ФС.3.1.0100.18. Фармакопейная статья. Хлорамбуцил, таблетки
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том III»)
Примечание
В соответствии с Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749 данный документ введен в действие с 01.12.2018. Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/femb/pharmacopea.php, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Хлорамбуцил, таблетки Chlorambucili tabulettae |
ФС.3.1.0100.18 Взамен ГФ Х, ст. 159 |
|---|
Настоящая фармакопейная статья распространяется на лекарственный препарат хлорамбуцил, таблетки. Препарат должен соответствовать требованиям ОФС «Таблетки» и ниже приведенным требованиям.
Содержит не менее 90,0% и не более 110,0% от заявленного количества хлорамбуцила C14H19Cl2NO2.
Описание. Содержание раздела должно соответствовать ОФС «Таблетки».
1. ВЭЖХ. Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания основного пика на хроматограмме стандартного раствора («Количественное определение»).
2. Качественная реакция. Навеску порошка растертых таблеток, содержащую 10 мг хлорамбуцила, помещают в пробирку и прибавляют 0,2 мл раствора калия дихромата в серной кислоте. Пробирку накрывают фильтровальной бумагой, смоченной свежеприготовленным 1% раствором натрия нитропруссида и каплей пиперидина и нагревают; должно появиться синее окрашивание.
3. Качественная реакция. К навеске порошка растертых таблеток, содержащей 10 мг хлорамбуцила, прибавляют 2 мл спирта 95%, перемешивают и фильтруют. К фильтрату прибавляют 0,5 мл 0,1 М раствора серебра нитрата и нагревают в течение 2 мин на кипящей водяной бане; должен образоваться белый творожистый осадок, растворимый в растворе аммиака.
Растворение. Определение проводят в соответствии с ОФС «Растворение для твердых дозированных лекарственных форм» методом ВЭЖХ.
Подвижная фаза (ПФ). 0,2 г аммония ацетата помещают в мерную колбу вместимостью 1 л, прибавляют 400 мл воды, 1 г уксусной кислоты ледяной и перемешивают. Прибавляют 600 мл ацетонитрила, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм и дегазируют.
Испытуемый раствор. В каждый сосуд для растворения с предварительно нагретой средой растворения помещают одну таблетку. Через 30 мин отбирают пробу раствора и фильтруют через полипропиленовый фильтр с размером пор 10 мкм, отбрасывая первые порции фильтрата. При необходимости полученный раствор дополнительно разводят средой растворения до концентрации хлорамбуцила около 0,0022 мг/мл. Срок годности раствора — 2 ч.
Стандартный раствор. Около 22 мг (точная навеска) стандартного образца хлорамбуцила помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в ацетонитриле и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. 5,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 500 мл и доводят объем раствора средой растворения до метки. Срок годности раствора — 2 ч.
Хроматографируют стандартный и испытуемый растворы.
Пригодность хроматографической системы (с использованием стандартного раствора) определяют в соответствии с ОФС «Хроматография» со следующими уточнениями:
- эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная для пика хлорамбуцила, должна быть не менее 600 т.т.;
- фактор асимметрии пика хлорамбуцила должен быть не более 2,0;
- относительное стандартное отклонение площади пика хлорамбуцила должно быть не более 2%.
Количество хлорамбуцила, перешедшее в раствор, в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot 900 \cdot F \cdot a_{0} \cdot 5 \cdot P}{S_{0} \cdot L \cdot 100 \cdot 500} = \frac{S_{1} \cdot F \cdot a_{0} \cdot P \cdot 0,09}{S_{0} \cdot L}
S1 — площадь основного пика на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь основного пика на хроматограмме стандартного раствора;
a0 — навеска стандартного образца хлорамбуцила, мг;
P — содержание хлорамбуцила в стандартном образце хлорамбуцила, %;
L — заявленное количество хлорамбуцила в одной таблетке, мг;
F — фактор дополнительного разведения испытуемого раствора.
Через 30 мин в раствор должно перейти не менее 75% (Q) хлорамбуцила C14H19Cl2NO2.
Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Растворы защищают от действия света и хранят при комнатной температуре не более 8 ч, при температуре 4 — 8 °C — не более 24 ч.
