--- title: "\"ГОСТ Р 53212-2008. Национальный стандарт Российской Федерации. Изделия кондитерские. Методы определения содержания сухого обезжиренного остатка молока в шоколадных изделиях с молоком\"" number: "ГОСТ Р 53212-2008" issuer: "Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии" status: утратил силу canonical: "https://bukva.ai/docs/gost-r-53212-2008" --- ## "ГОСТ Р 53212-2008. Национальный стандарт Российской Федерации. Изделия кондитерские. Методы определения содержания сухого обезжиренного остатка молока в шоколадных изделиях с молоком" # "ГОСТ Р 53212-2008. Национальный стандарт Российской Федерации. Изделия кондитерские. Методы определения содержания сухого обезжиренного остатка молока в шоколадных изделиях с молоком" (утв. и введен в действие Приказом Ростехрегулирования от 25.12.2008 N 704-ст) > [!WARNING] > Документ утратил силу с 15 февраля 2015 года в связи с изданием Приказа Росстандарта от 29.11.2012 N 1508-ст. > Взамен введен в действие [ГОСТ 31681-2012](https://bukva.ai/docs/gost-31681-2012). > Документ утратил силу с 15 февраля 2015 года в связи с изданием Приказа Росстандарта от 29.11.2012 N 1508-ст. Взамен введен в действие [ГОСТ 31681-2012](https://bukva.ai/docs/gost-31681-2012). > Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза "О безопасности пищевой продукции" (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Комиссии Таможенного союза от 09.12.2011 N 880). > Документ [введен](#p100010) в действие с 1 января 2010 года. > [!NOTE] > ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ ```mermaid flowchart LR n0["ГОСТ Р 53212-2008"]:::rst click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-r-53212-2008" "ГОСТ Р 53212-2008. Национальный стандарт Российской Федерации. Изделия кондитерские. Методы определения содержания сухого обезжиренного остатка молока в шоколадных изделиях... (утв" n1["ГОСТ 31681-2012"]:::doc click n1 "https://bukva.ai/docs/gost-31681-2012" "ГОСТ 31681-2012. Межгосударственный стандарт. Изделия кондитерские. Методы определения содержания сухого обезжиренного остатка молока в шоколадных изделиях с молоком (введен в дейс" n0 --> n1 classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000; classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000; classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000; ```
Утвержден и введен в действие
Приказом Федерального
агентства по техническому
регулированию и метрологии
от 25 декабря 2008 г. N 704-ст **НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ** **ИЗДЕЛИЯ КОНДИТЕРСКИЕ** **МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ СУХОГО ОБЕЗЖИРЕННОГО** **ОСТАТКА МОЛОКА В ШОКОЛАДНЫХ ИЗДЕЛИЯХ С МОЛОКОМ** Confectionery. Methods for determination of dry fat-free solids of milk content in chocolate products with milk **ГОСТ Р 53212-2008**
Группа Н49 ОКС 67.190 ОКСТУ 9109 Дата введения
1 января 2010 года ### Предисловие Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения". ### Сведения о стандарте 1. Разработан Государственным научным учреждением "Научно-исследовательский институт кондитерской промышленности" Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ НИИ КП Россельхозакадемии). 2. Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 149 "Кондитерские изделия". 3. Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 25 декабря 2008 г. N 704-ст. 4. В настоящем стандарте учтены основные нормативные положения следующих международных стандартов: AOAC Official Method 984.15 Lactose in Milk, 939.02 Protein (Milk) in Milk Chocolate. 5. Введен впервые. Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет. ### 1. Область применения Настоящий стандарт распространяется на кондитерские изделия: шоколад и отделяемую составную часть шоколада в шоколаде с начинкой и шоколадных изделиях (далее - шоколад) с добавлением молока и (или) продуктов его переработки и устанавливает следующие методы определения массовой доли сухого обезжиренного остатка молока: - окисление лактозы йодом в диапазоне измерений от 0% до 50%; - ферментативный метод в диапазоне измерений от 0% до 50%; - метод Кьельдаля в диапазоне измерений от 0% до 30%. ### 2. Нормативные ссылки В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты: ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 908-2004 Кислота лимонная моногидрат пищевая. Технические условия ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия ГОСТ 3769-78 