---
title: "\"ГОСТ Р 52415-2005. Национальный стандарт Российской Федерации. Молоко натуральное коровье - сырье. Люминесцентный метод определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов\""
number: "ГОСТ Р 52415-2005"
issuer: "Федеральное агентство по техническому регулированию и метрологии"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/gost-r-52415-2005"
---

## "ГОСТ Р 52415-2005. Национальный стандарт Российской Федерации. Молоко натуральное коровье - сырье. Люминесцентный метод определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов"

# "ГОСТ Р 52415-2005. Национальный стандарт Российской Федерации. Молоко натуральное коровье - сырье. Люминесцентный метод определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов"

(утв. и введен в действие Приказом Ростехрегулирования от 23.12.2005 N 331-ст)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза "О безопасности молока и молочной продукции" (ТР ТС 033/2013) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 26.05.2014 N 80).
> Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза "О безопасности пищевой продукции" (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Комиссии Таможенного союза от 09.12.2011 N 880).
> Документ [введен](#p100009) в действие с 01.01.2007.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утвержден и введен в действие<br>
Приказом Федерального<br>
агентства по техническому<br>
регулированию и метрологии

</div>

от 23 декабря 2005 г. N 331-ст

<a id="p100002"></a>**НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ**

<a id="p100003"></a>**МОЛОКО НАТУРАЛЬНОЕ КОРОВЬЕ - СЫРЬЕ**

<a id="p100004"></a>**ЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА МЕЗОФИЛЬНЫХ**
**АЭРОБНЫХ И ФАКУЛЬТАТИВНО-АНАЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ**

<a id="p100005"></a>Fresh cow's milk - raw material.
Luminescent method of quantitative determination
of the total amount of mesophilic aerobic and
elective anaerobic microorganisms

<a id="p100006"></a>**ГОСТ Р 52415-2005**

<div align="right">

<a id="p100007"></a>Группа Н19

<a id="p100008"></a>ОКС 67.100.10;<br>
ОКП 92 2000

<a id="p100009"></a>Дата введения<br>
1 января 2007 года

</div>



### <a id="p100010"></a>Предисловие


<a id="p100011"></a>Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения".


### <a id="p100012"></a>Сведения о стандарте


1. <a id="p100013"></a>Разработан ООО "Люмтек".
2. <a id="p100014"></a>Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 186 "Молоко и молочные продукты".
3. <a id="p100015"></a>Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 23 декабря 2005 г. N 331-ст.
4. <a id="p100016"></a>Введен впервые.

<a id="p100017"></a>Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте национального органа Российской Федерации по стандартизации в сети Интернет.


### 1. <a id="p100018"></a>Область применения


<a id="p100019"></a>Настоящий стандарт распространяется на сырое натуральное коровье молоко - сырье (далее - молоко) и устанавливает люминесцентный метод определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) от 50 тыс. до 20000 тыс. КОЕ/см3. Наименьший предел обнаружения КМАФАнМ - не менее 50 тыс. КОЕ/см3.
<a id="p100020"></a>Требования к молоку установлены в [ГОСТ Р 52054](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-r-52054-2003-gosstandart-rossii).


