ФС.2.5.0082.18. Фармакопейная статья. Лимонника китайского семена

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том IV»)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск..."]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gf-xi-minzdrav-sssr-ministerstvo" "Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье"
  n1["ФС.2.5.0082.18"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/fs-2-5-0082-18" "ФС.2.5.0082.18. Фармакопейная статья. Лимонника китайского семена (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Собранные и освобожденные от околоплодника, высушенные семена дикорастущей деревянистой лианы лимонника китайского — Schisandra chinensis (Turcz.) Baill., сем. лимонниковых — Schisandraceae.

ПОДЛИННОСТЬ

Внешние признаки. Цельное сырье. Семена округло-почковидной формы, на вогнутой стороне с заметным темно-серым рубчиком, расположенным поперек семени. Длина 3 — 5 мм, ширина 2 — 4,5 мм, толщина 1,5 — 2,5 мм. Поверхность гладкая, блестящая, желтовато-бурого цвета. Семена состоят из твердой хрупкой кожуры и плотного ядра, которое у недоразвитых семян может отсутствовать. Кожура легко ломается и свободно отстает от ядра. Ядро подковообразной формы, восковидно-желтое, один конец конусовидно заостренный, другой округлый. На выпуклой стороне ядра семени проходит светло-коричневая бороздка. Основную массу ядра семени составляет эндосперм. В заостренном конце верхушки (в эндосперме) лежит небольшой зародыш, заметный под лупой. Цвет желтовато-коричневый. Запах сильный, характерный. Вкус водного извлечения пряный, горьковато-жгучий.

Измельченное сырье. Кусочки сырья различной формы, проходящие сквозь сито с отверстиями диаметром 5 мм. Цвет желтовато-коричневый. Запах сильный, характерный. Вкус водного извлечения пряный, горьковато-жгучий.

Микроскопические признаки. Цельное сырье. На поперечном срезе семени должна быть видна семенная кожура, состоящая из нескольких слоев. Эпидермальный слой представлен крупными радиально вытянутыми клетками, с утолщенными, одревесневшими темно-желтыми оболочками, пронизанными порами. Под ним расположен склеренхимный слой, состоящий из 4 — 6 рядов сильно одревесневших каменистых клеток.

Далее лежит слой спавшихся клеток, а за ним один ряд очень крупных тонкостенных 4-угольных клеток, содержащих маслянистые включения в виде капель лимонно-желтого цвета. Самый внутренний слой семенной кожуры — бесструктурная спавшаяся тонкостенная ткань. Эндосперм семени состоит из небольших многоугольных клеток, содержащих капли жирного масла и мелкие алейроновые зерна.

Измельченное сырье. При рассмотрении микропрепаратов измельченного сырья должны быть видны фрагменты семенной кожуры с крупными радиально вытянутыми клетками эпидермального слоя, фрагменты склеренхимы и отдельные каменистые клетки, фрагменты спавшихся клеток, эндосперма с каплями масла, алейроновые зерна, капли масла.

Рисунок 1 — Лимонника китайского семена (120x)

А — поперечный срез; Б — измельченное сырье: 1 — эпидермис; 2 — склеренхима; 3 — слой спавшихся клеток; 4 — клетки с каплями масла лимонно-желтого цвета; 5 — бесструктурная спавшаяся тонкостенная ткань; 6 — клетки эндосперма; 7 — алейроновые зерна; 8 — капли масла

Рисунок 2 — Лимонника китайского семена

1 — поперечный срез семенной кожуры (120x); 2 — поперечный срез семени (120x); 3 — семенная кожура с поверхности (120x); 4 — поперечный срез семени. Эндосперм (120x); 5 — поперечный срез семени. Слой клеток с каплями жирного масла и эндосперм (120x); 6, 7 — Лимонника китайского семена измельченные (120x)

Определение основных групп биологически активных веществ

Тонкослойная хроматография

Около 0,5 г сырья, измельченного до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 25 мл спирта 70%, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Охлажденное до комнатной температуры извлечение фильтруют через бумажный фильтр «белая лента» (испытуемый раствор).

На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля с флуоресцентным индикатором наносят 10 мкл (0,01 мл) испытуемого раствора. Пластинку с нанесенной пробой сушат на воздухе в течение 2 — 3 мин, затем помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение не менее 30 мин хлороформом, и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителя и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм.

На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться одна основная зона адсорбции фиолетового цвета и не менее 3 зон адсорбции фиолетового цвета: одна выше и две ниже основной зоны адсорбции.

Качественная реакция

0,5 г сырья экстрагируют 25 мл спирта 70% в течение 30 мин. Полученное извлечение после охлаждения упаривают на кипящей водяной бане досуха. К сухому остатку добавляют 2 мл хлористого метилена и 3 — 5 капель серной кислоты концентрированной; должно наблюдаться красно-коричневое окрашивание (лигнаны).

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 12%.

Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 3%.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 0,5%.

Измельченность сырья. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 5 мм, — не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, — не более 5%.

Посторонние примеси

Поврежденные семена. Цельное сырье — не более 5%.

Другие части растения. Цельное сырье — не более 3%.

Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 1%.

Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 0,5%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».

Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье — содержание суммы лигнанов в пересчете на схизандрин не менее 1%.

Приготовление растворов

Раствор стандартного образца (СО) дифенила. Около 0,025 г (точная навеска) СО дифенила растворяют в спирте 70% в мерной колбе вместимостью 25 мл, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают (раствор А СО дифенила). Срок годности раствора 7 суток.

1,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора спиртом 70% до метки и перемешивают (раствор Б СО дифенила). Раствор используют свежеприготовленным.

Проверка пригодности хроматографической системы

Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:

• эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику дифенила на хроматограмме раствора Б СО дифенила, должна быть не менее 5000 теоретических тарелок;
• относительное стандартное отклонение площади пика дифенила на пяти хроматограммах не должна превышать 3%;
• фактор асимметрии пика дифенила должен быть не менее 0,8 и не более 1,5%.

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. Около 1,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 50 мл спирта 70%, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 45 мин. Полученное извлечение охлаждают до комнатной температуры и фильтруют в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора спиртом 70% до метки и перемешивают (раствор А испытуемого раствора).

10,0 мл раствора А испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора спиртом 70% до метки и перемешивают (раствор Б испытуемого раствора).

Условия хроматографирования

Хроматографируют раствор Б СО дифенила, получая не менее 5 хроматограмм. Результаты считаются достоверными, если выполняются требования теста «Проверка пригодности хроматографической системы».

Хроматографируют попеременно раствор Б испытуемого раствора и раствор Б СО дифенила, получая не менее 3 хроматограмм. Расчет содержания суммы лигнанов проводят по методу внешнего стандарта.

Содержание суммы лигнанов в пересчете на схизандрин в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{S_{x} \cdot a_{0} \cdot 1 \cdot 50 \cdot 25 \cdot k \cdot 100 \cdot 100}{S_{0} \cdot a \cdot 25 \cdot 25 \cdot 10 \cdot (100 - W)} = \frac{S_{x} \cdot a_{0} \cdot 3780}{S_{0} \cdot a \cdot (100 - W)} ,

где a — навеска сырья, г;

a0 — навеска СО дифенила, г;

k — коэффициент пересчета на схизандрин, k = 1,89;

S0 — площадь пика на хроматограмме раствора Б СО дифенила;

Sx — суммарная площадь пиков на хроматограмме раствора Б испытуемого раствора с относительными временами удерживания (по дифенилу) в интервале от 0,3 до 2,3;

W — влажность сырья, %.

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».