---
title: "\"ГОСТ 10444.1-84 (СТ СЭВ 3833-82). Государственный стандарт Союза ССР. Консервы. Методы микробиологического анализа. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе\""
number: "ГОСТ 10444.1-84"
issuer: "Государственный комитет СССР по стандартам"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/gost-10444-1-84"
---

## "ГОСТ 10444.1-84 (СТ СЭВ 3833-82). Государственный стандарт Союза ССР. Консервы. Методы микробиологического анализа. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе"

# "ГОСТ 10444.1-84 (СТ СЭВ 3833-82). Государственный стандарт Союза ССР. Консервы. Методы микробиологического анализа. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе"

(введен в действие Постановлением Госстандарта СССР от 17.01.1984)

(ред. от 01.07.1990)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия - национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза "Технический регламент на соковую продукцию из фруктов и овощей" (ТР ТС 023/2011) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 28.01.2020 N 19).
> Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза "Технический регламент на соковую продукцию из фруктов и овощей" (ТР ТС 023/2011) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Комиссии Таможенного союза от 09.12.2011 N 882).
> Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза "О безопасности пищевой продукции" (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Комиссии Таможенного союза от 09.12.2011 N 880).
> Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 N 02-03-48/563).
> Документ включен в Перечень национальных стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения Федерального закона "Технический регламент на соковую продукцию из фруктов и овощей" и осуществления оценки соответствия (Распоряжение Правительства РФ от 19.05.2009 N 690-р).
> Документ включен в Перечень национальных стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимых для применения и исполнения Федерального закона "Технический регламент на молоко и молочную продукцию" и осуществления оценки соответствия (Распоряжение Правительства РФ от 15.12.2008 N 1866-р).
> С 1 июля 2003 года до вступления в силу технических регламентов акты федеральных органов исполнительной власти в сфере технического регулирования носят рекомендательный характер и подлежат обязательному исполнению только в части, соответствующей целям, указанным в пункте 1 статьи 46 Федерального закона от 27.12.2002 N 184-ФЗ.
> Ограничение срока действия снято по Протоколу N 4-93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации ("ИУС", N 4, 1994).
> Документ [утрачивает](#p100011) силу с 01.07.1995.
> Документ [вводится](#p100010) в действие с 01.07.1985.
> Взамен ГОСТ 10444.1-75.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Введен в действие<br>
Постановлением Государственного<br>
комитета СССР по стандартам

</div>

от 17 января 1984 года

<a id="p100002"></a>**ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР**

<a id="p100003"></a>**КОНСЕРВЫ**

<a id="p100004"></a>**МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА**

<a id="p100005"></a>**ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАСТВОРОВ РЕАКТИВОВ, КРАСОК,**
**ИНДИКАТОРОВ И ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД, ПРИМЕНЯЕМЫХ**
**В МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОМ АНАЛИЗЕ**

<a id="p100006"></a>Canned food.
Preparation of reagent solutions, dyes, indicators
and culture media for microbiological analysis

<a id="p100007"></a>**ГОСТ 10444.1-84**

<div align="center">

**(СТ СЭВ 3833-82)**

</div>


<div align="right">

<a id="p100008"></a>Группа Н09

<a id="p100009"></a>ОКСТУ 9109

</div>


<a id="p100010"></a>Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 17.01.1984 срок введения установлен с 01.07.1985.
<a id="p100011"></a>Постановлением Госстандарта СССР от 25.09.1989 N 2871 срок действия продлен до 01.07.1995.

<a id="p100012"></a>Переиздание (июнь 1993 г.) с Изменением N 1, утвержденным в июле 1990 г. (ИУС 11-90).
<a id="p100013"></a>Взамен ГОСТ 10444.1-75.

<a id="p100014"></a>Настоящий стандарт распространяется на методы приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе.
<a id="p100015"></a>(Измененная редакция, Изм. N 1).


## 1. <a id="p100016"></a>ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ


<a id="p100017"></a>1.1. Для приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред (если нет специальных указаний) применяют:
<a id="p100018"></a>воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72;
<a id="p100019"></a>реактивы квалификации х.ч. и ч.д.а. по ГОСТ 13867-68;
<a id="p100020"></a>вспомогательные реактивы и растворы по ГОСТ 4517-87;
<a id="p100021"></a>растворы индикаторов по ГОСТ 4919.1-77.
<a id="p100022"></a>1.2. Растворы реактивов, красок, индикаторов приготовляют, используя стеклянную, лабораторную, мерную посуду, вымеренную для слива, класса А; для приготовления питательных сред (если нет специальных указаний) используют стеклянную лабораторную мерную посуду, вымеренную для слива, класса Б.
<a id="p100023"></a>1.3. Питательные среды приготовляют в эмалированной или стеклянной посуде. Новую стеклянную посуду, в том числе колбы, пробирки, пипетки, бактериологические чашки Петри, перед употреблением выдерживают в течение 12 - 24 ч в растворе соляной кислоты c (HCl) = 0,25 - 0,50 моль/дм3, промывают водопроводной, а затем дистиллированной водой и автоклавируют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 1 ч.
<a id="p100024"></a>1.4. Если в технологии приготовления питательных сред не указаны условия растворения питательных сред или компонентов, то их растворяют при перемешивании в воде комнатной температуры до полного растворения не менее 15 мин и затем, при необходимости, нагревают до растворения среды или ее компонентов.
<a id="p100025"></a>1.5. Необходимое значение pH питательных сред устанавливают с помощью раствора гидроокиси натрия концентрации 100 г/дм3 или раствора лимонной кислоты концентрации 200 г/дм3 или раствора соляной кислоты концентрации 36,5 г/дм3, по каплям прибавляя при перемешивании раствор к питательной среде и определяя значение pH в периодически отбираемой пробе потенциометрически или с помощью индикатора. Значение pH питательных сред при стерилизации может изменяться. При подщелачивании среды щелочью pH после кипячения и стерилизации снижается примерно на 0,2, а при приготовлении сред с настоем печени - на 0,3 - 0,4. Поэтому при приготовлении сред устанавливают pH на 0,2 - 0,4 выше заданного, кипятят, пока pH не понизится на 0,2 - 0,3, снова проверяют pH, исправляют, при необходимости, и стерилизуют в автоклаве. Обязательно проверяют pH после стерилизации.
<a id="p100026"></a>(Измененная редакция, Изм. N 1).
<a id="p100027"></a>1.6. Питательные среды, если нет специальных указаний, стерилизуют по [ГОСТ 26668-85](https://bukva.ai/docs/gost-26668-85).
<a id="p100028"></a>1.7. Готовые питательные среды хранят, если нет специальных указаний, при комнатной температуре не более 3 сут и при температуре около 4 °C не более одного месяца.


## 2. <a id="p100029"></a>АППАРАТУРА


<a id="p100030"></a>Для приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред применяются:
<a id="p100031"></a>автоклав для стерилизации питательных сред;
<a id="p100032"></a>стерилизатор паровой медицинский по ГОСТ 19569-89;
<a id="p100033"></a>пластины асбестовые фильтрующие и стерилизующие по ГОСТ 480-78;
<a id="p100034"></a>баня водяная с терморегулятором, позволяющая поддерживать температуру от 20 до 100 °C с отклонением до 1 °C от заданной;
<a id="p100035"></a>весы лабораторные по ГОСТ 24104-88;
<a id="p100036"></a>воронки для горячего фильтрования;
<a id="p100037"></a>воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82;
<a id="p100038"></a>гомогенизатор или смеситель лабораторный;
<a id="p100039"></a>горелка газовая или спиртовка по ГОСТ 25336-82;
<a id="p100040"></a>дистиллятор электрический марки Д N 9;
<a id="p100041"></a>капельницы;
<a id="p100042"></a>кастрюли разные;
<a id="p100043"></a>колбы плоскодонные конические или круглые разной вместимости по ГОСТ 25336-82;
<a id="p100044"></a>кюветы разные для окрашивания препаратов;
<a id="p100045"></a>марля медицинская по ГОСТ 9412-77;
<a id="p100046"></a>мясорубка по ГОСТ 4025-83;
<a id="p100047"></a>ножи;
<a id="p100048"></a>ножницы;
<a id="p100049"></a>палочки стеклянные по ГОСТ 25336-82;
<a id="p100050"></a>пинцеты по [ГОСТ 21241-89](https://bukva.ai/docs/trebovaniya-gost-21241-89);
<a id="p100051"></a>пипетки Мора;
<a id="p100052"></a>пипетки разной вместимости;
<a id="p100053"></a>плитка электрическая по ГОСТ 14919-83;
<a id="p100054"></a>pH-метр;
<a id="p100055"></a>пробирки разной вместимости по ГОСТ 25336-82;
<a id="p100056"></a>промывалка;
<a id="p100057"></a>рефрактометр;
<a id="p100058"></a>ареометр по [ГОСТ 18481-81](https://bukva.ai/docs/gost-18481-81);
<a id="p100059"></a>сетки асбестовые;
<a id="p100060"></a>стекла часовые;
<a id="p100061"></a>ступки фарфоровые по ГОСТ 9147-80;
<a id="p100062"></a>термометры химические от 0 до 50 °C и от 50 до 100 °C по [ГОСТ 28498-90](https://bukva.ai/docs/gost-28498-90);
<a id="p100063"></a>термостаты, позволяющие поддерживать температуру в пределах от 28 до 55 °C с отклонением до 0,5 °C от заданной;
<a id="p100064"></a>фильтры Зейтца;
<a id="p100065"></a>фильтры мембранные N 2;
<a id="p100066"></a>флаконы вместимостью 100 - 200 см3;
<a id="p100067"></a>холодильник по ГОСТ 16317-87;
<a id="p100068"></a>центрифуга, обеспечивающая частоту вращения $50\text{с}^{- 1}$ (3000 об/мин);
<a id="p100069"></a>цилиндры разной вместимости по [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74);
<a id="p100070"></a>часы песочные ОСТ 25-11-38-84;
<a id="p100071"></a>чашки Петри бактериологические по ГОСТ 25336-82;
<a id="p100072"></a>шкаф сушильный;
<a id="p100073"></a>шпатели металлические;
<a id="p100074"></a>шпатели стеклянные;
<a id="p100075"></a>шприцы по [ГОСТ 22967-90](https://bukva.ai/docs/standart-gost-22967-90).