### 2. <a id="p100021"></a>Нормативные ссылки


<a id="p100022"></a>В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
<a id="p100023"></a>[ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-1-2002) Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения
<a id="p100024"></a>[ГОСТ Р 51652-2000](https://bukva.ai/docs/gost-r-51652-2000) Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия
<a id="p100025"></a>[ГОСТ Р 51917-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-51917-2002) Продукты молочные и молокосодержащие. Термины и определения
<a id="p100026"></a>[ГОСТ Р 52054-2003](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-r-52054-2003-gosstandart-rossii) Молоко натуральное коровье - сырье. Технические условия
<a id="p100027"></a>[ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
<a id="p100028"></a>ГОСТ 2228-81 Бумага мешочная. Технические условия
<a id="p100029"></a>ГОСТ 2405-88 Манометры, вакуумметры, мановакуумметры, напоромеры, тягомеры и тягонапоромеры. Общие технические условия
<a id="p100030"></a>ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия
<a id="p100031"></a>[ГОСТ 3145-84](https://bukva.ai/docs/standart-gost-3145-84) Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия
<a id="p100032"></a>ГОСТ 6709-72 Реактивы. Вода дистиллированная. Технические условия
<a id="p100033"></a>[ГОСТ 8218-89](https://bukva.ai/docs/gost-8218-89) Молоко. Метод определения чистоты
<a id="p100034"></a>[ГОСТ 9225-84](https://bukva.ai/docs/gost-9225-84) Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа
<a id="p100035"></a>ГОСТ 10157-79 Аргон газообразный и жидкий. Технические условия
<a id="p100036"></a>ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
<a id="p100037"></a>[ГОСТ 12290-89](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-12290-89) Картон фильтровальный для пищевых жидкостей. Технические условия
<a id="p100038"></a>[ГОСТ 22649-83](https://bukva.ai/docs/gost-22649-83) Стерилизаторы воздушные медицинские. Общие технические условия
<a id="p100039"></a>[ГОСТ 22967-90](https://bukva.ai/docs/standart-gost-22967-90) Шприцы медицинские инъекционные многократного применения. Общие технические требования и методы испытаний
<a id="p100040"></a>ГОСТ 23932-90 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Общие технические условия
<a id="p100041"></a>ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования
<a id="p100042"></a>ГОСТ 24861-91 (ИСО 7886-84) Шприцы инъекционные однократного применения
<a id="p100043"></a>[ГОСТ 26668-85](https://bukva.ai/docs/gost-26668-85) Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов
<a id="p100044"></a>[ГОСТ 26809-86](https://bukva.ai/docs/gost-26809-86) Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу
<a id="p100045"></a>[ГОСТ 28498-90](https://bukva.ai/docs/gost-28498-90) Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
<a id="p100046"></a>[ГОСТ 29169-91](https://bukva.ai/docs/gost-29169-91) (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой.
<a id="p100047"></a>*Примечание.* При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте национального органа Российской Федерации по стандартизации в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться замененным (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.


### 3. <a id="p100048"></a>Термины, определения, обозначения и сокращения


<a id="p100049"></a>3.1. В настоящем стандарте применены термины по [ГОСТ Р ИСО 5725-1](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-1-2002) и [ГОСТ Р 51917](https://bukva.ai/docs/gost-r-51917-2002).

#### <a id="p100050"></a>3.2 В настоящем стандарте применены следующие обозначения и сокращения:

<a id="p100051"></a>КМАФАнМ - количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов;
<a id="p100052"></a>АТФ - аденозин-5'-трифосфат;
<a id="p100053"></a>BPN-реагент - растворитель соматических клеток, белка и жира молока;
<a id="p100054"></a>КОЕ - колониеобразующие единицы.


### 4. <a id="p100055"></a>Методика определения


<a id="p100056"></a>Метод основан на:
- <a id="p100057"></a>растворении соматических клеток, белка и жира молока BPN-реагентом;
- <a id="p100058"></a>фильтровании полученного раствора молока через бактериальный мембранный фильтр;
- <a id="p100059"></a>растворении отфильтрованных микроорганизмов диметилсульфоксидом;
- <a id="p100060"></a>измерении люминесценции полученного раствора, расчете молярной концентрации АТФ микроорганизмов и выражении ее значения в КОЕ/см3 молока.

