ГОСТ Р 53774-2010. Национальный стандарт Российской Федерации. Молоко и молочные продукты. Иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков

(утв. и введен в действие Приказом Ростехрегулирования от 26.02.2010 № 24-ст)

от 26 февраля 2010 г. № 24-ст

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ

ИММУНОФЕРМЕНТНЫЕ МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ АНТИБИОТИКОВ

Milk and milk products. Immunoenzyme methods for determination of antibiotics indication

1 января 2011 года

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения».

Сведения о стандарте

1. Разработан Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом молочной промышленности Россельхозакадемии (ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии).

2. Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность».

3. Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 февраля 2010 г. № 24-ст.

4. Взамен ГОСТ Р 51600-2000 в части разделов 5 и 6 (рецепторные методы).

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет.

1. Область применения

Настоящий стандарт распространяется на сырое, пастеризованное, стерилизованное и предварительно восстановленное сухое коровье молоко (далее — молоко) и устанавливает качественные иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков:

• методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа;
• методы определения наличия антибиотиков тетрациклиновой группы;
• методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы.

2. Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 53430-2009. Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80). Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3145-84. Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия

ГОСТ 6709-72. Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 12026-76. Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 16317-87. Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 25336-82. Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 28498-90. Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81). Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования.

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3. Оборудование, средства измерений, посуда, материалы и реактивы

3.1. Термостат, позволяющий поддерживать температуру от 37 °C до 66 °C с допустимой погрешностью +/- 0,5 °C.

3.2. Блок термостатированных ячеек, позволяющий поддерживать температуру (47,5 +/- 1,0) °C.

3.3. Холодильник бытовой, позволяющий поддерживать температуру от 0 °C до 12 °C по ГОСТ 16317.

3.4. Камера морозильная, позволяющая поддерживать температуру минус (20 +/- 2) °C.

3.5. Часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.

3.6. Термометр лабораторный стеклянный с диапазоном измерения от 0 °C до 100 °C ценой деления шкалы 1 °C по ГОСТ 28498.

3.7 Пипетки вместимостью 0,5 и 1,0 куб. см по ГОСТ 29227.

3.8 Колбы мерные вместимостью 50 куб. см по ГОСТ 1770.

3.9. Колбы конические вместимостью 250 куб. см по ГОСТ 25336.

3.10 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.11 Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

3.12 Тест-наборы для определения наличия антибиотиков:

• тест-набор № 1 (тест-набор Бета-лактам «Snap(R)») <1>, включающий укупоренные пробирки с 3,3,5,5-триметилбензидином и специфическими рецепторами, позволяющими определять антибиотики бета-лактамного типа; пипетки мерные вместимостью 0,4 куб. см; индикаторное устройство с диметилсульфоксидом;
• тест-набор № 2 (тест-набор «Beta Star(R)») <1>, включающий флаконы, содержащие специфические рецепторы, меченные коллоидным золотом, позволяющие определять антибиотики бета-лактамного типа; полоски хроматографической бумаги с зоной анализируемого молока и контрольной зоной; шприцы-дозаторы вместимостью 0,2 куб. см с одноразовыми наконечниками;
• тест-набор № 3 (тест-набор «Delvo-X-PRESS(R)бетта L-II») <1>, включающий пробирки с реагентом, флакон с индикатором, флакон с сухим контрольным раствором с антибиотиком (буферный раствор, после восстановления содержащий антибиотик с массовой концентрацией 0,003 мкг/г), ампулы с растворителем контрольного раствора (0,01%-ный водный раствор тимерозала), промывочный раствор (буферный раствор, содержащий глицерин), проявитель (водный раствор ферментного субстрата);
• тест-набор № 4 (тест-набор Тетрациклин «Snap(R)») <2>, включающий укупоренные пробирки с 3,3,5,5-триметилбензидином и специфическими рецепторами, позволяющими определять антибиотики тетрациклиновой группы; пипетки мерные вместимостью 0,4 куб. см; индикаторное устройство с диметил-сульфоксидом;
• тест-набор № 5 (тест-набор «TetraStar(R)») <2>, включающий флаконы со специфическими рецепторами, меченными коллоидным золотом, позволяющими определять антибиотики тетрациклиновой группы; полоски хроматографической бумаги с зоной анализируемого молока и контрольной зоной; шприцы-дозаторы вместимостью 0,2 куб. см с одноразовыми наконечниками;
• тест-набор № 6 (тест-набор «Twinsensor(BT)») <3>, включающий пластины микропробирок с буферным солевым раствором и специфическими рецепторами, позволяющими определять антибиотики бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы, индикаторные полоски хроматографической бумаги; шприц-дозатор вместимостью 0,2 куб. см с одноразовыми наконечниками; контрольные растворы: пробирки или флаконы со смесью сухого молока с массовой концентрацией пенициллина-G 0,004 мкг/г и окситетрациклина 0,1 мкг/г, красителя («Positive Standard»); пробирки или флаконы со смесью сухого молока без антибиотиков и красителя («Negative Standard»);
• тест-набор № 7 (тест-набор «Betastar(R) Combo») <3>, включающий флаконы со специфическими рецепторами, меченными коллоидным золотом, позволяющими определять антибиотики бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы; полоски хроматографической бумаги с зоной анализируемого молока и контрольной зоной; шприцы-дозаторы вместимостью 0,2 куб. см с одноразовыми наконечниками.