## 3. <a id="p100076"></a>РЕАКТИВЫ, РАСТВОРЫ И МАТЕРИАЛЫ


<a id="p100077"></a>Для приготовления растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред применяются:
<a id="p100078"></a>агар микробиологический по ГОСТ 17206-84;
<a id="p100079"></a>агар сухой питательный;
<a id="p100080"></a>аммоний лимоннокислый;
<a id="p100081"></a>аммоний щавелевокислый 1-водный по [ГОСТ 5712-78](https://bukva.ai/docs/gost-5712-78);
<a id="p100082"></a>ацетон по ГОСТ 2603-79;
<a id="p100083"></a>бром по [ГОСТ 4109-79](https://bukva.ai/docs/standart-gost-4109-79);
<a id="p100084"></a>бромкрезолпурпур;
<a id="p100085"></a>бромтимоловый синий;
<a id="p100086"></a>водорода пероксид по ГОСТ 10929-76;
<a id="p100087"></a>бумага фильтровальная по ГОСТ 12026-76;
<a id="p100088"></a>вата гигроскопическая медицинская по [ГОСТ 5556-81](https://bukva.ai/docs/gost-5556-81);
<a id="p100089"></a>вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72;
<a id="p100090"></a>глицин;
<a id="p100091"></a>глицерин по ГОСТ 6824-76;
<a id="p100092"></a>глюкоза по [ГОСТ 6038-79](https://bukva.ai/docs/gost-6038-79);
<a id="p100093"></a>дрожжи хлебопекарные прессованные по [ГОСТ 171-81](https://bukva.ai/docs/standart-gost-171-81);
<a id="p100094"></a>желатин пищевой по [ГОСТ 11293-89](https://bukva.ai/docs/gost-11293-89);
<a id="p100095"></a>железо-аммонийные квасцы;
<a id="p100096"></a>железо (II) сернокислое 7-водное по [ГОСТ 4148-78](https://bukva.ai/docs/gost-4148-78);
<a id="p100097"></a>железо треххлористое 6-водное по [ГОСТ 4147-74](https://bukva.ai/docs/gost-4147-74);
<a id="p100098"></a>инфузорная земля;
<a id="p100099"></a>йод по [ГОСТ 4159-79](https://bukva.ai/docs/gost-4159-79);
<a id="p100100"></a>калий азотнокислый по [ГОСТ 4217-77](https://bukva.ai/docs/gost-4217-77);
<a id="p100101"></a>калий двухромовокислый по ГОСТ 4220-75;
<a id="p100102"></a>калий сернокислый по [ГОСТ 4145-74](https://bukva.ai/docs/gost-4145-74);
<a id="p100103"></a>калий йодистый по [ГОСТ 4232-74](https://bukva.ai/docs/gost-4232-74);
<a id="p100104"></a>калий углекислый по ГОСТ 10690-73;
<a id="p100105"></a>калия теллурит;
<a id="p100106"></a>калий фосфорнокислый однозамещенный по [ГОСТ 4198-75](https://bukva.ai/docs/gost-4198-75) или двузамещенный 3-водный по [ГОСТ 2493-75](https://bukva.ai/docs/standart-gost-2493-75);
<a id="p100107"></a>кальций углекислый по [ГОСТ 4530-76](https://bukva.ai/docs/standart-gost-4530-76);
<a id="p100108"></a>капуста по [ГОСТ 1724-85](https://bukva.ai/docs/gost-1724-85);
<a id="p100109"></a>картофель по [ГОСТ 7176-85](https://bukva.ai/docs/gost-7176-85);
<a id="p100110"></a>кислота аскорбиновая;
<a id="p100111"></a>кислота лимонная пищевая по ГОСТ 908-79;
<a id="p100112"></a>кислота молочная пищевая по ГОСТ 490-79;
<a id="p100113"></a>кислота серная по ГОСТ 4204-77;
<a id="p100114"></a>кислота соляная по ГОСТ 3118-77;
<a id="p100115"></a>кислота уксусная по ГОСТ 61-75;
<a id="p100116"></a>крахмал растворимый по [ГОСТ 10163-76](https://bukva.ai/docs/gost-10163-76);
<a id="p100117"></a>кристаллический фиолетовый;
<a id="p100118"></a>кровь кролика;
<a id="p100119"></a>кровь крупного рогатого скота, лошади или барана;
<a id="p100120"></a>лакмус или лакмоид;
<a id="p100121"></a>лактоза;
<a id="p100122"></a>литий хлористый 6-водный;
<a id="p100123"></a>маннит;
<a id="p100124"></a>масло вазелиновое медицинское по [ГОСТ 3164-78](https://bukva.ai/docs/gost-3164-78);
<a id="p100125"></a>медь (II) сернокислая 5-водная по [ГОСТ 4165-78](https://bukva.ai/docs/gost-4165-78);
<a id="p100126"></a>молоко коровье пастеризованное по ГОСТ 13277-79;
<a id="p100127"></a>мясо говядина по ГОСТ 779-87, мясо баранина по ГОСТ 1935-55;
<a id="p100128"></a>мясо телятина по ГОСТ 779-87;
<a id="p100129"></a>мясо конина по [ГОСТ 27095-86](https://bukva.ai/docs/gost-27095-86);
<a id="p100130"></a>мука кукурузная по [ГОСТ 14176-69](https://bukva.ai/docs/gost-14176-69);
<a id="p100131"></a>натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77;
<a id="p100132"></a>натрий лимоннокислый трехзамещенный по [ГОСТ 22280-76](https://bukva.ai/docs/standart-gost-22280-76);
<a id="p100133"></a>натрия пируват;
<a id="p100134"></a>натрий сернистокислый по ТУ 6-09-5313-86;
<a id="p100135"></a>натрий углекислый по ГОСТ 83-79;
<a id="p100136"></a>натрий фосфорнокислый двузамещенный по [ГОСТ 11773-76](https://bukva.ai/docs/gost-11773-76) и однозамещенный 2-водный по [ГОСТ 245-76](https://bukva.ai/docs/gost-245-76);
<a id="p100137"></a>натрий уксуснокислый 3-х водный по [ГОСТ 199-78](https://bukva.ai/docs/gost-199-78);
<a id="p100138"></a>натрий хлористый по ГОСТ 4233-77;
<a id="p100139"></a>натрия азид;
<a id="p100140"></a>1-нафтол;
<a id="p100141"></a>парадиметиламинобензальдегид;
<a id="p100142"></a>парафин по ГОСТ 23683-89;
<a id="p100143"></a>панкреатин (порошок, в 1 г - 25 ед.);
<a id="p100144"></a>поджелудочная железа убойного скота;
<a id="p100145"></a>пирогаллол по ТУ 6-09-5319-86;
<a id="p100146"></a>плазма крови кроличья или человеческая;
<a id="p100147"></a>пепсин;
<a id="p100148"></a>пептон сухой ферментативный для бактериологических целей по [ГОСТ 13805-76](https://bukva.ai/docs/standart-gost-13805-76);
<a id="p100149"></a>печень говяжья, телячья, кроличья, не содержащая ингибиторов роста микроорганизмов;
<a id="p100150"></a>рыба треска или пикша, судак, щука по ГОСТ 814-61;
<a id="p100151"></a>сахароза по [ГОСТ 5833-75](https://bukva.ai/docs/gost-5833-75);
<a id="p100152"></a>сафранин: О или Т;
<a id="p100153"></a>солод ячменный;
<a id="p100154"></a>соль закиси железа и аммония двойная сернокислая - соль Мора по [ГОСТ 4208-72](https://bukva.ai/docs/gost-4208-72);
<a id="p100155"></a>спирт этиловый ректификованный по [ГОСТ 5962-67](https://bukva.ai/docs/gost-5962-67);
<a id="p100156"></a>спирт этиловый сырец по ГОСТ 131-67;
<a id="p100157"></a>сок томатный по ГОСТ 937-91;
<a id="p100158"></a>трипсин;
<a id="p100159"></a>триптон;
<a id="p100160"></a>триптический гидролизат казеина;
<a id="p100161"></a>триптофан;
<a id="p100162"></a>2,3,5-трифенилтетразолиум хлорид;
<a id="p100163"></a>уголь активный по [ГОСТ 4453-74](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-4453-74);
<a id="p100164"></a>фенолфталеин (индикатор);
<a id="p100165"></a>фуксин (основной и кислый);
<a id="p100166"></a>хлороформ по [ГОСТ 20015-88](https://bukva.ai/docs/gost-20015-88);
<a id="p100167"></a>цистеина гидрохлорид;
<a id="p100168"></a>экстракт дрожжевой сухой;
<a id="p100169"></a>экстракт мясной;
<a id="p100170"></a>яйца куриные по ГОСТ 27583-88.


## 4. <a id="p100171"></a>ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАСТВОРОВ РЕАКТИВОВ, КРАСОК, ИНДИКАТОРОВ И КОМПОНЕНТОВ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ



#### <a id="p100172"></a>4.1 Агар голодный

<a id="p100173"></a>2,0 г агара растворяют в 98 см3 дистиллированной воды, стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.
<a id="p100174"></a>Применяют для наслаивания на посевы с целью предотвращения соприкосновения посевов с кислородом воздуха.

#### <a id="p100175"></a>4.2 Взвесь (эмульсия) яично-желточная в физиологическом растворе.

<a id="p100176"></a>Из яйца, протертого с поверхности спиртом с объемной долей 70%, извлекают пипеткой желток и смешивают его со 100 см3 физиологического раствора. Желточную эмульсию приготовляют аналогично, но берут два желтка и смешивают их с 10 см3 физиологического раствора.
<a id="p100177"></a>Добавляют к питательным средам для определения лецитиназной активности микроорганизмов.
<a id="p100178"></a>Допускается яично-желточную эмульсию приготовлять следующим образом: свежие куриные яйца моют, ополаскивают холодной водой, опускают в раствор этилового спирта с объемной долей 70% и высушивают. Соблюдая правила асептики, разбивают каждое яйцо в стерильную чашку Петри и отделяют желток от белка. Помещают желток в стерильную колбу или флакон с четырьмя объемами стерильной воды и энергично перемешивают. Нагревают смесь на водяной бане при температуре (45 +/- 1) °C в течение 2 ч, оставляют на 18 - 24 ч при температуре от 0 до плюс 5 °C для формирования осадка.
<a id="p100179"></a>Соблюдая правила асептики, собирают эмульсию над осадком. Эмульсию хранят при температуре от 0 до плюс 5 °C не более 72 ч.

