---
title: "\"ГОСТ Р 51425-99 (ИСО 6870-85). Государственный стандарт Российской Федерации. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения массовой доли зеараленона\""
number: "ГОСТ Р 51425-99"
issuer: "Государственный комитет Российской Федерации по стандартизации и метрологии"
status: утратил силу
canonical: "https://bukva.ai/docs/gost-r-51425-99"
---

## "ГОСТ Р 51425-99 (ИСО 6870-85). Государственный стандарт Российской Федерации. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения массовой доли зеараленона"

# "ГОСТ Р 51425-99 (ИСО 6870-85). Государственный стандарт Российской Федерации. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения массовой доли зеараленона"

(принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 22.12.1999 N 580-ст)

> [!WARNING]
> Документ утратил силу с 01.03.2016 в связи с изданием Приказа Росстандарта от 19.01.2016 N 10-ст.
> Взамен действует [ГОСТ 31673-2012](https://bukva.ai/docs/gost-31673-2012), утв. Приказом Росстандарта от 29.11.2012 N 1684-ст.
> Документ утратил силу с 01.03.2016 в связи с изданием Приказа Росстандарта от 19.01.2016 N 10-ст. Взамен действует [ГОСТ 31673-2012](https://bukva.ai/docs/gost-31673-2012), утв. Приказом Росстандарта от 29.11.2012 N 1684-ст.
> С 1 июля 2003 года до вступления в силу технических регламентов акты федеральных органов исполнительной власти в сфере технического регулирования носят рекомендательный характер и подлежат обязательному исполнению только в части, соответствующей целям, указанным в пункте 1 статьи 46 Федерального закона от 27.12.2002 N 184-ФЗ.
> Документ [введен](#p100009) в действие с 01.01.2001.

> [!NOTE]
> ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

```mermaid
flowchart LR
  n0["ГОСТ Р 51425-99"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-r-51425-99" "ГОСТ Р 51425-99. Государственный стандарт Российской Федерации. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения массовой доли зеараленона (принят и введен в действие Пост"
  n1["ГОСТ 31673-2012"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/gost-31673-2012" "ГОСТ 31673-2012. Межгосударственный стандарт. Корма для животных. Определение содержания зеараленона (введен в действие Приказом Росстандарта от 29.11.2012 N 1684-ст)"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;
```


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Принят и введен в действие<br>
Постановлением Госстандарта России

</div>

от 22 декабря 1999 г. N 580-ст

<a id="p100002"></a>**ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ**

<a id="p100003"></a>**КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ**

<a id="p100004"></a>**МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ ЗЕАРАЛЕНОНА**

<a id="p100005"></a>Feedstuffs, compound feeds, feed raw materials. Method
for determination of zearalenone fraction of total mass

<a id="p100006"></a>**ГОСТ Р 51425-99**
**(ИСО 6870-85)**

<div align="right">

<a id="p100007"></a>Группа С19

<a id="p100008"></a>ОКС 65.120;<br>
ОКСТУ 9709,<br>
9209,<br>
9296

<a id="p100009"></a>Дата введения

</div>

1 января 2001 года


### <a id="p100010"></a>Предисловие


1. <a id="p100011"></a>Разработан Творческим коллективом с участием представителей Технического комитета по стандартизации ТК 4 "Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы".
<a id="p100012"></a>Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 4 "Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы".
2. <a id="p100013"></a>Принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. N 580-ст.
3. <a id="p100014"></a>Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 6870-85 "Корма для животных. Определение содержания зеараленона", за исключением [разделов 3](#p100024), [6](#p100077).
4. <a id="p100015"></a>Введен впервые.
5. <a id="p100016"></a>Переиздание. Сентябрь 2005 г.


### 1. <a id="p100017"></a>Область применения


<a id="p100018"></a>Настоящий стандарт распространяется на корма, комбикорма, комбикормовое сырье и устанавливает метод определения массовой доли зеараленона.
<a id="p100019"></a>Предел обнаружения зеараленона составляет около 50 мкг/кг.