Реактивы. Аммоний сернокислый. Технические условия [ГОСТ 4145-74](https://bukva.ai/docs/gost-4145-74) Реактивы. Калий сернокислый. Технические условия [ГОСТ 4159-79](https://bukva.ai/docs/gost-4159-79) Реактивы. Йод. Технические условия [ГОСТ 4165-78](https://bukva.ai/docs/gost-4165-78) Реактивы. Медь (II) сернокислая 5-водная. Технические условия [ГОСТ 4174-77](https://bukva.ai/docs/gost-4174-77) Реактивы. Цинк сернокислый 7-водный. Технические условия ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия [ГОСТ 4206-75](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-4206-75) Реактивы. Калий железосинеродистый. Технические условия ГОСТ 4232-74 Реактивы. Калий йодистый. Технические условия ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия [ГОСТ 5839-77](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-5839-77) Реактивы. Натрий щавелевокислый. Технические условия [ГОСТ 5904-82](https://bukva.ai/docs/gost-5904-82) Изделия кондитерские. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия [ГОСТ 7699-78](https://bukva.ai/docs/standart-gost-7699-78) Крахмал картофельный. Технические условия ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия [ГОСТ 10298-79](https://bukva.ai/docs/standart-gost-10298-79) Селен технический. Технические условия ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия ГОСТ 17299-78 Спирт этиловый технический. Технические условия ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия [ГОСТ 19814-74](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-19814-74) Кислота уксусная синтетическая и регенерированная. Технические условия ГОСТ 21400-75 Стекло химико-лабораторное. Технические требования. Методы испытаний ГОСТ 23932-90 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Общие технические условия ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры [ГОСТ 27068-86](https://bukva.ai/docs/gost-27068-86) Реактивы. Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат) 5-водный. Технические условия ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования ГОСТ 31227-2004 Натрий лимоннокислый трехзамещенный 5,5-водный пищевой (цитрат натрия). Технические условия *Примечание.* При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку. ### 3. Условия проведения измерений При подготовке и проведении измерений должны быть соблюдены следующие условия: - температура окружающего воздуха ....... (18 +/- 5) °C; 4 5 - атмосферное давление .................. (9,33 x 10 - 1,07 x 10 ) Па; - влажность воздуха ..................... не более 75%; - напряжение в сети ..................... (220 +/- 10) В. ### 4. Требования безопасности При выполнении измерений необходимо соблюдать требования безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.018, электробезопасности по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на применяемые средства измерений и вспомогательное оборудование. ### 5. Требования к квалификации оператора К выполнению измерений и обработке результатов допускается специалист, имеющий опыт работы в химической лаборатории, освоивший методы измерений и прошедший инструктаж по технике безопасности при работе с вредными веществами и пожарной безопасности. ### 6. Отбор и подготовка проб Отбор и подготовка проб для проведения измерений - по [ГОСТ 5904](https://bukva.ai/docs/gost-5904-82). ### 7. Метод окисления лактозы #### 7.1. Сущность метода Сущность метода заключается в окислении лактозы, содержащейся в анализируемом шоколаде с добавлением молока и (или) продуктов его переработки, щелочным раствором йода. #### 7.2. Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы При определении массовой доли сухого обезжиренного остатка молока используют следующее оборудование, реактивы и материалы. Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более +/- 0,02 г. Термометр жидкостный с диапазоном измерений от 100 °C до 200 °C и ценой деления 1 °C по ГОСТ 28498. Колбы Кн-1-250-14/23 ТХС по ГОСТ 25336. Колбы 1-500-1 и 1-1000-1 по ГОСТ 1770. Стаканы В-1-50 ТХС по ГОСТ 25336. Цилиндр 1-10 по ГОСТ 1770. Воронки ВФ-1-100 ХС по ГОСТ 25336. Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026. Баня водяная, обеспечивающая поддержание температуры от 5 °C до 100 °C с погрешностью не более +/- 2 °C. Медь (II) сернокислая 5-водная, х.ч., по [ГОСТ 4165](https://bukva.ai/docs/gost-4165-78). Натрия гидроокись, х.ч., по ГОСТ 4328. Кислота соляная, х.