Инструкция по фракционированию консервированной крови на клеточные компоненты и плазму

(утв. Минздравом СССР 11.06.1987 № 06-14/24)

ИНСТРУКЦИЯ ПО ФРАКЦИОНИРОВАНИЮ КОНСЕРВИРОВАННОЙ КРОВИ НА КЛЕТОЧНЫЕ КОМПОНЕНТЫ И ПЛАЗМУ

Инструкция предназначена для врачей учреждений Службы крови и лечебно-профилактических учреждений.

Введение

Фракционирование консервированной крови на компоненты и дифференцированное применение их в лечебной практике позволяет рационально использовать ресурсы донорской крови, получать необходимый лечебный эффект и определенную экономическую выгоду, т.к. компоненты, выделенные из одной дозы крови, могут быть использованы для лечения нескольких больных.

Основной клеточный компонент крови — эритроцитная масса (ЭМ) по своему составу, функциональным свойствам в лечебной эффективности равноценна цельной донорской крови, а в ряде случаев превосходит ее. В меньшем объеме ЭМ содержится то же количество эритроцитов, но значительно меньше цитрата, продуктов распада клеток, белковых антигенов и антител. Трансфузии ЭМ должны занять ведущее место в гемотерапии, направленной на восполнение дефицита красных клеток при острой и хронической анемии различной этиологии.

Переливания концентратов тромбоцитов и лейкоцитов являются эффективным средством терапии тяжелых заболеваний, сопровождающихся дефицитом этих клеток.

Оптимальное и рациональное фракционирование донорской крови на компоненты предусматривает их выделение в максимально возможном количестве и сохранение в функционально полноценном состоянии в течение определенного периода времени, установленного для каждого компонента.

В настоящей инструкции представлены 3 программы фракционирования дозы консервированной крови, предназначенные для оптимального ее использования.

1-я программа предназначена для заготовки ЭМ и плазмы; 2-я программа — для получения ЭМ, плазмы и концентрата тромбоцитов (КТ); 3-я программа — для заготовки ЭМ, плазмы, КТ и концентрата лейкоцитов (КЛ). При необходимости выделения одного из компонентов консервированной крови возможно использовать наиболее удобный для этой цели метод, указанный в той или иной программе.

    С    помощью    предлагаемых    программ   фракционирования   из   дозы
консервированной  крови (500 мл) может быть получено 200 +/- 15 мл нативной

                                                        11

плазмы,  200 +/- 15 мл  эритроцитной  массы,  0,5 - 0,9 x 10    (в  среднем

        11                              9                    9
0,7 x 10  ) тромбоцитов и 0,8 - 1,3 x 10  (в среднем 1,1 x 10 ) лейкоцитов.

Все выделенные компоненты крови обладают функциональной полноценностью и лечебной эффективностью.

Инструкция подготовлена Центральным НИИ гематологии и переливания крови МЗ СССР (разделы 1.0 - 8.0) и Ленинградским НИИ гематологии и переливания крови МЗ РСФСР (раздел 3.3.0).

1.0.0. ТРЕБОВАНИЯ, ПРЕДЪЯВЛЯЕМЫЕ К КОНСЕРВИРОВАННОЙ КРОВИ, ПРЕДНАЗНАЧЕННОЙ ДЛЯ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ НА КОМПОНЕНТЫ

Консервированная донорская кровь заготавливается в соответствии с инструкциями по заготовке крови (утв. МЗ СССР 03.08.84 № 06-14/10) и по медицинскому освидетельствованию доноров крови в стационарных и выездных условиях (утв. МЗ СССР 13.10.78 № 6-14/13).

1.0.1. Доноры, кровь которых предназначена для получения концентратов тромбоцитов, проходят медицинское освидетельствование с обращением специального внимания на отсутствие у них признаков кровоточивости (петехий, синяков и др.) и исключения приема аспирина по крайней мере за сутки до кроводачи.

1.0.2. Донорскую кровь заготавливают в полимерные контейнеры («Гемакон» 500, «Гемакон» 500/300, «Гемакон» 500/300/300) или стеклянные бутылки вместимостью 500 или 250 мл на одном из консервантов, применяемых в службе крови.

1.0.3. Консервированную кровь, предназначенную для фракционирования, хранят либо при температуре 4 +/- 2 °C (для последующего выделения плазмы, ЭМ), либо при температуре 22 +/- 2 °C (для выделения тромбоцитов, лейкоцитов).

1.0.4 Консервированная кровь, предназначенная для фракционирования на компоненты должна отвечать следующим требованиям:

• время хранения крови, отобранной для выделения тромбоцитов и лейкоцитов, должно быть ограничено 4 — 6 часами после заготовки от донора;
• для заготовки ЭМ — до 7 дней;
• для выделения плазмы — не более 2 — 6 часов с момента взятия от донора с целью получения криопреципитата и антигемофильной плазмы; до 24 часов — для получения замороженной плазмы и до 21 дня — для приготовления из плазмы белковых препаратов (в соответствии с регламентами их производства);
• хранившаяся кровь должна иметь четко выраженную границу разделения на плазму и глобулярную массу;
• плазма консервированной крови должна быть прозрачной, соломенно-желтого цвета без мути, хлопьев, нитей фибрина и признаков гемолиза, глобулярный слой крови должен быть равномерным, без неровностей на поверхности.

