ГОСТ Р 51469-99. Государственный стандарт Российской Федерации. Казеины и казеинаты. Фотометрический метод определения массовой доли лактозы
Актуально на 30.10.2026.
Как цитировать: "ГОСТ Р 51469-99. Государственный стандарт Российской Федерации. Казеины и казеинаты. Фотометрический метод определения массовой доли лактозы". ГОСТ Р 51469-99. https://bukva.ai/docs/gost-r-51469-99
(принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 22.12.1999 № 624-ст)
Примечание
Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности молока и молочной продукции» (ТР ТС 033/2013) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 26.05.2014 № 80). Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Комиссии Таможенного союза от 09.12.2011 № 880). Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 № 02-03-48/563). Документ включен в Перечень национальных стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимых для применения и исполнения Федерального закона «Технический регламент на молоко и молочную продукцию» и осуществления оценки соответствия (Распоряжение Правительства РФ от 15.12.2008 № 1866-р). С 01.07.2003 до вступления в силу технических регламентов акты федеральных органов исполнительной власти в сфере технического регулирования носят рекомендательный характер и подлежат обязательному исполнению только в части, соответствующей целям, указанным в п. 1 ст. 46 Федерального закона от 27.12.2002 № 184-ФЗ. Документ введен в действие с 01.01.2001.
от 22 декабря 1999 г. № 624-ст
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ ЛАКТОЗЫ
Caseins and caseinates. Photometric method for determination of lactose content
Предисловие
1. Разработан Государственным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом молочной промышленности (ГУ ВНИМИ).
Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 186 «Молоко и молочные продукты».
2. Принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. № 624-ст.
3. Настоящий стандарт гармонизирован с международным стандартом ИСО 5548-80 «Казеины и казеинаты. Определение содержания лактозы. Фотометрический метод».
1. Область применения
Настоящий стандарт распространяется на казеины и казеинаты массовой долей углеводов не более 2%. Стандарт устанавливает фотометрический метод определения массовой доли лактозы и других растворимых углеводов.
Метод основан на растворении навески продукта в горячей воде или растворе, осаждении осадка фильтрации, окраске безбелкового осадка углеводов, фотометрического измерения и определения массовой доли лактозы в соответствии с калибровочным графиком.
2. Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 61-75 Кислота уксусная. Технические условия
ГОСТ 199-78 Натрий уксуснокислый 3-водный. Технические условия
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия
ГОСТ 3118-77 Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 4201-79 Натрий углекислый кислый. Технические условия
ГОСТ 4204-77 Кислота серная. Технические условия
ГОСТ 6859-72 Приборы для отмеривания и отбора жидкостей. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 19814-74 Кислота уксусная синтетическая и регенерированная. Технические условия
ГОСТ 23519-93 Фенол синтетический технический. Технические условия
ГОСТ 24104-88 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу
ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1
ГОСТ 29251-91 Посуда лабораторная стеклянная. Бюретки. Часть 1. Общие требования
ИСО 707-97 <*> Молоко и молочные продукты. Методы отбора проб.
<*> Действует до введения в действие ГОСТ Р, разработанного на основе соответствующего ИСО.
3. Определение
В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением.
Массовая доля лактозы в казеинах и казеинатах: отношение массы растворимых углеводов к массе навески продукта, умноженное на 100.
4. Аппаратура, материалы и реактивы
Дозаторы серной кислоты по ГОСТ 6859 вместимостью 10 см3.
Весы лабораторные по ГОСТ 24104 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г и ценой поверочного деления 0,001 г.
Устройство измельчающее, без нагрева пробы при измельчении и без потери или поглощения влаги.
Колбы конические по ГОСТ 25336 вместимостью 100 и 500 см3.
Сито из проволочной сетки диаметром 200 мм, размером стороны ячейки 500 мкм.
Пробирки с притертыми пробками по ГОСТ 1770 вместимостью 40 см3.
Пипетки по ГОСТ 29227 исполнения 2, 1-го и 2-го класса точности, вместимостью 1, 2 и 10 см3.