#### <a id="p100180"></a>4.3 Вода бромная

<a id="p100181"></a>3 - 3,5 см3 брома растворяют в 100 см3 дистиллированной воды. Приготовляют бромную воду в вытяжном шкафу. Хранят в темной склянке с притертой пробкой в защищенном от света месте.
<a id="p100182"></a>Применяют в качестве индикатора при определении содержания триптофана в питательных средах. При наличии триптофана в присутствии 3 - 4 капель бромной воды жидкость принимает розово-фиолетовую окраску.
<a id="p100183"></a>4.2, 4.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).

#### <a id="p100184"></a>4.4 Вода пептонная

<a id="p100185"></a>1 г пептона растворяют в 1 дм3 дистиллированной воды, разливают по 10 см3 в пробирки и по 100 см3 в колбы. Затем стерилизуют 20 мин при температуре (121 +/- 1) °C.

#### <a id="p100186"></a>4.5 Глюкоза концентрации 5, 10, 100 и 200 г/дм3, водные растворы

<a id="p100187"></a>0,5; 1; 10; 20 г глюкозы переносят, смывая стерильной дистиллированной водой, в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят объем до метки. Разливают приготовленный раствор глюкозы в стерильные пробирки и стерилизуют при температуре (112 +/- 1) °C в течение 15 мин, или при температуре (100 +/- 1) °C в течение 3 сут по 30 мин, или фильтрованием через мембранный фильтр.
<a id="p100188"></a>Применяют в качестве источника углеводов в питательных средах и восстанавливающего вещества в питательных средах для анаэробных микроорганизмов.

#### <a id="p100189"></a>4.6 Индикатор Андреде

<a id="p100190"></a>0,5 г кислого фуксина растворяют в 100 см3 дистиллированной воды, прибавляют 16,4 см3 раствора гидроокиси натрия c (NaOH) = 1 моль/дм3 и стерилизуют при температуре (100 +/- 1) °C в течение 5 мин. Индикатор должен иметь соломенно-желтый цвет. Хранят во флаконе из темного стекла (с притертой пробкой).
<a id="p100191"></a>Применяют для приготовления среды Гисса.
<a id="p100192"></a>4.7. Индикатор бромкрезолпурпур - щелочной раствор, готовят по ГОСТ 4919.1-77.
<a id="p100193"></a>Применяют для определения кислотообразующей способности микроорганизмов.
<a id="p100194"></a>4.8. Индикатор бромтимоловый синий - щелочной раствор, готовят по ГОСТ 4919.1-77.
<a id="p100195"></a>Применяют для контроля pH питательных сред.

#### <a id="p100196"></a>4.9 Кальций углекислый стерильный

<a id="p100197"></a>Фасуют от 2 до 100 г углекислого кальция в пробирки, колбы или флаконы и стерилизуют воздухом по [ГОСТ 26668-85](https://bukva.ai/docs/gost-26668-85).
<a id="p100198"></a>Добавляют к питательным средам, предназначенным для посева в них кислотных продуктов.
<a id="p100199"></a>4.10. Раствор аскорбиновой кислоты концентрации 50 г/дм3 готовят по ГОСТ 4517-87 и стерилизуют фильтрованием через мембранный фильтр N 2.
<a id="p100200"></a>Применяют в качестве восстановителя, связывающего кислород в питательных средах для анаэробных микроорганизмов.

#### <a id="p100201"></a>4.11 Раствор лимонной кислоты концентрации 200 г/дм3

<a id="p100202"></a>20 г лимонной кислоты переносят в мерную колбу, доводят водой объем до 100 см3, растворяют и разливают в пробирки или колбы, стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.
<a id="p100203"></a>Применяют для подкисления питательных сред.
<a id="p100204"></a>4.10, 4.11. (Измененная редакция, Изм. N 1).

#### <a id="p100205"></a>4.12 Кусочки мяса, фарша, мясная вода, мясной отвар

<a id="p100206"></a>Освобожденное от костей, жира, сухожилий мясо говядины или конины для приготовления мясного отвара режут на мелкие кусочки или для приготовления мясной воды пропускают через мясорубку, заливают водой из расчета 1 дм3 воды на 500 г мяса и оставляют на ночь в холодильнике. На следующий день смесь мяса с водой медленно нагревают до кипения и кипятят до готовности, периодически помешивая и доливая воду до первоначального объема. Небольшое количество смеси (до 5 дм3) можно кипятить на открытом огне, часто помешивая, чтобы не произошло пригорания частичек мяса.
<a id="p100207"></a>Большое количество лучше кипятить в котлах с паровой рубашкой. Для определения готовности смеси фильтруют сначала небольшое количество ее в пробирку через бумажный фильтр; если жидкость прозрачна, кипячение прекращают. Смесь вновь оставляют до следующего дня в холодильнике. pH охлажденной смеси доводят до 7,0 - 7,2, фильтруют через ткань, отжимая из кусочков мяса или фарша всю жидкость. Мясную воду или мясной отвар и кусочки мяса или фарша стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.
<a id="p100208"></a>Применяют в качестве компонентов питательных сред.

#### <a id="p100209"></a>4.13 Кусочки печени, печеночная вода, печеночные отвар и бульон

<a id="p100210"></a>Свежую печень освобождают от пленок и жира. Для приготовления печеночного отвара режут на кусочки массой 30 - 40 г, для приготовления печеночной воды пропускают через мясорубку. Печень заливают водой из расчета 1 дм3 воды на 500 г печени, выдерживают при температуре от 4 до 8 °C в течение 2 ч и кипятят в течение 20 мин. После кипячения устанавливают pH 7,0 - 7,2 и вновь кипятят в течение 10 мин. Смесь процеживают через ткань, жидкость используют для приготовления воды, отвара или бульона. Устанавливают pH жидкости 7,0 - 7,2 и доводят объем жидкости до первоначального. Печеночные воду или отвар стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин. Для приготовления печеночного бульона к печеночной жидкости перед стерилизацией добавляют пептон из расчета 1 г на 100 см3 жидкости и поваренную соль из расчета 0,5 г на 100 см3 печеночной жидкости (контролируя pH 7,0 - 7,2), разливают во флаконы, колбы или пробирки и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.
<a id="p100211"></a>Кусочки печени разрезают на более мелкие по 1,5 - 3 г, заливают раствором двууглекислого натрия и кипятят в течение 10 - 15 мин (не допуская бурного кипения). После этого кусочки печени промывают в дуршлаге под струей водопроводной воды в течение 1 ч и несколько раз дистиллированной водой. Кусочки печени должны иметь pH 7,0 - 7,2; значение pH печени контролируют погружением кусочков в индикатор; бромтимоловый синий индикатор должен иметь сине-зеленую окраску. Кусочки печени фасуют в пробирки, колбы или флаконы и стерилизуют при (121 +/- 1) °C в течение 20 мин. Применяют в качестве компонентов питательных сред для анаэробных микроорганизмов.
<a id="p100212"></a>(Измененная редакция, Изм. N 1).
<a id="p100213"></a>4.14. Лакмус водно-спиртовой раствор (лакмусовая настойка), готовят по ГОСТ 4919.1-77.
<a id="p100214"></a>Добавляют в питательные среды для определения способности микроорганизмов к редукции лакмуса.

#### <a id="p100215"></a>4.15 Масло вазелиновое

<a id="p100216"></a>Масло разливают по 20 - 50 см3 в пробирки или колбы и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.
<a id="p100217"></a>Применяют для наслаивания на жидкие питательные среды для анаэробных микроорганизмов.

#### <a id="p100218"></a>4.16 Молоко обезжиренное

<a id="p100219"></a>Молоко доводят до кипения, оставляют на сутки в холодильнике, освобождают от сливок, вторично доводят до кипения, вновь оставляют на 1 сут в холодильнике и вторично снимают верхний слой. Обезжиренное молоко может быть приготовлено путем сепарирования. Обезжиренное молоко разливают в стерильную посуду и стерилизуют при температуре 100 °C в течение 3 сут по 30 мин или однократно при температуре (116 +/- 1) °C в течение 20 мин. После стерилизации молоко не должно принимать коричневый оттенок.
<a id="p100220"></a>Обезжиренное молоко применяют в качестве компонента питательных сред.
<a id="p100221"></a>4.17. Раствор гидроокиси натрия концентрации 100 г/дм3, готовят по ГОСТ 4517-87.
<a id="p100222"></a>Применяют для подщелачивания питательных сред.
<a id="p100223"></a>(Измененная редакция, Изм. N 1).

#### <a id="p100224"></a>4.18 Пептонно-солевой раствор, готовят по [ГОСТ 26669-85](https://bukva.ai/docs/gost-26669-85).

<a id="p100225"></a>Применяют для приготовления разведений.
<a id="p100226"></a>4.19. Пирогаллол, щелочной раствор, готовят по ГОСТ 4517-87.
<a id="p100227"></a>Применяют для поглощения кислорода в емкостях, предназначенных для анаэробных микроорганизмов.

#### <a id="p100228"></a>4.20 Цитратная плазма крови

<a id="p100229"></a>5 см3 свежеполученной крови, взятой из сердца кролика, помещают в центрифужную пробирку с 1 см3 раствора лимоннокислого натрия концентрации 50 г/дм3 (5 г лимоннокислого натрия переносят, смывая дистиллированной водой, в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят объем до метки). Центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин или оставляют на холоде. Плазму отделяют, разводят физиологическим раствором 1:4 и разливают в стерильные пробирки по 0,5 см3.
<a id="p100230"></a>Плазма кролика может быть заменена человеческой. Не допускается использовать плазму крови человека, которому незадолго до взятия крови вводилась глюкоза.
<a id="p100231"></a>Человеческая плазма не может быть использована, если исследуемая культура выращивалась в атмосфере углекислоты. В обоих случаях происходит угнетение реакции плазмокоагуляции. Допускается использовать сухую цитратную плазму кролика.
<a id="p100232"></a>Применяют для определения коагулазной способности микроорганизмов.
<a id="p100233"></a>4.21. Растворы для определения сульфитредуцирующей способности клостридий: сернистокислый натрий - раствор концентрации 10 г/дм3, сернокислое железо - раствор концентрации 4 г/дм3.
<a id="p100234"></a>Оба раствора стерилизуют раздельно при температуре (115 +/- 1) °C в течение 30 мин.
<a id="p100235"></a>Добавляют по 5 см3 каждого раствора в 100 см3 охлажденной, регенерированной питательной среды для клостридий непосредственно перед посевом.

