ГОСТ EN 16344-2016. Межгосударственный стандарт. Продукция косметическая солнцезащитная. Качественное определение УФ-фильтров и количественное определение 10 УФ-фильтров методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
(введен в действие Приказом Росстандарта от 04.04.2024 № 424-ст)
Примечание
Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности продукции легкой промышленности» (ТР ТС 017/2011) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 22.12.2020 № 177). Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности средств индивидуальной защиты» (ТР ТС 019/2011) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 03.03.2020 № 30). Документ включен в Перечень документов в области стандартизации, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности средств индивидуальной защиты» (ТР ТС 019/2011) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Комиссии Таможенного союза от 09.12.2011 № 878). Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности парфюмерно-косметической продукции» (ТР ТС 009/2011) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Комиссии Таможенного союза от 23.09.2011 № 799). Документ введен в действие с 01.01.2025 с правом досрочного применения.
Введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 4 апреля 2024 г. № 424-ст
ПРОДУКЦИЯ КОСМЕТИЧЕСКАЯ СОЛНЦЕЗАЩИТНАЯ
КАЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ УФ-ФИЛЬТРОВ И КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ 10 УФ-ФИЛЬТРОВ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Sunscreen cosmetic products. Qualitative determination of UV filters and quantitative determination of 10 UV filters by high performance liquid chromatography method
(EN 16344:2013, Cosmetics — Analysis of cosmetic products — Screening for UV-filters in cosmetic products and quantitative determination of 10 UV-filters by HPLC, IDT)
Дата введения 1 января 2025 года с правом досрочного применения
Предисловие
Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены»
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН научно-производственным республиканским унитарным предприятием «Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации» (БелГИСС) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5
2 ВНЕСЕН Госстандартом Республики Беларусь
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации по результатам голосования (протокол от 27 июля 2016 г. № 89-П)
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 4 апреля 2024 г. № 424-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 16344-2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2025 г. с правом досрочного применения
5 Настоящий стандарт идентичен европейскому стандарту EN 16344:2013 «Косметика. Анализ косметической продукции. Скрининг УФ-фильтров в косметической продукции и количественное определение 10 УФ-фильтров методом высокоэффективной жидкостной хроматографии HPLC» («Cosmetics — Analysis of cosmetic products — Screening for UV-filters in cosmetic products and quantitative determination of 10 UV-filters by HPLC», IDT).
Редакционные изменения в тексте стандарта выделены курсивом.
Европейский стандарт разработан техническим комитетом CEN/TC 392 «Косметика» Европейского комитета по стандартизации (CEN).
Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного европейского стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5-2001 (подраздел 3.6)
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.
В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге «Межгосударственные стандарты»
Введение
В настоящем стандарте имеется ссылка на следующее приложение Регламента (EC) № 1223/2009 Европейского парламента и Совета от 30 ноября 2009 г. по косметической продукции (далее — Регламент (EC) № 1223/2009):
приложение VI — Перечень УФ-фильтров, разрешенных к использованию в косметической продукции.
В техническом регламенте Таможенного союза ТР ТС 009/2011 «О безопасности парфюмерно-косметической продукции», гармонизированном с Регламентом (EC) № 1223/2009, перечень УФ-фильтров, разрешенных к использованию в косметической продукции, приведен в приложении 5.
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод с использованием обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) для обнаружения УФ-фильтров, разрешенных для использования нормативными документами, распространяющимися на косметическую продукцию. Данный метод предназначен также для количественного определения 10 УФ-фильтров, используемых главным образом в косметической солнцезащитной продукции на эмульсионной основе и в виде спрея, для определения их максимальной концентрации, регламентированной нормативными документами, распространяющимися на косметическую продукцию.
Могут использоваться другие аналитические методы качественного и количественного определения УФ-фильтров, если они обеспечивают получение сопоставимых результатов.
2 Термины и определения
В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:
2.1 УФ-фильтры (UV-filters): Органические химические соединения, поглощающие ультрафиолетовые лучи, и неорганические вещества, отражающие, рассеивающие и поглощающие ультрафиолетовые лучи.
