ФС.2.5.0083.18. Фармакопейная статья. Марены корневища и корни
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том IV»)
Примечание
В соответствии с Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749 данный документ введен в действие с 01.12.2018. Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/femb/pharmacopea.php по состоянию на 15.01.2019. Взамен ГФ XI, вып. 2, ст. 76.
ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ
flowchart LR n0["Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск..."]:::rst click n0 "https://bukva.ai/docs/gf-xi-minzdrav-sssr-ministerstvo" "Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье" n1["ФС.2.5.0083.18"]:::doc click n1 "https://bukva.ai/docs/fs-2-5-0083-18" "ФС.2.5.0083.18. Фармакопейная статья. Марены корневища и корни (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)" n0 --> n1 classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000; classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000; classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Марены корневища и корни | ФС.2.5.0083.18 |
|---|---|
| Rubiae rhizomata et radices | Взамен ГФ XI, вып. 2, ст. 76 |
Собранные весной в начале вегетации или осенью в период плодоношения, тщательно очищенные от земли и высушенные корневища и корни дикорастущих и культивируемых многолетних травянистых растений марены красильной — Rubia tinctorum L. и марены грузинской — Rubia iberica (Fish. ex DC). C. Koch, сем. мареновых — Rubiaceae.
Внешние признаки. Цельное сырье. Корневища и корни продольно-морщинистые, цилиндрические, различной длины, толщиной 2 — 18 мм, обычно с отслаивающейся шелушащейся пробкой. У корневищ в центре обычно имеется полость.
Цвет корневищ и корней снаружи красновато-коричневый, на изломе видна красновато-коричневая кора и оранжево-красная древесина. Запах слабый, характерный. Вкус водного извлечения сладковатый, затем слегка вяжущий и горький.
Измельченное сырье. Смесь кусочков корневищ и корней различной формы, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 7 мм. Цвет красновато-коричневый, оранжево-красный. Запах слабый, характерный. Вкус водного извлечения сладковатый, затем слегка вяжущий и горький.
Микроскопические признаки. Цельное сырье. На поперечном срезе корня или корневища должны быть видны несколько слоев клеток пробки представленных прямоугольными клетками с очень тонкими стенками. Наружные слои клеток пробки полуразрушены и отслаиваются. Сердцевинные лучи не выражены. Кора состоит из тонкостенных клеток, клетки лубяной паренхимы располагаются радиальными рядами. В клетках паренхимы встречаются рафиды оксалата кальция. Линия камбия узкая. Древесина имеет извилистый контур. Сосуды лежат небольшими группами. В полости сосудов часто встречаются тиллы. Паренхимные клетки древесины утолщены и одревесневшие, расположены радиальными рядами.
В корневище центральная часть занята сердцевиной, состоящей из крупных овальных клеток с утолщенными оболочками, пронизанными овальными порами, иногда сердцевина частично разрушена. Изредка в клетках сердцевины встречаются рафиды оксалата кальция.
Измельченное сырье. При рассмотрении «давленого» микропрепарата должны быть видны фрагменты пробковой ткани, состоящей из многоугольных или прямоугольных клеток, фрагменты сетчатых сосудов, фрагменты паренхимных клеток с рафидами оксалата кальция, одиночные игольчатые кристаллы.
Рисунок — Марены корневища и корни
1 — фрагмент поперечного среза корневища с рафидами оксалата кальция «a» (40x); 2 — фрагмент пробки — поперечный срез (200x); 3 — фрагмент поперечного среза корня (200x); 4 — фрагмент пробки — вид с поверхности (200x); 5 — сосуды древесины (200x); 6 — сосуды древесины с игольчатым кристаллом «a» и рафидами «b» оксалата кальция (200x); 7 — сосуды древесины с тиллами «a» (200x); 8 — фрагмент сетчатого сосуда — «давленый» микропрепарат (200x); 9 — рафиды оксалата кальция — «давленый» микропрепарат (400x); 10 — игольчатые кристаллы оксалата кальция — «давленый» микропрепарат (400x)
Люминесцентная микроскопия. При рассмотрении поперечного среза корня (без включающей жидкости) в УФ-свете должна быть видна тусклая, почти черная пробка. Кора должна иметь интенсивное желтовато-оранжевое или красновато-оранжевое свечение (антраценпроизводные). Оболочки древесных сосудов и трахеид яркие зеленовато-голубые, содержимое клеток древесной паренхимы желтовато-оранжевое или красновато-оранжевое. В отдельных сосудах, на месте тиллов, встречаются сростки кристаллов с очень яркой желтовато-оранжевой или красновато-оранжевой люминесценцией (руберитриновая кислота).