ч., по ГОСТ 3118. Йод, ч., по [ГОСТ 4159](https://bukva.ai/docs/gost-4159-79). Калий йодистый, ч., по ГОСТ 4232. Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат) 5-водный, х.ч., по [ГОСТ 27068](https://bukva.ai/docs/gost-27068-86). Крахмал картофельный по [ГОСТ 7699](https://bukva.ai/docs/standart-gost-7699-78). Вода дистиллированная по ГОСТ 6709. #### 7.3. Приготовление растворов ##### 7.3.1 Раствор гидроокиси натрия c(NaOH) = 1 моль/дм3 В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 40 г гидроокиси натрия, добавляют 300 - 400 см3 дистиллированной воды и перемешивают. После полного растворения объем раствора доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. ##### 7.3.2 Раствор Фелинга 1 В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 69,28 г меди (II) сернокислой 5-водной и 4 см3 раствора гидроокиси натрия c(NaOH) = 1 моль/дм3. ##### 7.3.3 Раствор натрия серноватистокислого (натрия тиосульфат) 5-водного с молярной концентрацией 0,1 моль/дм3 В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 24,82 г натрия серноватистокислого (натрия тиосульфат) 5-водного, добавляют 300 - 400 см3 дистиллированной воды и перемешивают. После полного растворения объем раствора доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. ##### 7.3.4 Раствор соляной кислоты с молярной концентрацией c(HCl) = 0,5 моль/дм3 В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 38 см3 концентрированной соляной кислоты плотностью 1,198 г/см3. Объем раствора доводят до метки дистиллированной водой. ##### 7.3.5 Раствор йода с молярной концентрацией 0,1 моль/дм3 В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 200 г йодистого калия, добавляют 300 - 400 см3 дистиллированной воды и перемешивают. Затем в колбу добавляют 12,69 г йода. После полного растворения объем раствора доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. ##### 7.3.6 Раствор крахмала с массовой долей 1% 1 г крахмала картофельного растворяют в 2 - 3 см3 дистиллированной воды и полученный раствор вливают в 100 см3 кипящей дистиллированной воды, помешивая его палочкой. Кипятят 1 мин, после чего охлаждают. #### 7.4. Проведение измерений Навеску подготовленной пробы массой 10 г помещают в стакан вместимостью 50 см3, растворяют в дистиллированной воде, имеющей температуру 40 °C - 50 °C, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 500 см3 (общее количество дистиллированной воды в колбе должно быть около 200 см3) и приливают 10 см3 раствора Фелинга 1. Содержимое колбы хорошо перемешивают, выдерживают в течение 20 - 30 мин и фильтруют в колбу вместимостью 500 см3. Полученный фильтрат используется для определения лактозы. К 25 см3 фильтрата при перемешивании приливают 25 см3 раствора йода с концентрацией 0,1 моль/дм3 и 37,5 см3 гидроокиси натрия с концентрацией 0,1 моль/дм3 и помещают в темное место. Через 20 мин приливают 8 см3 раствора соляной кислоты с молярной концентрацией 0,5 моль/дм3. Затем приливают 2 - 3 см3 раствора крахмала. Окрасившуюся в грязно-синий цвет жидкость титруют раствором натрия серноватистокислого (натрия тиосульфат) 5-водного с молярной концентрацией 0,1 моль/дм3 до появления окраски молочного цвета. Проводят контрольный опыт, используя вместо 25 см3 фильтрата 25 см3 дистиллированной воды. По отношению объемов израсходованного раствора натрия серноватистокислого (натрия тиосульфат) 5-водного и йода определяют коэффициент нормальности натрия серноватистокислого (натрия тиосульфат) 5-водного - K: $K = \frac{V_{1}C_{1}}{25 \cdot C_{2}}$ , (1) где $V_{1}$ - объем 0,1 моль/дм3 раствора натрия серноватистокислого (натрия тиосульфат) 5-водного, см3; $C_{1}$ - нормальность раствора натрия серноватистокислого (натрия тиосульфат) 5-водного, г-экв/дм3; 25 - объем 0,1 моль/дм3 раствора йода, см3; $C_{2}$ - нормальность раствора йода, г-экв/дм3. #### 7.5. Обработка и оформление результатов измерений ##### 7.5.1 Массовую долю лактозы L, %, вычисляют по формуле $L = \frac{V \cdot K \cdot 18,01 \cdot 500}{25 \cdot 10 \cdot 1000} 100 = V \cdot K \cdot 3,602$ , (2) где V - объем раствора натрия серноватистокислого (натрия тиосульфат) 5-водного, соответствующий йоду, затраченному на окисление лактозы, см3; K - коэффициент нормальности натрия серноватистокислого (натрия тиосульфат) 5-водного; 18,01 - миллиэквивалент лактозы; 3,602 - коэффициент пересчета, учитывающий величину миллиэквивалента лактозы, объем используемого фильтрата, массу навески образца. Для