#### <a id="p100061"></a>4.1 Средства измерений и вспомогательные устройства

<a id="p100062"></a>Прибор "Биотокс-7", обеспечивающий измерение люминесценции в диапазоне длин волн от 380 до 600 нм по [[1]](#p100166).
<a id="p100063"></a>Люминометрическая кювета полистирольная диаметром 10 мм, вместимостью 0,35 см3, дно которой выполнено из бактериального мембранного фильтра с порами 0,45 мкм (Приложение А, [рисунок 1](#p100155)) [[2]](#p100167).
<a id="p100064"></a>Штатив для люминометрических кювет (Приложение А, [рисунок 2](#p100157)) [[2]](#p100167).
<a id="p100065"></a>Шприц медицинский вместимостью 5 см3 по [ГОСТ 22967](https://bukva.ai/docs/standart-gost-22967-90), ГОСТ 24861.
<a id="p100066"></a>Наконечник резиновый к медицинскому шприцу (Приложение А, [рисунок 3](#p100159)) [[2]](#p100167).
<a id="p100067"></a>Колба вместимостью 5 см3, 100 см3, 1 дм3 по [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74).
<a id="p100068"></a>Пипетки автоматические, позволяющие дозировать объемы: 0,02, 0,05, 0,2 и 1 см3 [[3]](#p100168).
<a id="p100069"></a>Наконечники к автоматическим пипеткам стерильные [[4]](#p100169).
<a id="p100070"></a>Термометр стеклянный жидкостной (нертутный), диапазон измерения 0 °C - 100 °C, цена деления шкалы 1 °C, по [ГОСТ 28498](https://bukva.ai/docs/gost-28498-90).
<a id="p100071"></a>Часы механические с сигнальным устройством по [ГОСТ 3145](https://bukva.ai/docs/standart-gost-3145-84).
<a id="p100072"></a>Шкаф сушильный, позволяющий поддерживать температуру (165 +/- 5) °C.
<a id="p100073"></a>Стерилизатор воздушный медицинский по [ГОСТ 22649](https://bukva.ai/docs/gost-22649-83) или стерилизатор паровой медицинский, позволяющие поддерживать температуру (121 +/- 2) °C.
<a id="p100074"></a>Баня водяная, позволяющая поддерживать температуру (45 +/- 1) °C.
<a id="p100075"></a>Перегонная установка (см. [Приложение Б](#p100161)).
<a id="p100076"></a>Весы лабораторные с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более +/- 0,02 мг по ГОСТ 24104.
<a id="p100077"></a>Установка для получения деионизированной воды по [[5]](#p100170).
<a id="p100078"></a>Пипетка стеклянная номинальной вместимостью 50 см3 2 кл. по [ГОСТ 29169](https://bukva.ai/docs/gost-29169-91).
<a id="p100079"></a>Эксикатор по ГОСТ 23932.
<a id="p100080"></a>Вакуумметр по ГОСТ 2405.

#### <a id="p100081"></a>4.2 Реактивы и материалы

<a id="p100082"></a>АТФ-реагент для биолюминесцентного определения АТФ, чистый сухой, содержащий люциферазу светляков, Д-люциферин, соль магния, компоненты буферной системы, стабилизаторы [[6]](#p100171).
<a id="p100083"></a>Вода деионизированная с электропроводимостью не более 0,1 мкСм, получаемая в соответствии с инструкцией к установке по [4.1](#p100061).
<a id="p100084"></a>Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
<a id="p100085"></a>АТФ сухой с содержанием основного вещества не менее 99% [[7]](#p100172).
<a id="p100086"></a>BPN-реагент чистый сухой с массовой долей неионного детергента не более 5%, содержащий компоненты буферной системы и комплекс протеаз [[8]](#p100173).
<a id="p100087"></a>Промывочный раствор для подготовки образцов к АТФ-метрии, чистый, с массовой долей неионного детергента не более 1% [[9]](#p100174).
<a id="p100088"></a>Диметилсульфоксид [[10]](#p100175).
<a id="p100089"></a>Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч.
<a id="p100090"></a>Аргон по ГОСТ 10157.
<a id="p100091"></a>Фильтровальная бумага по ГОСТ 12026 или фильтровальный картон по [ГОСТ 12290](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-12290-89).
<a id="p100092"></a>Бумага мешочная по ГОСТ 2228.
<a id="p100093"></a>Спирт этиловый по [ГОСТ Р 51652](https://bukva.ai/docs/gost-r-51652-2000).
<a id="p100094"></a>Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств с метрологическими и техническими характеристиками, а также реактивов и материалов по качеству не уступающих приведенным выше.