### 2. <a id="p100020"></a>Сущность метода


<a id="p100021"></a>Анализируемое вещество экстрагируют из навески испытуемого продукта смесью ацетонитрила и раствора хлористого калия, фильтруют, берут аликвоту и обезжиривают ее изооктаном с последующей очисткой смесью ацетонитрила, воды, ацетата свинца и диатомовой земли; после фильтрования экстрагируют аликвотное количество хлороформом, который впоследствии испаряется.
<a id="p100022"></a>Растворяют сухой экстракт смесью бензола и ацетонитрила, аликвотную порцию этого раствора подвергают двухмерной тонкослойной хроматографии. Содержание зеараленона определяют визуально или путем измерения интенсивности флуоресценции пятна в ультрафиолетовом излучении и сравнения с известными количествами зеараленона, нанесенными на ту же пластину, что и экстракт испытуемой пробы.
<a id="p100023"></a>Подтверждение идентичности зеараленона проводят с помощью бисдиазотированного бензидина.


### 3. <a id="p100024"></a>Нормативные ссылки


<a id="p100025"></a>[ГОСТ 13496.0-80](https://bukva.ai/docs/gost-13496-0-80) <*>. Комбикорма, сырье. Методы отбора проб.

<a id="p100026"></a>

---

<a id="p100027"></a><*> Действует до введения в действие ГОСТ Р, разработанного на основе ИСО 6497 [[1]](#p100175).


### 4. <a id="p100028"></a>Реактивы


<a id="p100029"></a>Все реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а.:
<a id="p100030"></a>вода дистиллированная;
<a id="p100031"></a>ацетонитрил;
<a id="p100032"></a>изооктан;
<a id="p100033"></a>хлороформ;
<a id="p100034"></a>смесь бензола и ацетонитрила в объемном соотношении 98:2;
<a id="p100035"></a>Предупреждение - Бензол токсичен при вдыхании и контакте с кожей. Огнеопасен.
<a id="p100036"></a>проявляющие растворители (смесь толуола, этилацетата и муравьиной кислоты в объемном соотношении 6:3:1 и смесь хлороформа и этанола в объемном соотношении 95:5);
<a id="p100037"></a>раствор хлористого калия массовой концентрации 40 г/дм3;
<a id="p100038"></a>раствор уксуснокислого свинца готовят следующим образом:
<a id="p100039"></a>200 г уксуснокислого свинца помещают в мерную колбу с одной отметкой вместимостью 1000 см3, добавляют 3 см3 уксусной кислоты, доводят водой до метки и перемешивают;
<a id="p100040"></a>бисдиазотированный бензидиновый реактив.
<a id="p100041"></a>Приготовление раствора бензидина массовой концентрации 5 г/дм3
<a id="p100042"></a>В мерную колбу вместимостью 100 см3 приливают 20 см3 воды, 1,5 см3 соляной кислоты и вносят 0,5 г бензидина, доводят водой до метки и перемешивают.
<a id="p100043"></a>Раствор следует хранить в защищенном от света месте в склянке из темного стекла.
<a id="p100044"></a>Приготовление реактива
<a id="p100045"></a>Равные объемы растворов бензидина и нитрита натрия массовой концентрации 100 г/дм3 охлаждают примерно до температуры от 0 до минус 5 °C, тщательно перемешивают. Полученный раствор мутный и имеет темно-пурпурный цвет. Перед использованием его доводят до температуры окружающей среды, раствор приобретает желтый цвет.
<a id="p100046"></a>Реактив готовят непосредственно перед использованием;
<a id="p100047"></a>Предупреждение - Бензидин является канцерогенным веществом. Токсичен при вдыхании, контакте с кожей, приеме внутрь.
<a id="p100048"></a>диатомовая земля (цеолит 545), промытая соляной кислотой;
<a id="p100049"></a>азот;
<a id="p100050"></a>зеараленон, стандартный раствор в бензоле массовой концентрации 10 мкг/см3.
<a id="p100051"></a>На спектрометре определяют спектр поглощения раствора в диапазоне длин волн 300 и 330 нм, используя кювету толщиной просвечиваемого слоя 10 мм относительно бензола; регистрируют максимальное поглощение A, которое должно составлять примерно 317 нм.
<a id="p100052"></a>Массовую концентрацию зеараленона c, мкг/см3, рассчитывают по формуле

