ГОСТ Р 53400-2009 (ИСО 7937:2004). Национальный стандарт Российской Федерации. Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Метод подсчета колоний Clostridium perfringens

(утв. и введен в действие Приказом Ростехрегулирования от 24.09.2009 № 423-ст)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["ГОСТ Р 53400-2009"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-r-53400-2009" "ГОСТ Р 53400-2009. Национальный стандарт Российской Федерации. Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Метод подсчета колоний Clostridium perfringens (утв. и введен "
  n1["ГОСТ 31744-2012"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/gost-31744-2012" "ГОСТ 31744-2012. Межгосударственный стандарт. Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Метод подсчета колоний Clostridium perfringens (введен в действие Приказом Росс"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ

МЕТОД ПОДСЧЕТА КОЛОНИЙ CLOSTRIDIUM PERFRINGENS

Method microbiology of food and animal feeding stuffs. Method of Clostridium perfringens colonies count

ГОСТ Р 53400-2009

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения».

Сведения о стандарте

1. Подготовлен ОАО «Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации» (ОАО «ВНИИС») и Государственным учреждением «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Российской академии медицинских наук (ГУ «НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» РАМН) на основе аутентичного перевода стандарта, указанного в пункте 4.

2. Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность».

3. Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 24 сентября 2009 г. № 423-ст.

4. Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ИСО 7937:2004 «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод подсчета Clostridium perfringens. Метод подсчета колоний» (ISO 7937:2004 «Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the enumeration of Clostridium perfringens — Colony-count technique»). При этом в него не включены предисловие, отдельные слова и фразы примененного международного стандарта, которые нецелесообразно применять в национальной стандартизации. Дополнительные слова, фразы, абзацы, включенные в текст стандарта для учета потребностей национальной экономики Российской Федерации и особенностей российской национальной стандартизации, выделены курсивом.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ Р 1.5-2004 (пункт 3.5).

Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов национальным стандартам Российской Федерации, использованным в настоящем стандарте в качестве нормативных ссылок, приведены в Приложении B.

5. Введен впервые.

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежегодно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет.

1. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

Настоящий стандарт устанавливает метод подсчета жизнеспособных микроорганизмов Clostridium perfringens.

Настоящий стандарт применяется при исследовании продуктов, предназначенных для употребления в пищу человеком, и кормов для животных, а также образцов окружающей среды в местах производства и оборота пищевых продуктов.

2. НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 7218-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие правила микробиологических исследований

ГОСТ Р ИСО 11133-1-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории

ГОСТ Р ИСО 11133-2-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред

ГОСТ Р 51426-99 (ИСО 6887-83) Микробиология. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Общее руководство по приготовлению разведений для микробиологических исследований

ГОСТ Р 51448-99 (ИСО 3100-2-88) Мясо и мясные продукты. Методы подготовки проб для микробиологических исследований

ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов

Примечание. При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3. ТЕРМИНЫ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ

В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями:

3.1. Clostridium perfringens (C. perfringens): бактерии, которые образуют типичные колонии (черный осадок, вызванный разложением сульфита до сульфида, который окрашивает колонии в черный цвет) в определенных селективных средах, и которые дают положительные реакции подтверждения, если испытания проводят в соответствии с одним из двух методов, указанных в настоящем стандарте.

3.2. Подсчет колоний C. perfringens: определение количества способных к росту и подтвержденных бактерий Clostridium perfringens в см3 или г образца при условии проведения испытания в соответствии с методом, указанным в настоящем стандарте.

4. СУЩНОСТЬ МЕТОДА

4.1. Посев в чашки Петри определенного количества испытуемой пробы, если исходный продукт жидкий, или установленного количества исходной суспензии.

Следующий посев в чашки Петри проводят в аналогичных условиях с использованием десятикратного разведения испытуемой пробы или исходной суспензии.

Добавляют селективную среду (метод пластинчатого посева) и заливают посев сверху слоем той же среды.

4.2 Анаэробная инкубация чашек при 37 °C в течение (20 +/- 2) ч.