#### <a id="p100095"></a>4.3 Отбор проб

<a id="p100096"></a>Отбор проб - по [ГОСТ 9225](https://bukva.ai/docs/gost-9225-84) и [ГОСТ 26809](https://bukva.ai/docs/gost-26809-86).

#### <a id="p100097"></a>4.4 Подготовка к измерениям


##### <a id="p100098"></a>4.4.1 Приготовление водного раствора с массовой долей соляной кислоты от 1% до 2%

<a id="p100099"></a>В мерную колбу вместимостью 1 дм3 (см. [4.1](#p100061)) наливают от 100 до 200 см3 дистиллированной воды и доливают пипеткой (см. [4.1](#p100061)) 50 см3 соляной кислоты (см. [4.2](#p100081)). Приливают дистиллированную воду до метки.

##### <a id="p100100"></a>4.4.2 Подготовка посуды, инструментов и материалов

<a id="p100101"></a>Лабораторную посуду, инструменты и материалы (полоски фильтровальной бумаги или фильтровального картона размером 4 x 12 см), завернутые в бумагу (см. [4.2](#p100081)), стерилизуют в соответствии с ГОСТ 26668 [(пункт 1.2)](https://bukva.ai/docs/gost-26668-85#p100034).
<a id="p100102"></a>Колбу для отбора молока вместимостью 100 см3 (см. [4.1](#p100061)) кипятят в водном растворе соляной кислоты по [4.4.1](#p100098) в течение 15 мин и ополаскивают дистиллированной водой. Затем колбу стерилизуют в сушильном шкафу при температуре (160 +/- 5) °C в течение 2 ч с последующим охлаждением в эксикаторе (см. [4.1](#p100061)) либо в стерилизаторе при температуре (121 +/- 2) °C в течение (30 +/- 1) мин с последующим охлаждением в эксикаторе (см. [4.1](#p100061)).

##### <a id="p100103"></a>4.4.3 Очистка диметилсульфоксида с помощью перегонки

<a id="p100104"></a>Диметилсульфоксид перегоняют в потоке аргона при температуре (72,0 +/- 0,2) °C и остаточном давлении 15 мм рт. ст. Для шлифов перегонной установки (см. [4.1](#p100061)) использование смазки не допускается. Перегнанный диметилсульфоксид хранят в стеклянной посуде без доступа света в течение 30 дней при температуре не выше 4 °C.

##### <a id="p100105"></a>4.4.4 Подготовка раствора АТФ-реагента

<a id="p100106"></a>В упаковку с сухим АТФ-реагентом (см. [4.2](#p100081)) автоматической пипеткой, позволяющей дозировать 1 см3, вносят деионизированную воду по [4.2](#p100081) в объеме, указанном на этикетке упаковки, и осторожно перемешивают покачиванием. Если для испытания используют несколько упаковок с сухим АТФ-реагентом, то их содержимое после добавления деионизированной воды объединяют в одну упаковку с помощью автоматической пипетки. Перед использованием раствор АТФ-реагента выдерживают от 15 до 30 мин. Полученный раствор используют в течение 6 ч.
<a id="p100107"></a>4.4.5. Приготовление контрольного образца АТФ с молярной концентрацией $(C_{1}) - 1 \cdot 10^{- 11}\text{моль}/\text{см}^{3}$ 
<a id="p100108"></a>Взвешивают (0,2755 +/- 0,0001) г АТФ (см. [4.2](#p100081)), растворяют его деионизированной водой в мерной колбе вместимостью 5 см3 (молярная концентрация водного раствора АТФ - 0,1 моль/см3).
<a id="p100109"></a>0,5 см3 водного раствора АТФ вносят в мерную колбу вместимостью 5 см3 и доводят объем раствора до метки диметилсульфоксидом по [4.4.3](#p100103) (молярная концентрация полученного раствора АТФ в диметилсульфоксиде - $1 \cdot 10^{- 2}\text{моль}/\text{см}^{3}$ ). Данную процедуру повторяют еще девять раз, последовательно растворяя 0,5 см3 вновь получаемых растворов диметилсульфоксидом в мерных колбах вместимостью 5 см3.
<a id="p100110"></a>Допускается использовать для приготовления контрольного образца лиофильно высушенную смесь АТФ с инертными наполнителями, обеспечивающую после ее растворения молярную концентрацию АТФ $1 \cdot 10^{- 11}\text{моль}/\text{см}^{3}$ .