Подвижная фаза (ПФ). Метанол — 1% раствор трифторуксусной кислоты 50:50.
Испытуемый раствор. Навеску порошка растертых таблеток, содержащую 10 мг хлорамбуцила, помещают в мерную колбу вместимостью 20 мл, растворяют в метаноле и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Раствор сравнения. 1,0 мл испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора ПФ до метки. 2,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл и доводят объем раствора ПФ до метки.
Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. 5 мг стандартного образца хлорамбуцила (с примесью G) помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, растворяют в метаноле и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Примесь G: 4-{2-[бис(2-хлорэтил)амино]фенил}бутановая кислота, CAS 178481-89-5 или 4-{3-[бис(2-хлорэтил)амино]фенил}бутановая кислота, CAS 134862-11-6.
Хроматографируют испытуемый раствор, раствор сравнения и раствор для проверки пригодности хроматографической системы.
Пригодность хроматографической системы (с использованием раствора для проверки пригодности хроматографической системы) определяют в соответствии с ОФС «Хроматография» со следующим уточнением: разрешение (R) между пиками хлорамбуцила и примеси G должно быть не менее 1,5.
Относительные времена удерживания соединений. Хлорамбуцил — 1 (около 11 мин), примесь G — около 1,2.
Допустимое содержание примеси G. На хроматограмме испытуемого раствора площадь пика примеси G должна быть не более площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,4%).
Растворы защищают от света и используют сразу же после приготовления.
Растворитель. 400 мл воды помещают в мерную колбу вместимостью 1 л, прибавляют 8,7 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и доводят объем раствора водой до метки. 100 мл полученного раствора смешивают с 900 мл ацетонитрила.
Подвижная фаза А (ПФА). 1,9 г аммония ацетата помещают в мерную колбу вместимостью 1 л, растворяют в 900 мл воды и доводят pH полученного раствора до 3,9 уксусной кислотой ледяной. Доводят объем раствора водой до метки.
Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил.
Испытуемый раствор. Навеску порошка растертых таблеток, содержащую 25 мг хлорамбуцила, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 70 мл растворителя, взбалтывают, доводят объем раствора растворителем до метки и фильтруют.
Раствор сравнения. 1,0 мл испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора растворителем до метки. 1,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл и доводят объем раствора растворителем до метки.
Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. 5 мг стандартного образца хлорамбуцила для проверки пригодности хроматографической системы (с примесями B и E) помещают в мерную колбу вместимостью 20 мл, растворяют в растворителе и доводят объем раствора растворителем до метки.
Примесь В: 4-{4-[(2-хлорэтил)амино]фенил}бутановая кислота, CAS 116505-53-4;
примесь Е: 4-[4-({2-[(4-{4-[бис(2-хлорэтил)амино]фенил}бутаноил) окси]этил}(2-хлорэтил)амино)фенил]бутановая кислота, CAS 1988791-13-4.
| Время, мин | ПФА, % | ПФБ, % | Режим |
|---|---|---|---|
| 0 — 5 | 60 | 40 | Изократический |
| 5 — 15 | 60 \rightarrow 10 | 40 \rightarrow 90 | Линейный градиент |
| 15 — 25 | 10 | 90 | Изократический |
Хроматографируют испытуемый раствор, раствор сравнения и раствор для проверки пригодности хроматографической системы.
Пригодность хроматографической системы (с использованием раствора для проверки пригодности хроматографической системы) определяют в соответствии с ОФС «Хроматография» со следующим уточнением: разрешение (R) между пиками хлорамбуцила и примеси В должно быть не менее 5,0.
Относительные времена удерживания соединений. Хлорамбуцил — 1 (около 12 мин), примесь В — около 0,5, примесь Е — около 1,4.
Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:
- площадь пика примеси Е должна быть не более 6-кратной площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,6%);
- площадь пика примеси В должна быть не более 4-кратной площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,4%);
- площадь пика любой другой примеси должна быть не более площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,10%);
- суммарная площадь пиков всех примесей должна быть не более 10-кратной площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 1,0%).