4.3 Подсчет типичных колоний.

4.4. Подтверждение ряда типичных колоний и определение количества колоний C. perfringens в г или см3 продукта.

5. РАЗВЕДЕНИЕ, ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ И РЕАКТИВЫ

В лабораторной практике используют ГОСТ Р ИСО 7218, ГОСТ Р 51448, ГОСТ Р ИСО 11133-1 и ГОСТ Р ИСО 11133-2 для приготовления, производства, проверки и применения питательных сред.

5.1 Разведения

В общем случае разведения по ГОСТ Р ИСО 7218.

5.2 Сульфит-циклосериновый агар (SC)

5.2.1 Состав в соответствии с таблицей 1.

5.2.1.1 Приготовление среды

Растворяют компоненты среды в горячей воде и доводят до кипения. Устанавливают уровень pH, чтобы после стерилизации он соответствовал (7,6 +/- 0,2) при 25 °C.

Разливают среду во флаконы или бутылки соответствующей емкости.

Стерилизуют в автоклаве (см. 6.1) 15 мин при 121 °C.

Хранят в холодильнике при температуре (5 +/- 3) °C не более двух недель после приготовления.

5.2.2 Раствор D-циклосерина

5.2.2.1 Состав в соответствии с таблицей 2.

5.2.2.2 Приготовление среды

Растворяют D-циклосерин в воде и стерилизуют.

Среду хранят в холодильнике при температуре (3 +/- 2) °C не более четырех недель после приготовления.

5.2.3 Полная среда

Непосредственно перед посевом чашечным методом (см. 9.2) добавляют 1 см3 раствора D-циклосерина (см. 5.2.2) к каждой порции стерильной расплавленной основы среды объемом 100 см3 (см. 5.3.1), охлажденной до 44 °C — 47 °C.

5.2.4 Проверка качества среды (SC)

Определение селективности и качества среды проводят по ГОСТ Р ИСО 11133-1. Для проверки характеристик применяют ГОСТ Р ИСО 11133-2 (таблица B.1).

5.3 Жидкая тиогликолатная среда

5.3.1 Состав в соответствии с таблицей 3.

5.3.2. Растворяют компоненты в воде, при необходимости раствор доводят до кипения. Устанавливают уровень pH, чтобы после стерилизации он соответствовал (7,3 +/- 0,2) при 25 °C.

Среду разливают по 10 см3 в пробирки 16 x 160 мм и стерилизуют в автоклаве 15 мин при 121 °C.

Перед использованием среда должна быть деаэрирована.

5.3.3 Проверка качества тиогликолатной среды

Определение селективности и качества среды проводят по ГОСТ Р ИСО 11133-1. Для проверки характеристик применяют ГОСТ Р ИСО 11133-2 (см. таблицу B.4).

5.4 Лакто-сульфитная среда (LS) (необязательно)

5.4.1 Основа среды

5.4.1.1 Состав в соответствии с таблицей 4.

5.4.1.2 Приготовление

Растворяют компоненты в воде, при необходимости раствор доводят до кипения. Устанавливают уровень pH, чтобы после стерилизации он соответствовал (7,1 +/- 0,2) при 25 °C.

Среду разливают по 8 см3 в пробирки с обратными трубками Дархема и стерилизуют в автоклаве 15 мин при 121 °C.

Среду хранят в холодильнике при температуре (3 +/- 2) °C не более четырех недель после приготовления.

5.4.2 Раствор безводного метабисульфита натрия

5.4.2.1 Состав в соответствии с таблицей 5.

5.4.2.2 Приготовление

Растворяют двунатрий дисульфит в воде и стерилизуют.

Раствор используют в течение дня.

5.4.3 Раствор цитрата железа (III) — аммония

5.4.3.1 Состав в соответствии с таблицей 6.

5.4.3.2 Приготовление раствора

Растворяют цитрат железа (III) — аммония в воде и стерилизуют раствор фильтрованием.

Раствор используют в течение дня.