##### <a id="p100111"></a>4.4.6 Измерение люминесценции контрольного образца АТФ

<a id="p100112"></a>Люминометрическую кювету помещают в кюветное отделение прибора для измерения люминесценции и последовательно вносят в нее 0,02 см3 контрольного образца АТФ по [4.4.5](#p100107) и 0,05 см3 деионизированной воды, а также 0,05 см3 раствора АТФ-реагента по [4.4.4](#p100105). Раствор перемешивают прокачиванием: трижды набирая содержимое люминометрической кюветы в наконечник автоматической пипетки вместимостью 0,05 см3 и возвращая его в люминометрическую кювету. Измеряют люминесценцию $I_{1}$ .
<a id="p100113"></a>Процедуру измерения люминесценции контрольного образца АТФ проводят дважды. АТФ-реагент считают пригодным для проведения испытаний, если для среднеарифметического значения двух результатов наблюдений люминесценции выполняется условие: $\overline{I_{1}} \geq 500\text{усл}.\text{ед}.$ 

##### <a id="p100114"></a>4.4.7 Подготовка пробы молока

<a id="p100115"></a>Из объединенной пробы молока по [ГОСТ 9225](https://bukva.ai/docs/gost-9225-84) отбирают 250 см3 молока, фильтруют его через иглопробивную ткань в соответствии с требованиями [ГОСТ 8218](https://bukva.ai/docs/gost-8218-89) (см. [разделы 2](https://bukva.ai/docs/gost-8218-89#p100027), [3](https://bukva.ai/docs/gost-8218-89#p100033)). Предварительно ткань стерилизуют при температуре (121 +/- 2) °C в течение (30 +/- 1) мин, охлаждают в эксикаторе до температуры (20 +/- 2) °C. Предварительно поверхность установки для фильтрования молока обрабатывают этиловым спиртом (см. [4.2](#p100081)) и высушивают.

#### <a id="p100116"></a>4.5 Проведение измерений

<a id="p100117"></a>4.5.1. Отбирают 50 см3 отфильтрованного молока по [4.4.7](#p100114) и помещают в колбу вместимостью 100 см3, подготовленную по [4.4.2](#p100100). Молоко подогревают до температуры (20 +/- 2) °C и перемешивают.
<a id="p100118"></a>4.5.2. Автоматической пипеткой отбирают 1 см3 молока по 4.5.1, вносят его в упаковку с BPN-реагентом и перемешивают ее содержимое. Упаковку выдерживают в водяной бане при (45 +/- 1) °C в течение 10 мин.
<a id="p100119"></a>4.5.3. Люминометрическую кювету устанавливают на стопку из трех-пяти полосок фильтровальной бумаги или на одну полоску фильтровального картона по [4.4.2](#p100100), помещенных в штатив для люминометрических кювет (Приложение А, [рисунок 2](#p100157)). В люминометрическую кювету автоматической пипеткой вместимостью 0,2 см3 вносят 0,2 см3 раствора по [4.5.2](#p100118) и продавливают его в фильтровальную бумагу или фильтровальный картон, создавая избыточное давление воздуха с помощью шприца с резиновым наконечником (Приложение А, [рисунок 3](#p100159)). Стопку фильтровальной бумаги или полоску фильтровального картона в штативе для люминометрических кювет периодически перемещают так, чтобы после фильтрования под люминометрической кюветой она оставалась сухой.
<a id="p100120"></a>Если фильтрование затруднено, то процедуру по [4.5.2](#p100118) повторяют с увеличением времени выдерживания упаковки в водяной бане до 20 мин.
<a id="p100121"></a>4.5.4. В люминометрическую кювету по [4.5.3](#p100119) автоматической пипеткой вместимостью 0,2 см3 вносят 0,2 см3 промывочного раствора (см. [4.2](#p100081)) и продавливают его в фильтровальную бумагу или фильтровальный картон, создавая избыточное давление с помощью шприца с резиновым наконечником. Стопку фильтровальной бумаги (или полоску фильтровального картона) в штативе для люминометрических кювет периодически перемещают так, чтобы после фильтрования под люминометрической кюветой она оставалась сухой.
<a id="p100122"></a>4.5.5. Подготовленную люминометрическую кювету по [4.5.4](#p100121) помещают в кюветное отделение прибора для измерения люминесценции и автоматической пипеткой вместимостью 0,02 см3 вносят в нее 0,02 см3 диметилсульфоксида по [4.4.3](#p100103). Через 1 мин автоматической пипеткой вместимостью 0,05 см3 в люминометрическую кювету вносят последовательно 0,05 см3 деионизированной воды и 0,05 см3 раствора АТФ-реагента по [4.4.4](#p100105). Раствор перемешивают прокачиванием: трижды набирая содержимое люминометрической кюветы в наконечник автоматической пипетки и возвращая его в люминометрическую кювету. Измеряют люминесценцию анализируемой пробы $I_{2}$ .
<a id="p100123"></a>4.5.6. Процедуры по [4.5.3](#p100119) - [4.5.5](#p100122) проводят дважды.