<a id="p100053"></a> $c = \frac{318A1000}{6060}$ , (1)

<a id="p100054"></a>где 318 - молярная масса зеараленона, г/моль;
<a id="p100055"></a>6060 - коэффициент молярной экстинкции, дм3/моль x см.


### 5. <a id="p100056"></a>Оборудование и материалы


<a id="p100057"></a>Для проведения испытания применяют обычное лабораторное оборудование:
<a id="p100058"></a>мельницу для измельчения продукта до такой степени, чтобы он полностью проходил через сито, диаметр отверстий которого равен 1 мм;
<a id="p100059"></a>встряхиватель со скоростью встряхивания 100 колебаний в минуту;
<a id="p100060"></a>бумагу фильтровальную средней плотности (рыхлая фильтровальная бумага дает мутный раствор, плотная фильтровальная бумага будет забиваться);
<a id="p100061"></a>испаритель ротационный с круглодонной колбой;
<a id="p100062"></a>оборудование для тонкослойной хроматографии, т.е. оборудование для подготовки пластин и нанесения пятен (капиллярные пипетки или микрошприцы), емкость для проявления и распылитель для напыления реактива на пластины (пульверизатор);
<a id="p100063"></a>пластины стеклянные для тонкослойной хроматографии размером 200 x 200 мм подготавливают следующим образом: 30 г силикагеля G-HR помещают в коническую колбу, приливают 60 см3 воды, закрывают и тщательно перемешивают в течение 1 мин. Полученную суспензию наносят на пластины таким образом, чтобы получить равномерный слой толщиной 0,25 мм. Высушивают слой на воздухе и хранят пластины в эксикаторе. Перед использованием пластины активируют, выдерживая их в печи при температуре 110 °C в течение 1 ч.
<a id="p100064"></a>Указанного количества суспензии силикагеля достаточно для подготовки 5 пластин.
<a id="p100065"></a>Допускается использовать пластины промышленного применения, если результаты, полученные с их применением, будут сравнимы с результатами, полученными на пластинах, подготовленных по вышеописанному способу;
<a id="p100066"></a>лампы ультрафиолетовые с короткой длиной волны (253 нм).
<a id="p100067"></a>Интенсивность излучения должна обеспечивать четкую видимость пятна в 25 нг зеараленона на тонкослойной пластине при установке лампы на расстоянии 100 мм от пластины;
<a id="p100068"></a>Предупреждение - При работе с ультрафиолетовыми лучами в целях безопасности следует надевать защитные очки.
<a id="p100069"></a>пробирки с полиэтиленовой пробкой вместимостью 10 см3;
<a id="p100070"></a>флуороденситометр (при наличии);
<a id="p100071"></a>баню водяную температурой 60 °C;
<a id="p100072"></a>колбы конические с притертой пробкой вместимостью 500 см3;
<a id="p100073"></a>воронки делительные вместимостью 250 см3;
<a id="p100074"></a>цилиндры мерные вместимостью 100 и 250 см3;
<a id="p100075"></a>пипетки вместимостью 50 и 100 см3;
<a id="p100076"></a>микрошприцы.


### 6. <a id="p100077"></a>Отбор проб


<a id="p100078"></a>Отбор проб - по [ГОСТ 13496.0](https://bukva.ai/docs/gost-13496-0-80).


### 7. <a id="p100079"></a>Порядок проведения испытания



#### <a id="p100080"></a>7.1 Подготовка испытуемой пробы

<a id="p100081"></a>Пробу, предназначенную для испытания, измельчают так, чтобы она полностью проходила через сито с отверстиями диаметром 1 мм. Тщательно перемешивают.

#### <a id="p100082"></a>7.2 Взятие навески для проведения испытаний

<a id="p100083"></a>50 г испытуемой пробы взвешивают в конической колбе с точностью 0,01 г.

#### <a id="p100084"></a>7.3 Экстрагирование

<a id="p100085"></a>В колбу с навеской приливают 180 см3 ацетонитрила и 20 см3 раствора хлористого калия, тщательно отмеренные мерным цилиндром. Закрывают колбу, перемешивают и устанавливают на встряхиватель на 30 мин. Затем содержимое колбы фильтруют через фильтровальную бумагу.
<a id="p100086"></a>100 см3 фильтрата переливают пипеткой в делительную воронку, где фильтрат двукратно обезжиривают изооктаном по 50 см3 каждый раз.
<a id="p100087"></a>Ацетонитриловую фазу переносят в круглодонную колбу ротационного испарителя и высушивают досуха при пониженном давлении.

#### <a id="p100088"></a>7.4 Очистка

<a id="p100089"></a>К полученному остатку приливают 20 см3 ацетонитрила, 60 см3 воды и 20 см3 раствора уксуснокислого свинца, тщательно отмеренных мерным цилиндром. Перемешивают и ставят в водяную баню на 10 мин при температуре 60 °C для образования осадка. Затем добавляют 5 г диатомовой земли, перемешивают и фильтруют через фильтровальную бумагу.
<a id="p100090"></a>50 см3 фильтрата отбирают пипеткой в делительную воронку и проводят тройную переэкстракцию хлороформом по 50 см3 каждый раз. Хлороформную фракцию высушивают над сульфатом натрия. Собирают фракции хлороформа в круглодонную колбу ротационного испарителя и высушивают досуха при пониженном давлении.
<a id="p100091"></a>Сухой остаток растворяют в хлороформе и количественно переносят в пробирку, затем высушивают досуха в токе азота на водяной бане.
<a id="p100092"></a>При помощи микрошприца осторожно добавляют в пробирку 0,5 см3 бензол-ацетонитриловой смеси и пробирку плотно закрывают пробкой.

#### <a id="p100093"></a>7.5 Проведение двухмерной тонкослойной хроматографии


##### <a id="p100094"></a>7.5.1 Нанесение растворов (рисунок 1)


<a id="p100095"></a> ![7. Порядок проведения испытания](https://i.bukva.ai/2dCuLe45/img_0.png) 

<div align="center">

<a id="p100096"></a>Рисунок 1. Нанесение растворов и проявление хроматограммы

</div>


<a id="p100097"></a>На пластине проводят две прямые линии, параллельные прилегающим сторонам (на расстоянии от краев на 50 и 60 мм соответственно), с целью отметки границы перемещения растворителей.
<a id="p100098"></a>С помощью микрошприцев на пластину наносят растворы в точках по схеме, указанной на рисунке 1.
- <a id="p100099"></a>A - 25 мкдм3 очищенного экстракта.
- <a id="p100100"></a>B - 10 мкдм3 стандартного раствора.
- <a id="p100101"></a>C - 5 мкдм3 стандартного раствора.
- <a id="p100102"></a>D - 10 мкдм3 стандартного раствора.
- <a id="p100103"></a>E - 15 мкдм3 стандартного раствора.
<a id="p100104"></a>Высушивают пластину струей воздуха или азотом.
<a id="p100105"></a>Полученные пятна должны быть диаметром около 5 мм.