5.4.4 Полная среда

Перед составлением полной среды ее деаэрируют нагреванием и последующим быстрым охлаждением. В случае хранения среды во флаконах с завинчивающимися крышками крышки ослабляют перед нагреванием и затем завинчивают перед охлаждением.

Затем к каждым 8 см3 основы среды (см. 5.4.1) добавляют 0,5 см3 раствора цитрата железа (III) — аммония (см. 5.4.3) и 0,5 см3 раствора двунатрия дисульфита (см. 5.4.2).

Среда используется в течение дня.

5.5 Подвижная нитратная среда (необязательно)

5.5.1 Состав в соответствии с таблицей 7.

5.5.2 Приготовление

Растворяют компоненты в воде, при необходимости раствор доводят до кипения. Устанавливают уровень pH, чтобы после стерилизации он соответствовал (7,3 +/- 0,2) при 25 °C.

Среду разливают в пробирки с выросшей разводкой-культурой по 10 см3 и стерилизуют в автоклаве 15 мин при 121 °C. Если среду не использовали в день приготовления, то ее хранят в холодильнике при температуре (5 +/- 3) °C не более четырех недель после приготовления.

Непосредственно перед использованием подогревают в кипящей воде или на пару в течение 15 мин и затем быстро охлаждают до температуры разведения.

5.6 Нитратный реактив обнаружения (необязательно)

5.6.1 Раствор 5-амино-2-нафталинсульфокислоты (5-2-ANSA)

Растворяют 0,1 г 5-2-ANSA в 100 см3 15%-ного (объемная доля) раствора уксусной кислоты. Фильтруют через бумажный фильтр.

Реактив хранят в хорошо закупоренном флаконе (предпочтительно с капельницей шаровидной формы) в холодильнике при температуре (5 +/- 3) °C.

5.6.2 Раствор сульфаниловой кислоты

Растворяют 0,4 г сульфаниловой кислоты в 100 см3 15%-ного (объемная доля) раствора уксусной кислоты. Фильтруют через бумажный фильтр.

Реактив хранят в хорошо закупоренном флаконе (предпочтительно с капельницей шаровидной формы) в холодильнике при температуре (5 +/- 3) °C.

5.6.3 Приготовление полного реактива

Смешивают равные количества двух растворов (см. 5.6.1 и 5.6.2) непосредственно перед использованием. Неиспользованный реактив уничтожают.

5.7 Цинковая пыль (необязательно)

5.8 Лактозо-желатиновая среда

5.8.1 Состав в соответствии с таблицей 8.

5.8.2 Приготовление среды

Растворяют компоненты в воде (кроме лактозы и фенола красного). Устанавливают уровень pH, чтобы после стерилизации он соответствовал (7,5 +/- 0,2) при 25 °C.

Добавляют лактозу и фенол красный. Среду разливают в пробирки по 10 см3 и стерилизуют в автоклаве 15 мин при 121 °C. Если среду не использовали в день приготовления, то ее хранят в холодильнике при температуре (5 +/- 3) °C не более трех недель после приготовления.

Непосредственно перед использованием подогревают в кипящей воде или на пару в течение 15 мин и затем быстро охлаждают до температуры разведения.

6. ОБОРУДОВАНИЕ И ЛАБОРАТОРНАЯ ПОСУДА

Примечание. При одинаковой спецификации одноразовое оборудование предпочтительнее многоразового.

Используют обычное лабораторное оборудование, а также следующее:

6.1. Стерилизаторы сухожаровые (печи) или паровые (автоклавы) по ГОСТ Р ИСО 7218.

6.2 Термостат, поддерживающий температуру (37 +/- 1) °C.

6.3. Анаэростат, обеспечивающий культивирование анаэробных микроорганизмов.

6.4. pH-метр с разрешением 0,01 единиц pH и точностью +/- 0,1 pH при 25 °C.

6.5. Бактериологические петли из платино-иридиевого или никель-хромового сплава, около 3 мм в диаметре, и иглы из тех же материалов для пересева в агаровые косяки.