#### <a id="p100124"></a>4.6 Обработка результатов

<a id="p100125"></a>4.6.1. За результат измерений люминесценции контрольного образца принимают среднеарифметическое значение двух результатов наблюдений $\overline{I_{1}}$ , если их повторяемость (сходимость) не превышает 10% среднеарифметического значения.
<a id="p100126"></a>4.6.2. За результат измерений люминесценции анализируемой пробы принимают среднеарифметическое значение двух результатов наблюдений $\overline{I_{2}}$ , если их повторяемость (сходимость) не превышает 10% среднеарифметического значения.
<a id="p100127"></a>4.6.3. В случае если повторяемость превышает 10%, процедуры по [4.4.6](#p100111) и [4.5.2](#p100118) - [4.5.5](#p100122) повторяют.

##### <a id="p100128"></a>4.6.4 Молярную концентрацию АТФ $C_{2}$ , моль/см3, в анализируемой пробе рассчитывают по формуле


<div align="center">

<a id="p100129"></a> $C_{2} = 0,1C_{1}(\overline{I_{2}})/(\overline{I_{1}})$ , (1)

</div>


<a id="p100130"></a>где 0,1 - коэффициент, учитывающий концентрирование микроорганизмов в люминометрической кювете при фильтровании раствора;
<a id="p100131"></a> $C_{1}$ - молярная концентрация АТФ в контрольном образце, $1 \cdot 10^{- 11}\text{моль}/\text{см}^{3}$ по [4.4.6](#p100111);
<a id="p100132"></a> $\overline{I_{1}}$ - среднеарифметическое значение двух результатов наблюдений люминесценции контрольного образца АТФ по [4.4.6](#p100111), усл. ед.;
<a id="p100133"></a> $\overline{I_{2}}$ - среднеарифметическое значение двух результатов наблюдений люминесценции анализируемой пробы, усл. ед.
<a id="p100134"></a>4.6.5. Количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов определяют по таблице 1.