В корневище сердцевина имеет такое же свечение, как и кора.
Определение основных групп биологически активных веществ
Раствор магния ацетат спиртового 2%. 2 г магния ацетата растворяют в спирте 96% в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора спиртом 96% до метки и перемешивают. Срок годности раствора 1 месяц.
0,2 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,25 мм, помещают в плоскодонную колбу вместимостью 50 мл и прибавляют 20 мл воды. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Полученный раствор охлаждают до комнатной температуры, прибавляют 1 мл уксусной кислоты ледяной, перемешивают. 5 мл полученного раствора помещают в делительную воронку вместимостью 50 мл прибавляют 5 мл хлороформа и взбалтывают в течение 1 мин. После разделения слоев хлороформное извлечение (нижний слой) сливают в колбу вместимостью 30 мл. Извлечение хлороформом повторяют еще два раза порциями по 5 мл. К объединенному хлороформному извлечению прибавляют 10 мл натрия гидроксида раствора 10% и встряхивают в течение 1 мин; должно наблюдаться фиолетовое или фиолетово-красное окрашивание верхнего слоя (свободные антрахиноны).
Оставшийся водный слой после извлечения хлороформом (3 раза по 5 мл) фильтруют через бумажный фильтр (испытуемый раствор).
На линию старта хроматографической пластинки со слоем силикагеля с флуоресцентным индикатором наносят в виде полосы длиной 10 мм и шириной не более 2 см 15 мкл (0,015 мл) испытуемого раствора. Пластинку с нанесенной пробой сушат при температуре около 100 °C в течение 7 мин и помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение не менее 30 мин смесью растворителей спирт 96%-хлороформ-толуол-уксусная кислота ледяная (15:15:10:10), и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта ее вынимают из камеры, сушат при температуре около 100 °C в течение 3 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.
На хроматограмме испытуемого раствора в нижней половине должны обнаруживаться 2 зоны адсорбции с флуоресценцией оранжевого цвета (антраценпроизводные); допускается обнаружение других зон адсорбции.
Затем пластинку опрыскивают магния ацетата раствором спиртовым 2% и выдерживают при температуре 100 °C в течение 3 мин и просматривают в УФ-свете при 365 нм.
На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться зона адсорбции с флуоресценцией желтого цвета (нижняя из двух зон адсорбции с флуоресценцией оранжевого цвета); допускается обнаружение других зон адсорбции.
При взаимодействии эфирных извлечений с раствором натрия гидроксида 30% и щелочно-аммиачным раствором (раздел «Количественное определение») должно наблюдаться красно-фиолетовое окрашивание (антраценпроизводные).
Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 13%.
Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 10%.
Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 4%.
Измельченность сырья. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм, — не более 5%; измельченных частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,25 мм, — не более 5%.
Других частей растения (стеблей, листьев и др.). Цельное сырье — не более 1,5%.
Органической примеси. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 1%.
Минеральной примеси. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 1%.
Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».
Количественное определение. Связанные производные антрацена. Цельное сырье, измельченное сырье: связанных производных антрацена — не менее 3%.
Щелочно-аммиачный раствор. 50 г натрия гидроксида растворяют при перемешивании в 870 мл воды. После охлаждения раствора прибавляют 80 мл аммиака раствора концентрированного 25% и перемешивают. Раствор годен в течение суток.
1. Определение суммы производных антрацена
Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,25 мм.
