ГОСТ Р 51198-98 (ИСО 4134-78). Государственный стандарт Российской Федерации. Мясо и мясные продукты. Метод определения L-(+)-глутаминовой кислоты

(принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 28.08.1998 № 336)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["ГОСТ Р 51198-98"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-r-51198-98" "ГОСТ Р 51198-98. Государственный стандарт Российской Федерации. Мясо и мясные продукты. Метод определения L-(+)-глутаминовой кислоты (принят и введен в действие Постановлением Госс"
  n1["ГОСТ 34448-2018"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/standart-gost-34448-2018" "ГОСТ 34448-2018. Межгосударственный стандарт. Мясо и мясные продукты. Методы определения L-(+)-глутаминовой кислоты (введен в действие Приказом Росстандарта от 24.08.2018 N 527-ст)"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ L-(+)-ГЛУТАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ

Meat and meat products. Method for determination of L-(+)-glytamic acid content

ГОСТ Р 51198-98

Предисловие

1. Разработан Московской государственной академией пищевых производств.

Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность».

2. Принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 28 августа 1998 г. № 336.

3. Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 4134-78 «Мясо и мясные продукты. Определение содержания L-(+)-глутаминовой кислоты» с дополнительными требованиями, отражающими потребности экономики страны (2, 4, 6.6, 6.8, 6.12, 6.13, 7.1 и 9.1).

4. Введен впервые.

1. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные продукты и устанавливает метод определения L-(+)-глутаминовой кислоты.

2. НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ

ГОСТ 9792-73 Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 9793-74 Продукты мясные. Методы определения влаги

3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Массовая доля L-(+)-глутаминовой кислоты — массовая доля L-(+)-глутаминовой кислоты, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в процентах.

4. СУЩНОСТЬ МЕТОДА

L-(+)-глутаминовую кислоту экстрагируют из пробы продукта, взятой на испытание, ледяным раствором хлорной кислоты. Смесь центрифугируют, фильтруют и доводят активную кислотность фильтрата до требуемого значения. Проводят ферментативное преобразование L-(+)-глутамата в \alpha -кетоглутарат в ходе реакции с никотинамидадениндинуклеотидом (НАД) в присутствии глутаматдегидрогеназы (ГДГ):

Затем окисляют эквивалентное количество восстановленной формы НАДН хлоридом йодонитротетразолия (ИНТ) в присутствии липоаминдегидрогеназы (ЛАДГ):

Измеряют массовую долю образовавшегося формазана на спектрофотометре при длине волны 492 нм.

5. РЕАКТИВЫ

Все реактивы должны быть аналитического качества (не ниже х.ч.). Все растворы, кроме растворов неорганических соединений (5.1 и 5.2), должны храниться в закрытой посуде из темного стекла, тщательно вымытой и пропаренной или стерилизованной.

Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть деминерализованной или бидистиллированной, полученной в стеклянном дистилляторе.

Вода, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб, должна быть дистиллированной или деминерализованной.

Примечание. Однократно дистиллированная вода может содержать ионы металлов, которые снижают активность ферментов, а деминерализованная вода может содержать микроорганизмы, увеличивающие неспецифическую фоновую ферментативную активность и искажающие результаты анализа.

Препарат НАД должен содержать не менее 90% основного вещества.

L-(+)-глутаминовая кислота должна содержать не менее 98% основного вещества.

Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов при условии соответствия качества реактивов требованиям настоящего стандарта.

5.1 Раствор хлорной кислоты c(HClO_{4}) = 1,0\text{моль}/\text{дм}^{3}

8,6 см3 раствора хлорной кислоты массовой доли 70% и плотности 1,67 г/см3 помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят объем раствора до метки водой.

Примечание. При использовании хлорной кислоты меньшей массовой доли проводят перерасчет объема кислоты, используемой для осаждения белков.

5.2 Раствор гидроксида калия c (KOH) = 2 моль/дм3

Растворяют 56,1 г гидроксида калия (KOH) в воде, доводят объем раствора до 500 см3.

5.3 Буферный раствор активной кислотности 8,6 pH

5.3.1. Растворяют 1,86 г гидрохлорида триэтаноламина в воде, доводят активную кислотность раствора до 8,6 pH раствором гидроксида калия (5.2), используя для измерений pH-метр. Затем добавляют 0,68 г октилфенолдекаэтиленгликолевого эфира (например, Тритон X = 100) и доводят объем раствора до 100 см3 водой.

5.3.2. Растворяют 0,86 г двузамещенного фосфорнокислого калия (K_{2}HPO_{4}) и 0,007 г однозамещенного фосфорнокислого калия (KH_{2}PO_{4}) в воде и доводят объем раствора до 100 см3.