1.0.5. Фракционирование крови, заготовленной в стеклянные бутылки, производят с соблюдением правил асептики в специальной боксированной операционной, обработанной в соответствии с «Инструкцией по заготовке консервированной донорской крови».

1.0.6. Фракционирование крови, заготовленной в стеклянные контейнеры, производят с соблюдением правил асептики в специальном (небоксированном) помещении, т.к. процесс разделения крови на компоненты в полимерных контейнерах происходит в закрытой системе.

2.0.0. ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ КОНСЕРВИРОВАННОЙ КРОВИ ДЛЯ ЗАГОТОВКИ ЭРИТРОЦИТНОЙ МАССЫ И ПЛАЗМЫ

2.1.0. Заготовка ЭМ и плазмы методом спонтанной седиментации крови в стеклянных бутылках

2.1.1. Бутылки с консервированной кровью хранят в покое в вертикальном положении в холодильниках при 4 +/- 2 °C.

2.1.2. Отделение плазмы производят в специальной боксированной операционной с соблюдением всех правил асептики. Подготовка боксов для работы проводится в соответствии с «Инструкцией по контролю стерильности консервированной крови, ее компонентов, препаратов консервированного костного мозга, кровезаменителей и консервирующих растворов» (М., 1985 г.). Для предупреждения загрязнения воздуха продолжительность работы в боксе не должна превышать 3-х часов. Бутылки с кровью, предназначенные для отделения плазмы, и штативы протирают 3% растворам хлорамина. С тубусов бутылок снимают пергаментные колпачки, отгибают створки металлических колпачков и обжигают тубусы горящим ватным шариком со спиртом. После этого штатив с бутылками передают в бокс, где резиновые пробки бутылок обжигают второй раз.

2.1.2.1. Отделение плазмы из бутылки с кровью производят путем перемещения ее в другой сосуд (бутылку) с помощью создания вакуума в нем или повышенного давления в бутылке с кровью. Воздух, поступающий в бутылку с кровью, должен пройти через фильтр (патрон с тканью Петрянова) и быть стерильным.

Резиновую пробку бутылки с кровью прокалывают двумя иглами: короткой иглой с надетой на нее резиновой трубкой длиной в 5 см и длинной иглой системы для отделения плазмы. Система состоят из двух игл (И-114) и соединительной резиновой трубки (длина 15 см). Второй иглой системы прокалывается пробка пустой стерильной бутылки, в которую будет перемещаться плазма. Для выхода воздуха из этой бутылки (или создания вакуума в ней) пробку прокалывают короткой иглой.

Аспирацию плазмы заканчивают, когда над слоем эритроцитов остается слой плазмы высотой около 1 см (15 — 20 мл в бутылках вместимостью 250 мл и 30 — 40 мл в бутылках вместимостью 450 — 500 мл).

2.1.2.2. Полученная ЭМ остается в основной бутылке и имеет гематокритное число 0,7 — 0,8.

2.1.3. По окончании фракционирования крови на плазму и эритроцитную массу (ЭМ) из бутылок удаляют иглы, смазывают поверхности 5% йодом и производят герметизацию пробок путем погружения тубуса бутылки в расплавленный стерильный парафин. Кроме того, тубус бутылки покрывают пергаментной бумагой и фиксируют ее резиновым кольцом.

2.1.4. На бутылку с плазмой наклеивают этикетку, на которой указывают учреждение-заготовитель, «нативная плазма», объем, дату заготовки, срок хранения, группу крови и резус-фактор донора, регистрационный номер, дату заготовки крови и фамилию врача.

Плазму хранят при 4 +/- 2 °C не более 3-х дней используют для переливаний больным или направляют на приготовление препаратов плазмы в соответствии с «Типовым комплексным регламентом производства белковых препаратов донорской крови», утвержденным МЗ СССР в 1979 г. Для длительного хранения нативную плазму замораживают при температуре -25 — -30 °C непосредственно после заготовки, но не позднее 24 часов и хранят в таких же условиях до использования.

2.1.5. На бутылку с оставшейся ЭМ наклеивают дополнительную этикетку, на которой указывают учреждение-заготовитель, «эритроцитная масса», объем, дату заготовки, группу крови, название гемоконсерванта, фамилию врача. Хранят ЭМ при 4 +/- 2 °C в течение 21 дня после заготовки крови. Изменение срока хранения ЭМ может быть предусмотрено новыми инструкциями в зависимости от рецептуры консервирующего раствора для цельной крови.

