ФС.2.5.0095.18. Фармакопейная статья. Сушеницы топяной трава
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том IV»)
Внимание
Документ утратил силу в связи с введением в действие ФС.2.5.0095, утв. Приказом Минздрава России от 13.03.2024 № 120. В соответствии с Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749 данный документ введен в действие с 01.12.2018. Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/femb/pharmacopea.php по состоянию на 15.03.2019 и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи. Взамен ГФ XI, вып. 2, ст. 51.
ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ
flowchart LR n0["Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск..."]:::rst click n0 "https://bukva.ai/docs/gf-xi-minzdrav-sssr-ministerstvo" "Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье" n1["ФС.2.5.0095.18"]:::rst click n1 "https://bukva.ai/docs/fs-2-5-0095-18" "ФС.2.5.0095.18. Фармакопейная статья. Сушеницы топяной трава (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)" n2["ФС.2.5.0095"]:::doc click n2 "https://bukva.ai/docs/prikaz-fs-2-5-0095" "ФС.2.5.0095. Фармакопейная статья. Сушеницы топяной трава (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 13.03.2024 N 120)" n1 --> n2 n0 --> n1 classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000; classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000; classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Gnaphalii uliginosi herba ФС.2.5.0095.18 Взамен ГФ XI, вып. 2, ст. 51 | |
| Собранная в начале цветения и высушенная трава с корнями дикорастущего однолетнего травянистого растения сушеницы топяной — Gnaphalium uliginosum L.s. 1., сем. астровых — Asteraceae. |
Внешние признаки. Цельное сырье. Цельные или частично измельченные олиственные стебли длиной до 30 см с серовато-белым войлочным опушением. Корни тонкие, стержневые, ветвистые. Стебли тонкие, цилиндрические, обычно от основания распростерто-ветвистые. Листья длиной 0,5 — 3,5 см, шириной 0,1 — 0,4 см, очередные, короткочерешковые, линейно-продолговатые, с туповатой верхушкой и выдающейся срединной жилкой. Соцветие состоит обычно из нескольких яйцевидных мелких корзинок длиной 0,3 — 0,4 см, плотно скученных клубочками на верхушках побегов и окруженных лучисторасходящимися листьями, превышающими клубочки соцветий. Обвертка корзинки состоит из 2 — 3 рядов черепитчато-расположенных темно-бурых листочков; наружные листочки яйцевидные, при основании войлочные, в верхней половине голые, блестящие; внутренние — продолговато-яйцевидные, заостренные, голые. Цветки мелкие, желтоватые, трубчатые, пятизубчатые. Плоды — семянки с хохолком из 10 отдельных волосков. Корни стержневые, ветвистые.
Цвет зеленовато-серый. Запах слабый. Вкус водного извлечения солоноватый.
Измельченное сырье. Кусочки стеблей, листьев, соцветий, корней, а также отдельные цветки, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 7 мм. Цвет зеленовато-серый. Запах слабый. Вкус водного извлечения солоноватый.
Микроскопические признаки. Цельное сырье, измельченное сырье. При рассмотрении микропрепаратов листа с поверхности должны быть видны клетки эпидермиса, с обеих сторон более или менее вытянутые по длине листа. Клетки эпидермиса верхней стороны листа должны быть со слабоизвилистыми стенками, с нижней стороны листа — с сильно извилистыми стенками. Клетки в основном прямоугольной формы, у основания и вершины листа вытянутые. Нижний эпидермис с извилистыми и сильноизвилистыми стенками, у основания и вершины листа клетки вытянуты и имеют более ровные стенки. Кутикула ровная. Устьица крупные, овально-округлые, погруженные окружены 4 — 5 клетками эпидермиса и ориентированы по длине листа (аномоцитный тип) должны встречаться редко; на нижней стороне их значительно больше. На поперечных и продольных срезах должны быть видны утолщенные наружные и внутренние стенки эпидермальных клеток. Открытые коллатеральные сосудисто-волокнистые пучки расположены по кругу с небольшими межпучковыми зонами, в которых межпучковая паренхима склерифицирована. Склеренхимные волокна в виде «шапочек» должны быть расположены над пучками, а также имеются в ксилеме. Сосуды спиральные и точечные должны быть представлены небольшими радиальными тяжами группами по 2 — 4. Кора должна быть отделена от центрального осевого цилиндра рядом клеток эндодермы. Сердцевина должна быть заполнена крупными паренхимными клетками. Волоски стебля аналогичны волоскам листа.
