ФС.2.5.0065.18. Фармакопейная статья. Вахты трехлистной листья

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том IV»)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск..."]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gf-xi-minzdrav-sssr-ministerstvo" "Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье"
  n1["ФС.2.5.0065.18"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/fs-2-5-0065-18" "ФС.2.5.0065.18. Фармакопейная статья. Вахты трехлистной листья (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Собранные после цветения и высушенные листья дикорастущего многолетнего травянистого растения вахты трехлистной — Menyanthes trifoliata L., сем. вахтовых — Menyanthaceae.

ПОДЛИННОСТЬ

Внешние признаки. Цельное сырье. Цельные или частично измельченные, тонкие, голые тройчатые листья с остатками черешка длиной до 3 см. Отдельные листочки эллиптические или продолговато-обратнояйцевидные цельнокрайние или со слегка извилистым краем длиной 4 — 10 см, шириной 2,5 — 7 см. Листья с коричневатыми или красноватыми водяными устьицами (гидатодами), хорошо заметными под лупой.

Цвет с верхней стороны листовых пластинок зеленый или темно-зеленый, с нижней стороны зеленый или светло-зеленый; цвет черешков зеленый. Запах слабый характерный, вкус водного извлечения очень горький.

Измельченное сырье. Смесь кусочков различной формы, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм.

Цвет от светло-зеленого до темно-зеленого. Запах слабый характерный, вкус водного извлечения очень горький.

Микроскопические признаки. Цельное сырье, измельченное сырье. При рассмотрении микропрепарата листа с поверхности должны быть видны клетки верхнего эпидермиса, которые имеют многоугольную форму; клетки нижнего эпидермиса со слабоизвилистыми стенками. На обеих сторонах листа, преимущественно на нижней, имеются погруженные устьица, окруженные 4 — 7 клетками эпидермиса (аномоцитный тип). Вокруг устьиц заметна лучистая складчатость кутикулы. С нижней стороны листа под эпидермисом видна аэренхима с большими воздухоносными полостями. Клетки эпидермиса черешка прозенхимной формы. Проводящая система представлена открытыми коллатеральными пучками.

Рисунок — Вахты трехлистной листья

1 — фрагмент эпидермиса верхней стороны листа (200x): а — устьица аномоцитного типа, 2 — фрагмент эпидермиса нижней стороны листа (200x): а — устьица аномоцитного типа, 3 — фрагмент эпидермиса со складчатостью кутикулы (400x), 4 — аэренхима с воздухоносными полостями (400x), 5, 6, 7 — фрагмент поперечного среза черешка (200x, 200x, 400x): а — воздухоносные полости, б — открытые коллатеральные пучки, 8 — фрагмент эпидермиса черешка (200x)

Определение основных групп биологически активных веществ

Тонкослойная хроматография

Приготовление растворов.

Ванилина раствор 3%. 3,0 г ванилина растворяют в 100 мл спирта 96% и осторожно по каплям добавляют 0,5 мл серной кислоты концентрированной. Раствор используют свежеприготовленным.

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Около 1,0 г измельченного сырья помещают в колбу со шлифом, прибавляют 10 мл спирта 96% и нагревают при перемешивании на водяной бане при температуре 60 °C в течение 5 мин. Охлаждают и выпаривают при температуре 60 °C на роторном испарителе при пониженном давлении досуха. Сухой остаток растворяют в 2 мл спирта 96% (испытуемый раствор).

На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля с флуоресцентным индикатором наносят 30 мкл (0,03 мл) испытуемого раствора. Пластинку с нанесенной пробой помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение не менее 2 ч смесью растворителей: вода-спирт 96%-этилацетат (2:10:85,5), и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, опрыскивают ванилина раствором 3%, выдерживают при температуре 100 — 105 °C в течение 10 мин и просматривают при дневном свете.

На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться доминирующая зона адсорбции сероватого или серовато-фиолетового цвета; допускается обнаружение других зон адсорбции синего цвета, серовато-синего цвета, коричневого цвета (иридоиды).

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 14%.

Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 10%.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 2%.

Измельченность сырья. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм, — не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, — не более 5%.

Посторонние примеси

Листья, изменившие окраску (пожелтевшие, потемневшие и почерневшие). Цельное сырье — не более 5%.

Кусочки листьев, изменивших окраску (потемневшие и почерневшие). Измельченное сырье — не более 5%.

Листьев с черешками длиннее 3 см. Цельное сырье — не более 8%.

Отдельных черешков. Цельное сырье — не более 3%.

Органическая примесь. Цельное сырье — не более 1%.

Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 0,5%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».

Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье: суммы флавонолов в пересчете на рутин — не менее 1%.

Приготовление растворов.

Раствор стандартного образца (СО) рутина. Около 0,1 г (точная навеска) СО рутина помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в спирте 70%, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают. Срок годности раствора 1 мес.

5,0 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора спиртом 70% до метки и перемешивают.

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Около 1,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в пакет из фильтровальной бумаги и экстрагируют хлороформом в аппарате Сокслета в течение 14 ч до обесцвечивания (20 сливов). Пакет сушат на воздухе до удаления следов хлороформа. Навеску количественно переносят в коническую колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 10 мл спирта 70% и нагревают с обратным холодильником на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Извлечение фильтруют в колбу вместимостью 50 мл, избегая попадания частиц сырья на фильтр. Экстракцию в указанных выше условиях повторяют дважды порциями по 10 мл спирта 70%. Полученные извлечения объединяют, упаривают на водяной бане при температуре 70 °C на роторном испарителе при пониженном давлении до объема 6 — 7 мл, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора спиртом 96% до метки и перемешивают (испытуемый раствор А).

В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мл стрептоцида раствора 0,5% в серной кислоты растворе 10%, прибавляют 2 мл натрия нитрита раствора 0,2%, перемешивают в течение 2 мин, прибавляют 1,0 мл раствора А и 1 мл натрия гидроксида раствора 10%, перемешивают в течение 1 мин, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают (испытуемый раствор Б).

Через 15 мин измеряют оптическую плотность испытуемого раствора Б на спектрофотометре при длине волны 432 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно раствора сравнения. В качестве раствора сравнения используют испытуемый раствор А, разбавленный спиртом 96% в 25 раз (без добавления реактивов).

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора СО рутина, полученного аналогично испытуемому раствору, на спектрофотометре при длине волны 432 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно раствора сравнения. В качестве раствора сравнения используют раствор СО рутина, разбавленный спиртом 96% в 25 раз (без добавления реактивов).

Содержание суммы флавонолов в пересчете на рутин в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

\text{Х } = \frac{\text{А } \cdot \text{а}_{\text{о}} \cdot 5 \cdot 10 \cdot 25 \cdot 100 \cdot \text{Р}}{\text{А}_{\text{о}} \cdot \text{а} \cdot 25 \cdot 25 \cdot 1 \cdot (100 - W)} = \frac{\text{А } \cdot \text{а}_{\text{о}} \cdot \text{Р} \cdot 200}{\text{А}_{\text{о}} \cdot \text{а} \cdot (100 - W)} ,

где А — оптическая плотность испытуемого раствора Б;

Ао — оптическая плотность раствора СО рутина;

ао — навеска СО рутина, г;

а — навеска сырья, г;

Р — содержание основного вещества в СО рутина, %;

W — влажность сырья, %.

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».