--- title: "\"ГОСТ Р 54032-2010. Национальный стандарт Российской Федерации. Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Метод определения содержания бета-адреностимуляторов с помощью газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектором\"" number: "ГОСТ Р 54032-2010" issuer: "Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии" status: утратил силу canonical: "https://bukva.ai/docs/gost-r-54032-2010" --- ## "ГОСТ Р 54032-2010. Национальный стандарт Российской Федерации. Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Метод определения содержания бета-адреностимуляторов с помощью газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектором" # "ГОСТ Р 54032-2010. Национальный стандарт Российской Федерации. Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Метод определения содержания бета-адреностимуляторов с помощью газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектором" (утв. Приказом Росстандарта от 30.11.2010 N 646-ст) > [!WARNING] > Документ утратил силу с 15 февраля 2015 года в связи с изданием Приказа Росстандарта от 27.06.2013 N 241-ст. > Взамен введен в действие [ГОСТ 31982-2012](https://bukva.ai/docs/standart-gost-31982-2012). > Документ утратил силу с 15 февраля 2015 года в связи с изданием Приказа Росстандарта от 27.06.2013 N 241-ст. Взамен введен в действие [ГОСТ 31982-2012](https://bukva.ai/docs/standart-gost-31982-2012). > Документ [введен](#p100010) в действие с 1 января 2012 года. > [!NOTE] > ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ ```mermaid flowchart LR n0["ГОСТ Р 54032-2010"]:::rst click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-r-54032-2010" "ГОСТ Р 54032-2010. Национальный стандарт Российской Федерации. Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Метод определения содержания бета-адреностимуляторов с помощью газо" n1["ГОСТ 31982-2012"]:::doc click n1 "https://bukva.ai/docs/standart-gost-31982-2012" "ГОСТ 31982-2012. Межгосударственный стандарт. Продукты пищевые, корма, продовольственное сырье. Метод определения содержания бета-адреностимуляторов с помощью газовой хроматографии" n0 --> n1 classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000; classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000; classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000; ```
Утвержден
Приказом Федерального
агентства по техническому
регулированию и метрологии
от 30 ноября 2010 г. N 646-ст **НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ** **ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, КОРМА, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ** **МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ** **БЕТА-АДРЕНОСТИМУЛЯТОРОВ С ПОМОЩЬЮ ГАЗОВОЙ ХРОМАТОГРАФИИ** **С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТОРОМ** Food products, feeds, food raw materials. Method of determination of $\beta - agonists$ by gas chromatography with mass spectrometry detector
**ГОСТ Р 54032-2010**
Группа Н09
Н19
Н11 ОКС 65.120
67.050 ОКСТУ 9101
9709
Дата введения
1 января 2012 года
Предисловие Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения". Сведения о стандарте 1. Разработан Федеральным государственным учреждением "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГУ "ВГНКИ"), Федеральным государственным учреждением "Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория" (ФГУ "ЦНМВЛ"). 2. Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность". 3. Утвержден Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 ноября 2010 г. N 646-ст. 4. Введен впервые. Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет. 1. Область применения Настоящий стандарт распространяется на продукты пищевые в части мяса и мясных продуктов, включая мясо и продукты из мяса птицы, комбикорма и продовольственное сырье, и устанавливает метод газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектором (далее - ГХ-МС) для идентификации и количественного определения бета-адреностимуляторов. Диапазон измерений - от 0,1 до 100,0 мкг/кг. *Примечание.* Метод может быть использован для определения содержания бета-адреностимуляторов в физиологических жидкостях, шерсти и органах животных. 2. Нормативные ссылки В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты: ГОСТ Р 12.1.019-2009 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты [ГОСТ Р 51447-99](https://bukva.ai/docs/gost-r-51447-99) (ИСО 3100-1-91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования ГОСТ 12.2.085-2002 Сосуды, работающие под давлением. Клапаны предохранительные. Требования безопасности ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия [ГОСТ 4198-75](https://bukva.ai/docs/gost-4198-75) Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия ГОСТ 4233-77 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия [ГОСТ 6995-77](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77) Реактивы. Метанол-яд. Технические условия ГОСТ 9293-74 (ИСО 2435-73) Азот газообразный и жидкий. Технические условия [ГОСТ 9805-84](https://bukva.ai/docs/gost-9805-84) Спирт изопропиловый. Технические условия [ГОСТ 13496.0-80](https://bukva.ai/docs/gost-13496-0-80) Комбикорма, сырье. Методы отбора проб ГОСТ 13867-68 Продукты химические. Обозначение чистоты [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76) Реактивы. Эфиры этиловый и бутиловый уксусной кислоты. Технические условия [ГОСТ 24147-80](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-24147-80) Аммиак водный особой чистоты. Технические условия [ГОСТ 24363-80](https://bukva.ai/docs/gost-24363-80) Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры *Примечание.* При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку. 3. Сущность метода Идентификацию и количественное определение бета-адреностимуляторов методом ГХ-МС проводят с использованием стандартных образцов бета-адреностимуляторов. Количественное определение бета-адреностимуляторов проводят методом внутреннего стандарта по площади пика идентифицированных соединений относительно градуировочной зависимости, полученной при анализе градуировочных растворов известных соединений в аналогичных условиях. 4. Условия выполнения измерений При определении содержания бета-адреностимуляторов в лаборатории должны быть соблюдены следующие условия: - температура окружающего воздуха . . . . . . . . . от 10 °C до 30 °C; - атмосферное давление . . . . . . . . . . . . . . от 84 до 106 кПа; - напряжение в электросети . . . . . . . . . . . . (220 +/- 20) В; - частота тока в электросети . . . . . . . . . . . от 49 до 51 Гц; - относительная влажность воздуха . . . . . . . . . от 30% до 80%. Хроматографические измерения проводят в условиях, указанных инструкцией по эксплуатации соответствующего прибора.
