ФС.2.5.0081.18. Фармакопейная статья. Лимонника китайского плоды
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том IV»)
Примечание
В соответствии с Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749 данный документ введен в действие с 01.12.2018. Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/femb/pharmacopea.php по состоянию на 15.03.2019. Взамен ГФ X ст. 294.
| Лимонника китайского плоды | ФС.2.5.0081.18 |
|---|---|
| Schisandrae chinensis fructus | Взамен ГФ X, ст. 294 |
Собранные в период полного созревания (в сентябре — октябре), до наступления осенних заморозков, высушенные плоды дикорастущей или культивируемой деревянистой лианы лимонника китайского — Schisandra chinensis (Turcz.) Baill. из сем. лимонниковых — Schisandraceae.
Внешние признаки. Цельное сырье. Плоды округлой формы, часто деформированные, крупноморщинистые, одиночные (5 — 7 мм в диаметре) или слипшиеся по нескольку вместе. В мякоти плода 1 — 2 блестящих, округлопочковидных, желтовато-бурых или светло-коричневых семени. Цвет плодов от темно-красного до почти черного. Запах слабый, специфический. Вкус водного извлечения пряный, горьковато-кислый с терпким привкусом и характерным жжением во рту.
Микроскопические признаки. Цельное сырье. При рассмотрении наружного слоя перикарпия с поверхности видны многоугольные прямостенные клетки эпидермиса со слегка утолщенными стенками и складчатой кутикулой. Имеется достаточно много округлых секреторных клеток с каплями эфирного масла, клетки эпидермиса вокруг них образуют розетку. Изредка встречаются устьица аномоцитного типа. Внутренняя часть перикарпия — мякоть плода — состоит из тонкостенных, рыхло расположенных бесцветных и окрашенных паренхимных клеток. На поперечном срезе семени видна семенная кожура, состоящая из нескольких слоев: эпидермальный слой представлен крупными радиально вытянутыми клетками, с утолщенными одревесневшими темно-желтыми оболочками, пронизанными порами. Под ним расположен склеренхимный слой, состоящий из 4 — 6 рядов сильно одревесневших каменистых клеток. Далее лежит слой спавшихся клеток, а за ним один ряд очень крупных тонкостенных 4-угольных клеток, содержащих маслянистые включения в виде капель лимонно-желтого цвета. Самый внутренний слой семенной кожуры — бесструктурная спавшаяся тонкостенная ткань. Эндосперм семени состоит из небольших многоугольных клеток, содержащих капли жирного масла и мелкие алейроновые зерна.
Рисунок — Лимонника китайского плоды
1 — препарат околоплодника с поверхности: прямостенные клетки эпидермиса (x400); 2 — препарат околоплодника с поверхности: устьице (x400); 3 — препарат околоплодника с поверхности: секреторные клетки, окруженные розетками клеток эпидермиса, складчатая кутикула (x400); 4 — мякоть плода (x100); 5 — фрагмент поперечного среза семени: семенная кожура со слоями эпидермиса (а) и механических клеток (б), слоем клеток с каплями масла лимонно-желтого цвета (в) и эндоспермом (г) (x100); 6 — эндосперм с каплями жирного масла (препарат в судане III) (x400); 7 — клетки эпидермиса (а) и механические клетки (б) наружных слоев семенной кожуры (x100); 8 — клетки эпидермиса (а) и механические клетки (б) наружных слоев семенной кожуры (x400)
Определение основных групп биологически активных веществ
Около 0,5 г сырья, измельченного до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 25 мл спирта 70%, нагревают на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 30 мин. После охлаждения до комнатной температуры полученное извлечение фильтруют через бумажный фильтр (испытуемый раствор).
На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля наносят 10 мкл (0,01 мл) испытуемого раствора в виде полосы длиной 10 мм, шириной не более 3 мм.
Пластинку с нанесенной пробой сушат на воздухе в течение 2 — 3 мин, затем помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение не менее 30 мин смесью растворителей толуол-этилацетат-кислота уксусная (70:33:3), и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм.
На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться не менее 6 зон адсорбции фиолетового цвета.
Около 0,25 г сырья, измельченного до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 25 мл спирта этилового 95%. Колбу соединяют с обратным холодильником и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Охлажденное до комнатной температуры извлечение фильтруют через бумажный фильтр (испытуемый раствор).
2 мл испытуемого раствора упаривают досуха, к остатку прибавляют 2 мл трихлорметана и 3 — 5 капель кислоты серной концентрированной, встряхивают; должно наблюдаться окрашивание красно-коричневого цвета (лигнаны).
Влажность. Цельное сырье — не более 12%.
Зола общая. Цельное сырье — не более 6%.
Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье — не более 1,5%.
Плоды подгоревшие и поврежденные. Цельное сырье — не более 4%.
Другие части лимонника (остатки цветоложа, веточки). Цельное сырье — не более 1%.
Органическая примесь. Цельное сырье — не более 0,5%.
Минеральная примесь. Цельное сырье — не более 0,5%.
Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».
Количественное определение. Цельное сырье: суммы лигнанов в пересчете на схизандрин — не менее 0,7%.
Раствор стандартного образца (СО) дифенила. Около 0,025 г (точная навеска) СО дифенила помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 20 мл спирта 70% и перемешивают. Затем доводят объем раствора спиртом 70% (раствор А СО дифенила). 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят до метки спиртом 70% (раствор Б СО дифенила). Раствор используют свежеприготовленным.
Проверка пригодности хроматографической системы.
Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:
- эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику дифенила, должна быть не менее 5000 теоретических тарелок;
- относительное стандартное отклонение площади пика дифенила на пяти хроматограммах не должна превышать 3%;
- фактор асимметрии пика дифенила должен быть не более 1,5%.
Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. Около 1,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл спирта 70%. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 1,5 час. После охлаждения фильтруют в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят до метки спиртом 70% (раствор А испытуемого раствора).
10,0 мл раствора А испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят спиртом 70% до метки (раствор Б испытуемого раствора).
Хроматографируют раствор Б СО дифенила, получая не менее 3 хроматограмм. Результаты считаются достоверными, если выполняются требования теста «Проверка пригодности хроматографической системы».
Хроматографируют попеременно раствор Б испытуемого раствора и раствор Б СО дифенила, получая не менее 3 хроматограмм. Расчет содержания дифенила, проводят методом внешнего стандарта.
Содержание лигнанов в пересчете на схизандрин в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{x} \cdot a_{0} \cdot 25 \cdot k \cdot 100 \cdot 100}{S_{0} \cdot a \cdot 25 \cdot 10 \cdot (100 - W)} = \frac{S_{x} \cdot a_{0} \cdot 1,89 \cdot 100 \cdot 100}{S_{0} \cdot a \cdot 10 \cdot (100 - W)} ,
где a0 — навеска СО дифенила, г;
k — коэффициент пересчета на схизандрин, k = 1,89;
S0 — площадь пика на хроматограмме раствора Б СО дифенила;
Sx — суммарная площадь пиков на хроматограмме раствора Б испытуемого раствора, в интервале времен удерживания от 0,3 до 2,3 от времени удерживания пика дифенила;
Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».
Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».