3 Определение
УФ-фильтры экстрагируют смесью ацетона и метанола. Для качественного определения упомянутых УФ-фильтров и количественного определения 10 УФ-фильтров используют метод обращенно-фазовой ВЭЖХ с УФ-детектированием. Данный метод может также применяться для количественной оценки других УФ-фильтров после соответствующей валидации.
Для количественного анализа продукции, содержащей следующие УФ-фильтры, необходимо дополнительно провести экстрагирование и определение:
- терефталилидин дикамфорную сульфокислоту (TDSA) и динатрий фенил дибензимидазол тетрасульфонат (DPDT) дополнительно экстрагируют раствором гидроксида натрия в смеси метанола и воды;
- метилен бис-бензотриазолил тетраметилбутилфенол (MBBT) и бис-этилгексилоксифенол метоксифенил триазин (BEMT) дополнительно экстрагируют смесью тетрагидрофурана и ацетона.
В случае получения неудовлетворительной формы пика бутил метоксидибензоилметан (BMDM) дополнительно экстрагируют смесью ацетона, метанола и этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA).
Количественное определение проводят посредством обращенно-фазовой ВЭЖХ с УФ-детектором. УФ-спектры сравнивают со спектрами в базе данных.
Содержание каждого УФ-фильтра, полученное согласно данному методу, в протоколе испытания записывают в граммах на 100 г.
Данный метод был протестирован при проведении межлабораторных испытаний на конкретных матрицах косметической продукции (см. приложение A). Пользователь должен проверить показатели прецизионности метода в своей лаборатории для каждой другой матрицы и обратить особое внимание на рекомендации по контролю качества.
4 Реактивы
4.1 Общие требования
Если не указано иное, используют только реактивы с аналитической или более высокой степенью чистоты. Используемая вода должна быть дистиллированной или соответствующей ей по чистоте. Под «раствором» следует понимать водный раствор, если не указано иное.
4.2 Метанол (MeOH) для ВЭЖХ.
4.3 Ацетон для ВЭЖХ.
4.4 Тетрагидрофуран (THF) для ВЭЖХ.
4.5 Раствор аммиака с массовой долей w = 25 г/100 г.
4.6 Раствор гидроксида натрия молярной концентрации c = 1 моль/дм3.
4.7 Этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA) динатриевой соли дигидрат (Na2EDTA·2H2O), номер CAS: 6381-92-6, содержание основного вещества > 99%.
4.8 Раствор EDTA
Взвешивают 1,8 г Na2EDTA·2H2O (4.7) в мерную колбу вместимостью 100 см3 и добавляют воду до метки.
4.9 Этанол для ВЭЖХ.
4.10 Лаурилтриметил аммония бромид (LTAB, синоним: додецилтриметил аммония бромид. CAS 1119-94-4), при возможности для ВЭЖХ (содержание основного вещества >= 98%).
4.11 Бромид аммония (CAS 12124-97-9) (содержание основного вещества >= 99%).
4.12 Калибровочные вещества
Полярные УФ-фильтры (калибровочный раствор в метаноле)
| EC a | Сокращение | Наименование по INCI b и другие общепринятые наименования | |
| 4.12.1 | A2 | CBM | Бензалконий метосульфат камфоры, CAS 52793-97-2 |
| 4.12.2 | A6 | PBSA | Фенилбензимидазол сульфоновая кислота (2-фенил-бензимидазол-5-сульфоновая кислота), CAS 27503-81-7 |