2.1.6. ЭМ может быть использована для трансфузий в клинике; для криоконсервирования в соответствии с методическими рекомендациями «Методы долгосрочного хранения в замороженном состоянии эритроцитов, предназначенных для трансфузий», 1980 г.; для ресуспендирования в одном из плазмозамещающих растворов, утвержденных МЗ СССР. Срок хранения такой эритроцитной взвеси (ЭВ) определяется соответствующей инструкцией. Возможно ресуспендирование ЭМ в стерильном, апирогенном 0,9% растворе хлорида натрия (в соотношении 1:1). Такую ЭВ используют для трансфузий; ее допускается хранить не более 24 часов при 4 °C.

2.1.7. Этикетирование ЭВ производят как в п. 2.1.5, указывая в названии «эритроцитная взвесь».

2.2.0. Заготовка ЭМ и плазмы методом спонтанной седиментации крови в полимерных контейнерах

2.2.1. Контейнеры с кровью хранят в покое в холодильниках при 4 +/- 2 °C.

2.2.2. Для заготовки плазмы и эритроцитной массы полимерный контейнер с осевшими форменными элементами крови осторожно помещают в плазмоэкстрактор этикеткой к задней его пластине, прижимают передней подвижной пластиной, снимают зажим с трубки, ведущей к добавочному пустому контейнеру, и дают возможность плазме перетечь в него (см. «Инструкцию по применению полимерных контейнеров „Гемакон“ и „Компопласт“, 1983 г.). Когда граница раздела плазмы и эритроцитов окажется у выходного отверстия основного контейнера, на трубку накладывают зажим на расстоянии 2 — 5 см от контейнера с плазмой. При отсутствии плазмоэкстрактора полимерный контейнер с кровью подвешивают на штативе, пустой контейнер располагают на столе. Ослабив зажим на соединительной трубке, осторожно сжимают рукой нижнюю часть основного контейнера и переводят плазму в пустой контейнер. Накладывают зажим на соединительную трубку в 2 — 5 см от основного контейнера. Контейнеры, содержащие плазму и эритроцитную массу, герметизируют путем запайки трубки с помощью „Гематрона“ или другим доступным способом герметизации (наложение металлических колец, завязывание вручную двух пар тугих узлов).»

2.2.3. Трубку посередине между участками герметизации разрезают. Контейнер с плазмой отсоединяют, этикетируют и хранят, как указано в п. 2.1.4.

2.2.4. Контейнер с ЭМ этикетируют, хранят и используют, как указано в п. п. 2.1.5 - 2.1.7.

2.3.0. Заготовка ЭМ и плазмы методом центрифугирования крови в стеклянных бутылках

2.3.1. Стеклянные бутылки с консервированной кровью проверяют на герметичность укупорки, отсутствие трещин в стекле.

2.3.2. Кровь тщательно медленно перемешивают для равномерного распределения клеток в объеме.

2.3.3. Бутылки с кровью, вместимостью 250 мл <*>, помещают в центрифужные стаканы с резиновыми вкладышами, уравновешивают попарно водой и центрифугируют при центробежном ускорении 2000 g в течение 20 минут (температура +5 °C) (см. таблицу режимов).

---

<*> Стеклянные бутылки ГОСТ 10782-77 вместимостью 500 мл использовать для фракционирования крови методом центрифугирования не представляется возможным ввиду значительного боя этих бутылок в процессе центрифугирования.

2.3.4. Обработку бутылок с кровью для заготовки ЭМ и плазмы, отделение плазмы, герметизацию, паспортизацию бутылок с этими компонентами, хранение и использование их производят, как указано в п. п. 2.1.2 - 2.1.7.

2.3.5. ЭМ может быть использована для приготовления эритроконцентрата (ЭК) с гематокритом 0,8 — 0,9. Для этого иглу, вынутую из сосуда с плазмой (после ее отделения), вводят в пустую стерильную емкость, куда с помощью отсоса из бутылки с ЭМ переводят остаток плазмы с подлежащей лейкопленкой и эритроцитами общим объемом до 30 +/- 5 мл (при фракционировании крови в бутылках вместимостью 250 мл).

2.3.6. ЭК используют для получения ЭМ, обедненной лейкоцитами и тромбоцитами (ЭМОЛТ) в соответствии с «Инструкцией по заготовке эритроцитной массы, обедненной лейкоцитами и тромбоцитами», 1987 г., или для получения эритроцитной взвеси, как указано в п. 2.1.6.

2.3.7. ЭК может быть также использован для получения «модифицированной крови» (МК). Для этого во время заготовки ЭК в него возвращают по стерильной системе 20 — 30 мл или более аутоплазмы (после удаления из нее тромбоцитов и лейкоцитов). МК является средой, обладающей трансфузиологическими преимуществами перед цельной консервированной кровью: хорошими реологическими и функциональными свойствами, лишена тромбоцитов и обеднена лейкоцитами, содержит значительно меньшее число микроагрегатов. Этикетирование МК производят как в п. 2.1.5, указывают в названии «модифицированная кровь». Срок ее хранения при 4 +/- 2 °C зависит от рецептуры консервирующего раствора, на котором была заготовлена кровь от донора.