#### <a id="p100236"></a>4.22 Раствор Люголя

<a id="p100237"></a>2 г йодистого калия растворяют в 5 - 10 см3 воды в мерной колбе вместимостью 300 см3, добавляя 1 г кристаллического йода, оставляют на несколько часов до полного растворения йода и после этого доводят водой объем раствора до метки.
<a id="p100238"></a>Применяют для контроля степени осахаривания сусла.

#### <a id="p100239"></a>4.23 Раствор 1-нафтола

<a id="p100240"></a>5 г 1-нафтола, имеющего точку плавления 92,5 °C, вносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доливают этиловым спиртом с объемной долей 96% до метки.
<a id="p100241"></a>Раствор применяют свежеприготовленным для контроля ацетилметилкарбинола.

#### <a id="p100242"></a>4.24 Раствор панкреатина

<a id="p100243"></a>4 г панкреатина растворяют в 100 см3 физиологического раствора и оставляют при температуре (4 +/- 1) °C на 16 - 17 ч. Перед применением полученную жидкость фильтруют через плотный бумажный фильтр, а затем через стерилизующую пластинку фильтра Зейтца до получения прозрачной опалесцирующей жидкости. Готовый раствор панкреатина может сохраняться при температуре (4 +/- 1) °C в течение двух недель.
<a id="p100244"></a>Полученный раствор в объеме 0,5 см3 не должен убивать белую мышь массой 16 - 18 г при внутривенном введении. При подкожном введении морским свинкам 0,2 см3 раствора обычно появляется некроз участка кожи размером 0,5 x 0,5 см.
<a id="p100245"></a>Раствор применяют для активации протоксина возбудителей ботулизма.

#### <a id="p100246"></a>4.25 Растворы и реактивы для окраски по Граму


##### <a id="p100247"></a>4.25.1 Основной красящий раствор по Хукеру

<a id="p100248"></a>2 г кристалл-виолета с массовой долей сухих веществ 85 - 90% растворяют в 20 см3 спирта;
<a id="p100249"></a>0,8 г щавелевокислого аммония растворяют в 80 см3 воды; растворы смешивают и выдерживают в течение 24 ч при комнатной температуре перед употреблением.

##### <a id="p100250"></a>4.25.2 Йодный раствор по Бурке

<a id="p100251"></a>2 г йодистого калия растворяют в 5 - 10 см3 воды в мерной колбе вместимостью 100 см3, добавляют 1 г кристаллического йода, оставляют на несколько часов до полного растворения йода и после этого доводят водой объем раствора до метки.

##### <a id="p100252"></a>4.25.3 Контрастный красящий раствор

<a id="p100253"></a>0,25 г сафранина растворяют в 10 см3 спирта и полученный раствор смешивают со 100 см3 воды.
<a id="p100254"></a>4.25.4. Допускается использовать: в качестве основного красящего раствора - водный раствор кристаллического фиолетового концентрации 10 г/дм3; в качестве контрастного красящего раствора - водный раствор сафранина Т концентрации 5 г/дм3 или спиртовой раствор основного фуксина концентрации 5 г/дм3.
<a id="p100255"></a>Спиртовой раствор основного фуксина концентрации 5 г/дм3 используют для выявления глобул в бациллярных клетках.
<a id="p100256"></a>(Измененная редакция, Изм. N 1).
<a id="p100257"></a>4.25.5. Для удаления закрепленного основного красящего раствора используют этиловый спирт (при окраске по Хукеру) и ацетон (при окраске водным раствором кристаллического фиолетового).

#### <a id="p100258"></a>4.26 Растворы и реактивы для окраски бактериальных спор

<a id="p100259"></a>5 г малахитовой зелени растворяют в 100 см3 воды.
<a id="p100260"></a>Отдельно 0,5 г сафранина растворяют в 100 см3 воды.

#### <a id="p100261"></a>4.27 Раствор соляной кислоты концентрации 36,5 г/дм3

<a id="p100262"></a>Концентрированная соляная кислота имеет плотность 1,18 - 1,19 г/см3.
<a id="p100263"></a>При плотности концентрированной соляной кислоты 1,18 г/см3 ее концентрация составляет 427,7 г/дм3, поэтому для приготовления 100 см3 раствора концентрации 36,5 г/дм3 отбирают 8,5 см3 концентрированной соляной кислоты, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 и содержащую 50 - 70 см3 дистиллированной воды, а затем раствор доливают до метки дистиллированной водой.
<a id="p100264"></a>При плотности концентрированной соляной кислоты 1,19 г/см3 ее концентрация составляет 455,8 г/дм3, поэтому для приготовления 100 см3 раствора концентрации 36,5 г/дм3 отбирают 8 см3 концентрированной соляной кислоты, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 и содержащую 50 - 70 см3 дистиллированной воды, а затем раствор доливают до метки дистиллированной водой.
<a id="p100265"></a>Раствор применяют для подкисления питательных сред.
<a id="p100266"></a>(Измененная редакция, Изм. N 1).

#### <a id="p100267"></a>4.28 Смесь реактивов для создания анаэробных условий

<a id="p100268"></a>Смешивают 1 г пирогаллола, 1 г углекислого безводного калия и 5 г инфузорной земли и фасуют в бумажные пакеты.
<a id="p100269"></a>Применяют для создания анаэробных условий.

#### <a id="p100270"></a>4.29 Физиологический раствор

<a id="p100271"></a>0,85 г хлористого натрия растворяют в 100 см3 дистиллированной воды и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.
<a id="p100272"></a>Применяют для приготовления растворов реактивов.
<a id="p100273"></a>4.30. Реактив йодокрахмальный, готовят по ГОСТ 4517-87. Бумагу не пропитывают.
<a id="p100274"></a>Используют в виде раствора для контроля отсутствия нитритов в питательных средах.

#### <a id="p100275"></a>4.31 Парафиновая смесь

<a id="p100276"></a>Растапливают равные количества парафина и вазелинового масла, смешивают и стерилизуют горячим воздухом при температуре (140 +/- 1) °C в течение 60 мин.
<a id="p100277"></a>Применяют для наслаивания на жидкие питательные среды для анаэробных микроорганизмов.

#### <a id="p100278"></a>4.32 Дрожжевой экстракт

<a id="p100279"></a>100 г пекарских прессованных дрожжей нарезают небольшими кусочками и заливают 500 см3 воды, подобрав посуду для приготовления экстракта с учетом того, чтобы смесь занимала 1/5 вместимости. Смесь ставят в термостат (сушильный шкаф) при температуре от 58 до 60 °C на 2 сут и встряхивают 1 - 2 раза в сутки. Конец автолиза устанавливают по полному разжижению дрожжей. Экстракт должен иметь коричневый оттенок и приятный запах.
<a id="p100280"></a>Добавляют в питательные среды как источник веществ, способствующих регенерации поврежденных микроорганизмов.

#### <a id="p100281"></a>4.33 Раствор с объемной долей перекиси водорода 3%

<a id="p100282"></a>10 см3 пероксида водорода с содержанием основного вещества 30% (в случае, если пероксид водорода имеет другое содержание основного вещества, то делается пересчет) переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят объем дистиллированной водой до метки.
<a id="p100283"></a>Раствор применяют для определения каталазной активности.
<a id="p100284"></a>(Введен дополнительно, Изм. N 1).


## 5. <a id="p100285"></a>ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД



#### <a id="p100286"></a>5.1 Агар Байрд-Паркер

<a id="p100287"></a>Основа среды: в 1 дм3 дистиллированной воды вносят 10 г триптона или пептона, 17,9 г хлористого лития 6-водного, 5 г мясного экстракта и 5 см3 дрожжевого экстракта.
<a id="p100288"></a>При отсутствии мясного экстракта вместо дистиллированной воды и мясного экстракта используют 1 дм3 мясной воды или бульона Хоттингера или 1 дм3 мясо-пептонного бульона.
<a id="p100289"></a>При использовании мясо-пептонного бульона триптон или пептон в среду не вносят.
<a id="p100290"></a>Все компоненты, внесенные в 1 дм3 дистиллированной воды (мясо-пептонного бульона или бульона Хоттингера), нагревают, помешивая до полного их растворения, охлаждают до 50 - 60 °C. Устанавливают pH 6,8 - 7,0, разливают в колбы по 90 см3 и стерилизуют при (121 +/- 1) °C в течение 20 мин. К 90 см3 основы среды добавляют асептически 5 см3 желточной эмульсии и стерилизованные фильтрованием через мембранный фильтр растворы: 6,3 см3 раствора глицина концентрации 200 г/дм3, 5 см3 раствора пирувата натрия концентрации 200 г/дм3 и 1 см3 раствора теллурита калия концентрации 10 г/дм3.
<a id="p100291"></a>После тщательного перемешивания приготовленную среду разливают в чашки Петри. Чашки со средой можно хранить не более 48 ч.
<a id="p100292"></a>Применяют для культивирования стафилококков.
<a id="p100293"></a>(Измененная редакция, Изм. N 1).

#### <a id="p100294"></a>5.2 Желточный агар с ТТХ

<a id="p100295"></a>К 500 см3 стерильного мясо-пептонного агара, расплавленного и затем охлажденного до температуры 45°, прибавляют 20 см3 желточной эмульсии и 25 мг 2,3,5-трифенилтетразолиум хлорида. Смесь тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри, хранят в холодильнике не более 10 сут.
<a id="p100296"></a>Применяют для культивирования Bac. cereus.

#### <a id="p100297"></a>5.3 Капустный агар

<a id="p100298"></a>200 г размельченной свежей капусты добавляют в 1 дм3 водопроводной воды, смесь доводят до кипения, кипятят в течение 10 - 14 мин. Фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Полученный фильтрат разводят водой в два раза, добавляют к нему 20 г глюкозы, 10 г пептона, 10 г углекислого кальция и расплавляют в нем при нагревании 15 - 20 г агара. Устанавливают pH среды 7,0 - 7,4, разливают в стерильные колбы. Стерилизуют 20 мин при температуре (121 +/- 1) °C.