| 4.12.3 | A7 | TDSA | Терефталиден дикамфор сульфоновая кислота, CAS 90457-82-2, представляет собой соль триэтаноламина (молекулярная масса m = 860 г/моль), свободную кислоту (молекулярная масса m = 562 г/моль) |
| 4.12.4 | A22 | B-4/5 | Бензофенон-4/5 (2-гидрокси-4-метоксибензо-фенон-5-сульфоновая кислота, сулисобензон), CAS 4065-45-6 |
| 4.12.5 | A24 | DPDT | Динатрий фенил дибензимидазол тетрасульфонат, CAS 180898-37-7 |
| 4.12.6 | A28 | DHHB | Диэтиламино гидроксибензоил гексил бензоат, CAS 302776-68-7 |
| a EC — порядковый номер согласно Регламенту (EC) № 1223/2009 (приложение VI) ТР ТС 009/2011 [(приложение 5)]. b INCI — Международная номенклатура косметических ингредиентов. | |||
Среднеполярные УФ-фильтры [калибровочный раствор в смеси метанола и ацетона (1:1)]
| EC a | Сокращение | Наименование по INCI b и другие общепринятые наименования | |
| 4.12.7 | A4 | B-3 | Бензофенон-3 (оксибензонум, 2-гидрокси-4-метокси-бензофенон), CAS 131-57-7 |
| 4.12.8 | A10 | OC | Октокрилен (2-этилгексил-2-циано-3,3-дифенилакрилат), CAS 6197-30-4 |
| 4.12.9 | A12 | EHMC | Этилгексил метоксициннамат (октилметоксициннамат), CAS 5466-77-3 |
| 4.12.10 | A14 | IMC | Изоамил n-метоксициннамат, CAS 71617-10-2 |
| 4.12.11 | A18 | MBC | 4-метилбензилиден камфора (3-(4-метилбензилиден)-dl-камфора), CAS 36861-47-9 |
| 4.12.12 | A19 | 3-BC | 3-бензилиден камфора, CAS |
| 4.12.13 | A21 | EHDP | Этилгексил диметил 4-аминобензойной кислоты (2-этилгексил-4-диметил-аминобензоат), CAS 21245-02-3 |
| a EC — порядковый номер согласно Регламенту (EC) № 1223/2009 (приложение VI) ТР ТС 009/2011 [(приложение 5)]. b INCI — Международная номенклатура косметических ингредиентов. | |||
Неполярные УФ-фильтры [калибровочный раствор в тетрагидрофуране (THF)]
| EC a | Сокращение | Наименование по INCI b и другие общепринятые наименования | |
| 4.12.14 | A3 | HMS | Гомосалат (3,3,5-триметилциклогексилсалицилат), CAS 118-56-9 |
| 4.12.15 | A8 | BMDM | Бутил метоксидибензоилметан (4-трет-бутил-4'-метоксидибензоилметан), CAS 70356-09-1 |
| 4.12.16 | A15 | EHT | Этилгексил триазон (октилтриазон), CAS 88122-99-0 |
| 4.12.17 | A16 | DTS | Дрометризол трисилоксан (2-бензотриазол-2-ил-метилфенол трисилоксан), CAS 155633-54-8 |
| 4.12.18 | A17 | DEBT | Диэтилгексил бутамидо триазон, CAS 154702-15-5 |
| 4.12.19 | A20 | EHS | Этилгексил салицилат (2-этилгексилсалицилат), CAS 118-60-5 |
| 4.12.20 | A23 | MBBT | Метилен бис-бензотриазол тетраметилбутилфенол, CAS 103597-45-1 |
| 4.12.21 | A25 | BEMT | Бис-этилгексилоксифенол метоксифенил триазин (анисо-триазин), CAS 187393-00-6 |
| a EC — порядковый номер согласно Регламенту (EC) № 1223/2009 (приложение VI) ТР ТС 009/2011 [(приложение 5)]. b INCI — Международная номенклатура косметических ингредиентов. | |||
Другие УФ-фильтры или УФ-поглотители (не указанные в Регламенте (EC) № 1223/2009 (приложение VI) ТР ТС 009/2011 [(приложение 5)]
| EC a | Сокращение | Наименование по INCI b и другие общепринятые наименования | |
| 4.12.22 | - | MA | Метил антранилат, CAS 134-09-8 |
| 4.12.23 | - | PABA | 4-аминобензойная кислота, CAS 150-13-0 |
| 4.12.24 | - | B-1 | Бензофенон-1 (2,4-дигидроксибензофенон), CAS 131-56-6 |