2.4.0. Заготовка ЭМ и плазмы методом центрифугирования крови в полимерных контейнерах

2.4.1. Проверяют герметичность перекрытия соединительной трубки между основным и дополнительным контейнерами путем сжатия рукой контейнера с кровью.

2.4.2. Кровь тщательно медленно перемешивают для равномерного распределения клеток в объеме.

2.4.3. Контейнеры с кровью помещают в центрифужные стаканы, уравновешивают попарно сухим материалом (резиновой крошкой и пр.) и центрифугируют при центробежном ускорении 2000 g в течение 20 минут (температура +5 °C) (см. таблицу режимов).

2.4.4. Последующее отделение плазмы и ЭМ, герметизацию и этикетирование контейнеров с этими компонентами, хранение и использование их производят, как указано в п. п. 2.2.2 - 2.2.5; 2.3.5 - 2.3.7.

3.0.0. ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ КОНСЕРВИРОВАННОЙ КРОВИ ДЛЯ ЗАГОТОВКИ КОНЦЕНТРАТА ТРОМБОЦИТОВ, ЭРИТРОЦИТНОЙ МАССЫ И ПЛАЗМЫ

3.1.0. Заготовка концентратов тромбоцитов (КТ), ЭМ и плазмы из консервированной крови в полимерных контейнерах

3.1.1. Консервированную кровь, предназначенную для выделения КТ, хранят при комнатной температуре не более 4 — 6 часов с момента заготовки.

3.1.2. Перед центрифугированием крови проверяют герметичность перекрытия соединительной трубки между основным и дополнительными контейнерами путем сжатия рукой контейнера с кровью.

3.1.3. Кровь в контейнерах тщательно перемешивают, помещают в центрифужные стаканы, уравновешивают попарно сухим материалом и центрифугируют при центробежном ускорении 680 g в течение 13 мин., температура 22 +/- 2 °C (см. таблицу режимов). В результате кровь разделяется на обогащенную тромбоцитами плазму (ОТП) и ЭМ.

3.1.4. Полимерный контейнер с кровью осторожно помещают в плазмоэкстрактор и ОТП переводят в добавочный контейнер, как указано в п. 2.2.2.

3.1.5. Контейнер с ЭМ удаляют из плазмоэкстрактора. Из контейнера с ОТП путем сжатия его стенок полностью удаляют воздух в соединительную трубку, предварительно ослабив на ней зажим или в контейнер с ЭМ; контейнеры герметизируют и разъединяют.

3.1.6. Контейнер с ЭМ этикетируют и помещают в холодильник при 4 °C. Дальнейшее использование ЭМ производят, как указано в п. п. 2.1.5 - 2.1.7; 2.3.5 - 2.3.7.

3.1.7. Полимерные контейнеры с ОТП помещают по два в центрифужный стакан в вертикальном положении. При отсутствии второго контейнера с ОТП пустое пространство стакана заполняют полимерным контейнером с водой. Уравновешивание парных центрифужных стаканов производят сухим материалом в виде резиновой крошки.

3.1.8. Контейнеры с ОТП центрифугируют при центробежном ускорении 2400 g в течение 20 минут (см. таблицу режимов). При указанном режиме тромбоциты из плазмы осаждаются на дно контейнера, а над ними располагается бедная клетками плазма (БКП).

3.1.9. После остановки центрифуги контейнера осторожно извлекают из центрифужных стаканов и помещают между пластинами плазмоэкстрактора или подвешивают на штатив в вертикальном положении; добавочный пустой контейнер располагают на столе.

3.1.10. Открывают зажим на соединительной трубке между контейнерами, давлением пластины плазмоэкстрактора на контейнер большую часть БКП переводят в пустой контейнер. Когда над тромбоцитами останется 45 — 65 мл плазмы, необходимой для дальнейшего их ресуспендирования, соединительную трубку перекрывают зажимом на расстоянии 2 — 5 см от контейнера с концентратом тромбоцитов (КТ).

3.1.11. Контейнер с КТ удаляют из плазмоэкстрактора и, ослабив зажим на трубке, переводят из него воздух в соединительную трубку или контейнер с БКП. Наличие воздуха в контейнере с КТ может привести к их агрегации. Контейнеры герметизируют.

3.1.12. Контейнер с плазмой после этикетирования хранят и используют, как указано в п. 2.1.4.

3.1.13. Контейнер с КТ оставляют без перемешивания в спокойном состоянии на 1 час при температуре 22 +/- 2 °C. При этом происходит спонтанная дезагрегация тромбоцитов. Попытки ресуспендировать тромбоциты сразу же после отделения бедной клетками плазмы могут привести к необратимой агрегации клеток, в результате чего тромбоконцентрат окажется непригодным для переливания.

3.1.14. Через час тромбоциты ресуспендируют в оставшейся плазме осторожным размешиванием до тех пор, пока концентрат клеток приобретает вид гомогенной взвеси без видимых агрегатов.