---

<1> Тест-набор является рекомендуемым к применению. Эта информация приведена для сведения пользователей настоящего стандарта и не означает, что настоящий стандарт устанавливает обязательное применение указанного тест-набора. Допускаются к использованию тест-наборы производства других изготовителей, предназначенные для целей описываемых методов. Рекомендуемые тест-наборы: Бета-лактам «Snap(R)» (ООО «ЗИП-И»), «Beta Star(R)» (ООО «Хр. Хансен»), «Delvo-X-PRESS(R)бетта L-II» (ООО «ДСМ Восточная Европа»).

<2> Тест-набор является рекомендуемым к применению. Эта информация приведена для сведения пользователей настоящего стандарта и не означает, что стандарт устанавливает обязательное применение указанного тест-набора. Допускаются к использованию тест-наборы производства других изготовителей, предназначенные для целей описываемых методов. Рекомендуемые тест-наборы: Тетрациклин «Snap(R)» (ООО «ЗИП-И»), «TetraStar(R)» (ООО «Хр. Хансен»).

<3> Тест-набор является рекомендуемым к применению. Эта информация приведена для сведения пользователей настоящего стандарта и не означает, что стандарт устанавливает обязательное применение указанного тест-набора. Допускаются к использованию тест-наборы производства других изготовителей, предназначенные для целей описываемых методов. Рекомендуемые тест-наборы: «TwinsensorBT» (UNISENSOR SA), «Betastar(R) Combo» (ООО «Хр. Хансен»).

Применение конкретного оборудования, средств измерений, посуды, материалов и реактивов осуществляют в соответствии с требованиями разделов 4 и 5.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.

4. Отбор проб

Отбор проб — по ГОСТ Р 53430 с дополнением. Допускается хранить пробы молока для определения в холодильнике при температуре (5 +/- 1) °C не более 24 ч.

5. Методы контроля

5.1 Методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа

5.1.1 Метод с использованием тест-набора № 1

Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики бета-лактамного типа захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом, содержащим индикатор, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.

Наличие антибиотиков бета-лактамного типа устанавливают, сравнивая цвет зоны анализируемого молока с цветом контрольной зоны индикаторного устройства.

5.1.1.1 Подготовка к определению

Вскрывают упаковку тест-набора № 1, проверяют положение шарика реактива в пробирке, который должен находиться на дне. При необходимости шарик реактива устанавливают на дно пробирки встряхиванием.

Срок хранения тест-набора № 1 (без упаковки) при температуре (20 +/- 2) °C — не более 24 ч.