5. Средства измерений, вспомогательное оборудование,
посуда, реактивы и материалы 5.1. Для определения содержания бета-адреностимуляторов применяют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование и материалы: - хромато-масс-спектрометр, позволяющий проводить измерения в диапазоне от 45 до 650 атомных единиц массы (а.е.м.), с разрешением по шкале масс не более 1,0 а.е.м. и чувствительностью в режиме ионизации электронным ударом: при инжекции в колонку 2 пг гексахлорбензола (сканирование в диапазоне от 45 до 350 а.е.м. за 1 с) отношение сигнал/шум на молекулярном ионе с m/z 284 не менее 10/1; - колонку кварцевую капиллярную 30 м x 0,25 мм x 0,25 мкм с индексом полярности неподвижной жидкой фазы от пяти до 30; - компьютер с установленным программным обеспечением для управления хромато-масс-спектрометром и обработки результатов измерений; - автосамплер для газового хроматографа; - пипетки одноканальные переменного объема 10 - 100 мм3, 40 - 200 мм3, 200 - 1000 мм3, 1 - 5 см3 с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу не более 2% (Transferpettor Brand, Германия) <*>; --- <*> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. - весы класса точности I и класса точности II с дискретностью отсчета d = 0,01 мг, поверочным делением e = 100 d по ГОСТ Р 53228; - модуль термостатируемый нагревательный с системой отдувки растворителей инертным газом и максимальной температурой термостатирования 250 °C; - измельчитель-гомогенизатор лабораторный; - гомогенизатор лабораторный конфигурации ротор-статор; - испаритель ротационный со скоростью вращения от 20 до 280 об/мин и температурным диапазоном нагревательной бани от 30 °C до 100 °C; - центрифугу лабораторную рефрижераторную со скоростью вращения ротора не менее 3500 об/с и диапазоном рабочих температур от минус 10 °C до плюс 25 °C, с адаптерами для пробирок вместимостью 15, 50 см3 и микроцентрифужных пробирок вместимостью 1,5 см3; - картридж для твердофазной экстракции объемом не менее 6 см3, заполненный обращенно-фазным сорбентом C18 с размером диаметра частиц не более 50 мкм; - устройство вакуумное для твердофазной экстракции; - флаконы стеклянные вместимостью 4 см3 с завинчивающимися крышками и тефлоновыми прокладками; - флаконы стеклянные вместимостью 40 см3 с завинчивающимися крышками и тефлоновыми прокладками; - флаконы стеклянные вместимостью 2 см3 с завинчивающимися крышками, тефлоновыми прокладками и вставками объемом 100 мм3; - колбы мерные стеклянные 2-10-2, 2-100-2, 2-1000-2 по [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74); - колбы стеклянные П-2-100-32 ТС по ГОСТ 25336; - баню ультразвуковую с рабочей частотой не менее 20 кГц и объемом не менее 1 дм3; - шейкер вортексного типа движения, с амплитудой встряхивания 5 мм; - шейкер орбитального типа движения с максимальной скоростью вращения 1000 об/мин; - pH-метр с набором электродов с пределами абсолютной погрешности измерений +/- 0,01 ед. pH; - фильтры мембранные с размером диаметра пор не более 0,45 мкм; - шкаф сушильный лабораторный с автоматическим регулированием температуры в рабочем пространстве от 25 °C до 300 °C. #### 5.2 При выполнении измерений применяют следующие реактивы и материалы: - гелий газообразный (сжатый) высокой чистоты, марка 6.0; - азот газообразный особой чистоты по ГОСТ 9293; - фермент протеолитический Subtilisine A (Sigma, Германия, N P-5380) <*>; --- <*> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. - кислоту уксусную по ГОСТ 61, х.ч.; - кислоту соляную по ГОСТ 3118, х.ч.; - кислоту хлорную 65%-ную, х.ч.; - кальций хлористый двухводный, х.ч.; - аммиак водный по [ГОСТ 24147](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-24147-80), о.с.ч.; - кислоту метилборную, х.ч.; - N-метил-N-триметилсилил-трифторацетамид (МСТФА) (Sigma, Германия, N M-7891) <*>; --- <*> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. - триметилйодсилан (ТМИС) (Aldrich, Германия, N 19,552-9) <*>; --- <*> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. - дитиоэритритол (ДТЭ), х.ч.; - N,N-бис-триметилсилил-трифторацетамид (БСТФА) (Sigma, Германия, N T-5634) <*>; --- <*> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. - триметилхлорсилан (ТМХС) (Sigma, Германия, N T-4252) <*>; --- <*> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. - эфир метил-третбутиловый для хроматографии; - н-Гексан х.ч.; - калия гидроокись по [ГОСТ 24363](https://bukva.ai/docs/gost-24363-80), х.ч.; - натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х.ч.; - метанол-яд по [ГОСТ 6995](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77); - этанол абсолютный, х.ч.; - сок пищеварительный Helix pomatia (Merck, Германия, N 1.04114) <*>; --- <*> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. - воду деионизованную; - спирт изопропиловый по [ГОСТ 9805](https://bukva.ai/docs/gost-9805-84), о.с.ч.; - эфир этиловый уксусной кислоты по [ГОСТ 22300](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76), х.ч.; - сорбент Bondesil C18 40 мкм (Varian, США, N 12213012) <*>; --- <*> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. - твин 20 (Sigma, Германия, N P-2287) <*>; --- <*> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. - натрий хлористый по ГОСТ 4233, х.ч.; - калий фосфорнокислый однозамещенный по [ГОСТ 4198](https://bukva.ai/docs/gost-4198-75); - натрий уксуснокислый, х.ч.; - трис(гидроксиметил)-аминометан, х.ч. Все реактивы должны относиться к подгруппе чистоты 2, х.ч. или 3, ч.д.а. по ГОСТ 13867. #### 5.3 Для определения содержания бета-адреностимуляторов применяют следующие стандартные образцы: - цимбутерол-d9 массовой долей основного вещества не менее 98,0% (RIKILT <*>, Wageningen UR) <**>; --- <*> Институт пищевой безопасности, расположенный в Нидерландах. <**> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. - цимбутерол массовой долей основного вещества не менее 98,0% (RIKILT, Wageningen UR) <*>; --- <*> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. - кленбутерол-d6 массовой долей основного вещества не менее 98,0% (RIKILT, Wageningen UR) <*>; --- <*> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. - кленбутерол массовой долей основного вещества не менее 99,0% (Boehringer, Ingelheim) <*>; --- <*> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. - сальбутамол-d6 массовой долей основного вещества не менее 98,0% (RIKILT, Wageningen UR) <*>; --- <*> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. - сальбутамол массовой долей основного вещества не менее 98,0% (SIGMA, Deisenhofen) <*>; --- <*> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. - мапентерол массовой долей основного вещества не менее 99,0% (RIKILT, Wageningen UR) <*>; --- <*> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. - мапентерол-d11 массовой долей основного вещества не менее 98,0% (RIKILT, Wageningen UR) <*>; --- <*> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. - тербуталин массовой долей основного вещества не менее 99,0% (SIGMA, Deisenhofen) <*>; --- <*> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. - тербуталин-d9 массовой долей основного вещества не менее 98,0% (RIKILT, Wageningen UR) <*>; --- <*> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. - стандартные образцы с аттестованной массовой долей кленбутерола и сальбутамола: 1) лиофилизованная моча (IRMM <*>, BCR-504) <**>; --- <*> Институт референтных материалов и измерений, расположенный в Бельгии. <**> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. 