6.6. Приборы для фильтрования, предназначенные для стерилизации растворов.

6.7 Пробирки размером 16 x 160 мм с перевернутыми трубками Дархема, длиной 35 мм и диаметром 7 мм.

6.8 Пипетки с полным сливом, номинальным объемом от 1 до 10 см3.

6.9 Чашки Петри, из стекла или пластмассы, диаметром 90 — 100 мм.

6.10 Водяная баня, поддерживающая температуру от 44 °C до 47 °C.

6.11. Резиновые колбы, используемые с градуированными пипетками для разбрызгивания компонентов нитратного реактива обнаружения (при необходимости).

7. ОТБОР ПРОБ

В лабораторию направляют представительный образец. Образец не должен быть поврежден или изменен в процессе транспортирования или хранения.

Отбор проб не является частью метода, приведенного в настоящем стандарте. Рекомендуется достижение соглашения заинтересованных сторон касательно отбора проб конкретного продукта при отсутствии специального стандарта для данного продукта.

8. ПОДГОТОВКА ПРОБ ДЛЯ ИСПЫТАНИЯ

Подготовку проб проводят в соответствии со специальным стандартом для данного продукта. Рекомендуется достижение соглашения заинтересованных сторон касательно подготовки проб конкретного продукта при отсутствии специального стандарта на подготовку проб данного продукта.

9. ПРОВЕДЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

9.1 Метод приготовления исходной суспензии и последующие разведения

Приготовление пробы и первичного разведения в зависимости от вида продукта согласно соответствующей части ГОСТ 26669.

9.2 Посев и инкубирование (чашечный метод)

С помощью стерильной пипетки (см. 6.8) переносят в двух повторностях 1 см3 исходной суспензии или испытуемой пробы (если продукт жидкий) в центр пустых чашек Петри (см. 6.9).

Наливают в обе чашки от 10 до 15 см3 SC агара (см. 5.2.3), подогретого в водяной бане (см. 6.10) при температуре от 44 °C до 47 °C, и хорошо перемешивают с испытуемой пробой, осторожно вращая чашки. После затвердевания среды добавляют сверху 10 см3 дополнительно SC агара.

Оставляют чашки для затвердевания агара. Застывшие чашки агара с исходной пробой помещают в анаэростат или другие приборы, обеспечивающие культивирование анаэробных микроорганизмов, и инкубируют в анаэробных условиях в течение (20 +/- 2) ч при температуре 37 °C.

Более продолжительное инкубирование может привести к излишнему почернению среды.

Повторяют процедуру с последующими десятикратными разведениями (см. 9.1).

9.3 Подсчет и выделение колоний

После установленного периода инкубации (см. 9.2) выделяют все чашки Петри, содержащие менее 150 колоний. Из них выделяют чашки с двумя последовательными разведениями. Подсчитывают на каждой чашке характерные колонии, предположительно относящиеся к C. perfringens.

Выделяют из каждой чашки пять типичных колоний и подтверждают их, используя одну из методик, описанных в 9.4.2 или 9.4.3.

9.4 Биохимическое подтверждение

9.4.1 Общие положения

Для целей подтверждения может быть использован набор сред для биохимических испытаний в соответствии с ГОСТ Р ИСО 7218.

9.4.2 Методика подтверждения с использованием среды LS

Примечание. Реакция, протекающая в лактозо-сульфитной среде (см. 5.4) при 46 °C, очень специфична для C. perfringens и C. absonum. Поэтому необязательно добиваться дополнительной очистки черных колоний, выделенных с агаровой среды, перед их посевом на тиогликолатную и затем на лактозо-сульфитную среду.

9.4.2.1 Пересев и инкубирование

Каждую изолированную колонию (см. 9.3) пересевают на жидкую тиогликолатную среду (см. 5.3). Инкубируют в анаэробных условиях в течение 18 — 24 ч при температуре 37 °C.