#### <a id="p100299"></a>5.4 Молочно-солевой агар

<a id="p100300"></a>Непосредственно перед посевом к 1 дм3 расплавленного и охлажденного до температуры 60 - 70 °C мясо-пептонного агара, содержащего 65 г хлористого натрия, добавляют 100 см3 стерильного обезжиренного молока. Устанавливают pH (7,4 +/- 0,1), тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри.
<a id="p100301"></a>Применяют для культивирования стафилококков.
<a id="p100302"></a>(Измененная редакция, Изм. N 1).

#### <a id="p100303"></a>5.5 Печеночный агар

<a id="p100304"></a>К 500 см3 печеночной воды доливают 500 см3 водопроводной воды, добавляют 10 г пептона, 5 г хлористого натрия и 20 - 30 г агара. Среду кипятят на слабом огне до растворения агара, устанавливают pH 6,8 - 7,0, разливают в пробирки или флаконы и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.
<a id="p100305"></a>Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов.

#### <a id="p100306"></a>5.6 Сахарный кровяной агар по Цейсслеру

<a id="p100307"></a>К 100 см3 расплавленного и охлажденного до температуры 50 °C мясо-пептонного агара добавляют 10 см3 раствора глюкозы концентрации 200 г/дм3 и 15 - 20 см3 свежевзятой стерильной дефибринированной крови крупного рогатого скота, лошадей, овец. Смесь осторожно взбалтывают, избегая образования пены и пузырей, и разливают по чашкам Петри, среду подсушивают по ГОСТ 26670-85 и хранят не более 2 сут при температуре (4 +/- 1) °C. Среда должна иметь pH 7,2 - 7,4.
<a id="p100308"></a>Применяют для определения гемолитической активности микроорганизмов.

#### <a id="p100309"></a>5.7 Яично-желточно-азидный агар

<a id="p100310"></a>10 г пептона, 3 г хлористого натрия, 0,2 г двузамещенного фосфорнокислого натрия, 15 г агара, 5,5 г мясного экстракта растворяют при подогревании в 1 дм3 дистиллированной воды. При отсутствии мясного экстракта используют мясную воду. В этом случае все компоненты растворяют в 1 дм3 мясной воды. Устанавливают pH среды (7,6 +/- 0,1), стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 30 мин, охлаждают до температуры 50 - 60 °C, добавляют 0,15 г азида натрия, смешивают, вновь стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 30 мин, охлаждают до температуры 50 °C, добавляют 150 см3 яично-желточной взвеси, смешивают и разливают по 15 см3 в чашки Петри.
<a id="p100311"></a>Применяют для культивирования стафилококков.

#### <a id="p100312"></a>5.8 Яично-желточно-солевой агар

<a id="p100313"></a>1 дм3 мясо-пептонного агара перед анализом расплавляют и растворяют в нем 95 г хлористого натрия, охлаждают до температуры (45 +/- 1) °C и добавляют 100 см3 яично-желточной взвеси. Смесь тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. Чашки хранят в холодильнике не более 5 сут.
<a id="p100314"></a>Применяют для культивирования стафилококков.
<a id="p100315"></a>5.7; 5.8. (Измененная редакция, Изм. N 1).

#### <a id="p100316"></a>5.9 Глюкозо-триптонный (агар) бульон

<a id="p100317"></a>К 1 дм3 дистиллированной воды добавляют 5 г триптона, 2,5 г дрожжевого экстракта или 12,5 см3 раствора дрожжевого экстракта и при приготовлении плотных сред 12 - 15 г агара кипятят до полного растворения, фильтруют, охлаждают до температуры 50 - 60 °C, доводят pH до (7,0 +/- 0,1), добавляют 1 г глюкозы и в среду для термофилов 0,04 г бромкрезолпурпура, фасуют в колбы (плотную среду) или в пробирки (жидкую среду) и стерилизуют в автоклаве при температуре (121 +/- 1) °C в течение 15 мин.
<a id="p100318"></a>Применяют для культивирования мезофильных и кислотообразующих термофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

#### <a id="p100319"></a>5.10 Картофельно-пептонный (агар) бульон

<a id="p100320"></a>200 г очищенного и нарезанного кусочками картофеля заливают 1 дм3 водопроводной воды, кипятят 15 - 20 мин, не допуская разваривания клубней, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и доводят объем фильтрата до первоначального. В фильтрате растворяют 5 г пептона, 5 г хлористого натрия и расплавляют при нагревании 15 - 20 г агара. Устанавливают pH 7,0 - 7,2. Разливают в колбы и пробирки и стерилизуют при температуре (125 +/- 1) °C в течение 30 мин. Рекомендуется контролировать стерильность среды, термостатируя ее при (55 +/- 1) °C в течение 48 ч.
<a id="p100321"></a>Применяют для культивирования термофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

#### <a id="p100322"></a>5.11 Кислый протеозо-пептонный (агар) бульон

<a id="p100323"></a>5 г пептона, 500 мкг триптофана, 5 г глюкозы, 4 г двузамещенного фосфорнокислого калия растворяют при подогревании в 500 см3 дистиллированной воды и добавляют 135 см3 раствора дрожжевого экстракта. Устанавливают pH среды (5,0 +/- 0,1). Смесь разливают в колбы по 50 см3. В отдельную колбу к 500 см3 дистиллированной воды добавляют 20 г агара и нагревают при (100 +/- 1) °C до его растворения. Оба раствора стерилизуют 20 мин при температуре (121 +/- 1) °C. Перед посевом агар расплавляют, охлаждают до (50 +/- 1) °C, смешивают с таким же объемом среды и заливают посевы на чашках.
<a id="p100324"></a>Применяют для культивирования термофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

#### <a id="p100325"></a>5.12 Мясо-пептонный (агар) бульон

<a id="p100326"></a>10 г пептона и 5 г хлористого натрия добавляют к 1 дм3 мясной воды. Устанавливают pH 7,0 - 7,2, кипятят, фильтруют через бумажный фильтр. Стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин. При выпадении осадка в мясо-пептонном бульоне его вторично фильтруют с последующей стерилизацией.
<a id="p100327"></a>Для приготовления мясо-пептонного агара в 1 дм3 мясо-пептонного бульона перед стерилизацией добавляют 15 - 20 г агара и кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения агара. Устанавливают pH 7,0 - 7,2, разливают в пробирки или флаконы и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.
<a id="p100328"></a>Применяют для культивирования мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

#### <a id="p100329"></a>5.13 Мясо-пептонный (агар) бульон с глюкозой

<a id="p100330"></a>К 1 дм3 мясо-пептонного бульона (агара) перед стерилизацией добавляют 1 г или 10 г глюкозы, устанавливают pH 7,0 - 7,2 и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.
<a id="p100331"></a>Применяют для культивирования мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов и для определения общего количества микроорганизмов подсчетом на чашках Петри.

#### <a id="p100332"></a>5.14 Мясо-пептонный (агар) бульон с глюкозой и дрожжевым экстрактом

<a id="p100333"></a>К 1 дм3 мясо-пептонного (агара) бульона с глюкозой добавляют асептически 2 г дрожжевого экстракта или 10 см3 раствора дрожжевого экстракта.
<a id="p100334"></a>Применяют для культивирования аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

#### <a id="p100335"></a>5.15 Мясо-пептонный бульон с растворимым крахмалом

<a id="p100336"></a>10 г крахмала добавляют в небольшую порцию воды и при помешивании вносят в кипящую дистиллированную воду, получая 100 см3 крахмального раствора. Полученный раствор смешивают с 900 см3 мясо-пептонного бульона, содержащего триптофан (положительная качественная реакция на триптофан) и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин. Среда должна иметь pH (7,1 +/- 0,1).
<a id="p100337"></a>Применяют для культивирования кислотообразующих термофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

#### <a id="p100338"></a>5.16 Мясо-пептонный бульон с углекислым кальцием

<a id="p100339"></a>В пробирки разливают по 5 - 6 см3 мясо-пептонного бульона с раствором глюкозы концентрации 10 г/дм3, добавляют 0,1 г стерильного углекислого кальция. Во флаконы со 100 см3 среды добавляют 2 г углекислого кальция и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.
<a id="p100340"></a>Применяют для культивирования мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов при анализе кислотных консервированных продуктов.

#### <a id="p100341"></a>5.17 Мясо-пептонный бульон с нитратами

<a id="p100342"></a>К 100 см3 мясо-пептонного бульона, свободного от нитритов (проверяют йодкрахмальным реактивом по [п. 4.30](#p100273), при наличии нитритов появляется слабо-розовое окрашивание), добавляют 0,2 г свободной от нитритов калийной селитры. Разливают среду по 5 см3 в пробирки, промытые дистиллированной водой не менее пяти раз.
<a id="p100343"></a>При анализе на выявление анаэробных микроорганизмов в среду вводят 1,5 г агара, растворяют его при нагревании, среду разливают в пробирки по 10 см3. Стерилизацию проводят 15 мин при (121 +/- 1) °C.
<a id="p100344"></a>Применяют для определения нитратредуцирующей способности микроорганизмов.

#### <a id="p100345"></a>5.18 Рыбо-пептонный бульон

<a id="p100346"></a>Рыбу, освобожденную от костей и жира, пропускают через мясорубку и заливают холодной водопроводной водой из расчета 1 дм3 воды на 500 г рыбы. Смесь фарша с водой медленно нагревают до кипения и кипятят в течение 1,5 ч. Небольшое количество (до 5 дм3) можно кипятить на открытом огне, часто помешивая, чтобы не произошло пригорания частичек рыбы. Большое количество лучше кипятить в котлах с паровой рубашкой. Для определения готовности рыбной воды сначала фильтруют небольшое количество ее в пробирку через бумажный фильтр. Если жидкость прозрачная, рыбная вода готова. Затем жидкость отцеживают через полотно, сюда же отжимают весь сок из вареной рыбы, добавляют кипяченой воды до первоначального объема и разливают.
<a id="p100347"></a>Для приготовления рыбо-пептонного бульона к 1 дм3 полученной рыбной воды добавляют 10 г пептона, 5 г хлористого натрия. Устанавливают pH 7,0 - 7,2. Стерилизуют при (121 +/- 1) °C 20 мин.

#### <a id="p100348"></a>5.19 Рыбо-пептонный бульон с глюкозой

<a id="p100349"></a>К 1 дм3 рыбо-пептонного бульона перед стерилизацией добавляют 10 г глюкозы. Стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.