получения более точных результатов следует в полученные значения массовой доли лактозы ввести поправку, так как небольшое количество йода затрачивается на окисление присутствующих в молоке других органических веществ, в том числе сахарозы. Поправка составляет 3% от массовой доли лактозы, определенной по [формуле (1)](#p100114), и вычитается из массовой доли лактозы. ##### 7.5.2 Массовую долю сухого обезжиренного остатка молока в образце X, %, вычисляют по формуле X = L x 1,89, (3) где L - массовая доля лактозы, %, определенная по [формуле (2)](#p100121); 1,89 - коэффициент пересчета массовой доли лактозы на массовую долю сухого обезжиренного остатка молока. Вычисления проводят до второго десятичного знака с последующим округлением до первого десятичного знака. За окончательный результат определения массовой доли сухого обезжиренного остатка молока принимают среднеарифметическое двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости (ГОСТ Р ИСО 5725-6): $|X_{1} - X_{2}| \leq r$ , (4) где $X_{1}$ и $X_{2}$ - результаты двух параллельных определений, %; r - предел повторяемости (сходимости) двух параллельных определений, приведенный в таблице 1, %. Таблица 1 | Диапазон измерений массовой доли, % | Предел повторяемости (сходимости) (n = 2) P = 0,95, r, % | Предел воспроизводимости (m = 2) P = 0,95, R, % | Показатель точности (границы абсолютной погрешности) $\pm \Delta$ , %, P = 0,95 | | --- | --- | --- | --- | | От 0 до 50 включ. | 1,1 | 1,5 | 1,2 | ##### 7.5.3 Результат определения массовой доли сухого обезжиренного остатка молока представляют в виде: $(X_{\text{ср}} \pm \Delta)\%\text{при }P = 0,95$ , (5) где $X_{\text{ср}}$ - среднеарифметическое значение двух параллельных определений массовой доли сухого обезжиренного остатка молока, приведенное в [таблице 1](#p100137), %; $\Delta$ - значение абсолютной погрешности определения массовой доли сухого обезжиренного остатка молока, приведенное в [таблице 1](#p100137), %. ### 8. Метод ферментативного определения массовой доли лактозы Метод ферментативного определения массовой доли лактозы применяют при возникновении разногласий. #### 8.1. Сущность метода Метод основан на ферментативном гидролизе лактозы из образца до глюкозы и $\beta - \text{галактозы}$ , окислении $\beta - \text{галактозы}$ до галактоновой кислоты и фотометрическом измерении образовавшегося $\beta - \text{никотинамидадениндинуклеотида}$ . #### 8.2. Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы При определении массовой доли сухого обезжиренного остатка молока используют следующее оборудование, реактивы и материалы. Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более +/- 0,0002 г. Спектрофотометр, обеспечивающий проведение измерений при длинах волн 334, 340, 365 нм с допускаемой абсолютной погрешностью коэффициента пропускания +/- 1% с прилагаемым комплектом кювет. pH-метр, позволяющий проводить измерения pH в диапазоне от 3,0 до 8,0 с пределами допускаемой абсолютной погрешности +/- 0,05. Стекло химико-лабораторное (палочки) по ГОСТ 21400. Баня водяная, обеспечивающая поддержание температуры до 100 °C с погрешностью не более +/- 2 °C. Стаканы В-1-50 ТХС по ГОСТ 25336. Колбы Кн-1-250-14/23 ТХС по ГОСТ 25336. Колба 1-1000-1 по ГОСТ 1770. Воронки ВФ-1-100 ХС по ГОСТ 25336. Пипетки 1-2-1-(0,5; 1; 2; 5; 10) по ГОСТ 29227. Колбы мерные 1-1000-1, 1-100-1, 1-50-2 по ГОСТ 1770. Коническая колба Кн-1-250-29/32 по ГОСТ 23932. Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026. Вода дистиллированная по ГОСТ 6709. Никотинамид аденин динуклеотидфосфат натриевая соль (НАД) с содержанием основного вещества не менее 90%. Сухой лиофилизат $\beta - \text{галактозидазы}$ с содержанием основного вещества не менее 80%. Аммоний сернокислый, х.ч., по ГОСТ 3769. Цинк сернокислый 7-водный, х.ч., по [ГОСТ 4174](https://bukva.ai/docs/gost-4174-77). Гидроокись натрия, х.ч., по ГОСТ 4328. Калий железосинеродистый, х.ч., по [ГОСТ 4206](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-4206-75). Натрий лимоннокислый трехзамещенный 5,5-водный пищевой (цитрат натрия), х.ч., по ГОСТ 31227. Лимонная кислота моногидрат пищевая, ч., по ГОСТ 908. Кислота серная, х.ч., по ГОСТ 4204. Калия дигидроортофосфат, ч.д.а., по [[4]](#p100342). Спирт этиловый технический (гидролизный) по ГОСТ 17299 или спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300. Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования с метрологическими и техническими характеристиками и реактивов по качеству не ниже указанных. #### 8.3. Приготовление растворов ##### 8.3.1 Раствор Кареза I 3,6 г калия железосинеродистого $(K_{4}[Fe(CN)_{6}] \cdot 3H_{2}O)$ растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см3 в 70 - 80 см3 дистиллированной воды, объем раствора доводят до метки. ##### 8.3.2 Раствор Кареза II 7,2 г цинка сернокислого 7-водного $(ZnSO_{4} \cdot 7H_{2}O)$ растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см3 в 70 - 80 см3 дистиллированной воды, объем раствора доводят до метки. ##### 8.3.3 Раствор серной кислоты с концентрацией $c(H_{2}SO_{4}) = 4\text{моль}/\text{дм}^{3}$ (8 н) В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 400 - 500 см3 дистиллированной воды, медленно и осторожно при перемешивании приливают 106,5 см3 концентрированной серной кислоты с плотностью 1,84 г/см3. Объем раствора доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. ##### 8.3.4 Раствор гидроокиси натрия с концентрацией c(NaOH) = 0,1 моль/дм3 (0,1 н) В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 400 - 500 см3 дистиллированной воды, осторожно при перемешивании добавляют 4,0 г гидроокиси натрия. Объем раствора доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. ##### 8.3.5 Цитратный буфер 3,4 г натрия лимоннокислого трехзамещенного 5,5-водного пищевого (цитрата натрия) $(C_{6}H_{8}O_{7}Na_{3} \cdot 5,5H_{2}O)$ и 0,042 г моногидрата лимонной кислоты $(C_{6}H_{8}O_{7} \cdot H_{2}O)$ растворяют в 30 см3 дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 50 см3. Доводят pH раствора до 6,6. Для этого используют в зависимости от pH полученного раствора раствор серной кислоты с концентрацией $c(H_{2}SO_{4}) = 4\text{моль}/\text{дм}^{3}$ или раствор гидроокиси натрия с концентрацией c(NaOH) = 0,1 моль/дм3. Объем полученного раствора доводят дистиллированной водой до метки. Полученный раствор устойчив в течение трех мес при температуре 4 °C. ##### 8.3.6 Раствор аммония сернокислого с концентрацией $c(NH_{4})_{2}SO_{4} = 2,2\text{моль}/\text{дм}^{3}$ (2,2 М) 29,1 г аммония сернокислого $((NH_{4})_{2}SO_{4})$ растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см3 в 60 - 70 см3 дистиллированной воды, объем раствора доводят до метки. ##### 8.3.7 Раствор 1 Навеску никотинамид аденин динуклеотидфосфат натриевой соли (НАД) массой 0,035 г растворяют в 7 см3 цитратного буфера. Полученный раствор устойчив в течение трех недель при температуре 4 °C. ##### 8.3.8 Суспензия 2 Навеску сухого лиофилизата $\beta - \text{галактозидазы}$ массой 0,005 г суспендируют в 1 см3 раствора аммония сернокислого с концентрацией $c(NH_{4})_{2}SO_{4} = 2,2\text{моль}/\text{дм}^{3}$ . Суспензия устойчива в течение 12 мес при температуре 4 °C. ##### 8.3.9 Раствор 3 Навеску калия дигидроортофосфата $(K_{4}P_{2}O_{7})$ массой 8,3 г растворяют в 40 см3 дистиллированной воды. Доводят pH раствора до 8,6 раствором серной кислоты с концентрацией $c(H_{2}SO_{4}) = 4\text{моль}/\text{дм}^{3}$ . Полученный раствор устойчив в течение двух мес при температуре 4 °C. ##### 8.3.10 Суспензия 4 Навеску сухого лиофилизата $\beta - \text{галактозодегидрогеназы}$ массой 0,005 г суспендируют в 1 см3 раствора аммония сернокислого с концентрацией $c(NH_{4})_{2}SO_{4} = 2,2\text{моль}/\text{дм}^{3}$ . Суспензия устойчива в течение 12 мес при температуре 4 °C. Допускается применение набора реактивов для ферментативного анализа лактозы. #### 8.4. Проведение измерений Рассчитывают навеску образца так, чтобы ожидаемая массовая концентрация лактозы составляла от 0,05 до 1,00 г/дм3. Навеску образца массой 0,2 - 0,5 г количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3. В мерную колбу вместимостью 100 см3 добавляют 40 - 60 см3 дистиллированной воды. Содержимое колбы нагревают на водяной бане до температуры 40 °C - 50 °C и перемешивают. Пипеткой вместимостью 5,0 см3 добавляют 5,0 см3 раствора Кареза I и 5,0 см3 раствора Кареза II, тщательно перемешивают. Пипеткой вместимостью 10,0 см3 добавляют 10,0 см3 раствора гидроокиси натрия с концентрацией c(NaOH) = 0,1 моль/дм3 до pH (7,5 - 8,5). Раствор перемешивают, доводят до метки дистиллированной водой и фильтруют. Фильтрат используют для определения лактозы. Пипеткой вместимостью 1,0 см3 добавляют по 0,2 см3 раствора 1 в кюветы толщиной 1 см для контроля и для образца. Затем в каждую кювету добавляют по 0,05 см3 суспензии 2. Пипеткой