9.4.2.2 Обработка результатов

Исследуют пробирку с LS средой, учитывая образование газа и наличие черного окрашивания (осадок сульфита железа). Трубки Дархема, заполненные более чем на одну четвертую часть газом, и пробирки, содержащие черный осадок, оценивают как положительные.

В сомнительных случаях, когда трубка Дархема в пробирке с почерневшей средой заполнена газом менее чем на четверть, без промедления, с помощью стерильной пипетки переносят пять капель культуры с LS средой (см. 9.4.2.1) в другую пробирку с той же средой. Инкубируют на водяной бане (см. 6.10) при температуре от 46 °C в течение 18 — 24 ч. Оценивают эти пробирки, как описано выше.

Бактерии, которые образуют типичные колонии на LS среде и дают положительную реакцию подтверждения на LS среде, относят к C. perfringens. Во всех прочих случаях пробирки с посевами рассматривают как отрицательные.

9.4.3 Методика подтверждения с использованием подвижной нитратной среды и лактозо-желатиновой среды

9.4.3.1 Общие положения

Для данной методики подтверждения требуются хорошо изолированные типичные колонии. Если их нет (т.е. они чрезмерно разрослись на поверхности чашек, и нет возможности выбрать хорошо изолированные типичные колонии), засевают пять типичных колоний на предварительно деаэрированные жидкие тиогликолатные среды (см. 5.3).

Инкубируют в анаэробных условиях при температуре 37 °C в течение 18 — 24 ч. Штрихуют колонии на чашках с основным агаром SC (5.2.1.2) и добавляют сверху 10 см3 основного агара SC.

Дают застыть агару и инкубируют в анаэробных условиях при температуре 37 °C в течение 18 — 24 ч. Потом выбирают из каждой чашки одну типичную и хорошо выделенную колонию.

При необходимости повторяют штрихование и посев на чашки Петри с основным агаром SC до получения хорошо изолированных типичных колоний.

Подтверждают каждую колонию, как описано в 9.4.3.2, 9.4.3.3 и 9.4.3.4.

9.4.3.2 Инокуляция и исследование подвижной нитратной среды

Инокулируют уколом каждую выделенную колонию (см. 9.3) в только что деаэрированную подвижную нитратную среду (см. 5.5).

Инкубируют в анаэробных условиях при 3 °C в течение 24 ч. Исследуют пробирку с подвижной нитратной средой на тип культуры по линии укола. Подвижность очевидна по диффузному распределению бактерий в среду от линии укола.

Проводят испытание на присутствие нитрита, добавляя с помощью градуированной пипетки (см. 6.8) и резиновой колбы (см. 6.11) от 0,2 до 0,5 см3 нитритного реактива обнаружения (см. 5.6) в каждую пробирку с подвижной нитратной средой.

Примечание. В целях безопасности проводят это испытание в вытяжном шкафу.

Образование красного цвета подтверждает восстановление нитрата до нитрита. Если красный цвет не появляется в течение 15 мин, добавляют небольшое количество цинковой пыли (см. 5.7) и дают отстояться в течение 10 мин. Если красный цвет не появился после добавления цинковой пыли, восстановления нитрата не произошло.

9.4.3.3 Инокуляция и исследование лактозо-желатиновой среды

Инокулируют каждую выделенную колонию (см. 9.3) в только что деаэрированную лактозо-желатиновую среду (см. 5.8). Инкубируют в анаэробных условиях при 37 °C в течение 24 ч.

Исследуют пробирку с лактозо-желатиновой средой на присутствие газа и желтого цвета (благодаря образованию кислоты), указывающих на ферментацию лактозы. Охлаждают пробирки при 5 °C в течение 1 ч и проверяют на сжижение желатина. Если среда застыла, повторно инкубируют в течение еще 24 ч и снова проверяют на сжижение желатина.

9.4.3.4 Интерпретация

Бактерии, которые образуют черные колонии в среде SC, неподвижны, обычно восстанавливают нитрат до нитрита, вырабатывают кислоту и газ из лактозы и сжижают желатин за 48 ч, относятся к бактериям C. perfringens. Культуры, которые дают слабую реакцию на нитрит (т.е. розового цвета), должны быть ликвидированы, так как бактерии C. perfringens дают сильную и немедленную реакцию.

10. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

10.1 Метод расчета

Обработка результатов — по ГОСТ Р ИСО 7218.

10.2 Сходимость

10.2.1 Межлабораторные испытания

Данные о сходимости этого метода, описанные в настоящем стандарте, базируются на результатах межлабораторного испытания [1]. Детали этого межлабораторного испытания приведены в Приложении A. Предельные значения повторяемости и воспроизводимости определялись на трех видах продуктов, загрязненных на разных уровнях, и на контрольных материалах.

Значения, полученные на основе этого межлабораторного испытания, не могут применяться к пределам концентраций и матрицам, отличным от приведенных здесь.

10.2.2 Повторяемость

Абсолютная разность между двумя отдельными ( log_{10} -преобразованными) результатами испытаний (число C. perfringens на г или см3) или отношение большего к меньшему из двух результатов по нормальной шкале, полученных при использовании одного и того же метода, на идентичном испытуемом материале, одним и тем же оператором, использующим одно и то же оборудование, в течение короткого допустимого промежутка времени, будет превышать предел повторяемости (r) не более чем в 5% случаев.

В качестве общего показателя повторяемости (r) при испытании проб пищевых продуктов допускается использовать следующие значения. Эти значения r являются общими для всех матриц, рассматриваемых в процессе межлабораторного испытания:

• r = 0,21 для подтверждения LS или 0,25 для подтверждения MN/LG (выраженные как разница между log_{10} -преобразованными результатами испытания) или
• r = 1,67 для подтверждения LS или 1,8 для подтверждения MN/LG (выраженные как отношение большего к меньшему из двух результатов испытания).

Для контрольных материалов (см. таблицу A.4) могут применяться следующие значения:

• r = 0,13 для подтверждения LS или 0,12 для подтверждения MN/LG (выраженные как разница между log_{10} -преобразованными результатами испытания) или
• r = 1,3 для подтверждения LS или 1,8 для подтверждения MN/LG (выраженные как отношение большего к меньшему из двух результатов испытания).

Пример.

Получен первый результат 10000 или 1,0 x 10^{4} предполагаемых бактерий C. perfringens на грамм продукта. В условиях повторяемости отношение большего результата к меньшему не должно быть свыше 1,9. Следовательно, второй результат будет между 5263 (= 10000/1,9) и 19000 (10000 x 1,9) предполагаемых бактерий C. perfringens на грамм.

10.2.3 Воспроизводимость

Абсолютная разность между двумя отдельными ( log_{10} -преобразованными) результатами испытаний (число C. perfringens на г или см3) или абсолютное соотношение между результатами двух испытаний по нормальной шкале, полученными при использовании одного и того же метода, на идентичном испытуемом материале в разных лабораториях, разными операторами, использующими различное оборудование, будут превышать предел воспроизводимости (R) не более чем в 5% случаев.

В качестве показателя предела воспроизводимости (R) при испытании различных видов пищевых продуктов и контрольных материалов могут использоваться значения из таблицы 9. Эти значения r являются средними значениями, полученными в результате межлабораторного испытания для различных уровней <1>.

<1> В случае данного межлабораторного испытания значения воспроизводимости, которые должны быть выражены как общее значение, применимое ко всем пробам продуктов, очень сильно отличаются между пробами.

Примеры.

1. Во-первых, лаборатория нашла результат испытания, равный 10000 или 1,0 x 10^{4} C. perfringens на грамм сыра. В условиях воспроизводимости отношение большего результата к меньшему не должно быть свыше 2,1. Следовательно, результат второй лаборатории должен быть между 4761 (= 10000/2,1) и 21000 (10000 x 2,1) предполагаемых бактерий C. perfringens на грамм.