Не учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,5 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05%).
Однородность дозирования. Определение проводят в соответствии с ОФС «Однородность дозирования» (способ 1) методом ВЭЖХ в условиях испытания «Количественное определение».
Испытуемый раствор. Одну таблетку помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл спирта 96% и, при осторожном перемешивании, 5,0 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты и 2,0 мл раствора внутреннего стандарта. Раствор выдерживают на ультразвуковой бане в течение 5 мин, охлаждают и доводят объем раствора спиртом 96% до метки. Раствор фильтруют через фильтр со средним размером пор при пониженном давлении во избежание испарения растворителя. При необходимости полученный раствор дополнительно разводят спиртом 96% до концентрации хлорамбуцила около 0,02 мг/мл.
Содержание хлорамбуцила C14H19Cl2NO2 в процентах от заявленного количества (X) в одной таблетке вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot 2 \cdot P \cdot 100}{S_{0} \cdot 20 \cdot 100 \cdot L \cdot F} = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P}{S_{0} \cdot L \cdot F \cdot 10}
S1 — отношение площади пика хлорамбуцила к площади пика внутреннего стандарта на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь площади пика хлорамбуцила к площади пика внутреннего стандарта на хроматограмме стандартного раствора;
a0 — навеска стандартного образца хлорамбуцила, мг;
P — содержание хлорамбуцила в стандартном образце хлорамбуцила, %;
L — заявленное содержание хлорамбуцила в одной таблетке, мг;
F — фактор дополнительного разведения испытуемого раствора.
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
Количественное определение. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Подвижная фаза (ПФ). 500 мл спирта 96% помещают в мерную колбу вместимостью 1 л, прибавляют 1 мл уксусной кислоты ледяной и доводят объем раствора водой до метки. Проводят дегазирование в течение 2 мин при давлении 250 мм рт. ст.
Раствор внутреннего стандарта. Около 20 мг (точная навеска) стандартного образца пропилпарабена помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в спирте 96% и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Испытуемый раствор. Точную навеску порошка, содержащую около 2 мг хлорамбуцила, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл спирта 96% и, при осторожном перемешивании, 5,0 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты и 2,0 мл раствора внутреннего стандарта. Раствор выдерживают на ультразвуковой бане в течение 5 мин, охлаждают и доводят объем раствора спиртом 96% до метки. Раствор фильтруют через фильтр со средним размером пор при пониженном давлении во избежание испарения растворителя.
Стандартный раствор. Около 20 мг (точная навеска) стандартного образца хлорамбуцила помещают в мерную колбу вместимостью 20 мл, растворяют в спирте 96% и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. 2,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл спирта 96% и, при осторожном перемешивании, 5,0 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты и 2,0 мл раствора внутреннего стандарта. Доводят объем раствора спиртом 96% до метки.
Хроматографируют испытуемый и стандартный растворы.
Пригодность хроматографической системы (с использованием стандартного раствора) определяют в соответствии с ОФС «Хроматография» со следующими уточнениями:
- разрешение (R) между пиками хлорамбуцила и пропилпарабена должно быть не менее 2,0;
- относительное стандартное отклонение отношения площади пика хлорамбуцила к площади пика пропилпарабена должно быть не более 2,0%.
Содержание хлорамбуцила C14H19Cl2NO2 в процентах от заявленного количества (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot 2 \cdot P \cdot 100 \cdot G}{S_{0} \cdot 20 \cdot 100 \cdot a_{1} \cdot L} = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot G}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot L \cdot 10}
S1 — отношение площади пика хлорамбуцила к площади пика внутреннего стандарта на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — отношение площади пика хлорамбуцила к площади пика внутреннего стандарта на хроматограмме стандартного раствора;
a1 — навеска порошка растертых таблеток, мг;
a0 — навеска стандартного образца хлорамбуцила, мг;
P — содержание хлорамбуцила в стандартном образце хлорамбуцила, %;
G — средняя масса одной таблетки, мг;
L — заявленное количество хлорамбуцила в одной таблетке, мг.
Хранение. В защищенном от света месте при температуре от 2 до 8 °C.