2) лиофилизованная печень, чистый образец (IRMM, BCR-648) <*>; --- <*> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. 3) лиофилизованная печень (IRMM, BCR-649) <*>. --- <*> Указанные материалы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта. Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов, по качеству не хуже вышеуказанных. 6. Подготовка к проведению измерений #### 6.1 Приготовление растворов ##### 6.1.1 Приготовление трис-буфера молярной концентрации c = 0,2 моль/дм3 и pH 8,0 В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 24,2 г трис(гидроксиметил)-аминометана и 14,7 г кальция хлористого двухводного, растворяют в 800 см3 деионизованной воды, измеряют pH, доводят значение pH до (8,0 +/- 0,1) соляной кислотой молярной концентрации c = 1 моль/дм3 [(5.2)](#p100087) и доводят объем раствора до метки деионизованной водой. Срок хранения раствора при температуре от 2 °C до 4 °C - не более 1 мес. ##### 6.1.2 Приготовление фосфатного буферного раствора молярной концентрации c = 0,1 моль/дм3 и pH 5,0 В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 13,6 г калия фосфорнокислого однозамещенного, растворяют в 900 см3 деионизованной воды, измеряют pH, доводят значение pH до (5,0 +/- 0,1) соляной кислотой молярной концентрации c = 1 моль/дм3 [(5.2)](#p100087) и доводят объем до метки деионизованной водой. Срок хранения раствора при температуре от 2 °C до 4 °C - не более 3 мес. ##### 6.1.3 Приготовление фосфатного буферного раствора молярной концентрации c = 0,1 моль/дм3 и pH 6,0 В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 13,6 г калия фосфорнокислого однозамещенного, растворяют в 900 см3 деионизованной воды, измеряют pH, доводят значение pH до (6,0 +/- 0,1) соляной кислотой молярной концентрации c = 1 моль/дм3 [(5.2)](#p100087) и доводят объем до метки деионизованной водой. Срок хранения раствора при температуре от 2 °C до 4 °C - не более 3 мес. ##### 6.1.4 Приготовление ацетатного буферного раствора молярной концентрации c = 0,2 моль/дм3 В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 16,4 г натрия уксуснокислого, растворяют в 900 см3 деионизованной воды, измеряют pH, доводят значение pH до (5,0 +/- 0,1) концентрированной уксусной кислотой и доводят объем раствора до метки деионизованной водой. Срок хранения раствора при температуре от 2 °C до 4 °C - не более 1 мес. ##### 6.1.5 Приготовление растворов для дериватизации Для приготовления раствора МСТФА/ТМИС/ДТЭ смешивают 1000 мм3 МСТФА и 5 мм3 ТМИС во флаконе вместимостью 2 см3, добавляют к полученному раствору 2 мг ДТЭ. Срок хранения раствора при температуре от 2 °C до 4 °C - не более 1 недели. Для приготовления раствора БСТФА/ТМХС смешивают 1000 мм3 БСТФА и 10 мм3 ТМХС во флаконе вместимостью 2 см3. Срок хранения раствора при температуре от 2 °C до 4 °C - не более 1 недели. ##### 6.1.6 Приготовление раствора аммиака в изопропиловом спирте Во флакон вместимостью 40 см3 вносят 15 см3 изопропилового спирта, приливают 0,45 см3 аммиака и помещают раствор на 1 мин на ультразвуковую баню. Раствор используют свежеприготовленным. ##### 6.1.7 Приготовление раствора этилового эфира уксусной кислоты и метилборной кислоты Для приготовления раствора смешивают 0,02 см3 метилборной кислоты и 10 см3 этилового эфира уксусной кислоты в мерной колбе вместимостью 10 см3. Раствор используют свежеприготовленным. ##### 6.1.8 Приготовление раствора гидроокиси калия молярной концентрации c = 1 моль/дм3 В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 56,1 г гидроокиси калия, растворяют в 900 см3 деионизованной воды и доводят объем раствора до метки деионизованной водой. Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более 1 мес. ##### 6.1.9 Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрации c = 10 моль/дм3 В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 400,0 г гидроокиси натрия, растворяют в 600 см3 деионизованной воды и доводят объем раствора до метки деионизованной водой. Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более 1 мес. ##### 6.1.10 Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрации c = 2 моль/дм3 В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 84,0 г натрия гидроокиси, растворяют в деионизованной воде и доводят объем до метки дистиллированной водой. Срок хранения раствора при комнатной температуре в сосуде из полимерных материалов - не более 1 мес. ##### 6.1.11 Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрации c = 0,01 моль/дм3 В мерную колбу вместимостью 100 см3 приливают 50 см3 деионизованной воды, 0,1 см3 концентрированной соляной кислоты и доводят объем раствора до метки деионизованной водой. Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более 1 мес. ##### 6.1.12 Приготовление 25%-ного раствора соляной кислоты В мерную колбу вместимостью 100 см3 приливают 44 см3 деионизованной воды, затем осторожно вносят 56 см3 концентрированной соляной кислоты. Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более 1 мес. ##### 6.1.13 Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрации c = 1 моль/дм3 В мерную колбу вместимостью 1000 см3 приливают 500 см3 деионизованной воды, вносят 81 см3 концентрированной соляной кислоты и доводят объем до метки деионизованной водой. Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более 1 мес. ##### 6.1.14 Приготовление растворов внутреннего стандарта массовой концентрации c = 0,1 мкг/см3 В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 1 мг стандартного образца дейтрированных производных, приливают 80 см3 этанола, перемешивают и помещают раствор на 1 мин на ультразвуковую баню, затем доводят объем до метки этанолом. В мерную колбу вместимостью 10 см3 пипеточным дозатором вносят 0,1 см3 приготовленного раствора и доводят объем до метки этанолом. Срок хранения раствора при температуре не выше минус 18 °C - не более 12 мес. ##### 6.1.15 Приготовление стандартного раствора $C_{0}$ бета-адреностимуляторов В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 10 мг каждого стандартного образца, приливают 80 см3 этанола, перемешивают и помещают раствор на 1 мин на ультразвуковую баню, затем доводят объем до метки этанолом. Массовая концентрация каждого соединения в растворе $C_{0}$ должна составлять 0,1 мг/см3. Срок хранения раствора при температуре не выше минус 18 °C - не более 12 мес. ##### 6.1.16 Приготовление стандартного раствора $C_{1}$ бета-адреностимуляторов В мерную колбу вместимостью 10 см3 пипеточным дозатором вносят 0,1 см3 стандартного раствора $C_{0}$ [(6.1.15)](#p100225) и доводят объем до метки этанолом. Массовая концентрация каждого соединения в растворе $C_{1}$ должна составлять 1000 нг/см3. Срок хранения раствора при температуре от 2 °C до 4 °C - не более 4 мес. ##### 6.1.17 Приготовление стандартного раствора $C_{2}$ бета-адреностимуляторов В мерную колбу вместимостью 10 см3 пипеточным дозатором вносят 1 см3 стандартного раствора $C_{1}$ [(6.1.16)](#p100229) и доводят объем до метки этанолом. Массовая концентрация каждого соединения в растворе $C_{2}$ должна составлять 100 нг/см3. Срок хранения раствора при температуре от 2 °C до 4 °C - не более 4 мес. ##### 6.1.18 Приготовление стандартного раствора $C_{3}$ бета-адреностимуляторов В мерную колбу вместимостью 10 см3 пипеточным дозатором вносят 1 см3 стандартного раствора $C_{2}$ [(6.1.17)](#p100233) и доводят объем до метки этанолом. Массовая концентрация каждого соединения в растворе $C_{3}$ должна составлять 10 нг/см3. Срок хранения раствора при температуре от 2 °C до 4 °C - не более 4 мес. ##### 6.1.19 Приготовление стандартного раствора $C_{4}$ бета-адреностимуляторов В мерную колбу вместимостью 10 см3 пипеточным дозатором вносят 5 см3 стандартного раствора $C_{3}$ [(6.1.18)](#p100237) и доводят объем до метки этанолом. Массовая концентрация каждого соединения в растворе $C_{4}$ должна составлять 5 нг/см3. Срок хранения раствора при температуре от 2 °C до 4 °C - не более 4 мес. ##### 6.1.20 Приготовление градуировочных растворов бета-адреностимуляторов Для приготовления градуировочного раствора массовой концентрацией 0,1 нг/см3 к сухому остатку после упаривания матрицы вносят 0,02 см3 стандартного раствора $C_{4}$ [(6.1.19)](#p100241), приливают 0,1 см3 раствора внутреннего стандарта [(6.1.14)](#p100222). Затем пипеточным дозатором вносят 0,88 см3 этанола, переносят на шейкер и гомогенизируют. Затем помещают на центрифугу и центрифугируют при 15000 об/мин в течение 10 мин при температуре 10 °C. Для приготовления градуировочного раствора массовой концентрацией 0,5 нг/см3 используют стандартный раствор $C_{4}$ [(6.1.19)](#p100241). Для приготовления градуировочного раствора массовой концентрацией 1 нг/см3 используют стандартный раствор $C_{3}$ [(6.1.18)](#p100237). Для приготовления градуировочного раствора массовой концентрацией 10 нг/см3 используют стандартный раствор $C_{2}$ [(6.1.17)](#p100233). Для приготовления градуировочного раствора массовой концентрацией 100 нг/см3 используют стандартный раствор $C_{1}$ [(6.1.16)](#p100229). К сухому остатку после упаривания чистой пробы исследуемого типа матриц вносят 0,1 см3 соответствующего стандартного раствора, приливают 0,1 см3 раствора внутреннего стандарта [(6.1.14)](#p100222). Затем пипеточным дозатором вносят 0,8 см3 этанола, переносят на шейкер и гомогенизируют. Затем помещают на центрифугу и центрифугируют при 15000 об/мин в течение 10 мин при температуре 10 °C. Приготовленные градуировочные растворы и растворы внутренних стандартов хранят в морозильнике при температуре не выше минус 20 °C. Перед применением растворы выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 30 мин. #### 6.2 Подготовка хромато-масс-спектрометра к выполнению измерений Подготовку хромато-масс-спектрометра к работе осуществляют в соответствии с техническим руководством по эксплуатации прибора. #### 6.3 Подготовка газового хроматографа к выполнению измерений 6.3.1. Подготовку газового хроматографа к работе осуществляют в соответствии с техническим руководством по эксплуатации прибора. Для получения градуировочных характеристик устанавливают параметры газового хроматографа в соответствии с [6.4.1](#p100350). 6.3.2 Для получения градуировочных данных используют градуировочные растворы бета-адреностимуляторов и растворы их дейтерированных производных в соответствии с таблицей 1, внесенные в заведомо чистые пробы анализируемого типа матриц (растворы бета-адреностимуляторов и их дейтерированные производные вносят в матрицу перед этапом дериватизации). В качестве внутреннего стандарта используют дейтерированные производные определяемых бета-адреностимуляторов. Для каждого бета-адреностимулятора используется соответствующее дейтерированное производное.
Таблица 1
Массовая концентрация бета-адреностимуляторов
в градуировочных растворах
Наименование бета-адреностимулятораГрадуировочный уровень
N 1N 2N 3N 4N 5
Массовая концентрация, нг/см3
Нативные бета-адреностимуляторы
Кленбутерол0,10,5110100
Сальбутамол0,10,5110100
Мапентерол0,10,5110100
Цимбутерол0,10,5110100
Тербуталин0,10,5110100
Изотопно-меченые бета-адреностимуляторы/внутренний стандарт
Кленбутерол-d61010101010
Сальбутамол-d61010101010
Мапентерол-dl11010101010
Цимбутерол-d91010101010
Тербуталин-d91010101010
6.3.3. При установлении градуировочной характеристики используют не менее трех уровней массовой концентрации градуировочных растворов в диапазоне определяемого бета-адреностимулятора массовой концентрации от 1 до 100 нг/см3. В инжектор хроматографа вводят каждый градуировочный раствор не менее двух раз. С помощью компьютерной системы обработки данных устанавливают градуировочную характеристику для площади пика методом внутреннего стандарта для каждого бета-адреностимулятора. Коэффициент отклика $k_{i}$ для i-го бета-адреностимулятора рассчитывают по формуле
$k_{i} = \frac{S_{i}M_{is}}{S_{is}M_{i}}$ , (1)