    3.1.15. Контейнер   с   КТ   этикетируют   (на    этикетке    указывают
учреждение-заготовитель,  объем   и   количество   тромбоцитов   (не  менее

    9

0,5 · 10 ), дату   и  час   его   заготовки, срок хранения,  группу крови и
резус-фактор  донора,  регистрационный  номер, дату и час заготовки крови).
Для определения объема КТ  контейнер  с клетками взвешивают и из полученной

массы вычитают массу пустого контейнера, вес которого равен 23 г.

3.2.0. Заготовка КТ, ЭМ и плазмы из консервированной крови, заготовленной в стеклянные бутылки (с применением полимерных контейнеров)

3.2.1. Бутылки с кровью, предназначенной для выделения КТ, проверяют на герметичность упаковки и целостность стекла. Кровь тщательно перемешивают перед центрифугированием.

3.2.2. Бутылки с кровью центрифугируют при центробежном ускорении 1380 g в течение 6 мин. или при 680 g в течение 20 мин. (см. таблицу режимов). В результате кровь разделяется на ОТП и ЭМ.

3.2.3. Отделение плазмы производят, как указано в п. 2.1.2. Выделение ОТП заканчивают, когда над слоем эритроцитов останется слой плазмы высотой около 1 см (15 — 20 мл). Аспирацию плазмы из двух бутылок вместимостью 250 мл (от одного донора или одногруппную) производят в одну емкость. В тех случаях, когда отделение плазмы от эритроцитов производят путем подачи в бутылку с кровью стерильного воздуха под давлением, ОТП переводят сразу в контейнер «Компопласт» 300/300. Для этой цели длинную иглу, введенную в бутылку с кровью и погруженную в плазму, соединяют с помощью резиновой трубки с полимерной иглой контейнера «Компопласт» 300/300 (полимерную иглу вводят в просвет трубки). Под давлением стерильного воздуха ОТП поступает по трубке в контейнер. При этом на трубке, ведущей ко второму добавочному контейнеру, должен быть наложен зажим. После перевода всей плазмы из бутылки в контейнер, последний герметизируют.

3.2.4. Бутылки с ЭМ герметизируют и этикетируют, как указано в п. п. 2.1.3 и 2.1.5.

3.2.5. Дальнейшее использование ЭМ производят, как указано в п. п. 2.1.6 - 2.1.7; 2.3.5 - 2.3.7.

3.2.6. ОТП, собранную в стеклянную бутылку, немедленно переводят в полимерный контейнер «Компопласт» 300/300. Для этой цели пробку бутылки с ОТП обжигают горящим ватным шариком со спиртом и прокалывают ее длинной иглой — воздуховодом и короткой иглой с надетой на нее резиновой трубкой длиной 5 — 7 см. В просвете резиновой трубки вводится полимерная игла контейнера «Компопласт» 300/300. Бутылку с плазмой переворачивают вверх дном и переводят плазму в контейнер. Из него удаляют воздух в соединительную трубку или бутылку, освободившуюся от плазмы. Производят герметизацию контейнера, как указано в п. 2.2.2.

3.2.7. Последующее выделение КТ из ОТП в полимерных контейнерах производят, как указано в п. п. 3.1.7 - 3.1.15.

3.3.0. Заготовка КТ, ЭМ и плазмы из консервированной крови, заготовленной в стеклянные бутылки (Метод Ленинградского НИИГПК)

3.3.1. При отсутствии полимерных контейнеров типа «Гемакон» и «Компопласт» выделение КТ возможно производить в стеклянных бутылках вместимостью 250 мл.

3.3.2. Кровь заготавливают от донора в 2 бутылки вместимостью 250 мл в количестве 500 мл на растворе Глюгицир. Бутылки проверяют на герметичность укупорки, целостность стекла. Кровь тщательно перемешивают и центрифугируют при центробежном ускорении 780 g в течение 10 мин., температура 22 +/- 2 °C (см. таблицу режимов) или любым режимом, указанным в п. 3.2.2.

3.3.3. В боксе обогащенную тромбоцитами плазму с подлежащим слоем глобулярной массы высотой 1 см (около 15 — 20 мл) переводят в пустые стерильные бутылки вместимостью 250 мл. При этом из дозы консервированной крови выделяют до 200 мл ОТП.

3.3.4. По окончании отделения ОТП на трубку, соединяющую бутылки с ЭМ и ОТП с глобулярной массой, накладывают зажим, из пробок удаляют иглы, смазывают пробку бутылки с ЭМ 5% йодной настойкой и герметизируют заливкой стерильным расплавленным парафином.

3.3.5. Этикетирование и дальнейшее использование ЭМ производят, как указано в п. п. 2.1.5 - 2.1.7.

3.3.6. Тубусы бутылок с ОТП захватывают стерильным материалом, закрепляют резинкой. Бутылки с ОТП помещают в центрифужные стаканы, уравновешивают и центрифугируют для получения КТ при 1320 g в течение 20 мин. (см. таблицу режимов).

3.3.7. После остановки центрифуги бутылки осторожно переносят в бокс и в соответствии с п. 2.1.2 переводят надстой — бедную клетками плазму (БКП) в количестве 75 — 80 мл из каждой бутылки в 1 пустую емкость, герметизируют, этикетируют и используют в качестве нативной, как указано в п. п. 2.1.4.