| 4.12.25 | - | B-2 | Бензофенон-2 (2,2'4,4'-тетрагидроксибензофенон), CAS 131-55-5 |
| 4.12.26 | - | DPLT | Диметилпабамидопропил лаурдимониум тосилат, CAS 156679-41-3 |
| 4.12.27 | - | B-6 | Бензофенон-6 (2,2'-дигидрокси-4,4'-диметоксибензофенон), CAS 131-54-4 |
| 4.12.28 | - | B-8 | Бензофенон-8 (2,2'-дигидрокси-4-метоксибензофенон, диоксибензон), CAS 131-53-3 |
| 4.12.29 | - | B-9 | Бензофенон-9 (динатрий 3,3'-карбонилбис[4-гидрокси-6-метоксибензенсульфонат]), CAS 76656-36-5 |
| 4.12.30 | - | B-10 | Бензофенон-10 (2-гидрокси-4-метокси-4'-метилбензофенон), CAS 1641-17-4 |
| 4.12.31 | - | SA | Салицилат натрия, CAS 54-21-7 |
| a EC — порядковый номер согласно Регламенту (EC) № 1223/2009 (приложение VI) ТР ТС 009/2011 [(приложение 5)]. b INCI — Международная номенклатура косметических ингредиентов. | |||
Примечание — На следующие УФ-фильтры, указанные в Регламенте (EC) № 1223/2009 (приложение VI) ТР ТС 009/2011 [(приложение 5)], метод настоящего стандарта не распространяется:
- A9: 3-(4'-сульфо)-бензилиден-борнан-2-он, CAS 56039-58-8;
- A11: полимер N-(2(и 4)-(2-оксоборн-3-илиденметил)бензил)акриламида, CAS 113783-61-2 (отсутствует в продаже);
- A13: этоксилированный этил-4-аминобензоат, CAS 116242-27-4 (может быть определен только качественно);
- A26: диметикодиэтилбензалмалонат, CAS 207574-74-1 (не может быть определен по методу настоящего стандарта).
4.13 Растворы для экстракции
4.13.1 Смесь ацетона и метанола (для приготовления калибровочных растворов и растворов для экстракции).
Смешивают 500 см3 ацетона (4.3) и 500 см3 метанола (4.2) в конической колбе вместимостью 1000 см3.
4.13.2 Смесь ацетона и тетрагидрофурана (для экстракции неполярных УФ-фильтров).
Смешивают 500 см3 ацетона (4.3) и 500 см3 тетрагидрофурана (4.2) в конической колбе вместимостью 1000 см3.
4.13.3 Раствор гидроксида натрия в смеси метанола и воды (для экстракции полярных УФ-фильтров).
Смешивают 800 см3 метанола (4.2), 200 см3 воды и 10 см3 раствора гидроксида натрия (4.6) в конической колбе вместимостью 1000 см3.
4.13.4 Смесь ацетона, метанола и раствора EDTA для экстракции из продукции, содержащей BMDM, в случае получения неудовлетворительной формы пика.
Добавляют 1,0 см3 раствора EDTA (4.8) к 200 см3 смеси ацетона и метанола (4.13.1) в конической колбе вместимостью 200 см3. Так как раствор является перенасыщенным в отношении EDTA, его следует использовать в день приготовления.
4.14 Калибровочные растворы
4.14.1 Основные калибровочные растворы
Основные калибровочные растворы приготавливают в соответствии с таблицами 5, 6 и 7. Взвешивают навеску каждого вещества с точностью до 0,1 мг и доводят соответствующим растворителем до указанного объема. Для каждого вещества готовят один основной калибровочный раствор. При определении исходной массы навески следует учитывать чистоту веществ и (при необходимости) доводить концентрацию «активного вещества» до 4 мг/см3 в каждом случае. Основные калибровочные растворы хранят в течение одного месяца в темном месте в холодильнике при температуре от 2 °C до 8 °C.