Микропипетки вместимостью 0,2 см3 и ценой деления 0,001 см3.
Баня водяная с возможностью установки температур (20 +/- 1) °C и от 60 °C до 70 °C.
Цилиндры мерные по ГОСТ 1770 2-го класса точности вместимостью 25 см3.
Фотоэлектроколориметр диапазоном измерения при длине волны 490 нм, с кюветами размером оптического пути от 1 до 2 см.
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Натрий углекислый кислый (NaHCO_{3}) по ГОСТ 4201, ч.д.а.
Натрия трифосфат (Na_{5}P_{3}O_{10}) по технической документации, ч.д.а.
Кислота соляная по ГОСТ 3118, раствор концентрации 0,1 моль/дм3, х.ч.
Кислота серная концентрированная по ГОСТ 4204, плотностью 1,84 г/см3, раствор концентрации 1 моль/дм3, х.ч.
Кислота уксусная по ГОСТ 61, раствор 100 г уксусной кислоты в 1 дм3 дистиллированной воды, х.ч.
Натрий уксуснокислый (CH_{3}COONa) по ГОСТ 199, раствор концентрации 1 моль/дм3, ч.д.а.
Фенол по ГОСТ 23519, раствор с массовой долей фенола 80%.
Кислота уксусная синтетическая и регенерированная по ГОСТ 19814.
Допускается применять другие средства измерений с метрологическими характеристиками и оборудование с техническими характеристиками не хуже, а также реактивы по качеству не ниже указанных.
5. Отбор проб
Отбор и подготовка проб — по ГОСТ 26809, для экспортно-импортных операций — по ИСО 707.
6. Подготовка к определению
6.1 Подготовка пробы
6.1.1. В колбу вместимостью 250 см3 помещают (50 +/- 1) г казеина или казеината, закрывают колбу пробкой и перемешивают пробу десятикратным переворачиванием и встряхиванием колбы.
6.1.2 Тщательно перемешанную пробу переносят на лабораторное сито.
6.1.3. Если 50 г пробы полностью просеивается через сито, проба пригодна для дальнейшей работы.
6.1.4. Если проба полностью или частично не проходит, измельчают (50 +/- 5) г образца. Пробу просеивают и переносят в колбу вместимостью 250 см3, закрывают пробкой и тщательно перемешивают не менее чем десятикратным переворачиванием колбы. Во время проведения этих работ необходимо исключить попадание влаги в продукт и дальнейшее определение проводить как можно скорее.
6.2 Приготовление растворов для построения калибровочного графика
6.2.1 Раствор лактозы
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают (2,000 +/- 0,001) г безводной лактозы, доливают дистиллированной водой до метки и перемешивают до полного растворения. Раствор хранят при температуре 0 °C.
6.2.2 Приготовление градуированных растворов
6.2.2.1 Раствор А
В мерную колбу вместимостью 100 см3 пипеткой отмеряют 10 см3 раствора лактозы (по 6.2.1) и доливают дистиллированной водой до метки.
В 1 см3 раствора А содержится 2 мг безводной лактозы.
6.2.2.2 Раствор № 1
В мерную колбу вместимостью 100 см3 пипеткой отмеряют 1 см3 раствора А и доливают дистиллированной водой до метки.
В 1 см3 раствора содержится 20 мкг безводной лактозы.
6.2.2.3 Раствор № 2
В мерную колбу вместимостью 100 см3 пипеткой отмеряют 2 см3 раствора А, доливают дистиллированной водой до метки.
В 1 см3 раствора содержится 40 мкг безводной лактозы.
6.2.2.4 Раствор № 3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 пипеткой отмеряют 3 см3 раствора А, доливают дистиллированной водой до метки.
В 1 см3 раствора содержится 60 мкг безводной лактозы.
6.2.2.5 Раствор сравнения
В колбу вместимостью 100 см3 вносят (0,100 +/- 0,001) г углекислого кислого натрия для кислотного казеина или (0,100 +/- 0,001) г трифосфата натрия — для сычужного казеина и доливают 25 см3 дистиллированной воды. Перемешивают встряхиванием и ставят на водяную баню при температуре (65 +/- 5) °C до полного растворения. Далее обработка раствора по 6.3.4.