3.3.8. Оставшийся в бутылках КТ с примесью эритроцитов ресуспендируют в 40 — 50 мл оставленной плазмы путем покачивания бутылки с частотой 20 — 30 раз в мин. в течение 3 мин., смазывают пробки 5% йодной настойкой, герметизируют заливкой стерильным расплавленным парафином, этикетируют. Срок годности КТ в стеклянных бутылках — 24 часа при комнатной температуре.

4.0.0. ФРАКЦИОНИРОВАНИЕ КОНСЕРВИРОВАННОЙ КРОВИ ДЛЯ ЗАГОТОВКИ ПЛАЗМЫ, ЭРИТРОЦИТНОЙ МАССЫ, КОНЦЕНТРАТА ТРОМБОЦИТОВ И КОНЦЕНТРАТА ЛЕЙКОЦИТОВ

4.0.1. Кровь заготавливают в полимерные контейнеры «Гемакон» 500/300 или «Гемакон» 500/300/300.

4.0.2. Контейнеры с консервированной кровью после проверки на герметичность и тщательного перемешивания в них крови помещают в центрифужные стаканы, уравновешивают попарно сухим материалом и центрифугируют при центробежном ускорении 1250 g в течение 20 мин., температура 22 +/- 2 °C (см. таблицу режимов). При указанном режиме эритроциты оседают на дно контейнера, над ними располагается лейкотромбоцитарный слой (ЛТС) серовато-белого цвета, поверх которого находится БКП.

4.0.3. Контейнер с кровью (N 1), соединенный с другими пустыми контейнерами, осторожно вынимают из центрифужного стакана, не нарушая границу между слоями, и помещают в плазмоэкстрактор этикеткой к задней его пластине.

4.0.4. Переводят плазму в контейнер № 2, как указано в п. 2.2.2. Когда в контейнере № 1 над эритроцитами останется слой плазмы высотой 2 — 3 см (объемом около 40 — 50 мл) на соединительную трубку накладывают зажим на расстоянии 2 — 5 см от контейнера № 2.

4.0.5. Для выделения ЛТС на соединительной трубке между контейнерами № 1 и № 3 (при использовании «Гемакон» 500/300/300) ослабляют зажим и переводят весь ЛТС вместе с оставшейся плазмой и небольшим слоем подлежащих эритроцитов (высотой около 1 см) в контейнер № 3. Объем переведенной массы составляет приблизительно 80 — 90 мл. На соединительную трубку в 3 — 5 см от контейнера № 1 и на таком же расстоянии от контейнера № 3 накладывают зажимы. При использовании контейнера «Гемакон» 500/300 для выделения ЛТС к контейнеру № 1 присоединяют «Компопласт» 300/300.

4.0.6. В контейнер № 1, содержащий концентрат эритроцитов (ЭК) с гематокритным числом 0,8 — 0,9, частично обедненный лейкоцитами и тромбоцитами, возвращают около 40 мл или более БКП из контейнера № 2, предварительно ослабив зажим между контейнером № 1 и № 2. Получают «модифицированную кровь». Контейнеры герметизируют и разъединяют. Контейнер с МК этикетируют, хранят, как указано в п. 2.3.7, и используют для трансфузий. Возможно использование ЭК, как указано в п. 2.3.6.

4.0.7. Контейнер № 2, содержащий БКП, этикетируют, хранят и используют в соответствии с п. 2.1.4.

4.0.8. Контейнер № 3, содержащий ЛТС с примесью плазмы и эритроцитов в паре с другим контейнером с ЛТС или с водой помещают в центрифужные стаканы в вертикальном положении, уравновешивают сухим материалом и центрифугируют при центробежном ускорении 240 g в течение 10 мин. при температуре 22°. При этом режиме эритроциты и лейкоциты оседают на дно контейнера, а концентрированные тромбоциты, взвешенные в плазме, располагаются над ними.

4.0.9. После остановки центрифуги контейнер № 3 осторожно вынимают и помещают в плазмоэкстрактор в вертикальном положении, присоединяют к нему контейнер № 4 («Компопласт» 300), который располагают ниже на столе. Ослабляют зажим на соединительной трубке между контейнерами и медленно переводят КТ из контейнера № 3 в контейнер № 4. Когда у выходного отверстия трубки контейнера № 3 покажется слой лейкоцитов, накладывают зажимы на расстоянии 2 — 5 см от контейнеров. Производят герметизацию и разделение контейнеров.

    4.0.10.   Контейнер   N  3,  содержащий  концентрат  лейкоцитов  (КЛ) с
примесью  эритроцитов,  отсоединяют  и  этикетируют  (на этикетке указывают
учреждение-заготовитель,   объем  КЛ  и  количество  лейкоцитов  (не  менее

    9

0,8 · 10 ), дату и час его заготовки, срок хранения, группу крови и резус-фактор донора, регистрационный номер, дату и час заготовки крови).