где $S_{i}$ - площадь пика i-го бета-адреностимулятора в градуировочном растворе; $M_{is}$ - массовая концентрация внутреннего стандарта в градуировочном растворе, нг/см3; $S_{is}$ - площадь пика внутреннего стандарта в градуировочном растворе; $M_{i}$ - массовая концентрация i-го бета-адреностимулятора в градуировочном растворе, нг/см3. Проверяют приемлемость полученных значений коэффициента отклика $k_{i}$ для каждого бета-адреностимулятора анализируемых градуировочных уровней, используя неравенство
$\frac{K_{i}^{max} - K_{i}^{min}}{\overline{K_{i}}} 100 \leq d_{i}$ , (2) где $K_{i}^{max}$ - максимальное значение i-го коэффициента отклика;
$K_{i}^{min}$ - минимальное значение i-го коэффициента отклика; $\overline{K_{i}}$ - среднее значение i-го коэффициента отклика; $d_{i}$ - относительная разность коэффициентов отклика. Значения $d_{i}$ (P = 0,95) не должны превышать: 5% (n = 3) или 4% (n = 2), где n - число параллельных определений i-го коэффициента отклика для каждого градуировочного уровня. 6.3.4. При отсутствии дейтерированных производных бета-адреностимуляторов используют метод абсолютной градуировки. Градуировочные растворы бета-адреностимуляторов (не менее трех уровней массовой концентрации от 1 до 100 нг/см3 на пробу) вносят в заведомо чистые матрицы на стадии внесения внутреннего стандарта так же, как для метода с дейтерированными производными. Каждый градуировочный уровень анализируют не менее двух раз. 6.3.5. Расчеты коэффициента отклика и площади пика выполняют с помощью системы обработки данных в автоматическом режиме. 6.3.6. Градуировочную характеристику считают приемлемой, если рассчитанное программным обеспечением значение квадрата коэффициента корреляции для каждого бета-адреностимулятора >= 0,98, а значение "Accuracy" для каждой точки градуировочной кривой находится в диапазоне 80% - 120%. 6.3.7. Построение новой градуировочной кривой проводят после каждого включения газового хроматографа (остановка работы для сервисного обслуживания или текущей профилактики). #### 6.4 Условия хроматографических измерений 6.4.1. Газовый хроматограф с масс-спектрометрическим детектором включают в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают параметры, рекомендуемые изготовителем капиллярных колонок. Например, для кварцевой капиллярной колонки 30 м x 0,25 мм x 0,25 мкм применяют следующие хроматографические условия: - газ-носитель - гелий; - скорость потока газа-носителя 0,8 см3/мин; - температура инжектора 280 °C; - инжектор в режиме без деления потока; - температурная программа колонки: начальная температура 100 °C в течение 0,5 мин; программируемый нагрев от 100 °C до 200 °C со скоростью 25,0 °C/мин; программируемый нагрев от 200 °C до 225 °C со скоростью 4,0 °C/мин; программируемый нагрев от 225 °C до 270 °C со скоростью 20,0 °C/мин; - изотерма при температуре 270 °C до 20 мин; - время анализа 20 мин; - объем пробы от 1 до 5 мм3. Допускается использование других хроматографических условий, обеспечивающих разделение компонентов пробы. 6.4.2. Градуировку и настройку масс-спектрометрического детектора в режиме электронной ионизации и тандемной масс-спектрометрии проводят согласно инструкции по эксплуатации прибора. 7. Отбор проб #### 7.1 Отбор проб 7.1.1. Отбор проб мяса и мясных продуктов, включая мясо и продукты из мяса птицы, - по [ГОСТ Р 51447](https://bukva.ai/docs/gost-r-51447-99). ##### 7.1.2 Объем отбираемых проб мочи должен быть не менее 40 см3. Объем отбираемых проб желчи должен быть не менее 30 см3. Масса отбираемых проб пигментированной шерсти не менее 10 г. Отобранные пробы мочи и желчи при отсутствии возможности испытания в день отбора замораживают при температуре минус 20 °C. ##### 7.1.3 Отбор проб комбикормов - по [ГОСТ 13496.0](https://bukva.ai/docs/gost-13496-0-80). #### 7.2 Подготовка проб ##### 7.2.1 Обработка проб органов, тканей, мочи, желчи, шерсти животных и кормов 7.2.1.1. 100 г мышечной ткани, предварительно очищенной от грубой соединительной ткани, измельчают на гомогенизаторе и взвешивают на весах по 10,0 г гомогенизированной пробы в двух флаконах вместимостью по 40 см3. Во флаконы добавляют 20 см3 трис-буфера [(6.1.1)](#p100181), 10 мг протеолитического фермента и пипеточным дозатором вносят по 50 мм3 раствора дейтерированных стандартных образцов массовой концентрации 10 нг/см3. Флаконы закрывают крышкой с тефлоновой прокладкой и помещают на нагревательный модуль с магнитной мешалкой при температуре 55 °C на 3 ч. Затем флаконы с полученным гидролизатом охлаждают до комнатной температуры, измеряют pH и, при необходимости, доводят значение pH до 5,0 хлорной кислотой. Флаконы с пробами помещают на центрифугу и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин при температуре 4 °C. Полученный супернатант переносят в стеклянные флаконы вместимостью по 40 см3. Осадок повторно экстрагируют 5 см3 фосфатного буферного раствора [(6.1.2)](#p100184). Полученные гидролизаты объединяют, измеряют pH и, при необходимости, доводят значение pH до 6,0 хлорной кислотой, помещают на центрифугу и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин, фильтруют через мембранный фильтр. 7.2.1.2. Пробу печени или почек измельчают на гомогенизаторе и взвешивают на весах по 10,0 г гомогенизированной пробы в двух флаконах вместимостью 40 см3. Во флаконы добавляют по 20 см3 фосфатного буферного раствора [(6.1.2)](#p100184), измеряют pH и, при необходимости, доводят значение pH до 5,0 раствором гидроокиси калия [(6.1.8)](#p100204) молярной концентрации c = 1 моль/дм3 или 25%-ным водным раствором соляной кислоты [(6.1.12)](#p100216). Пипеточным дозатором вносят по 50 мм3 смеси дейтерированных стандартных образцов массовой концентрации 10 нг/см3 и ставят флаконы на ультразвуковую баню на 20 мин при температуре 40 °C. Затем пробы переносят на шейкер, гомогенизируют 30 сек и охлаждают до комнатной температуры. Флаконы с пробами помещают на центрифугу и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин при температуре 4 °C. Затем во флаконы приливают 5 см3 фосфатного буферного раствора [(6.1.2)](#p100184), экстрагируют 30 с на шейкере и центрифугируют. Экстракты объединяют, измеряют pH и, при необходимости, доводят значение pH до 5,0 раствором гидроокиси калия молярной концентрации c = 1 моль/дм3 [(6.1.8)](#p100204) или 25%-ным водным раствором соляной кислоты [(6.1.12)](#p100216). Пипеточным дозатором в экстракты вносят по 50 мм3 пищеварительного сока Helix pomatia, помещают на нагревательный модуль с магнитной мешалкой при температуре 40 °C на 15 ч. После гидролиза пробу охлаждают до комнатной температуры, измеряют pH и, при необходимости, доводят значение pH до 6,0 25%-ным водным раствором соляной кислоты [(6.1.12)](#p100216). Гидролизат центрифугируют и фильтруют через мембранный фильтр. 