ГОСТ Р 51239-98 (ДИН 1138-94). Государственный стандарт Российской Федерации. Соки фруктовые и овощные. Метод определения L-яблочной кислоты
(принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 25.12.1998 № 462)
Внимание
Документ утратил силу с 1 июля 2019 года в связи с изданием Приказа Росстандарта от 27.06.2018 № 365-ст. Взамен введен в действие ГОСТ 34409-2018. Документ утратил силу с 1 июля 2019 года в связи с изданием Приказа Росстандарта от 27.06.2018 № 365-ст. Взамен введен в действие ГОСТ 34409-2018. Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «Требования безопасности пищевых добавок, ароматизаторов и технологических вспомогательных средств» (ТР ТС 029/2012) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 07.02.2018 № 21). Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований Технического регламента Таможенного союза «Требования безопасности пищевых добавок, ароматизаторов и технологических вспомогательных средств» (ТР ТС 029/2012) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 02.10.2012 № 258). Документ был включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований Технического регламента Таможенного союза «Технический регламент на соковую продукцию из фруктов и овощей» (ТР ТС 023/2011) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Комиссии Таможенного союза от 09.12.2011 № 882). Документ включен в Перечень национальных стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения Федерального закона «Технический регламент на соковую продукцию из фруктов и овощей» и осуществления оценки соответствия (Распоряжение Правительства РФ от 19.05.2009 № 690-р). Документ введен в действие с 1 июля 1999 года.
ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ
flowchart LR n0["ГОСТ Р 51239-98"]:::rst click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-r-51239-98" "ГОСТ Р 51239-98. Государственный стандарт Российской Федерации. Соки фруктовые и овощные. Метод определения L-яблочной кислоты (принят и введен в действие Постановлением Госстандар" n1["ГОСТ 34409-2018"]:::doc click n1 "https://bukva.ai/docs/standart-gost-34409-2018" "ГОСТ 34409-2018. Межгосударственный стандарт. Продукция соковая. Определение L-яблочной кислоты ферментативным методом (введен в действие Приказом Росстандарта от 27.06.2018 N 365-" n0 --> n1 classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000; classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000; classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;
от 25 декабря 1998 г. № 462
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ L-ЯБЛОЧНОЙ КИСЛОТЫ
Fruit and vegetable juices. Determination of L-malic acid content
Предисловие
1. Разработан Московским государственным университетом пищевых производств.
Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность».
2. Принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 25 декабря 1998 г. № 462.
3. Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст национального стандарта ФРГ ДИН 1138-94 «Фруктовые и овощные соки. Ферментативное определение L-яблочной кислоты. Спектрофотометрическое определение НАДФ (никотинамидадениндинуклеотида)» с дополнительными требованиями, отражающими потребности народного хозяйства (разделы 2, 5, 7, 8 и 9 и пункты 6.1 и 6.5).
1. Область применения
Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодержащие напитки и устанавливает метод определения массовой концентрации L-яблочной кислоты в виде свободной кислоты или соли.
2. Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 3769-78 Аммоний сернокислый. Технические условия
ГОСТ 4328-77 Натрия гидроокись. Технические условия
3. Определение, обозначения и сокращения
3.1 В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями:
Массовая концентрация L-яблочной кислоты во фруктовых и овощных соках, нектарах и сокосодержащих напитках: массовая концентрация L-яблочной кислоты, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в г/дм3.
3.2 В настоящем стандарте применяют следующие обозначения и сокращения:
НАДН — \beta - \text{никотинамидадениндинуклеотид} (восстановленная форма);
ГОТ — глутаматоксалоацетаттрансаминаза;
Е — международная единица, определяющая количество (активность) фермента, которое служит катализатором для превращения при 25 °C 1 мкмоля вещества в минуту.
4. Сущность метода и реакции
Метод [1, 2] основан на ферментативном преобразовании L-яблочной кислоты в оксалоацетат под действием НАД в присутствии L-МДГ, смещении равновесия реакции путем связывания образовавшегося оксалоацетата L-глутаматом в присутствии ГОТ и спектрофотометрическом измерении массовой концентрации образовавшегося НАДН, эквивалентной массовой концентрации L-яблочной кислоты в пробе [1, 2].
L - \text{яблочная кислота } + \text{НАД}^{+} \leftarrow ^{L - \text{МДГ}} \rightarrow \text{оксалоацетат } + \text{НАДН } + \text{Н}^{+} , (1)
\text{оксалоацетат } + L - \text{глутамат } \leftarrow ^{\text{ГОТ}} \rightarrow L - \text{аспарат } + \alpha - \text{кетоглутарат} . (2)
5. Реактивы
5.1 Общие требования
Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов для определения L-яблочной кислоты при условии, что качество реагентов не ниже указанного в настоящем стандарте.