#### <a id="p100350"></a>5.20 Бульон Хоттингера и среды, его содержащие

<a id="p100351"></a>5.20.1. Для приготовления основного раствора Хоттингера в 1 дм3 кипящей воды на 20 мин опускают 1 кг мяса, нарезанного мелкими кусочками, затем мясо вынимают, измельчают на мясорубке и снова кладут в тот же отвар. Добавляют 30 - 40 г измельченной поджелудочной железы (вместо поджелудочной железы можно брать 3 - 5 г панкреатина) и 20 см3 хлороформа. Бутылки плотно закрывают пробкой и энергично встряхивают (пробку надо придерживать), ставят в термостат при температуре 37 °C на 3 - 4 ч. Мясо в виде мелкозернистой массы осаждается на дно бутыли. Жидкость над мясом должна быть прозрачной. Жидкость сливают, фильтруют и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин. Готовый раствор должен давать положительную реакцию на триптофан (розовое окрашивание при прибавлении двух капель бромной воды в пробирку с пробой).
<a id="p100352"></a>5.20.2. Для приготовления бульона Хоттингера смешивают 200 см3 основного раствора Хоттингера, 400 см3 мясного отвара и 400 см3 воды, добавляют 5 г хлористого натрия, 0,2 г фосфорнокислого двузамещенного натрия или фосфорнокислого двузамещенного калия, кипятят 10 мин и устанавливают pH (7,6 +/- 0,1). Бульон Хоттингера разливают высоким столбиком по пробиркам или флаконам, на дно которых кладут кусочки вареного мяса или фарша, наслаивают стерильное вазелиновое масло высотой около 2,0 см и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.
<a id="p100353"></a>5.20.3. Для приготовления плотной среды Хоттингера с триптоном, глюкозой и дрожжевым экстрактом в 1 дм3 бульона Хоттингера вносят 0,5 г дрожжевого экстракта или 2,5 см3 раствора дрожжевого экстракта, 5 г глюкозы, 5 г триптона, 15 - 20 г агара, устанавливают pH среды (7,1 +/- 0,1) и стерилизуют ее при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин. Перед употреблением в расплавленную стерильную среду асептически вносят 0,6 г аскорбиновой кислоты.
<a id="p100354"></a>5.20.4. Плотную среду Хоттингера с глюкозой и дрожжевым экстрактом приготовляют по [п. 5.19.3](#p100353), но без триптона и аскорбиновой кислоты.
<a id="p100355"></a>5.20.5. Бульон Хоттингера и плотную среду Хоттингера с триптоном, глюкозой и дрожжевым экстрактом применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов; плотную среду Хоттингера с глюкозой и дрожжевым экстрактом - для культивирования мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

#### <a id="p100356"></a>5.21 Бульон (агар) $V_{1}$ с печенью

<a id="p100357"></a>2 кг говядины, очищенной от жира, сухожилий и пленок и пропущенной через мясорубку, смешивают с 500 г фарша из печени и 9 дм3 воды в эмалированной посуде. Нагревают до температуры 50 °C и прибавляют 100 см3 раствора соляной кислоты концентрации 42,7 г/дм3 (для приготовления 100 см3 раствора соляной кислоты концентрации 42,7 г/дм3 в мерную колбу вместимостью 100 см3 наливают 50 - 70 см3 дистиллированной воды, затем прибавляют 10 см3 концентрированной соляной кислоты с плотностью $\rho = 1,18\text{г}/\text{см}^{3}$ , раствор доливают до метки дистиллированной водой. При использовании концентрированной соляной кислоты с другой плотностью делают пересчет на требуемую концентрацию 42,7 г/дм3).
<a id="p100358"></a>Количество пепсина, прибавляемого к смеси мяса, печени и воды определяется его титром, но прибавляют его на 50% больше, чем подсчитано. Например, при титре пепсина 1:10 для расщепления 2,5 кг белка требуется 0,25 г пепсина: в действительности же его прибавляют 0,375 г.
<a id="p100359"></a>Пепсин оставляют действовать на смесь в течение 20 ч при температуре 50 °C в водяной бане. После 20 ч воздействия пепсина на смесь она должна давать положительную биуретовую реакцию и реакцию на триптофан.
<a id="p100360"></a>Биуретовую реакцию проверяют с 5 см3 надосадочного слоя расщепленной смеси, в которую вносят для небольшого подщелачивания 1 - 2 капли раствора гидроокиси натрия концентрации 2 г/дм3 и прибавляют несколько капель раствора сернокислой (окисной) меди концентрации 10 г/дм3.
<a id="p100361"></a>При положительной реакции образуется фиолетовая окраска. Реакцию на триптофан устанавливают с бромной водой [(п. 5.20.1)](#p100351).
<a id="p100362"></a>Расщепление прекращают нагреванием до температуры 85 °C. Фарш отделяют от смеси процеживанием через ткань. Добавлением гидроокиси натрия устанавливают pH (5,6 +/- 0,1). Смесь кипятят 5 мин. После охлаждения фильтруют через фильтровальную бумагу. Добавлением гидроокиси натрия устанавливают pH (7,4 +/- 0,1). Измеряют объем отвара и прибавляют к нему пептон из расчета 1,5 г на 100 см3 отвара и, если нужно, агар из расчета 1,5 - 2 г на 100 см3 отвара.
<a id="p100363"></a>После растворения пептона и агара (при подогревании) вновь устанавливают pH (7,4 +/- 0,1). Бульон или агар разливают в колбы и стерилизуют при температуре (127 +/- 1) °C в течение 20 мин.
<a id="p100364"></a>Для приготовления бульона с печенью кусочки вареной печени массой около 1 - 1,5 г вносят в пробирки и заливают бульоном до высоты 10 - 15 см. Стерилизуют при температуре (127 +/- 1) °C в течение 20 мин.
<a id="p100365"></a>Применяют для мезофильных анаэробных микроорганизмов.

#### <a id="p100366"></a>5.22 Дифференциальная улучшенная клостридиальная среда (жидкая, вязкая или плотная)

<a id="p100367"></a>В 800 см3 дистиллированной воды вносят 10 г мясного экстракта (допускается заменять дистиллированную воду и мясной экстракт 800 см3 мясной воды), 10 г пептона, 1,5 г дрожжевого экстракта или 7,5 см3 раствора дрожжевого экстракта, 5 г уксуснокислого натрия. Отдельно 1 г растворимого крахмала вносят в небольшую порцию воды и при непрерывном помешивании переносят в кипящую воду, доводя объем до 200 см3 и получая крахмальный клейстер. Полученный клейстер смешивают с 800 см3 смеси, содержащей остальные компоненты, и кипятят на водяной бане в течение 30 мин. После кипячения к раствору добавляют 1 г глюкозы и 0,5 г цистеин гидрохлорида и доводят pH раствора до 7,1 - 7,2. Горячий раствор фильтруют через бумажный фильтр. Для приготовления вязкой среды в раствор добавляют 2 г агара на 1 дм3 среды, для приготовления плотной среды - 15 - 20 г агара на 1 дм3 среды. Среды стерилизуют в автоклаве при температуре (121 +/- 1) °C в течение 15 мин.
<a id="p100368"></a>Растворы сульфита натрия $Na_{2}SO_{3} \cdot 7H_{2}O$ концентрации 40 г/дм3 и цитрата железа $FeC_{6}H_{5}O_{7} \cdot 5H_{2}O$ с массовой концентрацией 70 г/дм3 (при приготовлении последнего раствор нагревают в течение 5 мин) стерилизуют фильтрованием и хранят раздельно при температуре 3 - 5 °C в полностью заполненных флаконах в течение не более 14 сут. Перед использованием основную среду регенерируют и охлаждают. Растворы сульфита натрия и цитрата железа смешивают в равных объемах и асептически добавляют в охлажденную среду из расчета 0,5 см3 смеси на 25 см3 основной среды.
<a id="p100369"></a>Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов.
<a id="p100370"></a>5.21, 5.22. (Измененная редакция, Изм. N 1).

#### <a id="p100371"></a>5.23 Лакмусовое молоко

<a id="p100372"></a>К стерильному молоку добавляют лакмусовую настойку до получения сиреневатого окрашивания (на 100 см3 молока примерно 1 см3 лакмусовой настойки). Лакмусовое молоко разливают по стерильным пробиркам высоким столбиком, кипятят на водяной бане в течение 15 - 20 мин и охлаждают для посева до температуры 45 °C.
<a id="p100373"></a>Применяют для мезофильных клостридий при анализе молочных консервов и при культивировании C. perfringens.

#### <a id="p100374"></a>5.24 Пептонная среда с глюкозой (глюкозо-пептонный бульон)

<a id="p100375"></a>5 г глюкозы, 5 г пептона, 5 г фосфорнокислого однозамещенного калия вносят в 1 дм3 дистиллированной воды, нагревают до растворения всех ингредиентов, устанавливают pH 7,0 - 7,2 и разливают в пробирки по 5 см3. Стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 15 мин.
<a id="p100376"></a>Применяют для культивирования микроорганизмов и определения их способности образовывать ацетилметилкарбинол.

#### <a id="p100377"></a>5.25 Печеночно-глицериновая среда

<a id="p100378"></a>К 1 дм3 печеночного бульона добавляют 5 г глицерина, 5 г глюкозы, разливают в пробирки или флаконы с кусочками печени (20 - 30 г печени на 100 см3 среды), устанавливают pH (7,0 +/- 0,1) и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин.
<a id="p100379"></a>Применяют для культивирования мезофильных анаэробных, микроорганизмов.

#### <a id="p100380"></a>5.26 Плотная среда Бликфельдта

<a id="p100381"></a>В 800 см3 дистиллированной воды растворяют 10 г лактозы, 10 г глюкозы, 5 г пептона, кипятят и фильтруют через бумажный фильтр. К фильтрату добавляют 40 г дрожжевого экстракта или 200 см3 раствора дрожжевого экстракта, 5 г углекислого кальция, растертого в ступке непосредственно перед употреблением, доводят pH до (7,3 +/- 0,1) и добавляют 15 - 20 г агара. Среду разливают в стерильные колбы, затем стерилизуют в автоклаве при температуре (117 +/- 1) °C не более 20 мин.
<a id="p100382"></a>Применяют для культивирования молочнокислых бактерий.
<a id="p100383"></a>(Измененная редакция, Изм. N 1).

