---
title: "\"ГОСТ 17.1.4.02-90. Межгосударственный стандарт. Вода. Методика спектрофотометрического определения хлорофилла a\""
number: "ГОСТ 17.1.4.02-90"
issuer: "Государственный комитет СССР по охране природы"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/gost-17-1-4-02-90"
---

## "ГОСТ 17.1.4.02-90. Межгосударственный стандарт. Вода. Методика спектрофотометрического определения хлорофилла a"

# "ГОСТ 17.1.4.02-90. Межгосударственный стандарт. Вода. Методика спектрофотометрического определения хлорофилла a"

(утв. и введен в действие Постановлением Госкомприроды СССР от 03.07.1990 N 28)

> [!IMPORTANT]
> КонсультантПлюс: примечание.
> С 1 июля 2003 года до вступления в силу технических регламентов акты федеральных органов исполнительной власти в сфере технического регулирования носят рекомендательный характер и подлежат обязательному исполнению только в части, соответствующей целям, указанным в пункте 1 статьи 46 Федерального закона от 27.12.2002 N 184-ФЗ.
> Документ [введен](#p100009) в действие с 1 января 1991 года.


<a id="p100001"></a>Утвержден и введен в действие
Постановлением Государственного
комитета СССР по охране природы
от 3 июля 1990 г. N 28

<a id="p100002"></a>**МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ**

<a id="p100003"></a>**ВОДА**

<a id="p100004"></a>**МЕТОДИКА СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ**
ХЛОРОФИЛЛА a

<a id="p100005"></a>Water. Spectrophotometric determination
of chlorophyll a

<a id="p100006"></a>**ГОСТ 17.1.4.02-90**

<a id="p100007"></a>Группа Т32

<a id="p100008"></a>ОКСТУ 2209

<a id="p100009"></a>Дата введения
1 января 1991 года


### <a id="p100010"></a>ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ


1. <a id="p100011"></a>Разработан и внесен Институтом океанологии АН СССР, соисполнитель - Гидрохимический институт Госкомгидромета СССР.
<a id="p100012"></a>Разработчики
<a id="p100013"></a>М.Е. Виноградов, член-корр. АН СССР; Б.В. Коновалов, канд. биол. наук (руководители темы); В.А. Кимстач, д-р хим. наук; А.А. Назарова, канд. хим. наук; Т.О. Гончарова, канд. хим. наук.
2. <a id="p100014"></a>Утвержден и введен в действие Постановлением Государственного комитета СССР по охране природы от 03.07.90 N 28.
3. <a id="p100015"></a>Введен впервые.
4. <a id="p100016"></a>Ссылочные нормативно-технические документы


| <a id="p100017"></a>Обозначение НТД, на который дана ссылка | <a id="p100018"></a>Номер раздела, пункта |
| --- | --- |
| <a id="p100019"></a>[ГОСТ 8.513-84](https://bukva.ai/docs/gost-8-513-84-gosstandart-sssr) | <a id="p100020"></a>[11](#p100157) |
| <a id="p100021"></a>ГОСТ 12.1.005-88 | <a id="p100022"></a>[12](#p100081) |
| <a id="p100023"></a>ГОСТ 12.1.007-76 | <a id="p100024"></a>[12](#p100160) |
| <a id="p100025"></a>[ГОСТ 17.1.5.04-81](https://bukva.ai/docs/gost-17-1-5-04-81) | <a id="p100026"></a>[2](#p100057) |
| <a id="p100027"></a>[ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) | <a id="p100028"></a>[5.10](#p100082) |
| <a id="p100029"></a>ГОСТ 2603-79 | <a id="p100030"></a>[4.2](#p100065) |
| <a id="p100031"></a>ГОСТ 3118-77 | <a id="p100032"></a>[4.4](#p100067) |
| <a id="p100033"></a>ГОСТ 3956-76 | <a id="p100034"></a>[4.1](#p100064) |
| <a id="p100035"></a>ГОСТ 4158-80 | <a id="p100036"></a>[4.5](#p100068) |
| <a id="p100037"></a>ГОСТ 6419-78 | <a id="p100038"></a>[4.6](#p100069) |
| <a id="p100039"></a>ГОСТ 6709-72 | <a id="p100040"></a>[4.3](#p100066) |
| <a id="p100041"></a>ГОСТ 9147-80 | <a id="p100042"></a>[5.4](#p100076) |
| <a id="p100043"></a>ГОСТ 25336-82 | <a id="p100044"></a>[5.9](#p100081) |
| <a id="p100045"></a>ИСО 5667-2-83 | <a id="p100046"></a>[2](#p100057) |


5. <a id="p100047"></a>Переиздание. Июль 1999 г.


### <a id="p100048"></a>ВВЕДЕНИЕ


<a id="p100049"></a>Хлорофилл a - основной пигмент зеленых растений, в том числе одноклеточных водорослей (фитопланктона). Из нескольких десятков пигментов, содержащихся в фотосинтетическом аппарате водорослей, хлорофиллу a отведена важнейшая роль в процессе фотосинтеза. Информация о концентрации хлорофилла a и ее изменчивости в водном объекте служит критерием при оценке запасов биомассы фитопланктона и его продукции, а также индикатором загрязнения вод. Соотношение между концентрацией хлорофилла a и продуктами его превращений, а также другими пигментами (хлорофилл b, хлорофилл c1 + c2, каротиноиды) характеризует физиологическое состояние водорослей.