вместимостью 1,0 см3 добавляют 0,1 см3 раствора образца (фильтрата) в кювету для образца. Перемешивают содержимое кювет легким встряхиванием и выдерживают в течение 20 мин при температуре воздуха 20 °C - 25 °C. В каждую кювету пипеткой вместимостью 1,0 см3 добавляют по 1,0 см3 раствора 3. В контрольную кювету пипеткой вместимостью 2,0 см3 добавляют 2,0 см3 дистиллированной воды, а в кювету для образца - 1,9 см3 дистиллированной воды. Перемешивают содержимое кювет стеклянной палочкой и через 2 мин измеряют на спектрофотометре величину оптической плотности $A_{1}$ для контрольного образца и $A_{1}^{1}$ - для опытного образца при длине волны 340 нм (365 или 334 нм). В каждую кювету пипеткой вместимостью 0,5 см3 добавляют по 0,05 см3 суспензии 4, перемешивают стеклянной палочкой, оставляют на 15 мин при комнатной температуре и измеряют на спектрофотометре величину оптической плотности $A_{2}$ для контрольного образца и $A_{2}^{1}$ - для опытного образца при длине волны 340 нм (365 или 334 нм). #### 8.5. Обработка результатов измерений 8.5.1. Определяют изменение оптической плотности содержимого контрольной кюветы $(A_{2} - A_{1})$ и кюветы с анализируемым образцом $(A_{2}^{1} - A_{1}^{1})$ . Вычисляют разницу между изменением оптической плотности контрольной кюветы и образца: $\Delta A = (A_{2}^{1} - A_{1}^{1}) - (A_{2} - A_{1})$ . (6) Массовую долю лактозы L, %, вычисляют по формуле $L = \Delta A \frac{1,13}{m \cdot \epsilon} 100\%$ , (7) где 1,13 - коэффициент, учитывающий объем используемых растворов, молекулярный вес лактозы, толщину кюветы; m - масса навески, г; $\epsilon$ - коэффициент экстинкции НАД: при длине волны 340 нм $\epsilon = 6,3$ ; " " " 365 нм $\epsilon = 3,4$ ; " " " 334 нм $\epsilon = 6,18$ . ##### 8.5.2 Массовую долю сухого обезжиренного остатка молока в образце X, %, вычисляют по формуле X = L x 1,89, (8) где 1,89 - коэффициент пересчета массовой доли лактозы на массовую долю сухого обезжиренного остатка молока. Вычисления проводят до второго десятичного знака с последующим округлением до первого десятичного знака. За окончательный результат определения массовой доли сухого обезжиренного остатка молока принимают среднеарифметическое двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости: $|X_{1} - X_{2}| \leq r$ , (9) где $X_{1}$ и $X_{2}$ - результаты двух параллельных определений, %; r - предел повторяемости (сходимости) двух параллельных определений, приведенный в таблице 2, %. Таблица 2 | Диапазон измерений массовой доли, % | Предел повторяемости (сходимости) (n = 2) P = 0,95, r, % | Предел воспроизводимости (m = 2) P = 0,95, R, % | Показатель точности (границы абсолютной погрешности) $\pm \Delta$ , %, P = 0,95 | | --- | --- | --- | --- | | От 0 до 50 включ. | 0,3 | 0,5 | 0,4 | ##### 8.5.3 Результат определения массовой доли сухого обезжиренного остатка молока представляют в виде: $(X_{\text{ср}} \pm \Delta)\%\text{при }P = 0,95$ , (10) где $X_{\text{ср}}$ - среднеарифметическое значение двух параллельных определений массовой доли сухого обезжиренного остатка молока, %; $\Delta$ - значение абсолютной погрешности определения массовой доли сухого обезжиренного остатка молока, приведенное в [таблице 2](#p100233), %. ### 9. Метод Кьельдаля #### 9.1. Сущность метода Метод основан на минерализации выделенного из образца молочного белка концентрированной серной кислотой в присутствии катализатора. #### 9.2. Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы При определении массовой доли сухого обезжиренного остатка молока используют следующее оборудование, реактивы и материалы. Муфельная печь с терморегулятором, обеспечивающая поддержание температуры (500 +/- 5) °C. Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более +/- 0,2 мг. Цилиндр 1-10-1 и 1-50-1 по ГОСТ 1770. Колбы 2-100-1 и 2-1000-1 по ГОСТ 1770. Колба Кн-1-250-29/32 ТХС и Кн-1-500-29/32 ТХС по ГОСТ 25336. Колба К-1-1000-29/32 ТХС по ГОСТ 25336. Каплеуловитель КО-14/23-60 ТХС по ГОСТ 25336. Холодильник ХТП-1-300-14/23 ТХС по ГОСТ 25336. Колба Кьельдаля 2-250-29 ТХС по ГОСТ 25336. Ступка фарфоровая диаметром не более 70 мм с пестиком по ГОСТ 9147. Шкаф сушильный электрический с терморегулятором, обеспечивающий поддержание температуры (100 +/- 2) °C. Плитка электрическая закрытого типа, обеспечивающая нагрев в диапазоне температуры от 120 °C до 200 °C, по ГОСТ 14919. Центрифуга лабораторная с числом оборотов не менее 3000 и центрифужными термостойкими пробирками с крышками вместимостью 50 см3. Петролейный эфир, ч., по [[1]](#p100339). Натрий щавелевокислый, х.