#### <a id="p100384"></a>5.27 Жидкая среда Бликфельдта

<a id="p100385"></a>В 800 см3 дистиллированной воды растворяют 10 г лактозы, 10 г глюкозы, 5 г пептона, кипятят и фильтруют через бумажный фильтр. К фильтрату добавляют 4 г дрожжевого экстракта или 20 см3 раствора дрожжевого экстракта, 10 см3 раствора бромкрезолпурпура, устанавливают pH (7,3 +/- 0,1), разливают в стерильную посуду и стерилизуют при температуре (117 +/- 1) °C не более 20 мин.
<a id="p100386"></a>Применяют для культивирования молочнокислых бактерий.

#### <a id="p100387"></a>5.28 Среда Вильсона-Блера, измененная для анаэробов

<a id="p100388"></a>Раствор железоаммонийных квасцов концентрации 50 г/дм3 и раствор сернистокислого натрия с массовой концентрацией 200 г/дм3 готовят на стерильной дистиллированной воде extempore. Раствор сернистокислого натрия стерилизуют текучим паром в течение 1 ч. К 100 см3 расплавленного и охлажденного до температуры 80 °C мясо-пептонного агара концентрации глюкозы 10 г/дм3 добавляют 10 см3 раствора сернистокислого натрия и 1 см3 раствора железоаммонийных квасцов. Устанавливают pH 7,5 - 7,8. Среду разливают по чашкам Петри и чашки подсушивают в термостате по ГОСТ 26670-85.
<a id="p100389"></a>Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов и определения их сульфитредуцирующей способности.
<a id="p100390"></a>(Измененная редакция, Изм. N 1).

#### <a id="p100391"></a>5.29 Среда Гисса

<a id="p100392"></a>10 г пептона и 5 г хлористого натрия растворяют в 1 дм3 дистиллированной воды при нагревании, фильтруют через бумажный фильтр так, чтобы раствор был прозрачным, прибавляют 10 г углевода (глюкозы, лактозы, мальтозы, маннита или сахарозы) в зависимости от выявляемой микрофлоры.
<a id="p100393"></a>Устанавливают pH 7,0 - 7,2, прибавляют 10 см3 раствора индикатора Андреде [(п. 4.6)](#p100189). При анализе для выявления аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов среду разливают по 5 см3 в стерильные пробирки с поплавками. Стерилизуют 20 мин при температуре (112 +/- 1) °C. Среда должна быть бесцветной или соломенно-желтого цвета без розового оттенка.
<a id="p100394"></a>При выявлении анаэробных микроорганизмов в среду добавляют 1,5 г агара, расплавляют при нагревании и разливают в пробирки по 12 - 13 см3.
<a id="p100395"></a>Применяют для определения сахаролитической способности микроорганизмов.

#### <a id="p100396"></a>5.30 Среда из вареного мяса (Cooked-Meat Medium)

<a id="p100397"></a>500 г свежего, освобожденного от костей, жира и сухожилий мяса или сердца крупного рогатого скота помещают в 500 см3 кипящей дистиллированной воды, содержащей 1,5 см3 раствора c (NaOH) = 1 моль/дм3 и кипятят в течение 20 мин; в конце кипячения в смесь добавляют молочную кислоту в количестве, необходимом для доведения pH смеси до (7,0 +/- 0,1). Горячую жидкость фильтруют через ватно-марлевый фильтр, к отфильтрованной жидкости добавляют пептон в количестве 0,5 г пептона на 100 см3 жидкости и хлористый натрий в количестве 0,25 г хлористого натрия на 100 см3 жидкости. Полученную жидкость вновь кипятят в течение 20 мин, добавляют в нее 1 см3 соляной кислоты и фильтруют. Доводят pH фильтрата до (8,2 +/- 0,1) и кипятят его в течение 3 мин.
<a id="p100398"></a>После кипячения устанавливают pH 7,7 - 7,8. Кусочки мяса фасуют в пробирки до 2,5 г и заливают 10 см3 вышеприготовленной жидкости. Стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин. После стерилизации среда должна иметь pH 7,4 - 7,5. Для выделения C. botulinum и сахаролитических анаэробных микроорганизмов в среду добавляют раствор глюкозы из расчета содержания ее в среде 0,5 - 1,0%. На поверхность среды наслаивают голодный агар, вазелиновое масло или парафиновую смесь.
<a id="p100399"></a>Применяют для культивирования анаэробных микроорганизмов.
<a id="p100400"></a>(Измененная редакция, Изм. N 1).

#### <a id="p100401"></a>5.31 Среда из сухого питательного агара

<a id="p100402"></a>50 г порошка сухого питательного агара высыпают в 1 дм3 холодной водопроводной воды, тщательно перемешивают и кипятят на слабом огне 1 - 2 мин при помешивании до полного расплавления агара, не допуская пригорания, в закрытом сосуде. Устанавливают pH среды 7,0 - 7,2. Расплавленный раствор фильтруют через вату, разливают в пробирки, флаконы или колбы и стерилизуют 20 мин при температуре (121 +/- 1) °C.

#### <a id="p100403"></a>5.32 Среда из сухого питательного агара с глюкозой

<a id="p100404"></a>В 975 см3 среды из сухого питательного агара непосредственно перед применением асептически добавляют 25 см3 стерильного раствора глюкозы концентрации 200 г/дм3.

#### <a id="p100405"></a>5.33 Среда из томатного сока

<a id="p100406"></a>К 700 см3 воды добавляют 300 см3 томатного сока, 2 г дрожжевого экстракта или 10 см3 раствора дрожжевого экстракта, 10 г глюкозы, доводят pH до 5,5 - 5,6, фильтруют, разливают по 100 см3 в стерильные колбы и стерилизуют в автоклаве при температуре (117 +/- 1) °C в течение 20 мин. Отдельно в 500 см3 дистиллированной воды растворяют при нагревании 20 г агара, разливают по 100 см3 в колбы и стерилизуют в автоклаве при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин. Перед посевом в асептических условиях смешивают 100 см3 жидкой среды со 100 см3 расплавленного агара. Агаризованную среду вносят в чашки, содержащие 0,25 г стерильного углекислого кальция.
<a id="p100407"></a>Применяют для культивирования молочнокислых бактерий.

#### <a id="p100408"></a>5.34 Среда Китт-Тароцци

<a id="p100409"></a>Для приготовления среды Китт-Тароцци стерильные пробирки заполняют на 1,0 - 1,5 см кусочками печени, мяса или рыбы и заливают приготовленным мясо-пептонным бульоном с глюкозой и агаром. В 1 дм3 мясо-пептонного, рыбо-пептонного или печеночного бульона вносят 10 г глюкозы и 1,5 г агара, который при нагревании постепенно расплавляют (высота слоя бульона в обычных пробирках 12 - 13 см, в высоких - 15 - 18 см) и стерилизуют 20 мин при температуре (121 +/- 1) °C. Требуемую величину pH проверяют до и после стерилизации. pH среды после стерилизации должно быть (7,1 +/- 0,1).
<a id="p100410"></a>При приготовлении среды впрок вместо добавления к ней агара на поверхность среды перед стерилизацией в пробирки наслаивают 0,5 - 1,0 см вазелинового масла.
<a id="p100411"></a>При применении среды Китт-Тароцци без добавления в нее агара или вазелинового масла на поверхность среды после окончания посева наслаивают голодный агар или парафиновую смесь высотой 1,0 - 1,5 см.
<a id="p100412"></a>При посевах в свежеприготовленную среду Китт-Тароцци (не более 3 сут с момента приготовления) добавлять агар, вазелиновое масло или наслаивать на ее поверхность голодный агар не обязательно.
<a id="p100413"></a>Применяют для культивирования мезофильных и термофильных анаэробных микроорганизмов.

#### <a id="p100414"></a>5.35 Среда Китт-Тароцци с углекислым кальцием

<a id="p100415"></a>В пробирки или флаконы, предназначенные для среды Тароцци, добавляют на дно щепотку углекислого кальция, стерилизуют горячим воздухом по [ГОСТ 26668-85](https://bukva.ai/docs/gost-26668-85), закладывают в них кусочки мяса или печени и заливают мясо-пептонным бульоном с глюкозой, приготавливая среду Тароцци по вышеописанной технологии.
<a id="p100416"></a>Применяют для анаэробных микроорганизмов, для посева кислотных консервированных продуктов.

#### <a id="p100417"></a>5.36 Среда Китт-Тароцци с углекислым кальцием, дрожжевым экстрактом и аскорбиновой кислотой

<a id="p100418"></a>Готовят среду Китт-Тароцци с углекислым кальцием, но в мясо-пептонный бульон перед фасовкой вносят 2 г дрожжевого экстракта или 10 см3 раствора дрожжевого экстракта. Перед анализом в регенерированную среду Китт-Тароцци с углекислым кальцием и дрожжевым экстрактом асептически вносят аскорбиновую кислоту из расчета 100 мкг на 1 дм3 среды.
<a id="p100419"></a>Применяют для мезофильных и термофильных анаэробных микроорганизмов.
<a id="p100420"></a>Для внесения аскорбиновой кислоты в среду раствор, приготовленный по [п. 4.10](#p100199), разводят в стерильной дистиллированной воде в 100 раз и 0,2 см3 приготовленного раствора вносят на 1 дм3 среды.
<a id="p100421"></a>(Измененная редакция, Изм. N 1).

#### <a id="p100422"></a>5.37 Среда Мак-Кланг и Мак-Кой (модифицированная)

<a id="p100423"></a>В 1 дм3 водопроводной воды добавляют 20 г порошкообразной печени, при отсутствии сухой порошкообразной печени применяют печеночную воду - 1 дм3, но в этом случае водопроводная вода из среды исключается, 50 г кукурузной муки (белой или желтой), все хорошо размешивают, чтобы не было комков. Нагревают в течение 1 ч в текучем паре до полного растворения всех компонентов. Устанавливают pH 7,0 - 7,2, разливают и стерилизуют 1 ч при (121 +/- 1) °C.
<a id="p100424"></a>Применяют для выявления мезофильных анаэробных микроорганизмов при анализе консервов с pH 4,4 и ниже.