Рисунок 1 — Сушеницы топяной лист:
А — верхний эпидермис (250x). Б — нижний эпидермис (250x).
В — поперечный срез (125x). 1 — простые волоски;
2 — головчатые волоски; 3 — клетки эпидермиса; 4 — устьица;
5 — флоэма; 6 — ксилема; 7 — губчатая паренхима.
Рисунок 2 — Сушеницы топяной стебель:
поперечный срез (125x). 1 — простые волоски; 2 — головчатые
волоски; 3 — клетки эпидермиса; 4 — эндодерма; 5 — флоэма;
6 — сосуды; 7 — камбий; 8 — склеренхимные волокна;
9 — склерифицированная межпучковая паренхима;
10 — паренхима сердцевины.
Рисунок 3 — Сушеницы топяной стебель:
А — продольный срез (125x). Б — срез с поверхности (150x).
В — схема расположения сосудисто-волокнистых пучков
на поперечном срезе. 1 — простые волоски; 2 — головчатые
волоски; 3 — клетки эпидермиса; 4 — эндодерма; 5 — флоэма;
6 — сосуды; 7 — камбий; 8 — склеренхимные волокна;
9 — паренхима сердцевины; 10 — устьица;
Фл — флоэма; Кс — ксилема.
семянки. 1 — головчатые волоски. 2 — простые волоски.
Эпидермис обвертки корзинки должен состоять из вытянутых прямоугольных клеток с ровными стенками и редко встречающихся аномоцитных устьиц. Кутикула ровная. Волоски должны быть такими же, как волоски листа, но головчатые волоски более крупные, насчитывающие до четырех клеток в высоту. Хохолок семени должен состоять из многочисленных пучковых многоклеточных волосков. Пыльца округлая шиповатая трехпоровая.
Определение основных групп биологически активных веществ.
Около 5,0 г (точная навеска) измельченного до однородной массы сырья, помещают в круглодонную колбу 250 мл, прибавляют 60 мл спирта 70% и нагревают на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 45 мин. Колбу с содержимым охлаждают до комнатной температуры и фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 мл через бумажный фильтр. В колбу со шротом добавляют 40 мл спирта 70%, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на водяной бане в течение 15 мин. Колбу с содержимым охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через тот же фильтр в ту же мерную колбу. Объем раствора доводят спиртом 70% до метки и тщательно перемешивают (раствор А).
20 мл раствора А упаривают до удаления запаха спирта на кипящей водяной бане. Водный остаток раствора А разбавляют водой очищенной до 30 мл и переносят в делительную воронку 100 мл. В ту же воронку добавляют 20 мл бутанола и встряхивают в течение 10 мин. Бутанольное извлечение переносят в колбу и упаривают на водяной бане под вакуумом досуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл спирта 70% (испытуемый раствор).
На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля наносят 20 мкл (0,02 мл) испытуемого раствора. Пластинку с нанесенной пробой сушат на воздухе в течение 10 мин, помещают в камеру со смесью растворителей: бутанол — уксусная кислота — вода (9:1:0,5) и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителя пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе до удаления следов растворителей в течение 15 мин. Затем пластину обрабатывают алюминия хлорида спиртовым раствором 5%, выдерживают при температуре 100 — 105 °C в сушильном шкафу в течение 10 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.
На хроматограмме испытуемого раствора в верхней трети должны обнаруживаться две зоны адсорбции с флуоресценцией зеленого цвета (флавоноиды); допускается обнаружение дополнительных зон адсорбции ниже указанных зон адсорбции.
В УФ-спектре испытуемого раствора, полученного при количественном определении, в области от 200 до 400 нм, должны регистрироваться максимумы поглощения при (216 +/- 3) нм и (330 +/- 3) нм и минимум поглощения при (266 +/- 3) нм.
Около 1,0 г сырья помещают в колбу вместимостью 25 мл и прибавляют 10 мл спирта 96%, соединяют с обратным холодильником и нагревают на водяной бане в течение 10 мин с момента закипания спирта в колбе. После охлаждения до комнатной температуры полученное извлечение фильтруют через бумажный фильтр.