ч., по [ГОСТ 5839](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-5839-77). Кислота уксусная синтетическая и регенерированная по [ГОСТ 19814](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-19814-74). Кислота дубильная с содержанием основного вещества не менее 90%. Кислота серная, х.ч., по ГОСТ 4204. Метиловый красный, ч.д.а., по [[2]](#p100340). Бромкрезоловый зеленый, ч.д.а., по [[3]](#p100341). Натрий гидроокись, х.ч., по ГОСТ 4328. Медь (II) сернокислая 5-водная по [ГОСТ 4165](https://bukva.ai/docs/gost-4165-78). Селен технический по [ГОСТ 10298](https://bukva.ai/docs/standart-gost-10298-79). Калий сернокислый, х.ч., по [ГОСТ 4145](https://bukva.ai/docs/gost-4145-74). Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026. Спирт этиловый технический (гидролизный) по ГОСТ 17299 или спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300. #### 9.3. Приготовление растворов и катализатора ##### 9.3.1 Раствор гидроокиси натрия с концентрацией c(NaOH) = 0,1 моль/дм3 (0,1 н) Навеску гидроокиси натрия (NaOH) массой 4,0 г растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 см3 в 70 - 80 см3 дистиллированной воды, объем раствора доводят до метки. ##### 9.3.2 Раствор натрия щавелевокислого с массовой долей 1% Навеску натрия щавелевокислого массой 10,0 г растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 см3 в 400 - 500 см3 дистиллированной воды, объем раствора доводят до метки. ##### 9.3.3 Раствор гидроокиси натрия (NaOH) с массовой долей 33% Навеску гидроокиси натрия массой 330 г растворяют в 670 см3 дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 1000 см3. ##### 9.3.4 Раствор серной кислоты с молярной концентрацией $c(H_{2}SO_{4}) = 0,05\text{моль}/\text{дм}^{3}$ (0,1 н) В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 400 - 500 см3 дистиллированной воды, осторожно при перемешивании приливают 2,7 см3 концентрированной серной кислоты с плотностью 1,84 г/см3. Объем раствора доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. ##### 9.3.5 Раствор гидроокиси натрия (NaOH) с молярной концентрацией 0,1 моль/дм3 4,0 г гидроокиси натрия растворяют в 700 см3 дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 1000 см3. Объем раствора доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. ##### 9.3.6 Катализатор Тщательно перемешивают в ступке смесь 10 г меди (II) сернокислой 5-водной $(CuSO_{4} \cdot 5H_{2}O)$ , 100 г калия сернокислого $(K_{2}SO_{4})$ и 2 г селена технического (Se). Допускается использовать смесь 1 г меди (II) сернокислой 5-водной $(CuSO_{4} \cdot 5H_{2}O)$ и 30 г калия сернокислого $(K_{2}SO_{4})$ . ##### 9.3.7 Раствор дубильной кислоты с массовой долей 10% Навеску дубильной кислоты массой 10,0 г растворяют в 60 см3 дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 100 см3. Объем раствора доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. #### 9.4. Проведение измерений 9.4.1. Навеску массой 15 - 20 г измельчают пестиком в фарфоровой ступке и помещают приблизительно равными частями в две центрифужные пробирки. Добавляют приблизительно по 30 см3 петролейного эфира, закрывают крышками, тщательно взбалтывают и уравновешивают вес центрифужных пробирок. Центрифугируют в течение 10 мин при скорости 3000 об/мин, надосадочную жидкость сливают, осадок высушивают от растворителя в сушильном шкафу при температуре 100 °C до постоянного веса. В каждую пробирку цилиндром вместимостью 50 см3 добавляют по 30 см3 раствора натрия щавелевокислого с массовой долей 1%, закрывают крышками, тщательно взбалтывают в течение 3 - 5 мин и уравновешивают вес центрифужных пробирок раствором натрия щавелевокислого с массовой долей 1%. Центрифугируют в течение 10 мин при скорости 3000 об/мин. Полученный экстракт выливают в коническую колбу вместимостью 250 см3. Пипеткой вместимостью 1 см3 добавляют 1 см3 уксусной кислоты, выдерживают 5 - 7 мин, добавляют 4 см3 10% дубильной кислоты и фильтруют выпавший осадок белков. Промывают фильтр 100 см3 раствора натрия щавелевокислого с массовой долей 1%, в который добавлены 1 см3 уксусной кислоты и 4 см3 раствора дубильной кислоты с массовой долей 10%. Фильтр с осадком помещают в колбу Кьельдаля, добавляют 2 г катализатора. С помощью цилиндра вместимостью 50 см3 добавляют 20 см3 концентрированной серной кислоты. Медленно