##### <a id="p100106"></a>7.5.2 Проявление [(рисунок 1)](#p100096)

<a id="p100107"></a>Проявляют хроматограмму в направлении 1, используя смесь толуола, этилацетата и муравьиной кислоты в объемном соотношении 6:3:1 слоем в 10 мм в насыщенной камере для хроматографирования, защищенной от воздействия света, до тех пор, пока фронт растворителя не достигнет линии отметки. Вынимают пластину из камеры и дают подсохнуть около 15 мин при температуре окружающей среды в защищенном от света месте.
<a id="p100108"></a>*Примечание.* После проявления в направлении 1 хроматограмму просматривают в ультрафиолетовом свете с длиной волны 253 нм и возможные пятна зеараленона отмечают карандашом (пятно в точке B свидетельствует о наличии зеараленона).

<a id="p100109"></a>Далее проводят хроматографирование в направлении 2, используя для этой цели смесь хлороформа и этанола в объемном соотношении 95:5 слоем 10 мм в ненасыщенной камере в защищенном от света месте, пока фронт растворителя не достигнет линии отметки. Вынимают пластину из камеры и подсушивают ее при температуре окружающей среды в защищенном от света месте.

#### <a id="p100110"></a>7.6 Определение

<a id="p100111"></a>Для определения используют два способа: визуальный или флуороденситометрическое измерение. Последний способ используют при наличии аппарата.

##### <a id="p100112"></a>7.6.1 Визуальное определение

<a id="p100113"></a>Определяют количество зеараленона в экстракте путем сравнения интенсивности флуоресценции в ультрафиолетовом свете пятна экстракта испытуемой пробы с интенсивностью свечения пятен C, D и E стандартного раствора, поместив пластину на расстоянии 10 см от ультрафиолетовой лампы. При необходимости осуществляют интерполирование полученных данных.
<a id="p100114"></a>Если интенсивность флуоресценции пятна экстракта испытуемой пробы объемом 25 мкдм3 превышает интенсивность свечения пятна стандартного раствора зеараленона объемом 15 мкдм3, то наносят меньший объем экстракта в точку A или разбавляют экстракт смесью бензола с ацетонитрилом и повторяют тонкослойное хроматографирование, начиная с [7.5](#p100093).

##### <a id="p100115"></a>7.6.2 Флуороденситометрическое определение

<a id="p100116"></a>Измеряют интенсивность флуоресценции пятен флуороденситометром, например на волне возбуждения в 313 нм и волне эмиссии в 443 нм (максимальная эмиссия при 470 нм).
<a id="p100117"></a>Определяют содержание зеараленона в экстракте, нанесенном на пластину, путем сравнения интенсивности флуоресценции пятна экстракта с интенсивностью свечения пятен C, D и E стандартного раствора.

#### <a id="p100118"></a>7.7 Проверочное испытание на присутствие зеараленона

<a id="p100119"></a>Напыляют на пластину, подготовленную по [7.5](#p100093), бисдиазотированный бензидин. Зеараленон дает яркое кирпично-красное пятно при температуре окружающей среды, выцветающее после 15-минутной экспозиции на воздухе.


### 8. <a id="p100120"></a>Обработка результатов



#### <a id="p100121"></a>8.1 Визуальное определение

<a id="p100122"></a>Содержание зеараленона X, мкг/кг, рассчитывают по формуле

<div align="center">

<a id="p100123"></a> $X = \frac{cV_{1}V_{3}}{mV_{2}}$ , (2)

</div>


<a id="p100124"></a>где c - массовая концентрация зеараленона в стандартном растворе, мкг/см3;
<a id="p100125"></a> $V_{1}$ - конечный объем экстракта с учетом возможных разбавлений, мкдм3;
<a id="p100126"></a> $V_{3}$ , $V_{2}$ - объемы стандартного раствора зеараленона и экстракта соответственно, с одинаковой интенсивностью флуоресценции, мкдм3;
<a id="p100127"></a>m - масса исследуемой пробы, соответствующая объему экстракта, подвергнутого очистке, г (12,5).