4.0.11. Контейнер № 4, содержащий концентрат тромбоцитов, этикетируют, как указано в п. 3.1.15. 9

    Примечание: Для  получения КЛ,  содержащего в 1 ед. в среднем 1,8 · 10
лейкоцитов   (из  них  80%  гранулоцитов)  может  быть  рекомендован  метод
заготовки КЛ с помощью желатина (см. методические  рекомендации  "Заготовка
концентратов   лейкоцитов   из   консервированной   крови   с   добавлением

желатина», 1985 г.).

5.0. ОЦЕНКА КАЧЕСТВА И ХРАНЕНИЕ КОМПОНЕНТОВ КРОВИ

5.1. Бактериологический контроль компонентов крови

Контроль стерильности компонентов крови производят согласно «Инструкции по контролю стерильности консервированной крови, ее компонентов, препаратов, консервированного костного мозга, кровезаменителей и консервирующих растворов», М., 1985 г.

5.2. Оценка полученных компонентов крови

Перед выдачей компонентов крови для трансфузии производится оценка их качества ответственным лицом. Критерием годности для нативной плазмы, концентрата тромбоцитов и лейкоцитов при визуальном осмотре служит прозрачность плазмы (отсутствие мути, хлопьев, нитей фибрина), гомогенность взвеси клеток, отсутствие агрегатов; для эритроцитной массы, эритроцитной взвеси, модифицированной крови — прозрачность надстоя, равномерность эритроцитного слоя, отсутствие видимых сгустков; для всех компонентов — целостность и герметичность полимерных контейнеров и стеклянных бутылок, наличие на них оформленных этикеток с указанием срока годности.

Оценка количества заготовленных тромбоцитов и лейкоцитов в концентратах, полученных из 500 мл консервированной крови, проводится выборочно — по одной пробе от каждых 20 единиц концентрата клеток, но не менее одной от каждого дня заготовки.

Подсчет клеток осуществляется в день заготовки КТ и КЛ.

Концентрат клеток в пластикатном контейнере, отобранный для контроля, тщательно перемешивают, путем сжатия стенок контейнера перед герметизацией заполняют одну из его свободных трубок. Герметизацию контейнера осуществляют наложением 2-х тугих узлов на трубку на расстоянии 2 — 3 см от контейнера. От второго узла оставляется сегмент трубки длиной 3 — 4 см, содержащий пробу для контроля концентрата клеток. На конец трубки накладывают один узел. Контейнер, предназначенный для контроля, взвешивают, на этикетке указывают вес концентрата и передают в лабораторию для подсчета клеток, взятых из сегмента трубки. Контейнер используют для трансфузий. Подсчет клеток осуществляют общепринятыми методами.

При заготовке КТ в стеклянных бутылках концентрат клеток после взятия пробы для подсчета тромбоцитов для трансфузии не используют.

В КТ, полученном из дозы консервированной крови, должно содержаться не 11 менее 0,5 · 10 тромбоцитов в объеме плазмы не менее 45 мл и не более 65 9

мл, pH должен быть выше 6,0. В КЛ должно  содержаться  не  менее  0,8 · 10
лейкоцитов в тех  же  объемах плазмы. Объем  концентрата клеток  определяют

взвешиванием контейнера с КТ и КЛ, из массы которого вычитают массу пустого контейнера, равную 23 г. Объем концентратов тромбоцитов, заготовленных в стеклянных бутылках, измеряют градуированным цилиндром.

При оценке качества ЭМ, хранившейся 21 день, свободный гемоглобин плазмы не должен превышать 2,0 г/л (бензидановым методом).

5.3. Хранение и учет компонентов крови

Хранение КТ, выделенного из свежезаготовленной крови в полимерных контейнерах, производится при комнатной температуре (22 +/- 2 °C) в течение 24 часов или при постоянном перемешивании на автоматических мешалках в течение 72 часов при той же температуре. Возможно также хранение КТ на протяжении 24 часов в электрохолодильнике при температуре 4 +/- 2 °C, особенно в тех случаях, когда по местным условиям не представляется возможным обеспечить указанный режим комнатной температуры. Вынутый из холодильника полимерный контейнер с КТ может содержать видимые агрегаты тромбоцитов, которые исчезают после их выдерживания при 22 +/- 2 °C в течение одного часа в покое и последующего осторожного перемешивания.

КТ, выделенные из свежазаготовленной крови в стеклянных бутылках, хранят при температуре 22 +/- 2 °C в течение 24 часов.

Хранение КЛ производят при температуре 22 +/- 2 °C или в условиях холодильника при 4 +/- 2 °C в течение 24 часов.

Эритроцитную массу, модифицированную кровь и эритроцитную взвесь хранят при температуре 4 +/- 2 °C в холодильнике в течение срока, определяемого рецептурой консервирующего, ресуспендирующего растворов для крови и ЭМ.

Нативную плазму хранят при 4 +/- 2 °C в течение 3 дней с момента заготовки или в замороженном состоянии при температуре -25 — 30 °C до 3-х месяцев.

