респ. ДСП М-ва здравоохр. Азерб. ССР), 2000 экз. на азерб. и русск. яз., цв. офсет (плакат).

Остерегайтесь заражения сибирской язвой. Не забивайте животных без ветеринарного осмотра. Плакат. М., ин-т сан. просвещения, 1963, т. 10000.

Сибирская язва — заразное заболевание. Плакат. Ин-т сан. просвещения, 1967, т. 30000.

Сибирская язва. Санбюллетень. М., Ин-т сан. просвещения, 1967. т. 30000.

Сибирская язва — опасна! Плакат. М., Ин-т сан. просвещения, 1965, т. 20000.

Кинофильм — Опасность еще не миновала. 1 ч., 1966.

---