7.2.1.3. Во флакон вносят 10 см3 мочи, 10 см3 ацетатного буферного раствора [(6.1.4)](#p100190), 50 мм3 пищеварительного сока Helix pomatia, измеряют pH и, при необходимости, доводят значение pH до 5,0 раствором гидроокиси калия молярной концентрации c = 1 моль/дм3 [(7.2.8)](#p100204) или 25%-ным водным раствором соляной кислоты [(6.1.12)](#p100216). Пипеточным дозатором вносят по 50 мм3 смеси дейтерированных стандартных образцов массовой концентрации 10 нг/см3 и ставят флаконы на нагревательный модуль при температуре 40 °C на 15 ч для ферментативного гидролиза коньюгатов. Гидролизат охлаждают до комнатной температуры, измеряют pH и, при необходимости, доводят значение pH до 6,0 25%-ным водным раствором соляной кислоты [(6.1.12)](#p100216), фильтруют через мембранный фильтр. 7.2.1.4. Во флакон вносят 5 см3 желчи, 15 см3 ацетатного буферного раствора [(6.1.4)](#p100190), 100 мм3 пищеварительного сока Helix pomatia. Далее проводят обработку пробы в соответствии с [7.2.3](#p100378). 7.2.1.5. Сетчатку отделяют от глазного яблока, помещают во флакон вместимостью 40 см3 и взвешивают на весах. На каждые 50 мг сетчатки добавляют 1 см3 фосфатного буферного раствора [(6.1.2)](#p100184). Затем гомогенизируют 30 с на гомогенизаторе конфигурации ротор-статор. Во флаконы вместимостью 40 см3 вносят по 1 см3 гомогенизированной пробы и добавляют по 9 см3 ацетатного буферного раствора [(6.1.4)](#p100190). Пипеточным дозатором вносят 50 мм3 пищеварительного сока Helix pomatia и по 50 мм3 смеси дейтерированных стандартных образцов массовой концентрации c = 10 нг/см3. Закрывают флаконы крышкой с тефлоновой прокладкой и помещают на нагревательный модуль с магнитной мешалкой на 15 ч при температуре 40 °C. Полученный гидролизат охлаждают до комнатной температуры, измеряют pH и, при необходимости, доводят значение pH до 6,0 раствором гидроокиси натрия молярной концентрации c = 10 моль/дм3 [(6.1.9)](#p100207). Флаконы с пробами помещают на центрифугу и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин при температуре 4 °C. Гидролизат фильтруют через мембранный фильтр. 7.2.1.6. 100 г кормов измельчают на гомогенизаторе и взвешивают на весах по 10,0 г гомогенизированной пробы в двух флаконах вместимостью 40 см3. Во флаконы добавляют 25 см3 соляной кислоты молярной концентрацией c = 0,01 моль/дм3 [(6.1.11)](#p100213). Пипеточным дозатором вносят по 50 мм3 смеси дейтерированных стандартных образцов массовой концентрации 10 нг/см3. Флаконы помещают в шейкер на 30 мин, а затем центрифугируют. Надосадочный слой переносят во флакон вместимостью 40 см3, добавляют 5 см3 н-Гексана, экстрагируют два раза по 2 мин, отбрасывая гексановые фракции. Измеряют pH водного остатка и, при необходимости, доводят значение pH до 6,0 раствором гидроокиси натрия молярной концентрации c = 10 моль/дм3 [(6.1.9)](#p100207), помещают на центрифугу и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин при температуре 4 °C. Экстракт фильтруют через мембранный фильтр. 7.2.1.7. 10 г пигментированной шерсти промывают 0,2%-ным водным раствором твин 20 и деионизованной водой, высушивают в сушильном шкафу при температуре 40 °C и измельчают ножницами на отрезки размером от 1 до 2 мм. Измельченную шерсть взвешивают на весах и по 1,0 г помещают в два флакона вместимостью 40 см3. Во флаконы добавляют по 20 см3 раствора гидроокиси натрия молярной концентрации c = 2 моль/дм3 [(6.1.10)](#p100210). Затем во флаконы вносят пипеточным дозатором по 50 мм3 смеси дейтерированных стандартных образцов массовой концентрации c = 10 нг/см3. Флаконы ставят на нагревательный модуль с магнитной мешалкой на 1 ч при температуре 85 °C. Затем охлаждают до комнатной температуры, добавляют 10 см3 метил-третбутилового эфира, экстрагируют два раза по 5 мин, собирая эфирную фракцию в выпарительную колбу вместимостью 100 см3. Для полного отделения метил-третбутилового эфира флаконы помещают на центрифугу и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин. Затем во флаконы вносят по 5 г натрия хлористого, перемешивают и повторно экстрагируют дважды по 5 мин с 10 см3 смеси этилового эфира уксусной кислоты и изопропилового спирта в соотношении 60:40. Объединенные экстракты упаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. К сухому остатку приливают 10 см3 фосфатного буферного раствора [(6.1.3)](#p100187) и помещают на 1 мин на ультразвуковую баню. Экстракт фильтруют через мембранный фильтр. #### 7.3 Очистка подготовленных проб методом твердофазной экстракции (ТФЭ) Картриджи для твердофазной экстракции вместимостью 6 см3 с 0,5 г сорбента C18 40 мкм кондиционируют на вакуумном устройстве для ТФЭ, пропуская последовательно: 4 см3 метанола, 1 см3 деионизованной воды, 3 см3 фосфатного буферного раствора молярной концентрации c = 0,1 моль/дм3 [(6.1.3)](#p100187). Пропускают через картридж пробу, полученную в соответствии с [7.2.1.1](#p100375) - [7.2.1.7](#p100382), в фосфатном буфере (на всех этапах ТФЭ, кроме этапов сушки, вакуум не применяют). Промывают картридж последовательно два раза фосфатным буферным раствором по 2 см3, раствором уксусной кислоты молярной концентрации c = 1 моль/дм3 - 1 см3 и затем сушат картридж в вакууме 20 мин. Далее промывают картридж 2 см3 метанола и снова сушат в вакууме 10 мин. Элюируют аналиты раствором аммиака в изопропиловом спирте [(6.1.6)](#p100198). Упаривают элюат на ротационном испарителе при температуре не выше 45 °C. Остаток перерастворяют в 1 см3 абсолютного этанола и переносят во флакон вместимостью 4 см3. Упаривают этанол досуха в токе азота на нагревательном модуле при температуре от 35 °C до 40 °C не менее 1 ч. Каждую новую партию сорбента необходимо тестировать по описанной процедуре ТФЭ. При тестировании используют стандартные растворы бета-адреностимуляторов известной молярной концентрации в фосфатном буферном растворе [(6.1.3)](#p100187). Модифицируют только два этапа: объем метанола на стадии промывки сорбента (критично для анилиновых бета-адреностимуляторов) и объем элюирующего раствора на последней стадии (критично для бета-адреностимуляторов фенольного типа). 8. Порядок выполнения измерений #### 8.1 Дериватизация бета-адреностимуляторов 8.1.1. Для получения триметилсилиловых производных бета-адреностимуляторов к сухому остатку после ТФЭ очистки по [7.3](#p100384) пипеточным дозатором приливают 50 мм3 смеси МСТФА/ТМИС/ДТЭ [(6.1.5)](#p100193). Помещают флаконы в нагревательный модуль на 60 мин при температуре 60 °C. По истечении указанного времени реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, переносят в стеклянные флаконы вместимостью 2 см3 с вставками на 100 мм3 и используют для ГХ-МС анализа. 