### 1. <a id="p100050"></a>НАЗНАЧЕНИЕ И ОБЛАСТЬ РАСПРОСТРАНЕНИЯ


<a id="p100051"></a>1.1. Методика регламентирует определение содержания хлорофилла a фитопланктона в пробах вод морских и поверхностных суши. Допускается использовать данную методику для определения хлорофилла a микрофитобентоса и микрофлоры льда. Результаты определений по данному стандарту могут быть использованы для калибровки непрямых методов оценки содержания хлорофилла a, в том числе при космическом зондировании состояния водных объектов, а также при регистрации роста водорослей в биохимических экспериментах.
<a id="p100052"></a>1.2. Методика предназначена для органов государственного контроля за состоянием водных объектов, ведомственных научно-исследовательских экологических и промысловых работ.
<a id="p100053"></a>1.3. Диапазон определяемых концентраций хлорофилла a, для которого устанавливаются пределы допускаемой погрешности определений, выполняемых по данной методике, составляет от 0,05 мг·м-3 до любых максимальных значений, встречающихся в природных водах.
<a id="p100054"></a>1.4. Основными компонентами, мешающими анализу, являются хлорофилл b, хлорофилл c<sub>1</sub> + c<sub>2</sub>, феофитин a, феофорбид a и хлорофиллид a. Содержание хлорофилла b, хлорофилла c1 + c2, суммарное содержание феофитина a и феофорбида a соизмеримо с содержанием хлорофилла a, поэтому поправка на присутствие этих пигментов вносится при расчете концентрации хлорофилла a. Содержание хлорофиллида a обычно несоизмеримо мало по сравнению с содержанием хлорофилла a, поэтому поправка на его присутствие не вносится.
<a id="p100055"></a>1.5. Определяемое вещество - хлорофилл a - легко разрушается под воздействием света, при повышении температуры и в кислой среде, поэтому при проведении любых процедур, начиная с момента отбора пробы и до окончания спектрофотометрирования, следует обеспечить нахождение объекта анализа (пробы, фильтра с осадком или экстракта) в затемненном прохладном месте при отсутствии паров кислоты.
<a id="p100056"></a>1.6. Продолжительность анализа одной пробы от момента ее отбора до окончания спектрофотометрирования без учета времени хранения пробы, фильтра с осадком и экстракта не должна превышать 3 ч.


### 2. <a id="p100057"></a>ССЫЛКИ НА СТАНДАРТЫ, СОВМЕСТНО С КОТОРЫМИ ДОЛЖЕН ПРИМЕНЯТЬСЯ НАСТОЯЩИЙ СТАНДАРТ


<a id="p100058"></a>[ГОСТ 17.1.5.04](https://bukva.ai/docs/gost-17-1-5-04-81) Охрана природы. Гидросфера. Приборы и устройства для отбора, первичной обработки и хранения проб природных вод. Общие технические условия.
<a id="p100059"></a>ИСО 5667-2 Качество воды. Отбор проб. Часть 2. Руководство по технике отбора проб.


### 3. <a id="p100060"></a>СУЩНОСТЬ МЕТОДА


<a id="p100061"></a>В основе метода - спектрофотометрирование экстракта пигментов до и после его подкисления раствором соляной кислоты. Расчеты концентрации хлорофилла a основаны на известных удельных спектральных показателях поглощения света хлорофиллом a и основными компонентами, мешающими анализу.
<a id="p100062"></a>Для приготовления экстракта пробу воды фильтруют через мембранный фильтр с нанесенным на нем слоем углекислого бария или магния, осадок размельчают (гомогенизируют), пигменты экстрагируют водным ацетоном из гомогената и удаляют центрифугированием из экстракта светорассеивающую взвесь.


### 4. <a id="p100063"></a>РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ



#### <a id="p100064"></a>4.1 Силикагель по ГОСТ 3956.


#### <a id="p100065"></a>4.2 Ацетон ч.д.а. по ГОСТ 2603.


#### <a id="p100066"></a>4.3 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.


#### <a id="p100067"></a>4.4 Кислота соляная х.ч. по ГОСТ 3118.


#### <a id="p100068"></a>4.5 Барий углекислый ч.д.а. по ГОСТ 4158.


#### <a id="p100069"></a>4.6 Магний углекислый основной ч.д.а. по ГОСТ 6419.

<a id="p100070"></a>4.7. Бумага фильтровальная - по нормативно-технической документации (НТД).
<a id="p100071"></a>4.8. Фильтры мембранные размерами пор 0,6 - 0,9 мкм: отечественного производства "Владипор" типа МФА-МА N 6 - 9 (0,6 - 0,9 мкм) (см. Приложение 1, [п. 2](#p100201)) или типа МФЦ N 4 (0,6 мкм) по НТД; производства зарубежных фирм Synpor N 4 (0,85 мкм) или N 5 (0,6 мкм), Millipore HA, Whatman GF/F.