5.1.1.2 Проведение определения

Мерную пипетку вместимостью 0,4 куб. см по 3.12 наполняют анализируемым молоком до метки и переносят в пробирку с 3,3,5,5-триметилбензидином и специфическими рецепторами по 3.12. Пробирку закрывают и тщательно перемешивают круговыми движениями до растворения реактива.

Пробирку и индикаторное устройство по 3.12 помещают в термостат по 3.1 и выдерживают при температуре (45 +/- 5) °C в течение 5 — 6 мин.

Индикаторное устройство вынимают из термостата и устанавливают на горизонтальной поверхности так, чтобы приемная воронка для заливания анализируемого молока находилась слева от оператора. Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.

При появлении анализируемого молока в круглом окне клавиши индикаторного устройства клавишу нажимают до щелчка для изменения тока жидкости и промывания пористого материала раствором антибиотиков.

Индикаторное устройство выдерживают в термостате при температуре (45 +/- 5) °C в течение 4 мин. Стабильность окраски сохраняется в течение 15 мин. после извлечения индикаторного устройства из термостата.

5.1.1.3 Обработка результатов

Сравнивают цвет контрольной зоны в окне индикаторного устройства с цветом зоны анализируемого молока в соответствии с А.1 (Приложение А).

Контрольная зона должна быть синего цвета.

Если изменение цвета контрольной зоны после проведения определения по 5.1.1.2 не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором № 1.

Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве аналогичен или темнее цвета контрольной зоны, антибиотики бета-лактамного типа в анализируемом молоке отсутствуют.

Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве белый или светлее цвета контрольной зоны, антибиотики бета-лактамного типа в анализируемом молоке присутствуют.

5.1.2 Метод с использованием тест-набора № 2

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционную и контрольную зоны.

5.1.2.1 Подготовка к определению

Необходимое для проведения определения количество комплектов тест-наборов № 2 по 3.12 перед применением выдерживают при комнатной температуре в течение 10 — 15 мин.

Флаконы с реагентом по 3.12 встряхивают для полного осаждения содержимого на дне.

5.1.2.2 Проведение определения

Шприцем-дозатором с одноразовым наконечником по 3.12 отбирают 0,2 куб. см анализируемого молока и переливают во флакон. Флакон закрывают крышкой, встряхивают до полного растворения сухих веществ, затем открывают флакон и помещают его в блок термостатированных ячеек по 3.2 при температуре (47,5 +/- 1,0) °C на 3 мин. Во флакон, находящийся в блоке термостатированных ячеек, помещают полоску хроматографической бумаги и термостатируют еще 2 мин. Затем полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона.

5.1.2.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появляющихся на полосках хроматографической бумаги в виде линий после проведения определения по 5.1.2.2 в соответствии с А.2 (Приложение А).

Зона в верхней части полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения не произошло окрашивания контрольной зоны, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют.

Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке на полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной.

Большая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствуют о присутствии антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке.

5.1.3 Метод с использованием тест-набора № 3

Метод основан на иммуноферментной реакции антибиотиков бета-лактамного типа со специфическими белковыми рецепторами, выделенными из бактерий вида Bacillus stearotermophillus, и пероксидазой хрена с образованием химически прочного комплекса.

Отсутствие или наличие антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке устанавливают по изменению или отсутствию изменения цвета содержимого пробирки.

5.1.3.1 Подготовка к определению

Из тест-набора № 3 по 3.12 отбирают необходимое количество пробирок, которые перед определением маркируют и выдерживают при комнатной температуре.

Термостат по 3.1 нагревают до температуры (64 +/- 2) °C и выдерживают при этой температуре не менее 15 мин.

а) Подготовка рабочего промывочного раствора

В мерную колбу вместимостью 50 куб. см по ГОСТ 1770 пипеткой по ГОСТ 29227 вносят 1 куб. см промывочного раствора по 3.12 и доводят объем до метки дистиллированной водой по ГОСТ 6709.