Концентраты тромбоцитов, лейкоцитов, эритроцитную массу, «модифицированную кровь» и нативную плазму регистрируют в специальном журнале (в соответствии с приказом МЗ СССР № 1055 от 07.08.85).

6.0. ПОДГОТОВКА КОМПОНЕНТОВ КРОВИ К ТРАНСФУЗИИ

В зависимости от показателей используют для трансфузий терапевтическую дозу — 4 - 6 или более единиц КТ или 8 — 10 и более единиц КЛ, совместимых по АВО и резус-фактору (в необходимых случаях по антигенам системы HIA). Терапевтическая доза КТ или КЛ может быть получена во время заготовки концентратов клеток путем сливания отдельных единиц в один контейнер или путем последовательного присоединения во время трансфузий отдельных единиц к стандартной системе.

Переливание компонентов должно производиться через «Системы для переливания крови и ее компонентов», выпускаемые промышленностью по ОСТ 64-2-168-83.

Перед трансфузией компонентов крови врач обязан:

проверить сохранность герметичности контейнера; произвести макроскопическую (визуальную) оценку качества КТ, КЛ и ЭМ; производить трансфузию с учетом групповой и резус-принадлежности донора и реципиента, в соответствии с «Инструкцией по технике переливания крови и ее компонентов» (М. 1986 г.), а в необходимых случаях использовать концентраты клеток с учетом антигенной гистосовместимости.

Концентраты тромбоцитов и лейкоцитов желательно применять в оптимальные сроки — в день их заготовки, т.к. при этом обеспечивается максимальная функциональная полноценность клеток и их лечебная эффективность. Наряду с этим оправдано и эффективно применение и хранившихся КТ и КЛ в течение указанных сроков.

7.0. ТЕХНИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ РАБОТЫ ЦЕНТРИФУГ

Проверка работы центрифуг должна производиться инженерным составом СПК при их вводе в эксплуатацию, а также периодически — один раз в 6 месяцев и в случаях каких-либо нарушений в работе. Проверка датчика времени производится с помощью секундомера, отсчет времени продолжается в течение 5 минут.

Правильность шкалы частоты вращения ротора центрифуги осуществляют по строботахометру (например, СТ-5, «Тбилприбор»). Температуру контролируют с помощью термопары.

Считать утратившими силу:

• Инструкцию по заготовке нативной плазмы, утв. МЗ СССР 23.10.1968;
• Методические указания об увеличении выхода плазмы из цельной крови, заготовленной во флаконы, утв. МЗ СССР 05.02.1969;
• Инструкцию по заготовке антигемофильной плазмы в замкнутой стерильной системе, создающейся с помощью сдвоенных пластикатных мешков, утв. МЗ СССР 05.02.1969;
• Инструкцию по заготовке и фракционированию крови на компоненты в выездных условиях с использованием пластикатных мешков, утв. МЗ СССР 23.10.1968;
• Инструкцию по заготовке и хранению эритроцитной массы, утв. МЗ СССР 15.02.1982;
• Инструкцию по выделению, консервированию и применению лейкоцитной массы, утв. МЗ СССР 05.02.1969;
• Инструкцию по заготовке консервированной тромбоцитной массы по методу, разработанному в ЦОЛИПК, утв. МЗ СССР 05.05.1968;
• Методические указания «Заготовка и хранение концентрата тромбоцитов из консервированной крови», утв. МЗ СССР 08.01.1982;
• Методические рекомендации «Заготовка в полимерных контейнерах концентрата тромбоцитов и концентрата лейкоцитов из лейкотромбоцитарного слоя консервированной крови», утв. МЗ СССР 07.05.1984;
• Инструкцию по заготовке и консервированию эритроцитной массы и эритроцитной взвеси, утв. МЗ СССР 30.09.1968.

Этапы фракционирования	Центробежное ускорение (g) и время центрифугирования (мин.)		Марки центрифуг, радиус ротора в см			Примечание
			ЦЛ 4000:27	ЦР 3:28	К 70 Д:23,5
			Скорость вращения ротора, об./мин.
Разделение крови на	2000 g	- 20	2600	2550	2800	Для центрифуг
ЭМ и плазму		мин.				других марок число оборо-
Выделение ОТП:						тов рассчиты-
в полимерных контейнерах	680 g	- 13 мин.	1500	1500	1600	вают по номограмме (не приводится)
в стеклянных бутылках	1380 g 680 g 780 g	- 6 мин. — 20 мин. — 10 мин.	2150 1500 1600	2100 1500 1600	2300 1600 1750	Радиус ротора измерен от центра ротора до дна центрифужного стакана
Выделение КТ из ОТП:
в полимерных контейнерах	2400 g	- 20 мин.	2800	2800	3000
в стеклянных бутылках	1320 g	- 20 мин.	2100	2050	2250
Выделение ЛТС	1250 g	- 20 мин.	2000	2000	2200
Выделение КТ и КЛ из	240 g	- 10	900	900	950
ЛТС		мин.

---