### 5. <a id="p100072"></a>СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ И ОБОРУДОВАНИЕ


<a id="p100073"></a>5.1. Спектрофотометр. Выделяемый спектральный интервал должен быть не более 2 - 3 нм, точность установки длин волн в диапазоне 430 - 750 нм не ниже +/- 2 нм, погрешность измерений по шкале оптических плотностей не более 0,01Б. Например спектрофотометры: двухлучевой типа СФ-18 или однолучевой типа СФ-46 по НТД.
<a id="p100074"></a>5.2. Центрифуга лабораторная. Вместимость пробирок 10 см3, число гнезд 6(12), ускорение 4000 - 5000 g. Например типа ЦЛН-2 или ОПн-ВУХЛ [4.2](#p100065) по НТД.
<a id="p100075"></a>5.3. Установка фильтровальная с воронками под фильтры мембранные диаметром от 35 до 142 мм (см. [Приложения 3](#p100287) и [4](#p100292)).
<a id="p100076"></a>5.4. Гомогенизатор механический с вместимостью 10 - 15 см3. Ступка фарфоровая N 1 - 3 (диаметр 50 - 90 мм) с пестиком N 2 (диаметр 22 - 34 мм) по ГОСТ 9147. Рекомендуется также устройство из стекла, схема которого дана в [Приложении 5](#p100305).
<a id="p100077"></a>5.5. Насос вакуумный, типа НВР-1 или ЗНВР-1Д, или отсасыватель хирургический ОХ-10 по НТД.

#### <a id="p100078"></a>5.6 Батометр (см. Приложение 1, [п. 1](#p100172)).

<a id="p100079"></a>5.7. Канистры полиэтиленовые черного цвета вместимостью 3, 5, 10 и 20 дм3.

#### <a id="p100080"></a>5.8 Ведро полиэтиленовое или эмалированное.

<a id="p100081"></a>5.9. Эксикатор диаметром 140, 190 или 250 мм по ГОСТ 25336.
<a id="p100082"></a>5.10. Пробирки стеклянные градуированные с притертой пробкой на 10 см3 с ценой деления 0,1 см3 по [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) и НТД.


### 6. <a id="p100083"></a>ПОДГОТОВКА РЕАКТИВОВ И ФИЛЬТРОВ


<a id="p100084"></a>6.1. Порошок углекислого бария (BaCO3) тщательно растирают в фарфоровой ступке с добавлением небольшого количества дистиллированной воды или фильтрованной природной. Из полученной массы удаляют самую грубую фракцию, оседающую со скоростью более 0,5 см·с-1, после чего эту массу используют для приготовления суспензии. Рекомендуемая концентрация BaCO3 в суспензии - 30 г·дм-3. Порция суспензии, добавляемой в фильтровальную воронку перед фильтрованием, берется из расчета 20 мг BaCO3 на 1 см2 поверхности фильтра.
<a id="p100085"></a>6.2. Мембранные фильтры готовят в зависимости от типа материала фильтра. Некоторые типы фильтров выпускают готовыми к использованию (например, стекловолокнистые фильтры типа GF/F), другие требуют предварительного вымачивания или даже кипячения в воде. Например, фильтры типа Synpor необходимо трижды прокипятить по 10 - 15 мин в свежих порциях дистиллированной воды. После кипячения следует провести выбраковку деформированных фильтров. Готовые фильтры хранят в сухом состоянии.
<a id="p100086"></a>6.3. Приготовление 1 дм3 90%-ного водного ацетона проводят смешением 0,9 дм3 100%-ного ацетона и 0,1 дм3 дистиллированной воды. В приготовленный раствор добавляют порцию MgCO3 из расчета 1 - 2 г на 1 дм3 раствора, суспензию тщательно перемешивают в течение 20 - 30 с и хранят не более 3 - 5 сут в склянках из темного стекла.
<a id="p100087"></a>6.4. 0,5 см3 концентрированной соляной кислоты растворяют в 10 см3 ацетона. Приготовленный раствор хранят не более суток.