б) Подготовка контрольного раствора

Флакон с сухим контрольным раствором и ампулу с растворителем по 3.12 вскрывают в соответствии с правилами работы с микробиологическими препаратами [1].

Во флакон с сухим контрольным раствором вносят содержимое ампулы, закрывают пробкой, перемешивают до растворения сухого вещества без образования пены и выдерживают при комнатной температуре в течение 20 мин.

Срок хранения контрольного раствора в холодильнике при температуре от 2 °C до 8 °C — не более 2 мес.

5.1.3.2 Проведение определения

В пробирки с реагентом по 3.12 пипеткой последовательно вносят 0,2 куб. см анализируемого молока и 0,2 куб. см индикатора. Параллельно в пробирку с реагентом без анализируемого молока пипеткой вносят 0,2 куб. см контрольного раствора с антибиотиком по 5.1.3.1 б) и 0,2 куб. см индикатора.

Все пробирки устанавливают в термостат и выдерживают при температуре (64 +/- 2) °C в течение 3 мин. при непрерывном встряхивании.

Пробирки извлекают из термостата и выливают содержимое в слив. Каждую пробирку трижды промывают рабочим промывочным раствором по 5.1.3.1 а), полностью наполняя пробирку раствором и полностью сливая его. После каждого слива пробирки устанавливают на фильтровальную бумагу по ГОСТ 12026 вверх дном.

Затем в каждую пробирку пипеткой добавляют по 1,0 куб. см проявителя по 3.12 и выдерживают при комнатной температуре в течение 3 мин.

5.1.3.3 Обработка результатов

Определяют цвет содержимого пробирок.

Синий цвет содержимого пробирок с анализируемым молоком свидетельствует об отсутствии антибиотиков бета-лактамного типа в нем.

Отсутствие изменения цвета содержимого пробирок с анализируемым молоком свидетельствует о присутствии антибиотиков бета-лактамного типа в нем.

Отсутствие изменения цвета содержимого пробирки с контрольным раствором с антибиотиком свидетельствует о достоверности полученных результатов.

5.2 Методы определения наличия антибиотиков тетрациклиновой группы

5.2.1 Метод с использованием тест-набора № 4

Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики тетрациклиновой группы захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом, содержащим индикатор, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.

Наличие антибиотиков тетрациклиновой группы устанавливают, сравнивая цвет зоны анализируемого молока с цветом контрольной зоны индикаторного устройства.

5.2.1.1 Подготовка к определению

Подготовку тест-набора № 4 по 3.12 проводят по 5.1.1.1.

5.2.1.2 Проведение определения — по 5.1.1.2

5.2.1.3 Обработка результатов

Сравнивают цвет контрольной зоны в окне индикаторного устройства с цветом зоны анализируемого молока в соответствии с А.1 (Приложение А).

Контрольная зона должна быть синего цвета.

Если изменение цвета контрольной зоны после проведения определения по 5.1.1.2 не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором № 4.

Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве аналогичен или темнее цвета контрольной зоны, антибиотики тетрациклиновой группы в анализируемом молоке отсутствуют.

Белый или менее интенсивный цвет зоны анализируемого молока по сравнению с цветом контрольной зоны свидетельствует о присутствии в нем антибиотиков тетрациклиновой группы.

5.2.2 Метод с использованием тест-набора № 5

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционную и контрольную зоны.

5.2.2.1 Подготовка к определению

Подготовку тест-набора № 5 по 3.12 проводят по 5.1.2.1.

5.2.2.2 Проведение определения

Шприцем-дозатором с одноразовым наконечником по 3.12 отбирают 0,2 куб. см анализируемого молока и переливают во флакон. Флакон закрывают крышкой, встряхивают до полного растворения сухих веществ, затем открывают флакон и помещают его в блок термостатированных ячеек при температуре (47,5 +/- 1,0) °C на 2 мин. Во флакон, находящийся в блоке термостатированных ячеек, помещают полоску хроматографической бумаги и термостатируют еще 3 мин. Затем полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона.