8.1.2. Для двухстадийной дериватизации к сухому остатку после ТФЭ очистки пипеточным дозатором приливают 50 мм3 раствора метилборной кислоты в этиловом эфире уксусной кислоты [(6.1.7)](#p100201). Полученную реакционную смесь выдерживают при комнатной температуре 20 мин. По истечении указанного времени от 1 мм3 до 2 мм3 реакционной смеси вводят в хромато-масс-спектрометр. Получают хроматограмму циклических метилборатов. Затем реакционную смесь упаривают досуха и к сухому остатку добавляют 50 мм3 раствора БСТФА/ТМХС [(6.1.5)](#p100193). Полученную реакционную смесь помещают в нагревательный модуль при температуре 60 °C на 30 мин. По истечении указанного времени реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, переносят в стеклянные флаконы вместимостью 2 см3 с вставками на 100 мм3 и используют для ГХ-МС анализа. #### 8.2 ГХ-МС анализ 8.2.1. В инжектор хроматографа вводят по 1 - 5 мм3 анализируемой пробы и проводят анализ в условиях, указанных в [6.4](#p100349). Проводят не менее двух определений для каждой анализируемой пробы. 8.2.2. Время удерживания бета-адреностимуляторов определяют при анализе градуировочных растворов. Время удерживания идентифицированных бета-адреностимуляторов в анализируемой пробе не должно отличаться от времени удерживания бета-адреностимуляторов в градуировочном растворе более чем на 2,5%. 8.2.3. Данные о диагностических ионах триметилсилиловых производных бета-адреностимуляторов приведены в таблице 2. Таблица 2
Диагностические ионы триметилсилиловых
производных бета-адреностимуляторов
Наименование бета-адреностимулятораN$M_{0}$$M_{d}$Диагностические ионы
Кленбутерол127634886/262/243/333
Кленбутерол-d6128235492/262/246/339
Кленбутерол227642086/300/335/405
Кленбутерол-d6228242692/300/335/411
Сальбутамол323945586/294/369/440
Сальбутамол-d6324546192/295/369/446
Тербуталин322544286/356/371/426
Мапентерол1324396100/277/291/296
Мапентерол2324468100/364/369/453
Цимбутерол123330586/200/219/234
Цимбутерол-d9124231495/206/219/234
Цимбутерол223337786/272/291/362
Цимбутерол-d9224238695/278/291/371
Примечание. В таблице использованы следующие условные обозначения:
N - число ТМС групп в молекуле производного;
$M_{0}$ - молекулярная масса;
$M_{d}$ - молекулярная масса ТМС производного.
8.2.4. Данные о диагностических ионах метилборатов бета-адреностимуляторов приведены в таблице 3.
Таблица 3
Диагностические ионы метилборатов бета-адреностимуляторов
Наименование бета-адреностимулятораN$M_{0}$$M_{d}$Диагностические ионы
Кленбутерол1276300243/245/285/287
Кленбутерол-d61282306246/248/288/290
Сальбутамол2239287229/230/271/272
Сальбутамол-d62245293232/233/274/275
Мапентерол1324348277/279/291/319
Цимбутерол1233257158/200/241/242
Цимбутерол-d91242266159/206/247/248
Примечание. В таблице использованы следующие условные обозначения:
N - число МБ-групп в молекуле производного;
$M_{0}$ - молекулярная масса;
$M_{d}$ - молекулярная масса ТМС производного.
9. Обработка результатов ГХ-МС анализа
9.1. В соответствии с данными, полученными при анализе градуировочных растворов, оформляют таблицу пиков с использованием программного обеспечения хромато-масс-спектрометра. Метод обработки хроматограммы - внутренний стандарт. Содержание i-го бета-адреностимулятора в анализируемой пробе $X_{i}$ , мкг/кг, рассчитывают по формуле $X_{i} = \frac{S_{i} \cdot M_{is}}{S_{is} \cdot k_{i}}$ , (3) где $S_{i}$ - площадь пика i-го бета-адреностимулятора в анализируемой пробе; $M_{is}$ - содержание внутреннего стандарта в анализируемой пробе, мкг/кг;
$S_{is}$ - площадь пика внутреннего стандарта в анализируемой пробе;
$k_{i}$ - коэффициент отклика для i-го бета-адреностимулятора.
9.1.1. Расчеты количества бета-адреностимулятора и площади пика выполняются системой обработки данных в автоматическом режиме.
9.1.2. Результаты измерений округляют до второго десятичного знака и выражают в мкг/кг. За результат измерений содержания i-го бета-адреностимулятора принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости: $\frac{|X_{i1} - X_{i2}|}{\overline{X_{i}}} \times 100 \leq r$ , (4) где $X_{i1}$ и $X_{i2}$ - результаты двух параллельных определений содержания i-го бета-адреностимулятора, выполненных в условиях повторяемости, мкг/кг; $\overline{X_{i}}$ - среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, $X_{i1}$ и $X_{i2}$ , мкг/кг; r - предел повторяемости, значение которого приведено в [таблице 7](#p100596), %. 9.1.3. Для целей количественного и подтверждающего анализа допускается проведение измерений в различных режимах тандемной масс-спектрометрии, позволяющих получить требуемое количество подтверждающих критериев. При количественном анализе допускается проведение измерения по одному, наиболее интенсивному иону в соответствии с требованиями, указанными в [8.2](#p100392). Подтверждающий анализ проводят при наличии не менее четырех диагностических критериев, полученных для силированных производных или метилборатов, в соответствии с требованиями, указанными в [8.2](#p100392). 9.2. Идентификацию бета-адреностимуляторов и их количественное определение проводят с соблюдением следующих условий для масс-спектрометрического детектирования:
- молекулярный ион используют для идентификации, если он присутствует в масс-спектре с относительной интенсивностью не менее 10%;
- относительная ионная интенсивность каждого из диагностических ионов должна быть не менее 10%;
- соотношение сигнал/шум для каждого диагностического иона должно быть не менее 3/1.
Относительные интенсивности детектированных ионов, выраженные как процент от интенсивности самого интенсивного иона, должны соответствовать таковым из градуировочного раствора, в сопоставимых массовых концентрациях, измеренным при тех же самых условиях, в пределах максимально допустимых отклонений, указанных в таблице 4. Таблица 4 Максимально допустимые отклонения
для относительных ионных интенсивностей | Относительная интенсивность (% от основного пика) | ЭИ-ГХ-МС (относительная), % | $\text{ГХ} - \text{МС}^{n}$ (относительная),% | | --- | --- | --- | | Св. 50 | +/- 10 | +/- 20 | | " 20 до 50 включ. | +/- 15 | +/- 25 | | От 10 " 20 " | +/- 20 | +/- 30 | | Менее 10 | +/- 50 | +/- 50 |
При проведении подтверждающего анализа число диагностических ионов для каждого из масс-спектрометрических методов определяют с учетом идентифицирующих критериев.