### 7. <a id="p100088"></a>ФИЛЬТРОВАНИЕ ПРОБ ВОДЫ И ХРАНЕНИЕ ФИЛЬТРОВ


<a id="p100089"></a>7.1. Объем пробы зависит от ожидаемой концентрации хлорофилла a в конкретном водном объекте и определяется в соответствии с [Приложением 2](#p100214), при этом количество хлорофилла в пробе должно составлять от 2 до 20 мкг.
<a id="p100090"></a>Из этих же соображений выбирается объем пробы грунта или льда при анализе микрофитобентоса или ледовой микрофлоры.
<a id="p100091"></a>7.2. После отбора пробу необходимо немедленно профильтровать. При отсутствии такой возможности допускается хранить ее в холодильнике при температуре от 2 до 6 °C. Максимально допустимая продолжительность хранения с момента отбора - не более 2 - 3 ч. После хранения, перед началом фильтрования, пробу необходимо осторожно перемешать. К материалу емкости для хранения пробы предъявляются те же требования, что и к материалу для изготовления устройства для отбора пробы (см. [Приложение 1](#p100171)).
<a id="p100092"></a>7.3. Проба воды фильтруется через мембранный фильтр (см. [п. 4.8](#p100071)), покрытый слоем BaCO3 (или MgCO3). Фильтрование проводится под вакуумом или под давлением (в том числе самотеком), перепад давления - 0,15 - 0,2 атм.
<a id="p100093"></a>Для получения на фильтре достаточно плотного и равномерного по толщине слоя BaCO3 и во избежание его взмучивания фильтрование необходимо проводить в следующей последовательности: заполнить фильтровальную воронку смесью фильтрата с порцией суспензии BaCO3, создать перепад давления, пропустить через фильтр некоторое количество фильтрата для полного осаждения BaCO3, после чего приступить к фильтрованию отобранной пробы.
<a id="p100094"></a>В процессе фильтрования необходимо следить за уровнем воды в фильтровальной воронке и не допускать размывания слоя BaCO3 струей, поступающей в воронку.
<a id="p100095"></a>После окончания фильтрования для подсушки фильтра следует поддержать перепад давления в течение еще 5 - 10 с.
<a id="p100096"></a>7.4. При значительной мутности пробы допускается применение фильтров с диаметром пор до 2,5 мкм и перепад давления до 0,5 - 0,6 атм. При этом допускается для последующего приготовления экстракта (см. [разд. 8](#p100101)) использовать слой BaCO3 вместе с фильтром. В этом случае необходимо убедиться в отсутствии потерь водорослей вследствие их продавливания через слой BaCO3 и фильтр. Контрольное определение содержания хлорофилла рекомендуется проводить, отфильтровывая мутную пробу на фильтр большого диаметра (или на несколько фильтров того же диаметра) с порами 0,6 - 0,9 мкм при перепаде давления 0,2 атм. Допускается контролировать присутствие хлорофилла в фильтрате с помощью флуориметра.

#### <a id="p100097"></a>7.5 Продолжительность фильтрования не должна превышать 40 - 60 мин.

<a id="p100098"></a>7.6. Сразу же после фильтрования необходимо подсушить фильтр с помощью фильтровальной бумаги, подкладывая ее в несколько слоев под фильтр и меняя 2 - 3 раза в течение 10 - 15 мин. Затем осадок с фильтра снять и перенести в гомогенизатор.
<a id="p100099"></a>При невозможности начать гомогенизацию и экстрагирование немедленно фильтр с осадком необходимо тщательно высушить, поместив его в эксикатор с силикагелем, и хранить в холодильнике при температуре минус 10 - 0 °C. Во избежание потерь вследствие рассыпания осадка с фильтров при их хранении и транспортировке допускается хранить фильтры свернутыми пополам осадком внутрь.
<a id="p100100"></a>7.7. Срок хранения должен быть по возможности сокращен и не превышать 1 мес. (в морозильной камере при температуре ниже минус 20 °C - до 3 мес.).


### 8. <a id="p100101"></a>ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА


<a id="p100102"></a>8.1. Гомогенизация и экстрагирование. Слой BaCO3, содержащий отфильтрованную взвесь, снимают скальпелем с мембранного фильтра и количественно переносят в механический гомогенизатор. После добавления туда же нескольких кубических сантиметров 90%-ного ацетона в течение 1 мин взвесь растирают. Для экстрагирования пигментов гомогенат в течение 30 мин выдерживают при комнатной температуре. Полученный экстракт сливают в центрифужную пробирку. Осадок повторно растирают в гомогенизаторе в течение 1 мин при добавлении новой порции 90%-ного ацетона. Через 30 мин вторую порцию экстракта вместе с осадком сливают в ту же центрифужную пробирку. Остатки экстракта и взвеси со ступицы и пестика смывают минимальным количеством 90%-ного ацетона и также сливают в центрифужную пробирку с экстрактом.
<a id="p100103"></a>При анализе фитопланктона, богатого зелеными и сине-зелеными водорослями с толстыми оболочками или слизью, для повышения полноты гомогенизации при растирании допускается добавить кварцевый песок или толченое стекло марки "пирекс".
<a id="p100104"></a>Взвесь, осажденную на фильтр из стекловолокна, допускается гомогенизировать вместе с фильтром. В этом случае следует использовать гомогенизатор со сферическими рабочими поверхностями.
<a id="p100105"></a>Кроме механического растирания, допускаются другие способы гомогенизации, например с помощью ультразвука. При этом способе необходимо следить за отсутствием чрезмерного, выше 40 °C, нагрева обрабатываемой взвеси.
<a id="p100106"></a>Высокая степень гомогенизации достигается также продавливанием замороженной взвеси под большим давлением через узкое отверстие (фильеру).
<a id="p100107"></a>8.2. Центрифугирование. Светорассеивающую взвесь удаляют из экстракта центрифугированием при 4000 - 5000 g в течение 15 мин, например на центрифуге типа ЦЛН-2 при 8000 об/мин. Чистота экстракта контролируется по оптической плотности на 750 нм. Последняя не должна превышать 0,005Б на каждый сантиметр рабочей длины кюветы. При более высокой плотности центрифугирование следует повторить.
<a id="p100108"></a>После центрифугирования экстракт следует перенести в стеклянную мерную пробирку, при необходимости добавляя 90%-ный ацетон, довести его объем до объема фотометрической кюветы и закрыть пробирку притертой пробкой (см. Приложение 2, [табл. 5](#p100071)).
<a id="p100109"></a>Подготовленный к фотометрированию экстракт допускается хранить в холодильнике при температуре 0 - 5 °C не более 1 сут.
<a id="p100110"></a>8.3. Спектрофотометрирование и подкисление экстракта. При спектрофотометрировании используются кюветы с рабочей длиной от 0,5 до 5 см в зависимости от объема экстракта и его оптической плотности. Последняя должна находиться в диапазоне 0,05 - 0,8Б.
<a id="p100111"></a>Отсчеты оптических плотностей берутся на четырех длинах волн - 664, 647, 630 и 750 нм. Фотометрирование проводится дважды: до и после подкисления экстракта несколькими каплями приготовленного раствора соляной кислоты в ацетоне.
<a id="p100112"></a>Количество кислоты, добавляемой в экстракт, зависит от его объема и рассчитывается таким образом, чтобы концентрация кислоты в нем равнялась 3 - 5 ммоль·дм-3. Такая концентрация будет получена, если к каждому кубическому сантиметру экстракта добавить 0,01 см3 приготовленного заранее раствора HCl (см. [п. 6.4](#p100087)). После добавления кислоты экстракт необходимо перемешать в течение 2 - 3 мин.
<a id="p100113"></a>При фотометрировании подкисленного экстракта отсчеты берутся на двух длинах волн - 664 и 750 нм.
<a id="p100114"></a>Одновременно с определением концентрации хлорофилла a допускается определять концентрации и других пигментов: феофитина a, хлорофиллов b и c1 + c2, суммарную концентрацию каротиноидов, а также пигментный индекс (см. [п. 9.3](#p100132)). С этой целью необходимо до подкисления экстракта дополнительно взять отсчеты еще на двух длинах волн - 430 и 480 нм.