#### <a id="p100425"></a>5.38 Пептонная среда с триптофаном

<a id="p100426"></a>10 г пептона растворяют в небольшом количестве водопроводной воды, добавляют 5 г растворимого крахмала, предварительно растворенного в 50 см3 воды, и доводят объем водопроводной водой до 1 дм3, устанавливают pH 6,7 - 6,8. Фильтруют через бумажный фильтр, добавляют 500 мкг триптофана, 5 г глюкозы, 20 г агара, нагревают до полного растворения агара и добавляют индикатор бромкрезолпурпур и бромтимоловый синий ([пп. 4.7](#p100192), [4.8](#p100194)). Разливают в стерильную посуду и стерилизуют 20 мин при температуре (116 +/- 1) °C.

#### <a id="p100427"></a>5.39 Среда Роберта

<a id="p100428"></a>В 1 дм3 дистиллированной воды вносят 2 г азотнокислого калия, 2 г двузамещенного фосфорнокислого калия, 1 г агара, 30 г желатина, дают набухнуть желатину и нагревают на водяной бане до полного растворения желатина и агара, добавляют 25 см3 стерильного мясо-пептонного бульона и 10 см3 раствора 2,3,5-трифенилтетразолиум хлорида концентрации 10 г/дм3, устанавливают pH (7,1 +/- 0,1), стерилизуют 3 сут подряд при температуре (100 +/- 1) °C в течение 20 мин или однократно при температуре (110 +/- 1) °C в течение 15 мин. Среда должна быть бесцветной.
<a id="p100429"></a>Применяют для культивирования C. perfringens.

#### <a id="p100430"></a>5.40 Среда Сабуро

<a id="p100431"></a>В 1 дм3 горячей дистиллированной воды растворяют 10 г пептона и 40 г глюкозы или мальтозы, разливают в стерильную посуду и стерилизуют 20 мин при температуре (112 +/- 1) °C.
<a id="p100432"></a>Применяют для дрожжей и плесневых грибов.

#### <a id="p100433"></a>5.41 Среда Смис-Лоренца

<a id="p100434"></a>5 г глюкозы, 10 г пептона, или триптона, или триптозы (Дифко), 20 г агара растворяют при подогревании в 950 см3 воды; отдельно 5 г растворимого крахмала растворяют в 50 см3 воды и раствор вносят в среду, устанавливают pH (7,1 +/- 0,1) и стерилизуют при температуре (117 +/- 1) °C в течение 20 мин.
<a id="p100435"></a>Применяют для культивирования аэробных и факультативно-анаэробных кислотообразующих термофильных микроорганизмов.

#### <a id="p100436"></a>5.42 Крахмало-пептонная среда, обогащенная триптофаном

<a id="p100437"></a>10 г пептона растворяют в небольшом количестве воды, добавляют 5 г растворимого крахмала, предварительно растворенного в 50 см3 воды, доводят объем водой до 1 дм3, устанавливают pH (6,2 +/- 0,1). Фильтруют через бумажный фильтр, добавляют 500 мкг триптофана, 5 г глюкозы, 20 г агара, нагревают до полного растворения агара и добавляют 10 см3 раствора бромкрезолпурпура концентрации 0,4 г/дм3, разливают в стерильную посуду и стерилизуют при температуре (116 +/- 1) °C в течение 20 мин.
<a id="p100438"></a>Применяют для культивирования кислотообразующих аэробных и факультативно-анаэробных термофильных микроорганизмов.

#### <a id="p100439"></a>5.43 Сульфат-лактатная (плотная, вязкая) среда

<a id="p100440"></a>5 г пептона растворяют в 1 дм3 воды, добавляют 4 г дрожжевого экстракта или 20 см3 раствора дрожжевого экстракта, 1,5 г сульфата натрия, 1,5 г сульфата магния, 3,5 г лактата натрия, устанавливают pH 7,2 - 7,4 и добавляют для приготовления плотной среды 20 г агара, вязкой - 1,5 г агара; подогревают до полного растворения, фасуют и стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин. Перед употреблением в расплавленную или регенерированную среду вносят раствор соли Мора (двойная сернокислая соль закиси железа и аммония) из расчета 4 мг/см3. Для этого перед использованием раствор соли Мора концентрации 100 г/дм3 стерилизуют фильтрованием и вносят асептически в каждую пробирку по 4 - 5 капель. Лактат натрия может быть заменен молочной кислотой, нейтрализованной гидроокисью натрия.
<a id="p100441"></a>Применяют для культивирования термофильного анаэроба D. nigrificans.

#### <a id="p100442"></a>5.44 Солодовое сусло

<a id="p100443"></a>Солодовое неохмеленное сусло готовят следующим образом.
<a id="p100444"></a>К 1 дм3 водопроводной воды, подогретой до (50 +/- 1) °C, прибавляют 200 г молотого ячменного солода. Смесь тщательно перемешивают в течение 30 мин, подогревают на водяной бане со скоростью 1 °C в минуту до (55 +/- 1) °C, выдерживают паузу 15 мин, затем вновь с той же скоростью поднимают температуру до 63 - 65 °C и удерживают ее на этом уровне в течение 1 ч. Температуру поднимают со скоростью 1 °C в минуту до (72 +/- 1) °C и выдерживают сусло при этой температуре до полного осахаривания. Степень осахаривания сусла проверяют раствором Люголя. Для этого каплю сусла переносят в фарфоровую чашку и осторожно прибавляют к нему каплю раствора Люголя. Окончательно осахаренное сусло не должно менять окраску в присутствии индикатора. Полученное сусло фильтруют через полотно или фильтровальную бумагу, доливают до 1 дм3 и стерилизуют 30 мин в автоклаве при 107 - 110 °C. Затем сусло декантируют.
<a id="p100445"></a>Прозрачное сусло разбавляют водой до массовой доли сухих веществ 7 - 8%, разливают в стерильную посуду, стерилизуют 20 мин при (116 +/- 1) °C. Солодовое сусло можно заменить виноградным суслом, доводя массовую долю сухих веществ этого раствора до 7 - 8%.
<a id="p100446"></a>Применяют для культивирования дрожжей и плесневых грибов.

#### <a id="p100447"></a>5.45 Солодовое агаризованное сусло

<a id="p100448"></a>К 1 дм3 солодового неохмеленного сусла с массовой долей сухих веществ 7 - 8% прибавляют 20 г агара. Среду расплавляют на водяной бане или текучим паром и фильтруют через гигроскопическую вату или фильтровальную бумагу. Фильтрат разливают по стерильным колбам или пробиркам и стерилизуют при температуре (116 +/- 1) °C в течение 15 мин или 3 сут по 30 мин текучим паром при температуре (100 +/- 1) °C. Для выявления дрожжей и плесневых грибов из продуктов, обильно обсемененных микроорганизмами, сусло перед использованием подкисляют 2 - 3 см3 стерильного раствора лимонной кислоты с массовой концентрацией 200 г/дм3 до pH 3,5.
<a id="p100449"></a>Применяют для культивирования дрожжей и плесневых грибов.

#### <a id="p100450"></a>5.46 Солодовое агаризованное сусло с углекислым кальцием

<a id="p100451"></a>К 1 дм3 солодового неохмеленного сусла с массовой долей сухих веществ 7 - 8% добавляют 15 - 20 г агара (в зависимости от его желирующей способности), растворяют его на водяной бане при нагревании и вносят 15 - 20 г стерильного углекислого кальция. Устанавливают pH среды 6,6 - 6,8. При постоянном помешивании разливают в стерильную посуду и стерилизуют при температуре (116 +/- 1) °C в течение 20 мин.
<a id="p100452"></a>Применяют для культивирования дрожжей, плесеней и молочнокислых бактерий.

#### <a id="p100453"></a>5.47 Улучшенная клостридиальная среда (R. C. M.)

<a id="p100454"></a>В 1 дм3 дистиллированной воды помещают 3 г дрожжевого экстракта или 15 см3 раствора дрожжевого экстракта, 10 г мясного экстракта, 10 г пептона, 1 г растворимого крахмала, 5 г глюкозы, 0,5 г цистеина гидрохлорида, 5 г хлористого натрия, 3 г уксуснокислого натрия или 5 г водного уксуснокислого натрия $(CH_{3}COONa \cdot 3H_{2}O)$ , 0,5 г агара для вязкой среды или 15 г агара для плотной среды, нагревают при непрерывном помешивании до кипения и кипятят до полного растворения всех компонентов; раствор охлаждают до температуры 50 - 60 °C, доводят его реакцию до pH (7,0 +/- 0,1). Стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин. Вязкую среду непосредственно перед использованием регенерируют, плотную - после розлива по чашкам Петри подсушивают. Допускается использовать 1 дм3 мясной воды вместо мясного экстракта и воды.
<a id="p100455"></a>Применяют для культивирования мезофильных анаэробных микроорганизмов.

#### <a id="p100456"></a>5.48 Среда питательная для контроля стерильности, сухая

<div align="center">

<a id="p100457"></a>В 33,0 г сухого порошка среды входят:<br>
<a id="p100458"></a>ферментативный гидролизат казеина неглубокой степени расщепления - 15,0 г;<br>
<a id="p100459"></a>витаминный препарат экстракта кормовых дрожжей - 5,0 г;<br>
<a id="p100460"></a>натрий хлористый - 6,4 г;<br>
<a id="p100461"></a>глюкоза - 5,0 г;<br>
<a id="p100462"></a>тиогликолят натрия - 0,3 г;<br>
<a id="p100463"></a>цистеина гидрохлорид - 0,75 г;<br>
<a id="p100464"></a>агар - 0,6 г;<br>
<a id="p100465"></a>натрий углекислый - 0,5 - 0,95 г.<br>
<a id="p100466"></a>Приготовление:<br>
<a id="p100467"></a>33,0 г сухого порошка растворяют в 1000 см3 воды, тщательно перемешивают, доводят до кипения, кипятят 2 - 3 мин при помешивании, фильтруют, разливают в пробирки по [п. 5.34](#p100408). Стерилизуют при температуре (121 +/- 1) °C в течение 20 мин. Готовая среда должна иметь pH 7,0 +/- 0,2 и храниться при комнатной температуре не более 7 сут.<br>
<a id="p100468"></a>Среду применяют для культивирования мезофильных и термофильных анаэробных микроорганизмов.<br>
<a id="p100469"></a>(Введен дополнительно, Изм. N 1).

</div>




<a id="p100470"></a>

---