Препараты глицилглицина, L-глутаминовой кислоты и НАД должны содержать не менее 90% основного вещества.
5.2 Глицилглициновый буферный раствор активной кислотности 10,0 pH
4,75 г глицилглицина и 0,88 г L-глутаминовой кислоты растворяют в 50 см3 дистиллированной воды по ГОСТ 6709. Устанавливают активную кислотность раствора равной 10,0 pH приблизительно 4,6 см3 раствора гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 молярной концентрации с (NaOH) = 10 моль/дм3. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 60 см3. Буферный раствор устойчив при температуре 4 °C 3 мес.
5.3 Раствор НАД
0,420 г НАД растворяют в 12 см3 дистиллированной воды. Раствор устойчив при температуре 4 °C 1 мес.
5.4 Суспензия фермента ГОТ
Раствор глутаматоксалоацетаттрансаминазы массовой концентрации 0,002 г/см3, содержащий L-аспартат и \alpha - \text{кетоглутарат} в качестве субстрата, смешивают с раствором сернокислого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации c((NH_{4})_{2}SO_{4}) = 3,2\text{моль}/\text{дм}^{3} . Удельная активность суспензии ГОТ составляет не менее 400 Е/см3. Суспензия устойчива при температуре 4 °C 12 мес.
5.5 Суспензия фермента L-МДГ
Раствор L-малатдегидрогеназы массовой концентрации 0,005 г/см3 смешивают с раствором сернокислого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации c((NH_{4})_{2}SO_{4}) = 3,2\text{моль}/\text{дм}^{3} . Удельная активность суспензии L-МДГ составляет не менее 6000 Е/см3. Суспензия устойчива при температуре 4 °C 12 мес.
6. Аппаратура
Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1 - 6.4.
6.1. Дозаторы пипеточные объемами доз 100, 50 и 25 см3 и относительной погрешностью дозирования +/- 1% [3] или пипетки градуированные номинальной вместимостью 2,0; 1,0; 0,5; 0,2; 0,1 и 0,02 см3 и допускаемой относительной погрешностью +/- 1%.
6.2. Кюветы фотометрические из оптического стекла или пластмассы толщиной поглощающего слоя 1 см для измерений при длинах волн 334, 340 или 365 нм.
6.3. Шпатели пластиковые или палочки стеклянные оплавленные длиной от 10 до 15 см для перемешивания содержимого кюветы при проведении фотометрических измерений.
6.4. Спектрофотометр или фотометр фотоэлектрический для измерений при длинах волн 334, 340 или 365 нм, допускаемой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания +/- 1%.
6.5. Весы лабораторные общего назначения наибольшим пределом взвешивания 20 г и допускаемой погрешностью +/- 0,0001 г.
7. Проведение испытания
7.1 Подготовка пробы к испытанию
Как правило, пробы не нуждаются в особых методах подготовки к испытаниям. Результаты испытания по настоящей методике выражают в граммах на кубический дециметр.
Испытания концентрированных продуктов проводят после их разбавления дистиллированной водой до получения значения относительной плотности разбавленного продукта согласно рецептурам натурального сока, нектара или сокосодержащего напитка. При этом относительную плотность разбавленной пробы выражают в граммах на кубический дециметр.
Результаты испытаний концентрированного продукта могут быть также выражены в граммах на килограмм. При расчете результата испытаний учитывают массу пробы концентрированного продукта и фактор разбавления.
При испытании продуктов высокой вязкости и/или с очень большим содержанием мякоти результаты испытаний выражают в граммах на килограмм продукта.
Сильно окрашенные продукты рекомендуется разбавить в большей степени, чем указано ниже. При этом пробы с очень низкой концентрацией L-яблочной кислоты рекомендуется предварительно осветлить путем центрифугирования.
Пробу разбавляют дистиллированной водой до получения значения массовой концентрации L-яблочной кислоты в интервале от 0,02 до 0,35 г/дм3. Допускается использование при проведении испытания окрашенной разбавленной пробы.
7.2 Определение
7.2.1 Общие требования
Определения проводят при постоянной температуре в интервале от 20 до 25 °C. Допускается проводить определения при постоянной температуре в интервале от 25 до 37 °C при условии получения равноценных результатов.
Абсорбционный максимум НАДН находится при длине волны 340 нм. При использовании спектрофотометра переменной длины волны все измерения проводят в максимуме поглощения света НАДН. При использовании спектрофотометра с ртутной лампой измерения проводят при длинах волн 334 или 365 нм.
Для дозирования буферных растворов, а также растворов проб, ферментов и коферментов используют только градуированные пипетки или автоматические дозаторы.