5.3.3. Смешивают 20 см3 раствора по 5.3.1 и 5 см3 раствора по 5.3.2.

Раствор хранят при температуре 4 °C.

5.4 Раствор НАД

Навеску НАД массой 0,025 г растворяют в 5,0 см3 воды в небольшой колбе со шлифом, колбу закрывают пробкой.

Раствор устойчив не менее 1 мес при температуре 4 °C.

5.5 Раствор йодонитротетразолия [2-(р-йодофенил)-3-(р-нитрофенил)-5-фенилтетразолия] хлорида (ИНТ-хлорида)

Растворяют 0,030 г ИНТ-хлорида в 50 см3 воды, колбу закрывают пробкой.

Раствор устойчив не менее 2 мес при температуре 4 °C в темноте.

5.6 Раствор ЛАДГ

Растворяют 0,003 г лиофильно высушенной липоаминдегидрогеназы в 1 см3 воды.

Раствор устойчив не менее трех недель при температуре 4 °C.

5.7 Раствор ГДГ

Используют раствор глутаматдегидрогеназы концентрации 10 мг/см3, свободный от сульфата аммония, этилендиаминтетрауксусной кислоты и глутаминазы, поставляемый в готовом виде (например, в расфасовке по 1,0 см3), удельной активностью не менее 900 Е/см3.

Раствор устойчив не менее 12 мес при температуре 4 °C.

5.8 Стандартный раствор L-(+)-глутаминовой кислоты

Растворяют 0,050 г L-(+)-глутаминовой кислоты в 25 см3 воды. Активную кислотность раствора устанавливают 7,0 pH раствором гидроксида калия (5.2), после чего доводят объем раствора до 50 см3.

Раствор хранят при температуре 4 °C и непосредственно перед использованием разводят водой в соотношении объемов 1:49.

6. СРЕДСТВА КОНТРОЛЯ И ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА

Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1 - 6.11.

6.1. Мясорубка механическая лабораторная, снабженная перфорированной пластинкой с отверстиями диаметром не более 4 мм.

6.2 Миксер лабораторный.

6.3 Центрифуга лабораторная с пробирками вместимостью 50 или 100 см3.

6.4. Иономер или pH-метр диапазоном измерений от 1 до 14 pH и допускаемой погрешностью +/- 0,05 pH.

6.5 Фильтры бумажные гофрированные диаметром 15 см.

6.6. Колбы мерные вместимостью 100 и 250 см3 и допускаемой относительной погрешностью +/- 0,2%.

6.7. Дозаторы пипеточные объемами доз 25, 50 и 100 см3 и относительной погрешностью дозирования +/- 1%.

6.8. Пипетки градуированные вместимостью 0,05; 0,2; 0,5 и 2,5 см3 и допускаемой относительной погрешностью +/- 1%.

6.9. Шпатели пластиковые или палочки стеклянные для перемешивания содержимого кюветы при проведении фотометрических измерений.

6.10. Спектрофотометр (фотометр) со следующими техническими характеристиками: спектральный интервал — не более 10 нм; интервал измерений оптической плотности — от 0,000 до 2,000; погрешность установки длины волны — +/- 3 нм; среднее квадратическое отклонение случайной составляющей погрешности измерений — не более 0,15%.

6.11 Кюветы фотометрические толщиной поглощаемого слоя 10 мм.

6.12. Термометр жидкостный стеклянный интервалом измерений от 0 до 100 °C, допускаемой погрешностью измерений +/- 2 °C.

6.13. Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 200 г и допускаемой погрешностью +/- 0,001 г.

7. ПОРЯДОК ПОДГОТОВКИ К ПРОВЕДЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ

7.1 Отбор проб — по ГОСТ 9792.

7.2. Пробу массой не менее 200 г, полученную из репрезентативной выборки, хранят в условиях, предотвращающих порчу и изменение состава.

8. ПОРЯДОК ПРОВЕДЕНИЯ ИЗМЕРЕНИЙ

8.1 Подготовка пробы к проведению измерений

Образец пробы гомогенизируют, дважды пропуская через мясорубку (6.1) и тщательно перемешивая.

Образец хранят не более 24 ч в заполненном доверху и герметически закрытом контейнере таким образом, чтобы предотвратить порчу или изменение состава.

8.2 Навеска для проведения анализа

Взвешивают приблизительно 50 г исследуемого образца с точностью до 10 мг и помещают навеску образца в лабораторный миксер (6.2).

8.3 Приготовление экстракта

8.3.1. К навеске образца в лабораторном миксере добавляют 100 см3 охлажденного льдом раствора хлорной кислоты (5.1) и гомогенизируют.