### 9. <a id="p100115"></a>ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ



#### <a id="p100116"></a>9.1 Концентрацию хлорофилла a в пробе (cxa) вычисляют по формуле


<a id="p100117"></a> $c_{xa} = 2,44 \frac{D_{664} - D_{664}^{k}}{D_{664}} c_{x}\prime_{a}$ , (1)

<a id="p100118"></a>где D664 и $D_{664}^{k}$ - оптические плотности экстракта в белах на длине волны 664 нм до и после его подкисления. Концентрации хлорофилла a в пробе, мкг·дм-3, без поправки на присутствие феофитина a $(c_{x}\prime_{a})$ вычисляют по формуле

<a id="p100119"></a> $c_{x}\prime_{a} = (11,85D_{664} - 1,54D_{647} - 0,08D_{630}) \frac{V_{\text{э}}}{V_{\text{пр}} \cdot l}$ , (2)

<a id="p100120"></a>где D630 и D647 - оптические плотности экстракта в белах на длинах волн 630 и 647 нм;
<a id="p100121"></a>Vэ - объем экстракта, см3;
<a id="p100122"></a>Vпр - объем пробы, дм3;
<a id="p100123"></a>l - длина кюветы, см.

#### <a id="p100124"></a>9.2 Концентрации других пигментов (cфa, cb, $c_{c_{1} + c_{2}}$ , ck), мкг·дм-3, рассчитывают по формулам


<a id="p100125"></a> $c_{\text{фа}} = 2,44 \frac{1,7D_{664}^{k} - D_{664}}{D_{664}} c_{x}\prime_{a}$ ; (3)

<a id="p100126"></a> $c_{b} = (21,03D_{647} - 5,43D_{664} - 2,66D_{630}) \cdot \frac{V_{\text{э}}}{V_{\text{пр}} \cdot l}$ ; (4)

<a id="p100127"></a> $c_{c_{1} + c_{2}} = (24,52D_{630} - 1,67D_{664} - 7,6D_{647}) \cdot \frac{V_{\text{э}}}{V_{\text{пр}} \cdot l}$ . (5)

<a id="p100128"></a>В том случае, если в пробе содержатся преимущественно зеленые или сине-зеленые водоросли, концентрации каротиноидов (ck), мкг·дм-3, вычисляют по формуле

<a id="p100129"></a> $c_{k} = 4D_{480} \cdot \frac{V_{\text{э}}}{V_{\text{пр}} \cdot l}$ . (6)

<a id="p100130"></a>При доминировании диатомовых, перидиней, золотистых и разножгутиковых - по формуле

<a id="p100131"></a> $c_{k} = 10D_{480} \cdot \frac{V_{\text{э}}}{V_{\text{пр}} \cdot l}$ . (7)


#### <a id="p100132"></a>9.3 Пигментный индекс в экстракте вычисляют по формуле


<a id="p100133"></a> $I_{430/664} = \frac{D_{430}}{D_{664}}$ . (8)

<a id="p100134"></a>9.4. Все оптические плотности, входящие в [формулы (1)](#p100117) - (8), берутся с учетом поправки, которая равна оптической плотности на длине волны 750 нм. Эта поправка вычитается из значения измеренной оптической плотности.
<a id="p100135"></a>За результат определений принимают единичный результат для каждой пробы.


### 10. <a id="p100136"></a>ПОГРЕШНОСТЬ ОПРЕДЕЛЕНИЙ


<a id="p100137"></a>При соблюдении требований, предусмотренных данным стандартом, погрешность текущих определений хлорофилла $a \pm \delta_{r}$ в процентах не будет превышать значений, указанных в табл. 1.

<a id="p100138"></a>Таблица 1


| <a id="p100139"></a>Концентрация хлорофилла a в пробе воды, мкг·дм-3 | <a id="p100140"></a>Ориентировочная концентрация хлорофилла a в экстракте, мкг·см-3 | <a id="p100141"></a>Погрешность $\pm \delta_{r}$ , % |
| --- | --- | --- |
| <a id="p100142"></a>< 0,02 | <a id="p100143"></a>< 0,25 | <a id="p100144"></a>100 |
| <a id="p100145"></a>0,02 - 0,07 | <a id="p100146"></a>0,25 - 0,5 | <a id="p100147"></a>50 |
| <a id="p100148"></a>0,07 - 0,2 | <a id="p100149"></a>0,5 - 1,5 | <a id="p100150"></a>30 |
| <a id="p100151"></a>0,2 - 0,7 | <a id="p100152"></a>1,5 - 2,5 | <a id="p100153"></a>20 |
| <a id="p100154"></a>> 0,7 | <a id="p100155"></a>> 2,5 | <a id="p100156"></a>10 |



### 11. <a id="p100157"></a>РЕГУЛЯРНЫЙ КОНТРОЛЬ ПОГРЕШНОСТИ ТЕКУЩИХ ОПРЕДЕЛЕНИЙ


<a id="p100158"></a>Строгое соблюдение требований настоящего стандарта обеспечивает исключение всех составляющих погрешности, кроме тех, которые возникают при фотометрировании экстракта. Поэтому для обеспечения текущих определений с регламентированной погрешностью наряду с соблюдением требований, установленных методикой, следует регулярно контролировать погрешность, возникающую при спектрофотометрировании.
<a id="p100159"></a>С этой целью в соответствии с требованиями [ГОСТ 8.513](https://bukva.ai/docs/gost-8-513-84-gosstandart-sssr) необходимо ежегодно проводить обязательную государственную поверку спектрофотометра. Кроме того, перед каждой серией текущих определений, но не реже одного раза в месяц, следует оценивать погрешность определений оптической плотности и установки шкалы длин волн путем сравнения спектров контрольных светофильтров, входящих в комплект прибора, с их спектрами, указанными в паспорте.


### 12. <a id="p100160"></a>ТРЕБОВАНИЯ К ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ ОТХОДОВ АНАЛИЗА, К БЕЗОПАСНОСТИ И КВАЛИФИКАЦИИ ОПЕРАТОРА


<a id="p100161"></a>Слив отходов анализа в канализацию допускается после их предварительного разбавления не менее чем в 100 раз.
<a id="p100162"></a>В процессе анализа требуется соблюдение мер предосторожности, регламентируемых при работе с вредными веществами (для ацетона, соляной кислоты и углекислого бария) по ГОСТ 12.1.005 и ГОСТ 12.1.007.
<a id="p100163"></a>Лица, допускаемые к выполнению измерений, должны обладать опытом проведения типовых биохимических анализов, а также навыками обращения со спектрофотометрами.


### 13. <a id="p100164"></a>ФОРМА ОТЧЕТА О ПРОВЕДЕННОМ ОПРЕДЕЛЕНИИ


<a id="p100165"></a>В отчете должна быть следующая информация:
<a id="p100166"></a>место, время и устройство отбора проб;
<a id="p100167"></a>результаты должны быть выражены в соответствии с [разд. 9](#p100115);
<a id="p100168"></a>любые отклонения от данной методики и другие обстоятельства, которые могут повлиять на результаты определений;
<a id="p100169"></a>ссылка на настоящий стандарт.





<a id="p100170"></a>Приложение 1
Справочное

<a id="p100171"></a>**БАТОМЕТРЫ И ФИЛЬТРЫ**

1. <a id="p100172"></a>Устройства для отбора проб
<a id="p100173"></a>Устройствами для отбора проб могут служить:
<a id="p100174"></a>батометр, срабатывающий от посыльного грузика или электрического импульса на заданной глубине;
<a id="p100175"></a>батометр для отбора "интегральной" пробы, снабженный устройством для обеспечения равномерного поступления воды при равномерном движении батометра в слое отбора;
<a id="p100176"></a>шланг (с насосом или без насоса);
<a id="p100177"></a>ведро (для отбора проб с поверхности).
<a id="p100178"></a>Материал для изготовления рабочих емкостей устройств для отбора, с которыми непосредственно контактирует отобранная проба, должен быть непрозрачным, нетоксичным, коррозионно-стойким. Оптимально удовлетворяет этим требованиям черный полиэтилен. Для батометра допускаются винипласт, оргстекло, другие пластмассы, стекло. При этом прозрачные материалы должны иметь снаружи непрозрачное покрытие. Перед началом работ устройство для отбора необходимо в течение нескольких дней выдержать в воде и тщательно отмыть.
<a id="p100179"></a>Для изготовления батометров можно воспользоваться конструкторскими разработками, осуществленными в ОКБ океанологической техники института океанологии АН СССР (см. табл. 2). Вместимость и марки батометров указаны в табл. 2.

<a id="p100180"></a>Таблица 2


| <a id="p100181"></a>Вместимость батометра, дм3 | <a id="p100182"></a>Марка батометра по спецификации ОКБ ОТ ИОАН СССР |
| --- | --- |
| <a id="p100183"></a>1 | <a id="p100184"></a>БП-1-63 |
| <a id="p100185"></a>2,5 | <a id="p100186"></a>ОА-07.00.00.00 |
| <a id="p100187"></a>2,5 | <a id="p100188"></a>2БМ2,5-00-00 |
| <a id="p100189"></a>7 | <a id="p100190"></a>Б4-С7-65 |
| <a id="p100191"></a>10 | <a id="p100192"></a>БМ10-00-00 |
| <a id="p100193"></a>30 | <a id="p100194"></a>БМ30-00-00 |
| <a id="p100195"></a>130 | <a id="p100196"></a>2А.011.00.00.00 |
| <a id="p100197"></a>150 | <a id="p100198"></a>ОА.285.00.00.00 |


<a id="p100199"></a>Кроме того, выпускается "барометр морской" вместимостью 1 дм3 марки БМ-48.
<a id="p100200"></a>Для защиты этих батометров от коррозии рекомендуется двухразовое покрытие их внутренней поверхности лаком марки ЭДН-1 по нормативно-технической документации или аналогичным.
2. <a id="p100201"></a>Размеры мембранных фильтров отечественного производства (мембраны "ВЛАДИПОР" типа МФА-МА ПО "ТАСМА") указаны в табл. 3.

<a id="p100202"></a>Таблица 3


| <a id="p100203"></a>Диаметр диска, мм | <a id="p100204"></a>Минимальный объем партии, шт. |
| --- | --- |
| <a id="p100205"></a>35-2 | <a id="p100206"></a>10000 |
| <a id="p100207"></a>47-2 | <a id="p100208"></a>6000 |
| <a id="p100209"></a>90-3 | <a id="p100210"></a>1500 |
| <a id="p100211"></a>142-4 | <a id="p100212"></a>500 |






<a id="p100213"></a>Приложение 2
Справочное

<a id="p100214"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЪЕМОВ ПРОБ**

<a id="p100215"></a>Ориентировочно оценить объем пробы при заданной величине ожидаемой концентрации хлорофилла a в пробе можно по табл. 4.

<a id="p100216"></a>Таблица 4


| <a id="p100217"></a>Концентрация хлорофилла a в пробе мг·м-3 | <a id="p100218"></a>0,05 | <a id="p100219"></a>0,1 | <a id="p100220"></a>0,5 | <a id="p100221"></a>1 | <a id="p100222"></a>5 | <a id="p100223"></a>10 | <a id="p100224"></a>50 | <a id="p100225"></a>100 |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100226"></a>Объем пробы, дм3 | <a id="p100227"></a>Более 40 | <a id="p100228"></a>20 - 50 и более | <a id="p100229"></a>5 - 50 | <a id="p100230"></a>2 - 20 | <a id="p100231"></a>0,4 - 4 | <a id="p100232"></a>0,2 - 2 | <a id="p100233"></a>0,04 - 0,4 | <a id="p100234"></a>0,02 - 0,2 |


<a id="p100235"></a>*Примечание.* Приведенные объемы проб рассчитаны исходя из оптимального диапазона оптических плотностей экстракта на длине волны 664 нм (0,05 - 0,8Б) и характерного отношения объема к рабочей длине для кювет, обычно используемых при фотометрировании. Это отношение может меняться от 2,5 до 4. При использовании специальных кювет с меньшим отношением объема к длине объем проб следует уменьшить пропорционально уменьшению указанного отношения. Ориентировочные соотношения между количеством хлорофилла a в экстракте, длиной кюветы (l), объемом экстракта в кювете (Vэ), концентрацией хлорофилла a в экстракте (cxa) и оптической плотностью D664 приведены в табл. 5.

<a id="p100236"></a>Таблица 5


<table>
<colgroup><col width="18%"><col width="7%"><col width="7%"><col width="7%"><col width="7%"><col width="8%"><col width="7%"><col width="7%"><col width="7%"><col width="7%"><col width="7%"><col width="7%"><col width="7%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100237"></a>Количество хлорофилла a в экстракте, мкг</td><td colspan="3"><a id="p100238"></a>2</td><td colspan="3"><a id="p100239"></a>5</td><td colspan="3"><a id="p100240"></a>10</td><td colspan="3"><a id="p100241"></a>20</td></tr>
<tr><td><a id="p100242"></a>l, см</td><td><a id="p100243"></a>1</td><td><a id="p100244"></a>2</td><td><a id="p100245"></a>5</td><td><a id="p100246"></a>1</td><td><a id="p100247"></a>2</td><td><a id="p100248"></a>5</td><td><a id="p100249"></a>1</td><td><a id="p100250"></a>2</td><td><a id="p100251"></a>5</td><td><a id="p100252"></a>1</td><td><a id="p100253"></a>2</td><td><a id="p100254"></a>5</td></tr>
<tr><td><a id="p100255"></a>Vэ, см3</td><td><a id="p100256"></a>4</td><td><a id="p100257"></a>8</td><td><a id="p100258"></a>20</td><td><a id="p100259"></a>4</td><td><a id="p100260"></a>8</td><td><a id="p100261"></a>20</td><td><a id="p100262"></a>4</td><td><a id="p100263"></a>8</td><td><a id="p100264"></a>20</td><td><a id="p100265"></a>4</td><td><a id="p100266"></a>8</td><td><a id="p100267"></a>20</td></tr>
<tr><td><a id="p100268"></a>cxa, мкг·см-3</td><td><a id="p100269"></a>0,5</td><td><a id="p100270"></a>0,25</td><td><a id="p100271"></a>0,1</td><td><a id="p100272"></a>1,25</td><td><a id="p100273"></a>0,625</td><td><a id="p100274"></a>0,25</td><td><a id="p100275"></a>2,5</td><td><a id="p100276"></a>1,25</td><td><a id="p100277"></a>0,5</td><td><a id="p100278"></a>5</td><td><a id="p100279"></a>2,5</td><td><a id="p100280"></a>1</td></tr>
<tr><td><a id="p100281"></a>D664, Б</td><td colspan="3"><a id="p100282"></a>0,05</td><td colspan="3"><a id="p100283"></a>0,125</td><td colspan="3"><a id="p100284"></a>0,25</td><td colspan="3"><a id="p100285"></a>0,5</td></tr>
</table>






<a id="p100286"></a>Приложение 3
Рекомендуемое

<a id="p100287"></a>**СХЕМА ФИЛЬТРОВАЛЬНОЙ УСТАНОВКИ ДЛЯ ФИЛЬТРОВАНИЯ САМОТЕКОМ**
**В ПОЛЕВЫХ УСЛОВИЯХ**

<a id="p100288"></a> ![13. Форма отчета о проведенном определении](https://i.bukva.ai/YEBVzRs4/img_0.png) 

<a id="p100289"></a>1 - воронка фильтровальная (например, В-67,
разработка ОКБ ОТ ИОАН СССР, см. [Приложение 1](#p100171));
2 - трубка полиэтиленовая; 3 - канистра полиэтиленовая;
4 - штатив для воронок; 5 - полка для канистр

<a id="p100290"></a>Черт. 1





<a id="p100291"></a>Приложение 4
Рекомендуемое

<a id="p100292"></a>**СХЕМА УСТАНОВКИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ СЖАТОГО ВОЗДУХА, ИСПОЛЬЗУЕМОГО**
**ПРИ ЗАВЕРШЕНИИ ФИЛЬТРОВАНИЯ САМОТЕКОМ ИЛИ ПРИ ФИЛЬТРОВАНИИ**
**ПРОБ МАЛОГО ОБЪЕМА В ПОЛЕВЫХ УСЛОВИЯХ**

<a id="p100293"></a> ![13. Форма отчета о проведенном определении](https://i.bukva.ai/YEBVzRs4/img_1.png) 

<a id="p100294"></a>1 - сжатый воздух; 2 - пробка; 3 - канистра;
4 - вода; 5 - трубка; 6 - зажим; 7 - анализируемая проба;
8 - воронка фильтровальная

<a id="p100295"></a>Черт. 2

<a id="p100296"></a>Примечания:
1. <a id="p100297"></a>Предпочтительнее использовать дюралевые канистры, однако при небольшом давлении (до 0,15 - 0,2 атм) пригодны канистры из твердого полиэтилена.
2. <a id="p100298"></a>Для получения запаса сжатого воздуха в нижней канистре следует:
<a id="p100299"></a>а) собрать установку по схеме, изображенной на черт. 2, заполнить верхнюю канистру водой до уровня, не доходящего до пробки на несколько сантиметров;
<a id="p100300"></a>б) разжать верхний зажим и зажать нижний;
<a id="p100301"></a>в) наклонить верхнюю канистру так, чтобы вода начала поступать по трубке в нижнюю, после чего возвратить ее в нормальное положение;
<a id="p100302"></a>г) после перетекания воды в нижнюю канистру в ней образуется запас сжатого воздуха, давление в котором будет определяться разностью уровней воды в канистрах - H.
3. <a id="p100303"></a>Для создания давления можно использовать любую чистую воду (фильтрованную или водопроводную), в дюралевых канистрах - желательно пресную.





<a id="p100304"></a>Приложение 5
Рекомендуемое

<a id="p100305"></a>**СХЕМА ГОМОГЕНИЗАТОРА**

<a id="p100306"></a> ![13. Форма отчета о проведенном определении](https://i.bukva.ai/YEBVzRs4/img_2.png) 

<a id="p100307"></a>1 - пестик; 2 - ступица

<a id="p100308"></a>Черт. 3

<a id="p100309"></a>*Примечание.* Наружная коническая поверхность M пестика и внутренняя поверхность N ступицы взаимно пришлифованы.



<a id="p100310"></a>

---