ГОСТ Р 50207-92 (ИСО 3496-78). Государственный стандарт Российской Федерации. Мясо и мясные продукты. Метод определения L(-)-оксипролина

(утв. и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 28.08.1992 № 1062)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["ГОСТ Р 50207-92"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-r-50207-92" "ГОСТ Р 50207-92. Государственный стандарт Российской Федерации. Мясо и мясные продукты. Метод определения L(-)-оксипролина (утв. и введен в действие Постановлением Госстандарта Рос"
  n1["ГОСТ 23041-2015"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/standart-gost-23041-2015" "ГОСТ 23041-2015. Межгосударственный стандарт. Мясо и мясные продукты. Метод определения оксипролина (введен в действие Приказом Росстандарта от 17.08.2015 N 1170-ст)"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

от 28 августа 1992 г. № 1062

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ L(-)-ОКСИПРОЛИНА

Meat and meat products. Determination of L(-)-hydroxyproline content

ГОСТ Р 50207-92

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. Подготовлен и внесен Всесоюзным научно-исследовательским и конструкторским институтом мясной промышленности.

Разработчики: В.И. Ивашов, д-р техн. наук; П.П. Веселова; С.А. Мамаева; Е.В. Белоусова; Г.И. Мосина.

2. Утвержден и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 28.08.1992 № 1062.

Настоящий стандарт подготовлен методом прямого применения международного стандарта ИСО 3496-78 «Мясо и мясные продукты. Эталонный метод определения содержания L(-)-оксипролина» и полностью ему соответствует.

3. Введен впервые.

4. Ссылочные нормативно-технические документы

1. НАЗНАЧЕНИЕ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

Настоящий стандарт устанавливает метод определения массовой доли L(-)-оксипролина в мясе и мясных продуктах.

2. ССЫЛКА

ГОСТ 9792.

3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Массовая доля L(-)-оксипролина в мясе и мясных продуктах — массовая доля L(-)-оксипролина, определенная в соответствии с методикой, установленной настоящим стандартом, выраженная в процентах к массе продукта.

4. СУЩНОСТЬ МЕТОДА

Гидролиз навески в постоянно кипящем растворе соляной кислоты, содержащем хлорид олова (II). Фильтрация и разбавление гидролизата. Нейтрализация гидроксидом натрия аликвотной части разбавленного гидролизата. Фильтрация и разбавление. Окисление L(-)-оксипролина хлорамином-T с последующим образованием окрашенного в красный цвет соединения p-диметиламинобензальдегида. Фотометрическое измерение при длине волны 558 нм.

5. РЕАКТИВЫ

Все реактивы должны быть аналитического качества. Используемая вода должна быть дистиллированной или эквивалентной чистоты.

5.1 Раствор соляной кислоты, содержащий хлорид олова (II)

Растворяют в воде 7,5 г хлорида олова (II) дигидрата (SnCl_{2} \cdot 2H_{2}O) , разбавляют до 500 см3 и добавляют 500 см3 соляной кислоты ( \rho_{20} 1,19 г/см3).

5.2 Соляная кислота, приблизительно 6 моль/дм3 раствор

Смешивают равные объемы соляной кислоты ( \rho_{20} 1,19 г/см3) и воды.

5.3 Гидроксид натрия, приблизительно 10 моль/дм3 раствор

Растворяют в воде 40 г гидроксида натрия, охлаждают и разбавляют до 100 см3.

5.4 Гидроксид натрия, приблизительно 1 моль/дм3 раствор

Растворяют в воде 1 г гидроксида натрия, охлаждают и разбавляют до 100 см3.

5.5 Буферный раствор, pH 6,0

Растворяют в воде:

50 г лимонной кислоты моногидрата (C_{6}H_{8}O_{7} \cdot H_{2}O) ;

26,3 г гидроксида натрия;

146,1 г ацетата натрия тригидрата [Na(CH_{3}CO_{2}) \cdot 3H_{2}O] .

Разбавляют водой до 1000 см3. Смешивают этот раствор с 200 см3 воды и 300 см3 пропанола-1.

Этот раствор устойчив в течение нескольких недель при 4 °C.

5.6 Реактив хлорамина-T

Растворяют в 10 см3 воды 1,41 г N-хлор-p-толуолсульфамида натрия тригидрата (хлорамин-T) и последовательно добавляют 10 см3 пропанола-1 и 80 см3 буферного раствора.

Этот раствор готовят непосредственно перед использованием.

5.7 Цветной реактив

10,0 г p-диметиламинобензальдегида растворяют в 35 см3 60%-ного раствора хлорной кислоты (m/m), а затем медленно добавляют 65 см3 пропанола-2.

Этот раствор готовят в день использования.

Примечание. Если необходима очистка p-диметиламинобензальдегида (см. примечание к п. 8.5), поступают следующим образом: готовят насыщенный раствор p-диметиламинобензальдегида в горячем 70%-ном этаноле (V/V). Охлаждают сначала при комнатной температуре, а затем в холодильнике. Примерно через 12 ч раствор фильтруют на воронке Бюхнера. Промывают небольшим количеством 70%-ного этанола (V/V). Снова растворяют в горячем 70%-ном этаноле (V/V). Добавляют холодную воду и тщательно перемешивают. Повторяют эту процедуру до тех пор, пока не образуется достаточное количество молочно-белых кристаллов. Оставляют на ночь в холодильнике. Фильтруют раствор на воронке Бюхнера, промывают 50%-ным этанолом (V/V) и высушивают под вакуумом в присутствии оксида фосфора (V).

5.8 Стандартные растворы L(-)-оксипролина

Готовят основной раствор, растворяя в воде 50 мг 4-оксипирролидин- \alpha -карбоновой кислоты (оксипролин). Добавляют одну каплю раствора соляной кислоты и разбавляют водой до 100 см3. Этот раствор устойчив в течение 1 мес при 4 °C.

В день использования 5 см3 основного раствора разбавляют до 500 см3 водой в мерной колбе. Затем готовят четыре стандартных раствора, разбавляя водой 10, 20, 30 и 40 см3 этого раствора до 100 см3 и получая соответственно концентрации L(-)-оксипролина 0,5; 1; 1,5 и 2 мкг/см3.

6. АППАРАТУРА

Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в пп. 6.1 - 6.10.

6.1. Механическая мясорубка лабораторного типа с решеткой, диаметр отверстий которой не более 4 мм.

6.2. Колба для гидролиза круглодонная или плоскодонная, вместимостью около 200 см3, с широким горлом, оснащенная воздушным или водяным холодильником.

6.3. Электрическое устройство для нагревания (например калильная сетка для нагревания, электроплитка или электрическая песчаная баня).

6.4 Фильтры из фильтровальной бумаги диаметром 12,5 см.

6.5. pH-метр.

6.6 Алюминиевая или пластиковая фольга.

6.8. Спектрофотометр, обеспечивающий измерение при длине волны (558 +/- 2) нм, или фотоэлектроколориметр со светофильтром, имеющий максимум поглощения при длине волны (558 +/- 2) нм.

6.9 Кюветы с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм.

6.10 Аналитические весы.

7. ОТБОР ПРОБ

7.1. Отобрать пробу продукта не менее 200 г (см. ГОСТ 9792 <*>).

<*> Допускается применение ГОСТ 9792 до введения ИСО 3100 в качестве государственного стандарта.

7.2. Пробу хранят в таких условиях, чтобы предотвратить порчу и изменение состава.

8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

8.1 Подготовка проб к испытанию

8.1.1 Сырые мясо и мясные продукты

Мясо в охлажденном состоянии (чуть ниже 0 °C) острым ножом нарезают на кубики (приблизительно 0,5 см3, т.е. длина стороны кубика примерно 8 мм).

Пробу помещают в сосуд и герметично закрывают или упаковывают под вакуумом в термостойкую пластиковую пленку; затем нагревают и выдерживают при температуре 70 °C в течение 30 мин; охлаждают и продолжают испытание в соответствии с требованиями п. 8.1.2.

В процессе последующих стадий подготовки пробы и взвешивания навески необходимо обеспечить хорошее перемешивание пробы, особенно равномерное распределение жира и жидкости.

Примечание. Тепловая обработка размягчает соединительную ткань и делает ее менее устойчивой к гомогенизации. Однако это может также привести к отделению жидкости, содержащей желатин. Присутствие жира может также потребовать особого внимания к приготовлению гомогенной пробы для испытания.

8.1.2 Мясо и мясные продукты, готовые к употреблению

Пробу гомогенизируют, пропуская ее дважды через мясорубку и тщательно перемешивая. Хранят гомогенизированную пробу в целиком заполненном воздухонепроницаемом закрытом сосуде в таких условиях, чтобы предотвратить ее порчу и изменение состава. Анализ испытуемой пробы проводят в течение 24 ч.

8.2 Навеска

В колбу для гидролиза взвешивают около 4 г испытуемой пробы с точностью 0,001 г. Навеску берут так, чтобы ни одна частица пробы не прилипла к боковой стенке колбы.

8.3 Гидролиз

8.3.1. В колбу помещают несколько кусочков карбида кремния для равномерного кипения, добавляют (100 +/- 1) см3 раствора соляной кислоты, содержащей хлористое олово (II). Колбу соединяют с воздушным или водяным холодильником, нагревают до спокойного кипения на нагревательном устройстве и выдерживают в течение 16 ч (лучше оставить на ночь).

Примечание. По желанию аналитика гидролиз можно проводить последовательно в две стадии, каждая от 7 до 8 ч в течение двух дней. Результаты данного альтернативного метода незначительно отличаются от результатов, полученных при проведении гидролиза в одну стадию в течение 16 ч.

8.3.2. Горячий гидролизат фильтруют через фильтровальную бумагу в мерную колбу с одной отметкой вместимостью 200 см3. Колбу и фильтровальную бумагу промывают три раза, используя каждый раз по 10 см3 горячего раствора соляной кислоты, промывную воду добавляют к гидролизату. Объем доводят водой до метки и перемешивают. Определение проводят не позднее следующего дня после гидролиза.

8.4 Проведение цветной реакции и измерение оптической плотности

8.4.1. В химический стакан пипеткой переносят такой объем гидролизата, чтобы после его разбавления до 250 см3 (см. п. 8.4.2) концентрация L(-)-оксипролина была от 0,5 до 2 мкг/см3.

Примечание. В большинстве случаев объем гидролизата от 5 до 25 см3 в зависимости от количества соединительной ткани, содержащейся в пробе.

8.4.2. С помощью pH-метра доводят pH до (8 +/- 0,2), добавляя по каплям сначала 10 моль/дм3 раствор гидроксида натрия, а затем 1 моль/дм3 раствор гидроксида натрия. Содержимое стакана фильтруют в мерную колбу с одной отметкой вместимостью 250 см3. Промывают стакан и осадок гидроксида олова на фильтровальной бумаге не менее трех раз водой порциями по 30 см3, собирая промывную жидкость в мерную колбу. Объем доводят до метки и перемешивают.

8.4.3. 4,00 см3 этого раствора переносят в пробирку и добавляют 2,00 см3 реактива хлорамина-T, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на (20 +/- 1) мин.

8.4.4. Добавляют 2,00 см3 цветного реактива, тщательно перемешивают и закрывают пробирку алюминиевой или пластиковой фольгой.

8.4.5. Пробирку быстро переносят в водяную баню температурой (60 +/- 5) °C и нагревают в течение точно 20 мин.

8.4.6 Охлаждают под струей воды в течение не менее 3 мин.

8.4.7. Оптическую плотность измеряют при длине волны (558 +/- 2) нм в кювете на спектрофотометре или фотоэлектроколориметре со светофильтром.

8.4.8. Вычитают оптическую плотность контрольного раствора и находят концентрацию L(-)-оксипролина в разбавленном гидролизате по калибровочному графику, построенному, как описано в п. 8.6.

8.5 Контрольное испытание

Процедуру, описанную в пп. 8.4.3 - 8.4.8, используя вместо разбавленного гидролизата воду, проводят в двух повторностях.

Примечание. Если оптическая плотность контрольного раствора превышает 0,040, следует приготовить свежий цветной реактив и, при необходимости, провести очистку p-диметиламинобензальдегида.

8.6 Калибровочный график

8.6.1. Повторяют всю процедуру определения, описанную в пп. 8.4.3 - 8.4.8, используя вместо разбавленного гидролизата по очереди 4,00 см3 каждого из четырех разбавленных стандартных растворов L(-)-оксипролина.

8.6.2. Строят чертеж, нанося измеренные значения оптической плотности против соответствующих концентраций стандартных растворов L(-)-оксипролина и проводя прямую линию через нанесенные на чертеж точки и начало координат.

8.7 Повторность результатов

Повторность проведения анализа двухкратная.

9. ВЫРАЖЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

9.1 Метод расчета и формула

Для каждой из двух навесок массовую долю L(-)-оксипролина (X) в процентах к массе продукта вычисляют по формуле

X = \frac{5c}{mV} ,

где c — концентрация L(-)-оксипролина разбавленного гидролизата, найденная по градуировочному графику, мкг/см3;

m — масса навески, г;

V — объем гидролизата, используемый для разбавления до 250 см3, см3.

За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений при условии, что это удовлетворяет требованиям п. 9.2. Результат вычисляют с точностью до 0,01%.

9.2 Согласование между повторными результатами испытаний

Расхождение между результатами двух параллельных определений, проведенных одним и тем же аналитиком, не должно превышать 5% по отношению к среднему арифметическому значению.

10. ОТЧЕТ ОБ ИСПЫТАНИИ

В отчете об испытании должны быть указаны используемый метод и полученные результаты. В нем также должны быть упомянуты любые условия проведения испытаний, не установленные данным стандартом или касающиеся как необязательных, так и любых других подробностей, которые могут повлиять на конечный результат.