2. Во-вторых, лаборатория хочет знать максимальный уровень, который она может найти и который соответствует установленному уровню (например предел в 100000 или log_{10}5 ). Для этого значение R (0,31 x 0,59) является разностью между log_{10} -трансформированными результатами испытаний, а значение 1,52 (10^{0,18}) представляет соотношение между результатами испытаний. Следовательно, результаты до log_{10}5,18(log_{10}5 + log_{10}0,18) или 152000 (100000 x 1,52) не указывают несоответствие пределу. Коэффициент 0,59 отражает тот факт, что испытание с односторонним 95%-ным интервалом проводят для того, чтобы узнать, превышен ли предел. Коэффициент 0,59 вычислен по формуле

11. ПРОТОКОЛ ИСПЫТАНИЯ

В протоколе испытания указывают:

• всю информацию, необходимую для полной идентификации образца;
• метод отбора пробы, если известен;
• использованный метод испытания со ссылкой на настоящий стандарт;
• все детали исследования, не оговариваемые в настоящем стандарте или рассматриваемые как необязательные, а также детали иного свойства, могущие оказать влияние на результаты исследований;
• полученные результаты.

Межлабораторное совместное испытание [1], в котором принимали участие 17 лабораторий из 15 стран, проводилось на пробах сыра, мяса, сухого корма для животных и контрольном материале. Каждая проба пищевых продуктов/кормов для животных была испытана на трех различных уровнях загрязнения бактериями Clostridium perfringens.

В соответствии с [2] в процессе межлабораторного испытания были получены следующие параметры. Испытание было организовано Голландским национальным институтом общественного здоровья (RIVM) в январе 2000 г. и дало данные по сходимости, приведенные в таблицах A.1 - A.4.

Число проб                                       2          2         2

Число лабораторий, оставшихся после             13         13        13

исключения выбросов

Число выбросов                                   0          0         0

Число принятых проб                             26         26        26

Среднее значение \overline{x} (log cfu/g) a a a

10 2,5/2,5 3,5/3,5 4,5/4,5

Среднеквадратическое отклонение a a a

повторяемости S  (log  cfu/g)              0,11/0,11  0,06/0,07  0,08/0,10
               R     10

Среднее относительное отклонение a a a

повторяемости, % 4,37/4,59 1,63/1,97 1,85/2,31

Предел повторяемости r: a a a

• как разность по шкале log (log cfu/g) 0,30/0,32 0,16/0,19 0,23/0,29 10 10
• как соотношение по нормальной шкале a a a

2,0/2,1 1,5/1,6 1,7/1,9

Среднеквадратическое отклонение a a a

воспроизводимости S  (log  cfu/g)          0,13/0,13  0,08/0,15  0,11/0,14
                   r     10

Среднее относительное отклонение a a a

воспроизводимости, % 5,21/5,11 2,32/4,38 2,50/3,11

Предел повторяемости R: a a a

• как разность по шкале log (log cfu/g) 0,36/0,35 0,23/0,43 0,31/0,39 10 10
• как соотношение по нормальной шкале a a a

2,3/2,2 1,7/2,7 2,1/2,4

a

  Первый результат был получен с использованием  лактозо-желатиновой среды,
а  второй - с  использованием  подвижной  нитратной  и  лактозо-желатиновой

среды.

Число проб                                       2          2         2

Число лабораторий, оставшихся после             13         13        13

исключения выбросов

Число выбросов                                   0          0         0

Число принятых проб                             26         26        26

Среднее значение \overline{x} (log cfu/g) a a a

10 2,7/2,7 3,6/3,6 4,5/4,5

Среднеквадратическое отклонение a a a

повторяемости S  (log  cfu/g)              0,06/0,11  0,06/0,10  0,11/0,09
               R     10

Среднее относительное отклонение a a a

повторяемости, % 2,32/4,22 1,67/2,70 2,33/2,01

Предел повторяемости r: a a a

• как разность по шкале log (log cfu/g) 0,18/0,32 0,17/0,27 0,29/0,25 10 10
• как соотношение по нормальной шкале a a a