Для подтверждения каждого из бета-адреностимуляторов необходимы минимум четыре идентифицирующих критерия. В таблице 5 приведено количество идентифицирующих критериев в зависимости от используемых масс-спектрометрических методов. Таблица 5 Отношение между масс-спектрометрическими методами
и количеством полученных идентифицирующих критериев | Масс-спектрометрические методы | Количество идентифицирующих критериев, полученных на диагностический ион | | --- | --- | | Масс-спектрометрия низкого разрешения (НР) | 1,0 | | $\text{НР} - \text{МС}^{n}$ ион предшественник | 1,0 | | $\text{НР} - \text{МС}^{n}$ дочерние ионы | 1,5 | | Масс-спектрометрия высокого разрешения (ВР) | 2,0 | | $\text{ВР} - \text{МС}^{n}$ ион предшественник | 2,0 | | $\text{ВР} - \text{МС}^{n}$ дочерние ионы | 2,5 |
В таблице 6 показаны примеры числа идентифицирующих критериев (n - целое число), полученных для различных масс-спектрометрических методов.
Таблица 6 Примеры расчета идентифицирующих критериев
| Методы ГХ-МС анализа | Число диагностических ионов | Количество идентифицирующих критериев | | --- | --- | --- | | ГХ-МС (ЭИ или ХИ) | N | n | | ГХ-МС (ЭИ или ХИ) 2 производных | 2 (Производное А) + 2 (Производное Б) | 4 | | ГХ-МС-МС | 1 предшественник и 2 дочерних | 4 | | ГХ-МС-МС | 2 предшественника, каждый с 1 дочерним | 5 |
10. Метрологические характеристики
Значения допускаемой относительной расширенной неопределенности $U_{rel}$ , % (при коэффициенте охвата k = 2) измерений содержания индивидуальных бета-адреностимуляторов по установленному в настоящем стандарте методу приведены в таблице 7.
Таблица 7
Метрологические характеристики метода
Диапазон измерений содержания бета-адреностимуляторов, мкг/кгОтносительная расширенная неопределенность
(k = 2), $U_{rel}$ , %		Предел повторяемости, при P = 0,95, $n = 2r_{\text{отн}}$ , %
От0,10до1,00включ.2515
Св.1,00"10,00"1510
"10,00105
Фактические значения расширенной неопределенности $U_{c}$ , мкг/кг (при коэффициенте охвата k = 2) результатов, полученных при определении содержания индивидуальных бета-адреностимуляторов и признанных приемлемыми [(8.1.2)](#p100390), рассчитываются по [формуле (7)](#p100632).
11. Оформление результатов измерений
Результат анализа $M_{c}$ в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде
$M_{c} = \overline{X_{i,c}} \pm U_{c}$ , (5)
где $M_{c}$ - окончательный результат определения содержания бета-адреностимулятора, мкг/кг; $\overline{X_{i,c}}$ - среднеарифметическое значение двух параллельных определений содержания i-го бета-адреностимулятора в анализируемой пробе, выполненных в условиях повторяемости, мкг/кг; $U_{c}$ - расширенная неопределенность (при коэффициенте охвата k = 2) определения содержания i-го бета-адреностимулятора, определяемая по [формуле 7](#p100632), мкг/кг.
12. Контроль точности измерений
12.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят не реже одного раза в пять дней. Повторно анализируют образцы для градуировки хроматографа по [6.4](#p100349) и определяют коэффициенты отклика для каждого бета-адреностимулятора (два параллельных определения) в тех же условиях, в которых была установлена градуировочная характеристика. Градуировочную характеристику признают стабильной, если коэффициент отклика для каждого из двух параллельных определений отличается от значения, установленного при градуировке, не более чем на 10%. Если градуировочная характеристика нестабильна, градуировку хроматографа проводят повторно. 12.2. Контроль смещения результатов измерений с помощью стандартных образцов проводят не реже одного раза в месяц. С использованием стандартной процедуры подготовки проб проводят анализ стандартных образцов в соответствии с [разделом 7](#p100365) и получают результат измерений содержания i-го бета-адреностимулятора ( $\overline{X_{i,c}}$ , мкг/кг). Результаты измерений признают удовлетворительными при выполнении неравенства
$|\overline{X_{i,c}} - X_{i,\text{а}}| \leq \sqrt{U_{i,c}^{2} + U_{i,a}^{2}}$ , (6)
где $\overline{X_{i,c}}$ - содержание i-го бета-адреностимулятора в анализируемом стандартном образце, мкг/кг; $X_{i,\text{а}}$ - аттестованное значение содержания i-го бета-адреностимулятора в стандартном образце, мкг/кг; $U_{i,\text{с}}$ - расширенная неопределенность (при коэффициенте охвата k = 2) результата измерений содержания i-го бета-адреностимулятора, полученного при соблюдении требований настоящего стандарта, мкг/кг, рассчитываемая по формуле:
$U_{i,\text{с}} = 0,12\overline{X_{i,\text{с}}^{0,71}}$ , (7)
где $U_{i,\text{с}}$ - расширенная неопределенность (при коэффициенте охвата k = 2) аттестованного содержания i-го бета-адреностимулятора в аттестованном стандартном образце в соответствии с паспортом (сертификатом) на конкретный стандартный образец, мкг/кг.
13. Требования безопасности
13.1. Используемые в работе реактивы относятся к веществам 1-го и 2-го класса опасности по ГОСТ 12.1.007, при работе с ними необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005. 13.2. Помещения, в которых проводят анализ и подготовку проб, должны быть оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией. 12.3. Операции по приготовлению и дозированию градуировочных растворов следует проводить под тягой в вытяжном шкафу. 13.4. При проведении испытаний следует соблюдать ГОСТ 12.2.085 и [[1]](#p100642). 13.5. При выполнении измерений на хромато-масс-спектрометре следует соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ Р 12.1.019, пожаровзрывобезопасности - по ГОСТ 12.1.018 и инструкцией по эксплуатации прибора. 13.6. К выполнению измерений методом газовой хроматографии допускаются лица, владеющие техникой ГХ-МС и изучившие инструкции по эксплуатации применяемой аппаратуры.
Библиография
| [1] | ПБ 03-576-2003 | Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением (Утверждены Постановлением Госгортехнадзора России от 11.06.2003 N 91) | | --- | --- | --- | ---