--- title: "\"ОФС.1.7.2.0028.18. Общая фармакопейная статья. Количественное определение фенола в биологических лекарственных препаратах\"" number: "ГФ XIV" issuer: "Министерство здравоохранения Российской Федерации" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/gf-xiv-minzdrav-rossii-ministerstvo-12" --- ## "ОФС.1.7.2.0028.18. Общая фармакопейная статья. Количественное определение фенола в биологических лекарственных препаратах" # "ОФС.1.7.2.0028.18. Общая фармакопейная статья. Количественное определение фенола в биологических лекарственных препаратах" ("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том II") > [!IMPORTANT] > В соответствии с Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749 данный документ введен в действие с 01.12.2018. > Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/femb/pharmacopea.php, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. > Взамен ОФС.1.7.2.0028.15. > [!NOTE] > ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ ```mermaid flowchart LR n0["ОФС.1.7.2.0028.15"]:::rst n1["ОФС.1.7.2.0028.18"]:::doc click n1 "https://bukva.ai/docs/gf-xiv-minzdrav-rossii-ministerstvo-12" "ОФС.1.7.2.0028.18. Общая фармакопейная статья. Количественное определение фенола в биологических лекарственных препаратах" n0 --> n1 classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000; classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000; classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000; ``` **МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ** **ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ** | Количественное определение фенола в биологических лекарственных препаратах | ОФС.1.7.2.0028.18
Взамен ОФС.1.7.2.0028.15 | | --- | --- | Настоящая общая фармакопейная статья предназначена для определения фенола в биологических лекарственных препаратах (БЛП) спектрофотометрическим методом и методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Спектрофотометрический метод Спектрофотометрический метод основан на способности фенола поглощать свет в ультрафиолетовой области. Определение фенола проводится спектрофотометрическим методом. По результатам измерения оптической плотности растворов при 269 нм (максимум поглощения фенола) и 290 нм (максимум поглощения окрашенных примесей) определяется содержание фенола по калибровочному графику. Готовят 10 мл разведенного испытуемого образца и измеряют оптическую плотность испытуемого и стандартных растворов в кюветах с толщиной слоя 10 мм при 269 нм и 290 нм по сравнению с контрольным раствором (вода очищенная). Рассчитывают разность между показателем оптической плотности при 269 нм и 290 нм (А269 - А290) и по калибровочному графику определяют количество фенола в разведенном образце в мкг/мл. Количество фенола (Х) в исходном образце в мг/мл вычисляют по формуле: $\text{Х} = \frac{\text{а} \cdot 100}{1000} = \frac{\text{а}}{10} ,$ где: а - количество фенола, найденное по калибровочному графику, мкг/мл; 100 - разведение испытуемого раствора; 1000 - пересчет в мг. Содержание фенола в биологических лекарственных препаратах (БЛП) должно составлять от 1,5 до 4,0 мг/мл. Построение калибровочного графика. К 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 мл стандартного раствора В прибавляют воду очищенную до объема 5 мл и перемешивают (концентрация фенола соответственно: 10; 20; 30; 40; 50 мкг/мл), далее анализ проводят, как указано выше. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество мкг фенола, а по оси ординат - среднее значение разности между показателем оптической плотности при 269 нм и 290 нм (А269 - А290). Примечания Приготовление испытуемого раствора. К 0,1 мл испытуемого образца добавляют 9,9 мл воды очищенной и перемешивают. Приготовление основного стандартного раствора фенола 10 мг/мл (раствор А). Помещают 1,0000 г (точная навеска) фенола в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят в склянке из темного стекла при температуре 4 - 8 °С в течение 1 г. Приготовление стандартного раствора фенола 100 мкг/мл (раствор В). Наливают 0,1 мл стандартного раствора А в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят в склянке из темного стекла при температуре 4 - 8 °С в течение 3 мес. Метод обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) Для определения содержания фенола в БЛП необходимо соблюдать следующие хроматографические условия: - Колонка с неподвижной фазой С18; - Подвижная фаза: смесь ацетонитрила или метанола с ледяной уксусной кислотой; - Температура колонки: 20 - 25 °С; - УФ детектор - длина волны 269 нм или 270 нм; - Скорость потока - в зависимости от параметров хроматографической колонки (рекомендуемая величина - 0,8 - 1,2 мл/мин). Порядок проверки пригодности хроматографической системы Для проверки пригодности хроматографической системы вводят следующие пробы: 20 мкл разводящего раствора (1 инжекция), по 20 мкл рабочего стандартного раствора фенола 0,1 мг/мл (6 инжекций). Хроматографическая система считается пригодной при соблюдении следующих условий: 1. хроматограмма разводящего раствора ("холостой" опыт) не должна содержать пики, перекрывающиеся с пиками определяемого вещества; 2. относительное стандартное отклонение площади пика фенола в 6 измерениях должно быть не более 3%; 3. коэффициент асимметрии пика фенола должен быть не более 2; 4. число теоретических тарелок пика фенола должно быть не менее 5000. Порядок измерений Проводят измерения проб в следующей последовательности: рабочие стандартные растворы фенола 10; 20; 30 мкл (отбор проб в хроматографической системе производится автоматически и при введении стандартных образцов количество фенола изменяется за счет изменения объема). Затем вводят 20 мкл испытуемого раствора. Измерения всех испытуемых проб проводят в двух повторностях. Для вычисления содержания фенола используют среднее значение. Содержание фенола (Х) в испытуемом образце в мг/мл вычисляют по формуле: $X = \frac{S - b}{a} \cdot 25,$ где: S - значение площади пика фенола на хроматограмме испытуемого раствора, найденное по графику; b - свободный коэффициент уравнения регрессии; a - угловой коэффициент уравнения регрессии; 25 - степень разведения испытуемого образца. Построение калибровочного графика. Для определения отбирают 10; 20; 30 мкл рабочего стандартного раствора фенола (0,1 мг/мл) с ожидаемым содержанием фенола 0,05; 0,1 и 0,15 мг (точное значение количества фенола рассчитывают с учетом навески, взятой для приготовления основного стандартного раствора фенола). Проводят измерения в последовательности, указанной выше. Строят график регрессионной зависимости площади пика от концентрации фенола с помощью программного обеспечения к прибору. Метод обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) применим для БЛП с содержанием фенола от 1 до 4,0 мг/мл. Примечания 1. Приготовление испытуемого раствора. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мл раствора образца, доводят объем раствора до метки водой очищенной или другим растворителем, указанным в нормативной документации, и перемешивают. Раствор хранят в течение 7 сут. при комнатной температуре. 2. Приготовление 0,5% раствора уксусной кислоты. В мерную колбу вместимостью 1000 мл вносят 700 мл воды очищенной, добавляют 5 мл ледяной уксусной кислоты, перемешивают, доводят объем раствора до метки водой очищенной и вновь перемешивают. 3. Приготовление разводящего раствора (подвижная фаза): Ацетонитрил для ВЭЖХ разводят 0,5% раствором уксусной кислоты в соотношении 1:4. 4. Приготовление основного стандартного раствора фенола (1 мг/мл). В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 60 мл разводящего раствора, добавляют 0,1000 г (точную навеску) фенола и перемешивают, затем доводят объем раствора до метки тем же раствором и вновь перемешивают. Раствор хранят в течение 7 сут. при комнатной температуре. Приготовление рабочего стандартного раствора фенола (0,1 мг/мл). В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10 мл основного стандартного раствора фенола, доводят объем раствора разводящим раствором до метки и перемешивают. Раствор хранят в течение 7 сут. при комнатной температуре. ---