#### <a id="p100128"></a>8.2 Флуороденситометрическое определение

<a id="p100129"></a>Содержание зеараленона $X_{1}$ , мкг/кг, рассчитывают по формуле

<div align="center">

<a id="p100130"></a> $X_{1} = \frac{m_{1}V_{1}}{mV_{2}}$ , (3)

</div>


<a id="p100131"></a>где $m_{1}$ - масса зеараленона в пятне экстракта (с учетом объема $V_{2}$ ), выявленная при определении, нг;
<a id="p100132"></a> $V_{1}$ - конечный объем экстракта с учетом возможных разбавлений, мкдм3;
<a id="p100133"></a>m - масса исследуемой пробы, соответствующая объему экстракта, подвергнутого очистке, г (12,5);
<a id="p100134"></a> $V_{2}$ - объем экстракта, наносимого на пластину, мкдм3 (25 мкдм3).


### 9. <a id="p100135"></a>Точность


<a id="p100136"></a>Международные испытания, проведенные в 20 лабораториях (из которых только 16 представили результаты, приемлемые для кукурузы B), каждая из которых провела 3 измерения, позволили получить статистические данные, приведенные в таблице 1.

<div align="right">

<a id="p100137"></a>Таблица 1

<a id="p100138"></a>В микрограммах на килограмм

</div>


<table>
<colgroup><col width="59%"><col width="18%"><col width="23%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100139"></a>Проба</td><td><a id="p100140"></a>Кукуруза A</td><td><a id="p100141"></a>Кукуруза B (кукуруза A, разбавленная на 1/3)</td></tr>
<tr><td><a id="p100142"></a>Количество лабораторий, представивших необходимые результаты</td><td><a id="p100143"></a>20</td><td><a id="p100144"></a>15</td></tr>
<tr><td><a id="p100145"></a>Средняя величина</td><td><a id="p100146"></a>734</td><td><a id="p100147"></a>219</td></tr>
<tr><td><a id="p100148"></a>Стандартные отклонения повторяемости $S_{r}$</td><td><a id="p100149"></a>78</td><td><a id="p100150"></a>34</td></tr>
<tr><td><a id="p100151"></a>Коэффициент отклонения повторяемости</td><td><a id="p100152"></a>11%</td><td><a id="p100153"></a>15%</td></tr>
<tr><td><a id="p100154"></a>Повторяемость $2,83S_{r}$</td><td><a id="p100155"></a>221</td><td><a id="p100156"></a>96</td></tr>
<tr><td><a id="p100157"></a>Стандартное отклонение воспроизводимости или сходимости $S_{R}$</td><td><a id="p100158"></a>282</td><td><a id="p100159"></a>125</td></tr>
<tr><td><a id="p100160"></a>Коэффициент отклонения воспроизводимости или сходимости, %</td><td><a id="p100161"></a>38</td><td><a id="p100162"></a>57</td></tr>
<tr><td><a id="p100163"></a>Воспроизводимость или сходимость $2,83S_{R}$</td><td><a id="p100164"></a>798</td><td><a id="p100165"></a>354</td></tr>
<tr><td colspan="3"><a id="p100166"></a>Примечание. Кукуруза B - это кукуруза A, разбавленная 3 раза кукурузой, не содержащей зеараленон.</td></tr>
</table>



### 10. <a id="p100167"></a>Оформление результатов испытания


<a id="p100168"></a>В отчете об испытании должны быть указаны:

<div align="right">

- <a id="p100169"></a>используемый метод;<br>
- <a id="p100170"></a>полученные результаты;

</div>

- <a id="p100171"></a>любые условия проведения испытаний, не установленные данным стандартом и касающиеся подробностей, которые могут повлиять на конечный результат.

<div align="center">

<a id="p100172"></a>В отчете должны быть все данные, необходимые для полной идентификации пробы.

</div>






<a id="p100173"></a>Приложение А
(справочное)

<a id="p100174"></a>**БИБЛИОГРАФИЯ**

<div align="center">

<a id="p100175"></a>[1] ИСО 6497. Корма для животных. Методы отбора проб.

</div>




<a id="p100176"></a>

---