Схема приготовления основных калибровочных растворов полярных УФ-фильтров
| Полярный УФ-фильтр | Исходная масса навески, мг | Объем, см3 | Растворитель |
|---|---|---|---|
| CBM (29%) (4.12.1) |
140 | 10 | Метанол (4.2). (Исходная масса: 140 мг, т.к. используется калибровочный раствор с массовой долей 29%, что соответствует 40 мг «активного вещества») |
| PBSA (4.12.2) | 40 | 10 | Добавляют 2 см3 метанола (4.2) и три капли раствора аммиака (4.5). Доводят водой до метки |
| TDSA (4.12.3) | 60 | 10 | Добавляют 2 см3 метанола (4.2) и три капли раствора аммиака (4.5). Доводят водой до метки (исходная масса: 60 мг из-за присутствия соли триэтаноламина; соответствует 40 мг свободной кислоты, см. предельное значение) |
| B-4/5 (4.12.4) | 40 | 10 | Метанол (4.2) |
| DPDT (4.12.5) | 40 | 10 | Добавляют 2 см3 метанола (4.2) и три капли раствора аммиака (4.5). Доводят водой до метки |
| DHHB (4.12.6) | 40 | 10 | Метанол (4.2) |
Схема приготовления основных калибровочных растворов среднеполярных УФ-фильтров
| Среднеполярный УФ-фильтр | Исходная масса навески, мг | Объем, см3 | Растворитель |
|---|---|---|---|
| B-3 (4.12.7) | 40 | 10 | Смесь ацетона и метанола (4.13.1) |
| OC (4.12.8) | 40 | 10 | Смесь ацетона и метанола (4.13.1) |
| EHMC (4.12.9) | 40 | 10 | Смесь ацетона и метанола (4.13.1) |
| MBC (4.12.11) | 40 | 10 | Смесь ацетона и метанола (4.13.1) |
| IMC (4.12.10) | 40 | 10 | Смесь ацетона и метанола (4.13.1) |
| 3-BC (4.12.12) | 40 | 10 | Смесь ацетона и метанола (4.13.1) |
| EHDP (4.12.13) | 40 | 10 | Смесь ацетона и метанола (4.13.1) |
Схема приготовления основных калибровочных растворов неполярных УФ-фильтров
| Неполярный УФ-фильтр | Исходная масса навески, мг | Объем, см3 | Растворитель |
|---|---|---|---|
| HMS (4.12.14) | 40 | 10 | Тетрагидрофуран (4.4) |
| BMDM (4.12.15) | 40 | 10 | Тетрагидрофуран (4.4) |
| EHT (4.12.16) | 40 | 10 | Тетрагидрофуран (4.4) |
| DTS (4.12.17) | 40 | 10 | Тетрагидрофуран (4.4) |
| DEBT (4.12.18) | 40 | 10 | Тетрагидрофуран (4.4) |
| EHS (4.12.19) | 40 | 10 | Тетрагидрофуран (4.4) |
| MBBT (4.12.20) | 40 | 10 | Тетрагидрофуран (4.4) |
| BEMT (4.12.21) | 40 | 10 | Тетрагидрофуран (4.4) |
4.14.2 Приготовление основных калибровочных растворов для УФ-фильтров таблицы 4 (УФ-фильтров, не разрешенных нормативными документами)
Основные калибровочные растворы УФ-фильтров B-1, B-2, B-6, B-8, B-10, MA и DPLT можно приготовить, используя в качестве растворителя смесь ацетона и метанола (4.13.1). Растворы PABA и SA готовят с использованием метанола в качестве растворителя. Раствор B-9 готовят в соответствии с процедурой для PBSA (4.12.2). Раствор B-9 имеет желтую окраску, но эксперименты показали, что разрушение вещества не происходит и окраска раствора на результат испытания не влияет.
4.14.3 Калибровочные растворы
Калибровочные растворы готовят по схеме, указанной в таблице 8. Основные калибровочные растворы определенного объема для каждого УФ-фильтра (полярного) (см. таблицу 5), среднеполярного (см. таблицу 6) и неполярного (см. таблицу 7), используют для приготовления калибровочного раствора 1 (Cal 1) и доводят до метки либо метанолом (MeOH), либо смесью ацетона и метанола (MeOH/ацетон), либо тетрагидрофураном (THF). Следующие калибровочные растворы готовят из калибровочного раствора 1 (Cal 1). Их используют в калибровочном диапазоне от 10 до 400 нг. Для испытания вводят пробу объемом 1 мм3. Калибровочные растворы хранят в течение недели в темном месте в холодильнике при температуре от 2 °C до 8 °C.
Схема приготовления калибровочных растворов
| Калибровочный раствор | Объем, см3 | Раствор | До, мл | Растворитель | Концентрация | |||
| Полярный | Среднеполярный | Неполярный | Раствор, нг/мм3 | Проба a, г/100 г | ||||
| 1 | 2 | Исходный | 20 | MeOH | MeOH/ацетон | THF | 400 | 10,0 |
| 2 | 5 | Cal 1 | 10 | MeOH | MeOH/ацетон | THF | 200 | 5,0 |
| 3 | 2,5 | Cal 1 | 10 | MeOH | MeOH/ацетон | THF | 100 | 2,5 |
| 4 | 1 | Cal 1 | 10 | MeOH | MeOH/ацетон | THF | 40 | 1,0 |
| 5 | 0,5 | Cal 1 | 10 | MeOH | MeOH/ацетон | THF | 20 | 0,5 |
| 6 | 0,5 | Cal 1 | 20 | MeOH | MeOH/ацетон | THF | 10 | 0,25 |
| a Для исходной массы навески 100 мг. | ||||||||
Во время проведения испытания калибровочные растворы должны быть защищены от воздействия света.
4.15 Подвижная фаза для высокоэффективной жидкостной хроматографии
4.15.1 Подвижная фаза A: водная фаза
Взвешивают 3,0 г лаурил триметил аммония бромида (LTAB) (4.10), 1,0 г бромида аммония (4.11) и 2,5 см3 раствора EDTA (4.8) в мерную колбу вместимостью 1000 см3 и добавляют воду до метки.
4.15.2 Подвижная фаза B: органическая фаза
Взвешивают 3,0 г лаурил триметил бромида аммония (LTAB) (4.10), 1,0 г бромида аммония (4.11) в мерную колбу вместимостью 1000 см3 и добавляют этанол (4.9) до метки.
5 Аппаратура
В дополнение к обычному лабораторному оборудованию требуется следующее:
5.1 Аналитические весы с точностью взвешивания до 0,1 мг.
5.2 Колба Эрленмейера — коническая колба со стеклянной пробкой вместимостью 50 см3.
5.3 Лабораторный встряхиватель (шейкер).
5.4 Ультразвуковая баня с нагревателем, имеющим устройство контроля температуры.
5.5 Центрифуга (не менее 2500g).
5.6 Мембранный фильтр для фильтрования пробы, например из PTFE, с размером отверстий 0,2 мм3 <1>.
<1> Для кольцевого испытания используют фильтры диаметром 0,2 м, которые могут использоваться в течение длительного времени.
5.7 Высокоэффективный жидкостный хроматограф, состоящий из:
- устройства ввода пробы;
- насосной системы с градиентной функцией;
- дегазатора;
- колоночного термостата;
- фотодиодно-матричного детектора;
- системы обработки информации.
5.8 Аналитическая разделительная колонка
Колонка Kromasil C18, зернением 5 мкм, длиной 125 мм, с внутренним диаметром, например, 2, 3 или 4 мм.
Используют предколонку с неподвижной фазой, аналогичную аналитической разделительной колонке.
6 Отбор проб
Методика отбора проб не является частью метода настоящего стандарта.
7 Проведение испытания
7.1 Приготовление пробы
7.1.1 Стандартное разделение экстракцией
Взвешивают 90 — 120 мг пробы с точностью до 0,1 мг в коническую колбу вместимостью 50 см3 (5.2), добавляют 25 см3 смеси ацетона и метанола (4.13.1) с помощью градуированной пипетки и энергично встряхивают. Закрывают коническую колбу притертой пробкой и подвергают пробу экстрагированию в течение 15 мин при температуре 50 °C в ультразвуковой бане. После охлаждения (по истечении 20 мин) центрифугируют суспензию в течение 5 мин, если возможно — при ускорении 2500g. Фильтруют около 1 см3 надосадочной жидкости через мембранный фильтр из PTFE (5.6). Вводят фильтрат в систему высокоэффективной жидкостной хроматографии.
При необходимости массу пробы можно изменять в зависимости от концентрации УФ-фильтра в пробе.
Необходимо следить за тем, чтобы растворитель не испарялся во время экстракции. Для обнаружения потерь растворителя к экстракту пробы добавляют УФ-фильтр бензофенон-10 (4.12.30) в концентрации w = 0,1 мг/см3 в качестве внутреннего стандарта.
7.1.2 Экстракция при качественном определении TDSA, DPDT, BMDM, MBBT и BEMT
Экстракцию проводят согласно 7.1.1; однако для некоторых анализируемых веществ необходимо использовать растворители для экстракции, указанные в таблице 9.
Растворители для экстракции некоторых УФ-фильтров
| УФ-фильтр | Растворитель |
|---|---|
| MBBT/BEMT | Смесь ацетона и тетрагидрофурана (4.13.2) |
| TDSA/DPDT | Раствор гидроксида натрия в смеси метанола и воды (4.13.3) |
| BMDM | Смесь ацетона, метанола и EDTA (4.13.4) |
Во время испытания все растворы проб должны быть защищены от воздействия света.
7.2 Высокоэффективная жидкостная хроматография
Качественный и количественный анализ проводят посредством обращенно-фазовой ВЭЖХ. Примером наиболее оптимальных рабочих условий ВЭЖХ являются условия, указанные ниже. Условия должны быть адаптированы для используемой аппаратуры, колонок и подвижных фаз:
- объем вводимой пробы: например, 1 мм3;
- температура колонки: (30 +/- 1) °C;
- обнаружение: на длинах волн 300, 350 нм.
УФ-спектральный диапазон: 220 — 420 нм.
Примечание — При промывании системы ввода пробы смесь ацетона и метанола в соотношении по объему 1:1 (4.13.1) является пригодной для удаления остатков пробы, которые могут наблюдаться, в частности, в случае неполярных УФ-фильтров (MBBT и BEMT).
При использовании систем ВЭЖХ с различным объемом задержки градиент должен быть соответствующим образом скорректирован. Особое внимание должно быть уделено тому, чтобы вещество не вымывалось во время изменения градиента. Это привело бы к недостоверным результатам. В следующих таблицах приведены примеры трех альтернативных градиентных программ (в зависимости от внутренних диаметров колонки).
Градиентная программа при использовании колонки с внутренним диаметром 2 мм (система ВЭЖХ с объемом задержки 850 мм3)
Градиентная программа при использовании колонки с внутренним диаметром 3 мм (система ВЭЖХ с объемом задержки 850 мм3)
Градиентная программа при использовании колонки с внутренним диаметром 4 мм (система ВЭЖХ с объемом задержки 850 мм3)
Время от времени колонку можно отсоединять для обратной промывки ацетоном или THF. Если эффективность разделения не является удовлетворительной, предколонку следует заменить.
8 Обработка результатов
8.1 Обработка данных хроматограмм
Площади пиков определяют при длине волны 300 или 350 нм соответственно (см. приложение B).
При необходимости калибровку можно проводить при любой наиболее подходящей длине волны и/или по высоте пика. Распределение пиков на хроматограмме осуществляется в зависимости от времени удерживания и УФ-спектра.
Если форма пика BMDM (4.12.15) не является удовлетворительной, проводят дополнительное экстрагирование смесью ацетона, метанола и EDTA (4.13.4) (см. приложение C).
8.2 Обработка результатов
Количественную оценку выполняют с помощью калибровочной кривой, построенной с использованием значений площади или высоты пика внешних стандартов
где y — площадь или высота пика внешнего стандарта;
x — концентрация внешнего стандарта;
m — наклон калибровочной кривой;
b — \gamma - \text{отрезок} калибровочной кривой.
Количество определяемого вещества x, нг, вычисляют по линии регрессии по площади или высоте пика.
Содержание УФ-фильтра в пробе, г/100 г, вычисляют по формуле
\omega = \frac{\frac{x}{InjV} \cdot V \cdot VF}{m \cdot 10} = \frac{x \cdot 25}{m} , (2)
где \omega — содержание УФ-фильтра, г/100 г;
x — масса определяемого вещества, полученная по калибровочной кривой, нг;
InjV — объем вводимой пробы, мм3 (например, 1 мм3);
V — объем экстракта, см3 (в данном случае 25 см3);
VF — коэффициент разбавления (применяется только в случае, если проба разбавлена);
10 — коэффициент преобразования (мг/г в г/100 г).
В случае УФ-фильтра октокрилена (OC — A10) определяют содержание эфира, которое пересчитывают в содержание соответствующей кислоты. Молекулярная масса эфира 361,48 г/моль, молекулярная масса свободной кислоты 249,27 г/моль. Коэффициент пересчета 0,69.
8.3 Выражение результатов
Содержание в протоколе испытаний записывают в граммах на 100 г с округлением до третьего десятичного знака.
9 Протокол испытания
Протокол испытания должен содержать:
a) сведения, необходимые для идентификации образца (вид, состав и наименование продукции);
b) ссылку на настоящий стандарт;
c) наименование лаборатории, проводившей испытание;
d) дату и метод отбора образца (если это известно);
e) дату поступления образца и выдачи результатов испытания;
g) результаты испытания и единицы измерений, в которых они выражены;
h) обоснование отклонений от метода данного стандарта;
i) операции, не указанные в методе или рассматриваемые как дополнительные, которые могли бы повлиять на результаты.
РЕЗУЛЬТАТЫ МЕЖЛАБОРАТОРНЫХ ИСПЫТАНИЙ
Метод настоящего стандарта разработан рабочей группой «Косметика» Немецкой федеральной организации по защите потребителей и безопасности пищевой продукции (BVL) с целью реализации требований раздела 64 Кодекса по пищевым продуктам и кормам (LFGB). Он был протестирован в межлабораторных испытаниях, в которых приняли участие 10 лабораторий.
Показатели прецизионности метода были проверены для следующих УФ-фильтров:
- бис-этилгексилофенол метоксилфенил триазин (BEMT, 4.12.21);
- бутил метоксидибензоилметан (BMDM, 4.12.15);
- диэтилгексил бутамидо триазон (DEBT, 4.12.18);
- дрометризол трисилоксан (DTS, 4.12.17);
- этилгексил метоксициннамат (EHMC, 4.12.9);
- этилгексил триазон (EHT, 4.12.16);
- изоамил p-метоксициннамат (IMC, 4.12.10);
- метилен бис-бензотриазол тетраметилбутилфенол (MBBT, 4.12.20);
- октокрилен (OC, 4.12.8);
- терефталиден дикамфор сульфоновая кислота (TDSA, 4.12.3).
Образец 1: солнцезащитное молочко, солнцезащитный фактор 40.
Образец 2: солнцезащитный спрей, солнцезащитный фактор 50.
Образец 3: солнцезащитная продукция (эмульсия типа масло в воде), солнцезащитный фактор неизвестен.
Образцы 1 и 2 имеются в продаже, а образец 3 был приготовлен специально для межлабораторных испытаний.
Любые торговые наименования, упомянутые в настоящем стандарте, или любые описания продукта, касающиеся конкретных поставщиков, приведены только в качестве информации для пользователей настоящим методом, но это не означает, что CEN рекомендует именно этот продукт. Аналогичные продукты могут использоваться при условии, что при испытании будут получены такие же результаты.
A.2 Показатели прецизионности метода
Образец 1 — смесь для экстракции, указанная в 4.13.1 (смесь ацетона и метанола)
Образец 1 — смесь для экстракции, указанная в 4.13.2 (смесь ацетона/тетрагидрофурана)
Образец 1 — смесь для экстракции, указанная в 4.13.4 (смесь ацетона, метанола и EDTA)
Образец 2 — смесь для экстракции, указанная в 4.13.1 (смесь ацетона и метанола)
Образец 2 — смесь для экстракции, указанная в 4.13.2 (смесь ацетона/тетрагидрофурана)
Образец 2 — смесь для экстракции, указанная в 4.13.4 (смесь ацетона, метанола и EDTA)
Образец 3 — смесь для экстракции, указанная в 4.13.1 (смесь ацетона и метанола)
Образец 3 — смесь для экстракции, указанная в 4.13.2 (смесь ацетона/тетрагидрофурана)
Образец 3 — смесь для экстракции, указанная в 4.13.3 (смесь метанола и гидроксида натрия)
Образец 3 — смесь для экстракции, указанная в 4.13.4 (смесь ацетона, метанола и EDTA)
X — время, мин; Y — оптическая плотность, mAU Верхняя линия: длина волны детектирования 300 нм. Нижняя линия: длина волны детектирования: 350 нм.
Рисунок B.1 — Хроматограмма образца 1 при использовании колонки размерами 150 мм·2 мм
Время удерживания анализируемых веществ в калибровочной смеси
X — время, мин; Y — оптическая плотность, mAU
Рисунок C.1 — BMDM в основном образце с (верхняя линия) или без (нижняя линия) добавления EDTA к экстрагирующей смеси
БИБЛИОГРАФИЯ
| УДК 65.584.014:543.544.5.068.7(083.74)(476) | МКС 71.100.70 | IDT |
| Ключевые слова: продукция косметическая | ||