6.3 Подготовка фильтрата в соответствии с требованиями, изложенными в Приложении А
6.3.1. Навеску массой (1,00 +/- 0,01) г казеина или казеината по 6.1 помещают в коническую колбу вместимостью 100 см3 и добавляют (кроме казеината):
- для кислотного казеина — (0,100 +/- 0,001) г углекислого кислого натрия (NaHCO_{3}) ;
- для сычужного казеина — (0,100 +/- 0,001) г трифосфата натрия (Na_{5}H_{3}O_{10}) .
6.3.2. В колбу доливают 25 см3 дистиллированной воды, ставят на водяную баню температурой от 60 до 70 °C. Колбу периодически перемешивают встряхиванием.
6.3.3. Нагревание проводят в течение 10 — 15 мин до полного растворения навески.
6.3.4 Колбу охлаждают до комнатной температуры и постепенно добавляют:
- 15 см3 дистиллированной воды и перемешивают встряхиванием;
- 8 см3 раствора соляной кислоты или раствора серной кислоты концентрации 0,1 моль/дм3 и перемешивают встряхиванием;
- 1 см3 раствора уксусной кислоты и перемешивают встряхиванием.
Затем добавляют 1 см3 раствора ацетата натрия и перемешивают встряхиванием.
Колбу оставляют до полного осаждения казеинового преципитата.
Раствор фильтруют через сухую фильтровальную бумагу.
7. Проведение определения
7.1. В пробирку вместимостью 40 см3 отмеряют пипеткой 2 см3 фильтрата, добавляют микропипеткой 0,2 см3 раствора фенола массовой долей 80% и перемешивают встряхиванием.
Доливают концентрированную серную кислоту при помощи дозатора со скоростью 5 см3/с. Струю кислоты направляют на поверхность раствора, а не по стенке пробирки, при этом хорошо перемешивают.
Содержимое пробирки вновь тщательно перемешивают встряхиванием и оставляют в покое на 15 мин.
Охлаждают в течение 5 мин на водяной бане при температуре (20 +/- 2) °C и приступают к измерению.
Измеряют оптическую плотность раствора при длине волны 490 нм с использованием раствора сравнения, приготовленного по 6.2.2.5.
Если значение оптической плотности выше верхнего предела, указанного калибровочной кривой, повторяют измерение с использованием 2 см3 разбавленного раствора фильтрата вместо самого фильтрата.
Примечание. Если делается такое разбавление, то в формуле расчета по 8.1 проводят соответствующую корректировку.
7.2 Построение калибровочного графика
В четыре пробирки для анализа помещают 2 см3 каждого из трех градуировочных растворов по 6.2 и приливают к ним 2 см3 дистиллированной воды.
Измеряют оптическую плотность трех градуировочных растворов с использованием раствора сравнения, подготовленного по 6.2.2.5.
Строят калибровочный график нанесением значений массовой концентрации безводной лактозы и результатов измерения оптической плотности.
8. Обработка результатов
8.1 Массовую долю лактозы в навеске M, %, вычисляют по формуле
где c — массовая концентрация безводной лактозы, определенная по градуировочному графику, мкг/см3;
m — масса навески продукта, г;
50 — объем раствора казеина или казеината, см3.
9. Метрологические характеристики
9.1 Сходимость
Разность двух результатов определений, полученных при анализе одной и той же пробы одним и тем же лаборантом за короткий промежуток времени, не должна превышать 0,03% при массовой доле лактозы менее или равной 0,2% и вероятности P = 0,95.
9.2 Воспроизводимость
Разность двух единичных и независимых результатов определений, полученных двумя лаборантами, работающими в разных лабораториях с одной и той же пробой, не должна превышать 0,04% при массовой доле лактозы менее или равной 0,2% и вероятности P = 0,95.
9.3. Если расхождение результатов двух параллельных определений (сходимость) превышает 0,03%, то повторно проводят два новых определения.