5.2.2.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появляющихся на полосках хроматографической бумаги в виде линий после проведения определения по 5.2.2.2 в соответствии с А.3 (Приложение А).

Зона в верхней части полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения не произошло окрашивания контрольной зоны, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют.

Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке на полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной.

Большая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке.

Меньшая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствуют о присутствии антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке.

5.3 Методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы

5.3.1 Метод с использованием тест-набора № 6

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.3.1.1 Подготовка к определению

Из тест-набора № 6 по 3.12 отбирают необходимое количество пеналов и перед их открытием выдерживают при комнатной температуре до видимого испарения влаги с поверхности.

Из тест-набора № 6 отбирают и маркируют необходимое количество микропробирок (не более 8) с учетом контрольных растворов.

Термост нагревают до температуры (40 +/- 3) °C и выдерживают при этой температуре не менее 5 мин.

Восстановление контрольных растворов «Positive Standard» и «Negative Standard»

В пробирки с контрольными растворами пипеткой вносят по 1 куб. см дистиллированной воды (0,4 куб. см для контрольных растворов во флаконах) и тщательно перемешивают до образования однородного раствора.

Срок хранения восстановленных контрольных растворов в морозильной камере при температуре минус 20 °C — не более 6 мес. Не допускается повторное замораживание восстановленных контрольных растворов.

5.3.1.2 Проведение определения

Микропробирки по 3.12 помещают в термостат. В каждую микропробирку шприцем-дозатором с наконечником вносят 0,2 куб. см анализируемого молока, быстро перемешивают его с реагентом, наполняя и сливая смесь шприцем-дозатором пять раз для получения однородного раствора, и выдерживают его в течение 3 мин.

В микропробирки помещают индикаторные полоски хроматографической бумаги и термостатируют в течение 3 мин. при температуре (40 +/- 3) °C. По истечении времени индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают.

Определение с использованием контрольных растворов проводят, как указано выше, при этом в одну микропробирку вносят 0,2 куб. см раствора «Positive Standard», в другую — 0,2 куб. см раствора «Negative Standard».

5.3.1.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появляющихся на индикаторных полосках хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.4 (Приложение А).

Зона центральной части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной.

Если после проведения определения окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют по 5.3.1.2.

Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке расположена над контрольной зоной. Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа — под контрольной зоной.

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие окрашивания зоны определения антибиотиков свидетельствуют о присутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

При проведении определений с применением контрольных растворов «Positive Standard» и «Negative Standard» обработку результатов проводят, как указано выше.

5.3.2 Метод с использованием тест-набора № 7

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.3.2.1 Подготовка к определению

Подготовку тест-набора № 7 по 3.12 проводят по 5.1.2.1.

5.3.2.2 Проведение определения — по 5.2.2.2

5.3.2.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появляющихся на полосках хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.5 (Приложение А).

Зона центральной части полоски хроматографической бумаги является контрольной.

Если после проведения определения по 5.2.2.2 не произошло окрашивания контрольной зоны, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новой тест-полоской.

Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке на полоске хроматографической бумаги расположена над контрольной зоной. Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы — под контрольной зоной.

Большая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков испытуемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие окрашивания зон определения антибиотиков свидетельствуют о присутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

6. Метрологические характеристики

Наименьшие пределы определения антибиотиков в молоке и молочных продуктах приведены в таблице 1.