В две одинаковые пробирки помещают по 2 мл полученного фильтрата, затем в одну из пробирок добавляют 0,5 мл алюминия хлорида спиртового раствора 2% (испытуемый раствор), а во вторую — 0,5 мл спирта 96% (раствор сравнения), содержимое пробирок перемешивают. Через 20 мин в обе пробирки прибавляют по 10 мл воды очищенной, перемешивают содержимое и просматривают на белом фоне. Анализируемый раствор должен иметь желтый цвет и по интенсивности окраски заметно превосходить раствор сравнения (флавоноиды).
Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 13%.
Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 20%.
Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 10%.
Измельченность сырья. Цельное сырье. Измельченных частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, — не более 5%. Измельченное сырье. Частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм, — не более 10%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,31 мм, — не более 10%.
Органической примеси. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 2%.
Минеральной примеси. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 2%.
Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».
Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье. Сумма флавоноидов в пересчете на гнафалозид А — не менее 0,2%
Приготовление колонки: 1,5 г порошка полиамида для колоночной хроматографии помещают в стакан вместимостью 50 мл, заливают 30 мл воды, перемешивают и выливают через воронку диаметром 3,5 см в колонку шириной 1,2 см и высотой 25 см, в нижнюю часть которой помещают небольшой ватный тампон, предварительно смоченный водой. Колонку заполняют при открытом кране. Элюирование проводят со скоростью 4 мл/мин.
Контрольный раствор. Контрольный раствор получают аналогично определяемой сумме флавоноидов путем пропускания 50 мл спирта 96% через колонку в мерную колбу вместимостью 50 мл. Объем раствора доводят спиртом 96% до метки и перемешивают.
Стандартный раствор калия бихромата. Около 0,03 г (точная навеска) калия бихромата, высушенного до постоянной массы, растворяют в серной кислоте растворе 0,005 М в мерной колбе вместимостью 1 л, доводят объем раствора тем же раствором до метки и перемешивают.
Серной кислоты раствор 0,005 М. К 1 л воды приливают 0,28 мл серной кислоты концентрированной и перемешивают.
Аналитическую пробу сырья измельчают до получения однородной массы. Около 5,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в патрон из фильтровальной бумаги и экстрагируют спиртом 96% в аппарате Сокслета с экстрактором вместимостью 150 мл на кипящей водяной бане в течение 5 ч ( 20 \div 25 сливов). Извлечение в круглодонной колбе вместимостью 100 мл упаривают по частям на кипящей водяной бане досуха.
К сухому остатку в колбе прибавляют 5 мл натрия хлорида раствора 10%, нагревают на кипящей водяной бане в течение 2 мин, растирая осадок стеклянной палочкой до растворения. После охлаждения раствор количественно переносят на колонку с полиамидным сорбентом. Операцию проводят два раза. Слив производят через воронку с ватным тампоном, предварительно смоченным водой.
Колонку промывают 10 мл воды, затем убирают ватный тампон и промывают колонку еще 20 мл воды. Водный элюат отбрасывают. Флавоноиды элюируют 50 мл спирта 96% со скоростью 4 мл/мин. Когда темно-желтая зона (в УФ-свете) подойдет к нижней части сорбента, элюат собирают в мерную колбу вместимостью 50 мл. Объем извлечения доводят спиртом 96% до метки и тщательно перемешивают.
1 мл полученного элюата переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, объем доводят раствора спиртом 96% до метки и перемешивают (испытуемый раствор). Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 338 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм по сравнению с контрольным раствором.
Параллельно измеряют оптическую плотность стандартного раствора калия бихромата. В качестве раствора сравнения используют серной кислоты раствор 0,005 М.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на гнафалозид А в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{A \cdot 0,2020 \cdot 50 \cdot 50 \cdot 1,03 \cdot a_{0} \cdot 100 \cdot 100}{A_{0} \cdot a \cdot 1 \cdot 1000 \cdot (100 - W)} = \frac{A \cdot 5,201 \cdot a_{0}}{A_{0} \cdot a \cdot (100 - W)} ,
где A — оптическая плотность испытуемого раствора;
A0 — оптическая плотность стандартного раствора калия бихромата;
a0 — навеска калия бихромата, г;
0,2020 — коэффициент пересчета калия бихромата на гнафалозид А;
1,03 — поправочный коэффициент на неполное элюирование гнафалозида А с полиамидного сорбента;
Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».
Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».