7.2.2 Контрольный раствор
В фотометрическую кювету вносят 1,00 см3 буферного раствора по 5.2, 0,20 см3 раствора НАД по 5.3, 1,50 см3 дистиллированной воды и 0,01 см3 суспензии ГОТ по 5.4. Смесь перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой, выдерживают 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора относительно оптической плотности воздуха — (A_{1})_{\text{к}} .
7.2.3 Раствор пробы
В кювету спектрофотометра (фотометра) вносят 1,00 см3 буферного раствора по 5.2, 0,20 см3 раствора НАД по 5.3, 1,40 см3 дистиллированной воды, 0,01 см3 суспензии ГОТ по 5.4 и 0,1 см3 подготовленной пробы. Смесь перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой, выдерживают 3 мин и измеряют оптическую плотность раствора относительно оптической плотности воздуха — (A_{1})_{\text{пр}} .
7.2.4 Ферментативная реакция и количественное определение
В каждую из кювет с контрольным раствором по 7.2.2 и раствором пробы по 7.2.3 вносят по 0,01 см3 суспензии L-МДГ по 5.5 и перемешивают пластиковым шпателем или стеклянной палочкой. По окончании реакции (через 5 — 10 мин) измеряют оптические плотности растворов относительно оптической плотности воздуха — (A_{2})_{\text{пр}} и (A_{2})_{\text{к}} . Окончание реакции проверяют повторным считыванием показаний прибора через 2 мин.
8. Выражение результатов
8.1. В ферментативных реакциях, лежащих в основе данного метода, образующийся в кювете НАДН приводит к изменению оптической плотности раствора (\Delta A) , а его массовая концентрация пропорциональна массовой концентрации L-яблочной кислоты в пробе.
\Delta A = (A_{2} - A_{1})_{\text{пр}} - (A_{2} - A_{1})_{\text{к}} . (3)
8.2. Массовую концентрацию L-яблочной кислоты в пробе \rho , г/см3, вычисляют в соответствии с законом Ламберта-Бера по формуле
где M — молярная масса L-яблочной кислоты, 134,09 г/моль;
V_{1} — общий объем раствора в кювете, см3;
F — фактор разбавления по 7.1;
\epsilon — молярный коэффициент поглощения НАДФН, \text{дм}^{3} \cdot \text{ммоль}^{- 1} \cdot \text{см}^{- 1} :
- при длине волны 340 нм — 6,3,
- при длине волны 365 нм — 3,4 (ртутная лампа),
- при длине волны 334 нм — 6,18 (ртутная лампа);
Если нет отклонений от объемов, указанных в 7.2.3, то
\rho = 3,647 \cdot \frac{F\Delta A}{\epsilon} . (5)
8.3. При использовании имеющихся в продаже наборов реактивов численный коэффициент (3,647) в уравнении (5) может быть иным из-за изменения общего объема раствора (V_{1}) в кювете.
8.4. За результат испытаний принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, округленное до сотых долей.
9. Точность определения
9.1 Сходимость
Абсолютное расхождение между результатами двух параллельных определений, выполненных в одной лаборатории, не должно превышать более чем в 5% случаев значения показателя сходимости r, г/дм3, рассчитываемого по формуле
где \rho_{1} — среднее арифметическое результатов двух параллельных определений.
9.2 Воспроизводимость
Абсолютное расхождение между результатами двух измерений, выполненных в двух лабораториях, не должно превышать более чем в 5% случаев значения показателя воспроизводимости R, г/дм3, рассчитываемого по формуле
где \rho_{2} — среднее арифметическое результатов двух измерений.
10. Отчет об испытании
- информация, которая необходима для идентификации пробы (виды пробы, ее происхождение, описание);
- ссылка на настоящий стандарт;
- дата и способ отбора пробы (если возможно);
- дата доставки пробы;
- результаты испытаний и наименования единиц измерений, в которых они приводятся;
- информация о выполнении условий воспроизводимости метода;
- замечания об особенностях проведения испытания;
- особые условия проведения испытания, которые не учтены настоящим стандартом, но могли бы оказать влияние на результаты испытания.
(справочное)
СТАТИСТИЧЕСКИЕ РЕЗУЛЬТАТЫ КРУГОВОГО ИСПЫТАНИЯ
Проведенное в соответствии с [4] круговое испытание дало следующие характеристики точности метода, приведенные в таблице А.1.
Испытание проводилось под руководством Отдела пищевой химии Института Макса фон Петтенкофера Федерального министерства здравоохранения, г. Берлин, ФРГ.
Год проведения кругового испытания — 1983.
Число участвовавших лабораторий — 24.