ГОСТ 31769-2012. Межгосударственный стандарт. Мед. Метод определения частоты встречаемости пыльцевых зерен
(введен в действие Приказом Росстандарта от 29.11.2012 № 1649-ст)
Примечание
Документ введен в действие с 1 июля 2013 года.
ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ
flowchart LR n0["ГОСТ Р 52940-2008"]:::rst click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-r-52940-2008" "ГОСТ Р 52940-2008. Национальный стандарт Российской Федерации. Мед. Метод определения частоты встречаемости пыльцевых зерен (утв. и введен в действие Приказом Ростехрегулирования о" n1["ГОСТ 31769-2012"]:::doc click n1 "https://bukva.ai/docs/gost-31769-2012" "ГОСТ 31769-2012. Межгосударственный стандарт. Мед. Метод определения частоты встречаемости пыльцевых зерен (введен в действие Приказом Росстандарта от 29.11.2012 N 1649-ст)" n0 --> n1 classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000; classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000; classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;
Введен в действие
Приказом Федерального
агентства по техническому
регулированию и метрологии
от 29 ноября 2012 г. № 1649-ст
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧАСТОТЫ ВСТРЕЧАЕМОСТИ ПЫЛЬЦЕВЫХ ЗЕРЕН
Honey. Determination of the relative frequency of pollen
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены».
Сведения о стандарте
1. Подготовлен Рабочей группой, состоящей из представителей Общества с ограниченной ответственностью «Тенториум» и Общества с ограниченной ответственностью «Центр исследований и сертификации „Федерал“.»
2. Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт).
3. Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (Протокол от 1 октября 2012 г. № 51).
4. Настоящий стандарт соответствует национальному немецкому стандарту DIN 10760:2002. Analysis of honey — Determination of the relative frequency of pollen (Анализ меда. Определение относительной частоты пыльцы).
Степень соответствия — неэквивалентная (NEQ).
Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 52940-2008.
5. Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. № 1649-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31769-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет.
1. Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод определения частоты встречаемости пыльцевых зерен в меде.
2. Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ ISO 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения
ГОСТ ISO 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
ГОСТ 6259-75 Реактивы. Глицерин. Технические условия
ГОСТ 6672-75 Стекла покровные для микропрепаратов. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 9284-75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия
ГОСТ 11293-89 Желатин. Технические условия
ГОСТ 19792-2001 Мед натуральный. Технические условия
ГОСТ 23519-93 Фенол синтетический технический. Технические условия
ГОСТ 24104-2001 <*> Весы лабораторные. Общие технические требования
<*> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
ГОСТ 31766-2012 Меды монофлорные. Технические условия.
Примечание. При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3. Термины и определения
В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ ISO 5725-1, а также следующий термин с соответствующим определением:
3.1. Частота встречаемости пыльцевых зерен (relative frequencies of the pollen): доля пыльцевых зерен отдельного вида, выраженная в процентах от общего числа учитываемых пыльцевых зерен.
Примечание. Допускается определение принадлежности пыльцевых зерен к группе видов с морфологически сходными пыльцевыми зернами; совокупностям неопределяемых (деформированных) и неопределенных пыльцевых зерен; совокупности пыльцевых зерен, не принадлежащих к определенному(ым) виду(ам).
4. Отбор и подготовка пробы
Репрезентативную пробу меда массой не менее 200 г отбирают по ГОСТ 31766, ГОСТ 19792. Закристаллизованный мед размягчают в термостате по 6.8 или на термостатируемой водяной бане.
Мед с примесями процеживают через сито. Крупные механические частицы удаляют вручную.
Сотовый мед (без перговых ячеек) отделяют от сот при помощи сита без нагревания. Пробу интенсивно и тщательно перемешивают не менее 3 мин.
5. Сущность метода
Пыльцевые зерна концентрируют из раствора меда центрифугированием, готовят препарат для световой микроскопии, идентифицируют определенное количество пыльцевых зерен и вычисляют процентную долю пыльцевых зерен отдельных видов от общего числа учтенных пыльцевых зерен.
6. Средства измерения, вспомогательные устройства и материалы
Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1 - 6.12.
6.1. Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более 0,01 г.