<div align="right">

<a id="p100135"></a>Таблица 1

</div>



| <a id="p100136"></a>Молярная концентрация АТФ, $C_{2}$ , моль/см3 | <a id="p100137"></a>КМАФАнМ, КОЕ/см3 |
| --- | --- |
| <a id="p100138"></a>Менее $0,6 \cdot 10^{- 12}$ | <a id="p100139"></a>До 50 тыс. |
| <a id="p100140"></a>От $0,6 \cdot 10^{- 12}$ до $1,20 \cdot 10^{- 12}$ включ. | <a id="p100141"></a>Св. 50 тыс. " 100 тыс. включ. |
| <a id="p100142"></a>" $1,21 \cdot 10^{- 12}$ " $2,70 \cdot 10^{- 12}$ " | <a id="p100143"></a>" 100 тыс. " 200 тыс. " |
| <a id="p100144"></a>" $2,71 \cdot 10^{- 12}$ " $4,20 \cdot 10^{- 12}$ " | <a id="p100145"></a>" 200 тыс. " 300 тыс. " |
| <a id="p100146"></a>" $4,21 \cdot 10^{- 12}$ " $7,30 \cdot 10^{- 12}$ " | <a id="p100147"></a>" 300 тыс. " 500 тыс. " |
| <a id="p100148"></a>" $7,31 \cdot 10^{- 12}$ " $74,00 \cdot 10^{- 12}$ " | <a id="p100149"></a>" 500 тыс. " 4000 тыс. " |
| <a id="p100150"></a>" $74,10 \cdot 10^{- 12}$ " $442,00 \cdot 10^{- 12}$ " | <a id="p100151"></a>" 4000 тыс. " 20000 тыс. " |






<div align="right">

<a id="p100152"></a>Приложение А<br>
(обязательное)

</div>


<div align="center">

<a id="p100153"></a>**ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА ДЛЯ ФИЛЬТРОВАНИЯ МОЛОКА**

<a id="p100154"></a> ![4. Методика определения](https://i.bukva.ai/d6iqSQ91/img_0.png) 

<a id="p100155"></a>Рисунок 1. Люминометрическая полистирольная кювета

</div>




<div align="center">

<a id="p100156"></a> ![4. Методика определения](https://i.bukva.ai/d6iqSQ91/img_1.png) 

<a id="p100157"></a>Рисунок 2. Штатив для люминометрической кюветы

</div>




<div align="center">

<a id="p100158"></a> ![4. Методика определения](https://i.bukva.ai/d6iqSQ91/img_2.png) 

<a id="p100159"></a>Рисунок 3. Резиновый наконечник к медицинскому шприцу

</div>






<div align="right">

<a id="p100160"></a>Приложение Б<br>
(рекомендуемое)

</div>


<div align="center">

<a id="p100161"></a>**ПЕРЕГОННАЯ УСТАНОВКА**

<a id="p100162"></a> ![4. Методика определения](https://i.bukva.ai/d6iqSQ91/img_3.png) 

<a id="p100163"></a>1 - нагреватель; 2 - термометр; 3 - холодильник;<br>
4 - вакуумметр; 5 - охлаждаемая склянка; 6 - приемник<br>
фракций; 7 - круглодонная колба; 8 - капилляр

<a id="p100164"></a>Рисунок Б.1

</div>







## <a id="p100165"></a>БИБЛИОГРАФИЯ



1. <a id="p100166"></a>ЮУВА 414236.001 ТУ
2. <a id="p100167"></a>Каталог ООО "Люмтек", N по каталогу LR09, или каталог фирмы New
   Horizons Diagnostics Corp., США N по каталогу 89-117021
3. <a id="p100168"></a>ТУ 9452-002-33189998-2002. Дозаторы пипеточные с двойным
   термостатированным цветным корпусом, фиксированными и переменными
   объемами одно- и многоканальные "Колор"
4. <a id="p100169"></a>ТУ 9452-002-33189998-2002. Наконечники полимерные одноразовые
   к дозаторам пипеточным НП - "Термоэлектрон"
5. <a id="p100170"></a>Каталог фирмы Millipore, Франция, N по каталогу ZMQS500TY
6. <a id="p100171"></a>ТУ 2639-001-17919612-2002. АТФ-реагент для биолюминесцентного
   определения АТФ. Чистый
7. <a id="p100172"></a>Каталог фирмы Sigma, N по каталогу A7699
8. <a id="p100173"></a>ТУ 2639-002-17919612-2002. BPN-реагент. Чистый
9. <a id="p100174"></a>ТУ 2639-003-17919612-2002. Промывочный раствор для подготовки образцов
   к АТФ-метрии. Чистый
10. <a id="p100175"></a>Диметилсульфоксид Р 75/244/9, утвержденный Фармакологическим
   Государственным Комитетом Минздрава России от 15.03.1999.
   <a id="p100176"></a>------------------------------------------------------------------