1,5/2,1 1,5/1,9 2,0/1,8

Среднеквадратическое отклонение a a a

воспроизводимости S  (log  cfu/g)          0,14/0,18  0,18/0,18  0,18/0,22
                   r     10

Среднее относительное отклонение a a a

воспроизводимости, % 5,01/6,54 5,07/5,05 3,90/4,76

Предел повторяемости R: a a a

• как разность по шкале log (log cfu/g) 0,38/0,49 0,51/0,50 0,49/0,60 10 10
• как соотношение по нормальной шкале a a a

2,4/3,1 3,2/3,2 3,1/4,0

a

  Первый результат был получен  с использованием  лактозо-сульфитной среды,
а  второй - с  использованием  подвижной  нитратной  и  лактозо-желатиновой

среды.

Число проб                                       2          2         2

Число лабораторий, оставшихся после             13         13        13

исключения выбросов

Число выбросов                                   0          0         0

Число принятых проб                             25         25        25

Среднее значение \overline{x} (log cfu/g) a a a

10 2,6/2,6 3,8/3,9 4,8/4,9

Среднеквадратическое отклонение a a a

повторяемости S  (log  cfu/g)              0,07/0,10  0,08/0,08  0,06/0,04
               R     10

Среднее относительное отклонение a a a

повторяемости, % 2,85/3,79 2,09/1,93 1,22/0,75

Предел повторяемости r: a a a

• как разность по шкале log (log cfu/g) 0,21/0,28 0,22/0,21 0,16/0,10 10 10
• как соотношение по нормальной шкале a a a

1,6/1,9 1,7/1,6 1,5/1,3

Среднеквадратическое отклонение a a a

воспроизводимости S  (log  cfu/g)          0,32/0,32  0,25/0,24  0,17/0,17
                   R     10

Среднее относительное отклонение a a a

воспроизводимости, % 12,21/12,03 6,53/6,18 3,50/3,49

Предел повторяемости R: a a a

• как разность по шкале log (log cfu/g) 0,88/0,88 0,69/0,67 0,47/0,47 10 10
• как соотношение по нормальной шкале a a a

7,6/7,6 4,9/4,7 3,03/3,0

a

  Первый результат был получен  с использованием  лактозо-сульфитной среды,
а  второй - с  использованием  подвижной  нитратной  и  лактозо-желатиновой

среды.

Число проб                                                 2

Число лабораторий, оставшихся после                       13

исключения выбросов

Число выбросов                                             0

Число принятых проб                                       26

Среднее значение \overline{x} (log cfu/capsule) a

10 3,7/3,7

Среднеквадратическое отклонение a

повторяемости S  (log  cfu/capsule)                   0,05/0,5
               R     10

Среднее относительное отклонение a

повторяемости, % 1,24/1,21

Предел повторяемости r: a

• как разность по шкале log 0,13/0,12 10 (log cfu/capsule) 10
• как соотношение по нормальной шкале a

1,3/1,3

Среднеквадратическое отклонение a

воспроизводимости S  (log  cfu/capsule)               0,09/0,09
                   R     10

Среднее относительное отклонение a

воспроизводимости, % 2,51/2,39

Предел повторяемости R: a

• как разность по шкале log 0,26/0,25 10 (log cfu/capsule) 10
• как соотношение по нормальной шкале a

1,8/1,6

a

  Первый результат был получен  с использованием  лактозо-сульфитной среды,
а  второй - с  использованием  подвижной  нитратной  и  лактозо-желатиновой

среды.

• Заменен на ИСО 6887-2:2003.

БИБЛИОГРАФИЯ

1. Schulten S.M., Benschop E., Nagelkerke N.J.D. и Mooijman K.A.

   Validation  of  microbiological  methods:  Enumeration  of  Clostridium
   perfringens   according  to  ISO  7937 (второе  издание,  1997).  Отчет
   286555002,  Национальный институт  общественного здоровья и  окружающей

среды, Bilthoven, Нидерланды, 2001

2. ИСО 16140:2003 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Протокол проверки достоверности альтернативных методов

------------------------------------------------------------------