Около 0,1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 200 мл, приливают 7,5 мл ледяной уксусной кислоты, 1 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и нагревают с обратным холодильником на кипящей водяной бане при слабом кипении в течение 15 мин; при этом колбу периодически встряхивают вращательным движением, смывая появляющийся на ее стенках осадок. Затем колбу охлаждают холодной водой и проводят экстракцию эфиром 3 раза по 30 мл при нагревании на водяной бане с обратным холодильником (температура не выше 35 °C) в течение 15 мин с момента закипания эфира. После охлаждения колбы объединенное эфирное извлечение фильтруют через вату в делительную воронку вместимостью 250 мл.
Эфирное извлечение промывают 2 раза по 20 мл воды. При непрерывном охлаждении к эфирному извлечению приливают малыми порциями сначала 15 мл натрия гидроксида раствора 30%, затем 25 мл щелочно-аммиачного раствора. Затем, не переставая охлаждать, смесь встряхивают в течение 5 мин, окрашенный раствор собирают в мерную колбу вместимостью 500 мл. Экстракцию щелочно-аммиачным раствором повторяют несколько раз до прекращения окрашивания щелочного раствора.
К объединенному извлечению прибавляют 3 капли пергидроля, тщательно перемешивают, доводят объем раствора щелочно-аммиачным раствором до метки и перемешивают. Через 10 мин измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длине волны 530 нм в кювете с толщиной слоя 5 мм, используя в качестве раствора сравнения щелочно-аммиачный раствор.
По калибровочному графику находят содержание производных антрацена в граммах в 1 мл раствора.
Содержание суммы производных антрацена в пересчете на абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{C \cdot 500 \cdot 100 \cdot 100}{a \cdot (100 - W)} ,
где C — содержание свободных производных антрацена в 1 мл раствора, найденное по калибровочному графику, в граммах;
W — влажность сырья в процентах.
2. Определение свободных производных антрацена
Около 0,1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 300 мл, прибавляют 50 мл эфира и нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 10 мин с момента закипания эфира. Экстракцию повторяют трижды, затем колбу охлаждают и эфирные извлечения фильтруют через вату в делительную воронку вместимостью 20 мл. Воронку с эфирным извлечением охлаждают и производные антрацена извлекают 4 раза по 20 мл щелочно-аммиачным раствором, каждый раз встряхивая в течение 5 мин. Щелочной раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 1 каплю пергидроля, объем раствора доводят щелочно-аммиачным раствором до метки и перемешивают.
Измеряют оптическую плотность полученного раствора как указано при определении суммы производных антрацена («1»).
Содержание свободных производных антрацена в пересчете на абсолютно сухое сырье в процентах (X1) вычисляют по формуле:
X_{1} = \frac{C \cdot 100 \cdot 100 \cdot 100}{a \cdot (100 - W)} ,
где C — содержание свободных производных антрацена в 1 мл раствора, найденное по калибровочному графику, в граммах;
W — влажность сырья, в процентах.
Содержание связанных производных антрацена в пересчете на абсолютно сухое сырье (в процентах X2) вычисляют по формуле:
Построение калибровочного графика. 50 г кобальта хлорида (CoCl2·6H2O), высушенного до постоянной массы, помещают в мерную колбу вместимостью 500 мл, растворяют в 250 мл воды, прибавляют 1 мл хлористоводородной кислоты 25%, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Полученный раствор является исходным (N 10). Из этого раствора готовят серию разбавленных растворов (N 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 и 9), содержащих кобальта хлорида соответственно 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 и 90 мг в 1 мл, и измеряют их оптические плотности на спектрофотометре при длине волны 530 нм. Для построения калибровочного графика на оси абсцисс откладывают концентрацию растворов, а на оси ординат — их оптическую плотность.
При этом концентрации растворов кобальта хлорида выражают в соответствующих концентрациях свободных производных антрацена, пользуясь таблицей.
Соотношения содержания свободных производных антрацена, содержащего кобальта хлорида (CoCl2·6H2O), г/мл в растворе
Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья».
Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».