6.2. Дозатор пипеточный или механический одноканальный с объемом дозирования до 1 см3 или пипетка стеклянная градуированная номинальной вместимостью 1,0 см3 по ГОСТ 29227.
6.3. Цилиндр мерный стеклянный вместимостью 50 — 100 см3 по ГОСТ 1770.
6.4. Микроскоп световой общего назначения, микроскоп биологический с увеличением 300^{\times} - 1000^{\times} .
6.5. Центрифуга, позволяющая получать центростремительное ускорение 1000g.
Примечание. Центростремительное ускорение a_{n} при измерении в единицах g ( 9,8\text{м } \cdot \text{с}^{- 2} ) рассчитывают по формуле
где r — расстояние от оси вращения до точки осаждения (дно центрифужной пробирки в рабочем положении), см;
f — частота вращения (число оборотов), \text{мин}^{- 1} .
Необходимую частоту вращения f при работе на центрифуге конкретной модели вычисляют по формуле
6.6 Сито из нержавеющей стали, диаметр отверстий 0,5 мм.
6.7 Водяная баня.
6.8. Термостат или другое устройство, позволяющее производить равномерный нагрев до 40 °C.
6.9. Пробирки стеклянные центрифужные вместимостью не менее 40 см3 по ГОСТ 25336.
6.10 Стекло предметное по ГОСТ 9284.
6.11 Стекло покровное по ГОСТ 6672.
6.12. Стакан стеклянный номинальной вместимостью 50 — 100 см3 по ГОСТ 25336.
Допускается использование других средств измерений и лабораторного оборудования по метрологическим, техническим характеристикам и качеству не ниже указанных в настоящем стандарте.
7. Реактивы
7.1. Глицериновый желатин для микроскопии или глицериновый желатин, приготовленный по 8.1.1.
Примечание. Рекомендуется использовать глицериновый желатин указанной марки, так как осмотические свойства среды заключения влияют на морфологию и достоверность идентификации пыльцевых зерен.
7.2 Глицерин по ГОСТ 6259, ч.
7.3 Желатин пищевой по ГОСТ 11293.
7.4 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
7.5 Фенол по ГОСТ 23519.
Допускается использование других реактивов по качеству и чистоте не ниже указанных в настоящем стандарте.
8. Проведение испытаний
8.1. Подготовка к испытаниям
8.1.1. Глицериновый желатин готовят следующим образом: 10 г желатина по ГОСТ 11293 заливают 60 см3 дистиллированной воды по ГОСТ 6709 и выдерживают 2 — 3 ч для набухания (смесь 1); в 70 см3 глицерина по ГОСТ 6259 растворяют 0,1 г фенола по ГОСТ 23519, вливают в смесь 1 и, перемешивая, нагревают на водяной бане до образования однородной массы. При этом следует избегать попадания в глицериновый желатин пузырьков воздуха.
8.2. Приготовление препарата меда
8.2.1. В стакане по ГОСТ 25336 взвешивают (10,0 +/- 0,1) г меда, подготовленного по разделу 4, растворяют в 20 см3 дистиллированной воды, нагретой до температуры не выше 40 °C, и переносят в центрифужную пробирку по ГОСТ 25336. Раствор центрифугируют в течение 10 мин при ускорении 1000g.
8.2.2. Надосадочную жидкость осторожно сливают, к осадку добавляют 20 см3 дистиллированной воды и перемешивают. Полученную суспензию центрифугируют 5 мин при 1000g. Надосадочную жидкость декантируют, центрифужную пробирку помещают на фильтровальную бумагу под углом 45° для удаления остатков жидкости.
8.2.3. Осадок тщательно перемешивают микробиологической петлей или с помощью дозатора со сменным наконечником <1>, переносят на предварительно прогретое до 40 °C предметное стекло по ГОСТ 9284 и равномерно распределяют по площади 22 x 22 мм микрошпателем или гранью покровного стекла по ГОСТ 6672. Стекло с осадком прогревают при температуре не выше 40 °C до полного высушивания осадка.
<1> Рекомендуется применять дозатор со сменным наконечником, чтобы избежать попадания в препарат пыльцы из других образцов меда.