Таблица 1

(Ед./г (мкг/г)) <*>

Наименование антибиотика	Наименьший предел определения антибиотиков с использованием тест-наборов
	№ 1	№ 2	№ 3	№ 4	№ 5	№ 6	№ 7
Амоксициллин	0,0035	0,002	0,004	-	-	0,003	0,002
Ампициллин	0,0035	0,002	0,004	-	-	0,003	0,002
Бензициллин	0,003	-	-	-	-	-	-
Гетациллин	0,01	-	0,006	-	-	-	-
Диклоксациллин	0,02	0,005	0,025	-	-	0,006	0,003
Доксициклин	-	-	-	0,04	-	0,0025	0,025
Клоксациллин	0,022	0,005	0,03	-	-	0,006	0,005
Метациклин	-	-	-	0,04	-	-	-
Метициллин	-	-	0,01	-	-	-	-
Нафциллин	0,052	0,008	-	-	-	0,030	0,012
Оксациллин	0,024	0,005	0,025	-	-	0,012	0,003
Окситетрациклин	-	-	-	0,01	0,06	0,009	0,05
Пенициллин G	0,002	0,002	0,002	-	-	0,002	0,002
Пенициллин V	0,003	-	0,003	-	-	-	-
Пиперациллин	0,006	-	0,005	-	-	-	-
Прокаин-пенициллин	0,002	-	0,003	-	-	-	-
Тетрациклин	-	-	-	0,011	0,06	0,015	0,05
Тикарциллин	0,04	-	0,03	-	-	-	-
Хлортетрациклин	-	-	-	0,026	0,04	0,006	0,025
Цефадроксил	0,03	-	0,005	-	-	-	-
Цефазолин	0,013	0,04	-	-	-	0,018	0,005
Цефалексин	0,025	-	0,025	-	-	0,750	-
Цефалон	-	-	-	-	-	0,003	-
Цефалоний	0,04	-	0,003	-	-	-	-
Цефалониум	0,04	0,007	-	-	-	0,003	0,004
Цефаперазон	0,01	0,005	0,005	-	-	0,003	0,005
Цефапирин	0,011	0,008	0,004	-	-	0,006	0,008
Цефацетрил	0,05	-	-	-	-	0,03	-
Цефкуином	0,02	0,02	-	-	-	0,02	0,02
Цефоксазол	0,05	-	0,075	-	-	-	-
Цефотаксим	0,01	-	0,004	-	-	-	-
Цефрадин	0,03	-	0,025	-	-	-	-
Цефтиофур	0,011	0,075	0,004	-	-	0,01	0,05
Цефуроксим	0,01	-	0,004	-	-	-	-
<*> 0,003 мкг активного вещества равно 0,005 Ед активности.

(обязательное)

В АНАЛИЗИРУЕМОМ МОЛОКЕ И МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТАХ

А.1. Примеры результатов определения наличия антибиотиков в анализируемом молоке и молочных продуктах с использованием тест-набора № 1 и тест-набора № 4 приведены на рисунке А.1.

                1                2               3

<pre class="legal-pre">               ┌─────────┐      ┌─────────┐     ┌─────────┐
               │ ┌──┐    │      │ ┌──┐    │     │ ┌──┐    │
               │ │//│    └─┐    │ │  │    └─┐   │ │//│    └─┐
               │ └──┘      │    │ └──┘      │   │ └──┘      │
               │ ┌──┐      │    │ ┌──┐      │   │ ┌──┐      │
               │ │  │    ┌─┘    │ │//│    ┌─┘   │ │//│    ┌─┘
               │ └──┘    │      │ └──┘    │     │ └──┘    │
               └─────────┘      └─────────┘     └─────────┘</pre>

1 — антибиотики присутствуют; 2, 3 — антибиотики отсутствуют

Рисунок А.1

А.2. Примеры результатов определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке и молочных продуктах с использованием тест-набора № 2 приведены на рисунке А.2 (здесь и далее рисунки не приводятся).

А.3. Примеры результатов определения наличия антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке и молочных продуктах с использованием тест-набора № 5 приведены на рисунке А.3.

А.4. Примеры результатов определения наличия антибиотиков в анализируемом молоке и молочных продуктах с использованием тест-набора № 6 приведены на рисунке А.4.

А.5. Примеры результатов определения наличия антибиотиков в анализируемом молоке и молочных продуктах с использованием тест-набора № 7 приведены на рисунке А.5.

БИБЛИОГРАФИЯ

[1] СП 1.2.731-99. Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности и гельминтами.

---