нагревают колбу Кьельдаля до температуры 420 °C - 430 °C в муфельной печи, избегая сильного вспенивания содержимого, в течение 2 - 3 ч до обесцвечивания жидкости. Количественно переносят полученный остаток в колбу для отгонки аммиака с паром, с помощью цилиндра вместимостью 50 см3 добавляют 35 см3 раствора гидроокиси натрия (NaOH) с массовой долей 33% и проводят перегонку аммиака с паром. В приемную колбу с помощью цилиндра вместимостью 50 см3 помещают 25 см3 раствора серной кислоты концентрацией 0,05 моль/дм3. Общий объем дистиллята составляет приблизительно 160 см3. Схема установки для перегонки аммиака с водяным паром приведена на рисунке 1. ![9.4. Проведение измерений](https://i.bukva.ai/KPsTxQEb/img_0.png)
1 - колба коническая вместимостью 500 см3; 2 - плитка
электрическая; 3 - баня с насыщенным раствором хлористого
натрия; 4 - колба для отгонки аммиака с паром;
5 - каплеуловитель; 6 - холодильник; 7 - приемная колба
(колба коническая вместимостью 250 см3)
Рисунок 1. Схема лабораторной установки
для перегонки аммиака Полученный дистиллят титруют раствором гидроокиси натрия (NaOH) с концентрацией 0,1 моль/дм3, используя 5 капель смешанного индикатора (0,2 г метилового красного и 0,1 г бромкрезолового зеленого растворяют в 100 см3 этилового спирта). 9.4.2. Затем проводят контрольный опыт. Для этого в приемную колбу помещают 25 см3 раствора серной кислоты концентрацией 0,05 моль/дм3 и титруют 0,1 моль/дм3 раствором гидроокиси натрия NaOH, используя пять капель смешанного индикатора. #### 9.5. Обработка результатов 9.5.1. Массовую долю азота N, %, в анализируемой пробе при отгонке аммиака в серную кислоту вычисляют по формуле $N = \frac{(V_{1} - V_{0})K \cdot 0,0014 \cdot 100}{m}$ , (11) где $V_{1}$ - объем раствора гидроокиси натрия молярной концентрацией 0,1 моль/дм3, израсходованный на титрование 25 см3 серной кислоты молярной концентрацией 0,05 моль/дм3 в контрольном опыте, см3; $V_{0}$ - объем раствора гидроокиси натрия молярной концентрацией 0,1 моль/дм3, израсходованный на титрование 25 см3 серной кислоты молярной концентрацией 0,05 моль/дм3 в испытуемом растворе, см3; K - поправка к титру 0,1 моль/дм3 раствора гидроокиси натрия, определяется отношением объемов раствора гидроокиси натрия с молярной концентрацией 0,1 моль/дм3, израсходованного на титрование 25 см3 раствора серной кислоты с молярной концентрацией 0,05 моль/дм3, и раствора серной кислоты; 0,0014 - количество азота, эквивалентное 1 см3 серной кислоты молярной концентрацией 0,05 моль/дм3; m - масса навески, г. Массовую долю молочного белка Y, %, вычисляют по формуле Y = 6,38 x N, (12) где 6,38 - коэффициент пересчета массовой доли азота на молочный белок; N - массовая доля азота в испытуемой пробе, %. Массовую долю сухого обезжиренного остатка молока X, %, вычисляют по формуле X = Y x 2,73, (13) где 2,73 - коэффициент пересчета молочного белка на сухой обезжиренный остаток сухого молока. Вычисления проводят до второго десятичного знака с последующим округлением до первого десятичного знака. За окончательный результат определения массовой доли сухого обезжиренного остатка молока принимают среднеарифметическое двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости: $|X_{1} - X_{2}| \leq r$ , (14) где $X_{1}$ и $X_{2}$ - результаты двух параллельных определений, %; r - предел повторяемости (сходимости) двух параллельных определений, приведенный в таблице 3, %.
Таблица 3
| Диапазон измерений массовой доли, % | Предел повторяемости (сходимости) (n = 2) P = 0,95, r, % | Предел воспроизводимости (m = 2) P = 0,95, R, % | Показатель точности (границы абсолютной погрешности) $\pm \Delta$ , %, P = 0,95 | | --- | --- | --- | --- | | От 0 до 30 | 0,8 | 1,0 | 0,7 | ##### 9.5.2 Результат определения массовой доли сухого обезжиренного остатка молока представляют в виде: $(X_{\text{ср}} \pm \Delta)\%\text{при }P = 0,95$ , где $X_{\text{ср}}$ - среднеарифметическое значение двух параллельных определений массовой доли сухого обезжиренного остатка молока, %; $\Delta$ - значение абсолютной погрешности определения массовой доли сухого обезжиренного остатка молока, приведенное в [таблице 3](#p100325), %. ## БИБЛИОГРАФИЯ 1. ТУ 6-02-1244-83 Петролейный эфир 2. ТУ 6-09-5169-84 Метиловый красный, ч.д.а. 3. ТУ 6-09-4530-77 Бромкрезоловый зеленый, ч.д.а. 4. ТУ 6-09-5324-87 Калия дигидроортофосфат, х.ч. ------------------------------------------------------------------