8.2.4. Глицериновый желатин по 8.1.1 расплавляют на водяной бане при температуре не выше 40 °C. На предварительно прогретое до температуры 40 °C покровное стекло наносят каплю глицеринового желатина и распределяют крестообразно по диагоналям. Покровное стекло медленно (во избежание появления воздушных пузырьков) опускают на подсушенный осадок. Для равномерного распределения глицеринового желатина и оптимального набухания пыльцы препарат прогревают в течение 5 мин при температуре не выше 40 °C. Глицериновый желатин нельзя наносить непосредственно на высохший осадок.
Просмотр препарата под микроскопом проводят после застывания глицеринового желатина.
8.2.5. Если в препарате обнаружена низкая плотность пыльцевых зерен, то его готовят вновь из большего количества меда, сохраняя при этом пропорции, указанные в 8.2.1. В случае высокого содержания пыльцы препарат готовят из части осадка, полученного по 8.2.2. Для этого пипеткой по ГОСТ 29227 или дозатором перемешивают осадок в центрифужной пробирке с 0,5 — 1,0 см3 воды. Необходимое количество суспензии равномерно распределяют по предметному стеклу и высушивают, как описано в 8.2.3.
8.3. Подсчет пыльцевых зерен
8.3.1. При предварительном просмотре под микроскопом по 6.4 оценивают плотность и разнообразие пыльцевых зерен в препарате, проводят идентификацию присутствующих морфологических типов пыльцевых зерен. Увеличение микроскопа должно быть достаточным для достоверной идентификации.
8.3.2. При подсчете пыльцевых зерен подбирают такое увеличение микроскопа, чтобы их число в каждом поле зрения было счетным. Скопления пыльцевых зерен, которые относятся к перге, не учитывают.
8.3.3. Поля зрения, в которых проводят подсчет (счетные поля), должны быть, по возможности, равномерно распределены по рядам. При смене счетного поля, во избежание субъективного выбора, препарат рекомендуется перемещать без наблюдения в окуляр микроскопа. Интервал между счетными полями зависит от плотности пыльцевых зерен в препарате. В случае анализа меда с низким содержанием пыльцы следует подсчитывать одну непрерывную линию.
8.3.4. По каждому ряду подсчитывают не менее 100 пыльцевых зерен. Первые пять рядов распределяют равномерно по площади препарата, как изображено на рисунке 1. Таким образом, сумма подсчитанных пыльцевых зерен должна составлять не менее 500.
8.3.5. В каждом счетном поле подсчитывают количество пыльцевых зерен искомого(ых) вида(ов) растений A_{j} , а также общее количество пыльцевых зерен n_{j} , принадлежащих:
- всем видам растений;
- видам растений, выделяющих нектар, без подсчета пыльцевых зерен видов, не выделяющих нектар (перечень не выделяющих нектар растений приведен в Приложении А);
- видов растений, выделяющих нектар, без подсчета пыльцевых зерен отдельного(ых) вида(ов).
Вариант подсчета числа пыльцевых зерен выбирает исполнитель в зависимости от целей исследования.
8.3.6. Если для интерпретации результатов недостаточно 500 учтенных пыльцевых зерен, следует подсчитывать не менее 1000 пыльцевых зерен. Для этого дополнительные пять рядов счетных полей размещают между первыми пятью рядами, как изображено на рисунке 1.
9. Обработка и представление результатов испытаний
9.1 Частоту встречаемости пыльцевых зерен отдельного вида растений X_{p} , %, рассчитывают по формуле
где A = \sum A_{i} — число пыльцевых зерен отдельного вида во всех счетных полях;
n = \sum n_{i} — общее количество подсчитанных пыльцевых зерен во всех счетных полях;
100 — коэффициент пересчета относительных долей в проценты.
9.2. При представлении результатов испытаний относительно пыльцевых зерен видов растений, выделяющих нектар, следует указать частоту встречаемости этих пыльцевых зерен относительно общего количества пыльцевых зерен всех видов.