8.3.2. Часть гомогенизата помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют 10 мин при угловой скорости 3000\text{мин}^{- 1} , затем, осторожно отодвинув слой жира, отфильтровывают супернатант через гофрированный бумажный фильтр (6.5) в коническую колбу вместимостью 200 см3. Первые 10 см3 фильтрата выбрасывают.

8.3.3. 50 см3 подготовленного раствора, который может быть слегка мутным, переносят в стаканчик вместимостью 100 см3 и доводят активную кислотность раствора до 10 pH раствором гидроксида калия (5.2).

8.3.4. Количественно переносят содержимое стаканчика в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят объем раствора до метки водой.

8.3.5. Раствор охлаждают в ледяной бане 20 мин и фильтруют через гофрированный бумажный фильтр (6.5), отбросив первые 10 см3 фильтрата.

8.3.6. 25 см3 фильтрата переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3 и доводят объем фильтрата до метки водой.

Примечание. Объем фильтрата выбирают так, чтобы концентрация L-(+)-глутаминовой кислоты была приблизительно 0,030 г/дм3.

8.4 Определение

8.4.1. Температуру растворов по 5.3 и 8.3.6 доводят до 20 — 25 °C. Для проведения ферментативной реакции берут две фотометрические кюветы (6.11), в каждую из которых пипеточным дозатором (6.5) добавляют:

• 2,50 см3 буферного раствора (5.3);
• 0,20 см3 раствора НАД (5.4);
• 0,20 см3 раствора ИНТ (5.5) и
• 0,05 см3 раствора диафоразы (5.6).

Затем в одну кювету вносят 0,50 см3 экстракта (8.3.6), получая исследуемый раствор, а во вторую — 0,50 см3 воды, получая контрольный раствор.

Растворы в кюветах перемешивают пластиковыми шпателями или стеклянными палочками (6.9) и измеряют оптические плотности относительно воздуха при длине волны 492 нм: A_{1} — оптическая плотность исследуемого раствора, A_{1\text{к}} — оптическая плотность контрольного раствора.

Температура растворов должна быть от 20 до 25 °C.

8.4.2. В каждую кювету вносят по 0,05 см3 раствора ГДГ (5.7) и тщательно смешивают с содержимым, используя шпатель или стеклянную палочку (6.9).

Растворы выдерживают 15 мин. Затем измеряют оптические плотности при длине волны 492 нм, повторяя измерения через каждые 2 мин до достижения постоянных значений.

Строят графики зависимости оптических плотностей растворов от времени и экстраполируют их на момент внесения фермента ГДГ (Приложение А).

Получают экстраполированные значения оптических плотностей исследуемого (A_{2}) и контрольного (A_{2\text{к}}) растворов.

8.4.3. Определяют микромолярный коэффициент оптической плотности формазана, повторяя операции по 8.4.1 и 8.4.2, но заменяя 0,5 см3 экстракта в первой фотометрической кювете на 0,5 см3 стандартного раствора L-(+)-глутаминовой кислоты (5.8).

Получают следующие значения оптических плотностей:

• A_{1}\prime — стандартного раствора L-(+)-глутаминовой кислоты;
• A_{1}\prime_{\text{к}} — контрольного раствора;
• A_{2}\prime — стандартного раствора L-(+)-глутаминовой кислоты;
• A_{2}\prime_{\text{к}} — контрольного раствора.

8.5. Выполняют два параллельных определения в двух пробах из одного и того же образца (8.1).

9. ПРАВИЛА ОБРАБОТКИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ

9.1 Метод расчета

Массовую долю L-(+)-глутаминовой кислоты в пробе X, %, вычисляют по формуле

где \Delta A = (A_{2} - A_{1}) - (A_{2\text{к}} - A_{1\text{к}}) ;

147,1 — молярная масса L-(+)-глутаминовой кислоты;

M — массовая доля влаги в пробе, определенная по ГОСТ 9793;

m — масса навески (8.2), г;

V — объем фильтрата, взятый на определение (8.3.6), см3;

k — микромолярный коэффициент оптической плотности формазана при длине волны 492 нм, см2/мкмоль, рассчитанный по формуле

где \Delta A\prime = (A_{2}\prime - A_{1}\prime) - (A_{2}\prime_{\text{к}} - A_{1}\prime_{\text{к}}) .

За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений при условии выполнения 9.2.

Результат определяют с точностью 0,01%.

9.2 Сходимость

Относительное расхождение результатов двух параллельных определений, выполненных в одной лаборатории, не должно превышать 10% среднего арифметического значения.

10. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ

В отчете об испытании должны быть указаны:

• используемый метод;
• полученные результаты;
• любые условия проведения испытаний, не установленные данным стандартом и касающиеся подробностей, которые могут повлиять на конечный результат.

В отчете должны быть все данные, необходимые для полной идентификации пробы.