9.3. За результат испытаний принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, полученных в условиях повторяемости, если расхождение между ними не превышает предел повторяемости r по ГОСТ ISO 5725-6. Значение предела повторяемости r приведено в таблице 1.
| Общее количество подсчитанных пыльцевых зерен n | Предел повторяемости r | Критический диапазон для трех результатов CR_{0,95} (3) | Предел воспроизводимости R |
|---|---|---|---|
| 500 и более | 0,15\overline{X_{p}} | 0,18\overline{X_{p}} | 0,30\overline{X_{p}} |
При превышении предела повторяемости r целесообразно произвести дополнительное определение частоты встречаемости пыльцевых зерен и получить еще один результат. Если при этом расхождение (X_{p,max} - X_{p,min}) результатов трех определений не превосходит значения критического диапазона CR_{0,95} (3), то в качестве окончательного результата принимают среднеарифметическое значение результатов трех определений. Значение критического диапазона CR_{0,95} (3) приведено в таблице 1.
При невыполнении этого условия проводят повторные испытания.
9.4. Расхождение между результатами испытаний, полученными в двух лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости R по ГОСТ ISO 5725-6. При выполнении этого условия приемлемы оба результата испытания и в качестве окончательного результата может быть использовано их среднеарифметическое значение. Значение предела воспроизводимости R приведено в таблице 1.
9.5. Результат испытаний представляют в виде значения, округленного до сотых долей в диапазоне частоты встречаемости от 0,1% до 1,0%; десятых долей — от 1,0% до 10,0%; целых чисел — от 10,0% до 100,0%.
9.6. Пример определения числа пыльцевых зерен, частоты встречаемости пыльцевых зерен отдельных видов представлен в Приложении Б; примеры расчета повторяемости и воспроизводимости при определении частоты встречаемости пыльцевых зерен — в Приложении В.
10. Характеристика погрешности испытаний
10.1. Погрешность результатов испытаний, получаемых согласно данному методу, не превышает 0,21\overline{X_{p}} , при доверительной вероятности P = 0,95.
В приложении приводится систематическая принадлежность по [1] ветроопыляемых и безнектарных насекомоопыляемых по [2] растений, пыльца которых встречается в меде.
| Отдел Покрытосеменные — Magnoliophyta (Angiospermatophyta) |
|---|
| Класс Однодольные — Monocotyledones (Liliopsida) |
| Семейство Осоковые — Cyperaceae Juss. |
| Род Осока — Carex L. |
| Род Камыш — Scirpus L. |
| Род Пушица — Eriophorum L. |
| Род Болотница (Ситняг) — Eleocharis R. Br. |
| Семейство Ситниковые — Juncaceae Juss. |
| Род Ситник — Juncus L. |
| Род Ожига — Luzula DC. |
| Семейство Злаковые (Мятликовые) — Poaceae (R. Br.) Barnh. (Gramineae Juss.) |
| Класс Двудольные — Magnoliopsida (Dicotyledones) |
| Семейство Амарантовые (Щирицовые) <1> - Amarantaceae Juss. |
| Род Амарант (Щирица) — Amaranthus L. |
| Семейство Березовые — Betulaceae S. F. Gray |
| Род Береза — Betula L. |
| Род Граб — Carpinus L. |
| Род Ольха — Alnus Mill. |
| Род Лещина (Орешник) <1> - Corylus L. |
| Семейство Коноплевые — Cannabaceae Endl. |
| Род Конопля — Cannabis L. |
| Семейство Маревые — Chenopodiaceae Vent. |
| Род Марь — Chenopodium L. |
| Род Лебеда — Atriplex L. |
| Семейство Сложноцветные (Астровые) — Compositae Giseke (Asteraceae Dumort.) |
| Род Амброзия — Ambrosia L. |
| Род Полынь — Artemisia L. |
| Семейство Буковые <1> - Fagaceae Dumort. |
| Род Бук — Fagus L. |
| Семейство Маковые — Papaveraceae Adans. |
| Род Маки — Papaver L. |
| Семейство Подорожниковые — Plantaginaceae Juss. |
| Род Подорожник — Plantago L. |
| Семейство Гречишные <1> - Polygonaceae Juss. |
| Род Щавель — Rumex L. |
| Семейство Лютиковые — Ranunculaceae Adans. |
| Род Василистник — Thalictrum L. Семейство Ивовые <1> - Salicaceae Mirb. |
| Род Тополь — Populus L. |
| Семейство Рогозовые — Typhaceae Juss. |
| Род Рогоз — Typha L. |
| Семейство Крапивные — Urticaceae Juss. |
| Род Крапива — Urtica L. |
| Отдел Голосеменные — Gymnospermae (Pinophyta) |
| Класс Хвойные — Pinopsida (Coniferopsida) |
| Семейство Кипарисовые — Cupressaceae Bartl. |
| Род Можжевельник — Juniperus L. |
| Семейство Сосновые — Pinaceae Lindl. |
| Род Сосна — Pinus L. |
| Род Пихта — Abies L. |
| Род Ель — Picea A. Dietr. |
| Род Лиственница — Larix Mill. |
(справочное)
При учете более 1000 пыльцевых зерен в препарате меда подсчитано 1044 пыльцевых зерна 22 идентифицированных морфологических типов и 41 пыльцевое зерно неопределенной принадлежности. Общее количество подсчитанных пыльцевых зерен n составило 1085. Число пыльцевых зерен отдельных видов A и результаты расчета по 9.1 частоты встречаемости пыльцевых зерен X_{p} представлены в таблице Б.1.
И ПРЕДСТАВЛЕНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧАСТОТЫ ВСТРЕЧАЕМОСТИ ПЫЛЬЦЕВЫХ ЗЕРЕН
8.1 Контроль повторяемости
Условиями повторяемости по ГОСТ ISO 5725-1 являются условия, при которых независимые результаты испытаний получаются одним и тем же методом на идентичных объектах испытаний, в одной и той же лаборатории, одним и тем же оператором, с использованием одного и того же оборудования, в пределах короткого промежутка времени.
По 9.3 за результат испытаний принимают среднеарифметическое значение результатов параллельных определений, если разность между максимальным и минимальным результатами, полученными в условиях повторяемости, r_{k} = X_{p,max} - X_{p,min} не превышает заданное значение предела повторяемости r:
Например, при определении частоты встречаемости пыльцевых зерен малины в двух параллельных образцах, приготовленных из одной пробы меда, оператор получил два результата:
X_{p,max} = 7,28\% ; X_{p,min} = 6,42\% .
Среднеарифметическое значение двух результатов:
\overline{X} = \frac{X_{p,max} + X_{p,min}}{2} = \frac{7,28 + 6,42}{2} = 6,85\% .
В соответствии с таблицей 1 заданное значение предела повторяемости:
Так как разность между результатами r_{k} меньше заданного значения предела повторяемости:
то значение \overline{X_{p}} = 6,85\% является результатом, полученным в условиях повторяемости. Погрешность измерения по 10.1:
После округления по 9.5 результат представляют в следующем виде:
8.2 Контроль воспроизводимости
Условиями воспроизводимости по ГОСТ ISO 5725-1 являются условия, при которых результаты испытаний получают одним и тем же методом, на идентичных объектах испытаний, в разных лабораториях, разными операторами, с использованием различного оборудования.
По 9.4 за результат испытаний принимают среднеарифметическое значение результатов, полученных в условиях воспроизводимости, если абсолютная величина разности между результатами R_{k} = \overline{X}\prime_{p} - \overline{X_{p}} не превышает заданное значение предела воспроизводимости R:
Например, при определении частоты встречаемости пыльцевых зерен малины в одной пробе меда в разных лабораториях получены два результата:
Абсолютное значение разности между результатами:
Среднеарифметическое значение результатов:
\overline{X_{p}} = \frac{\overline{X_{p}} + \overline{X}\prime_{p}}{2} = \frac{7,5 + 6,9}{2} = 7,2\% .
В соответствии с таблицей 1 заданное значение предела воспроизводимости:
R = 0,30 ; \overline{X_{p}} = 0,30 \cdot 7,2 = 2,2\% .
Так как абсолютное значение разности между результатами меньше заданного значения предела воспроизводимости:
то значение \overline{X_{p}} = 7,2\% является результатом, полученным в условиях воспроизводимости. Погрешность измерения рассчитывают по 10.1:
Результат представляют в виде: