ФС.2.5.0063.18. Фармакопейная статья. Брусники обыкновенной листья

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том IV»)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск..."]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gf-xi-minzdrav-sssr-ministerstvo" "Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье"
  n1["ФС.2.5.0063.18"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/fs-2-5-0063-18" "ФС.2.5.0063.18. Фармакопейная статья. Брусники обыкновенной листья (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Собранные до начала цветения или после созревания плодов и высушенные листья многолетнего вечнозеленого дикорастущего кустарничка брусники обыкновенной Vaccinium vitis-idaea L., семейства вересковых Ericaceae.

ПОДЛИННОСТЬ

Внешние признаки. Цельное сырье. Смесь цельных или частично измельченных листьев. Листья короткочерешковые, кожистые, эллиптические или обратнояйцевидные, на верхушке притупленные или слабовыемчатые с цельными или слегка зазубренными, завернутыми вниз краями, длиной 7 — 30 мм, шириной 5 — 15 мм. При рассмотрении под лупой (10x) или стереомикроскопом (16x) на нижней поверхности листа видны многочисленные темно-коричневые точки (железки). Черешки листьев в поперечном сечении округло-треугольной формы, покрытые волосками.

Цвет листьев сверху зеленый или темно-зеленый, снизу от светло-зеленого до серовато-зеленого с ясно заметными темно-коричневыми точками (железки), изредка с коричневыми, фиолетово-коричневыми или розовато-фиолетовыми пятнами. Запах отсутствует, вкус водного извлечения горький, вяжущий.

Измельченное сырье. Кусочки листьев различной формы и черешков, проходящих сквозь сито 3 мм. При рассмотрении под лупой (10x) или стереомикроскопом (16x) видны кусочки листьев различной формы, на нижней поверхности листьев многочисленные темно-коричневые точки (железки).

Цвет от серовато-зеленого или светло-зеленого до темно-зеленого с ясно заметными темно-коричневыми точками (железки) с редкими коричневыми, фиолетово-коричневыми или розовато-фиолетовыми вкраплениями. Запах отсутствует, вкус водного извлечения горький, вяжущий.

Порошок. Кусочки листьев и черешков, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. При рассмотрении под лупой (10x) или стереомикроскопом (16x) видны кусочки листьев от серовато-зеленого, светло-зеленого до темно-зеленого с темными точками (железки) с коричневато-зелеными, светло-коричневыми, фиолетово-коричневыми или розовато-коричневыми и коричневыми вкраплениями.

Запах отсутствует, вкус водного извлечения горький, вяжущий.

Микроскопические признаки. Цельное, измельченное сырье. При рассмотрении листа с поверхности должны быть видны клетки верхнего и нижнего эпидермиса со слегка извилистыми боковыми стенками и четко видным утолщением клеточных стенок, на нижнем эпидермисе вокруг железок клетки с почти прямыми стенками; устьица располагаются на нижнем эпидермисе; устьица мелкие, окруженные двумя околоустьичными клетками, смежные клетки которых расположены параллельно устьичной щели (парацитный тип). На нижней стороне листа должны быть железки, состоящие из многоклеточной ножки, постепенно переходящей в овальную многоклеточную головку с коричневым содержимым; простые волоски редкие одноклеточные толстостенные прямые или изогнутые с гладкой или со слабобородавчатой поверхностью; встречаются по жилкам и на черешке; в мезофиле содержатся редкие одиночные призматические кристаллы и друзы оксалата кальция.

Клетки эпидермиса черешка прозенхимной формы. Эпидермис опущен многочисленными одноклеточными прямыми или изогнутыми волосками с толстыми стенками и гладкой или слабобородавчатой поверхностью. Под эпидермисом в три-четыре слоя залегает колленхима.

Проводящая система черешка представлена одним крупным коллатеральным пучком, расположенным в центре. Над флоэмой проводящего пучка залегает группа лубяных волокон.

Рисунок — Брусники обыкновенной листья

1 — фрагмент верхнего эпидермиса листа (400x); 2 — фрагмент нижнего эпидермиса листа с устьицами (парацитный тип) (400x); 3 — фрагмент эпидермиса листа вдоль жилки с одноклеточными изогнутыми волосками с толстыми стенками и гладкой или слабобородавчатой поверхностью (200x); 4 — фрагмент эпидермиса листа вдоль жилки с одноклеточными прямыми волосками с толстыми стенками и гладкой или слабобородавчатой поверхностью (100x); 5 — фрагмент нижнего эпидермиса листа с железкой (400x); 6 — фрагмент эпидермиса листа вдоль жилки (400x); 7 — поперечный срез листа (100x); 8 — поперечный срез черешка (40x); 9 — фрагмент эпидермиса черешка с одноклеточными прямыми или изогнутыми волосками с толстыми стенками и гладкой или слабобородавчатой поверхностью (100x); 10 — фрагмент мезофилла черешка с друзами оксалата кальция (400x); 11 — фрагмент мезофилла черешка с одиночными призматическими кристаллами оксалата кальция (400x)

Порошок. При рассмотрении микропрепарата порошка должны быть видны фрагменты клеток эпидермиса со слегка извилистыми утолщенными боковыми стенками, фрагменты устьиц с 2 околоустьичными клетками, смежные стенки которых расположены параллельно устьичной щели (парацитный тип); фрагменты клеток эпидермиса с железками, состоящими из многоклеточной ножки, постепенно переходящей в овальную многоклеточную головку с коричневым содержимым; волоски простые, толстостенные, прямые или изогнутые с гладкой или слабобородавчатой поверхностью или их фрагменты; фрагменты мезофилла с друзами и одиночными призматическими кристаллами оксалата кальция. В микропрепарате также обнаруживаются фрагменты черешка листа.

Определение основных групп биологически активных веществ

1. Тонкослойная хроматография

Приготовление растворов

Раствор стандартного образца (СО) арбутина. Около 0,01 г СО арбутина помещают в колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 8,0 мл спирта 70% и нагревают на водяной бане до полного растворения. Затем раствор охлаждают, доводят объем раствора тем же спиртом до 10 мл и перемешивают. Срок годности раствора 3 мес.

На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля на алюминиевой подложке, размером 10 x 15 см наносят 60 мкл (0,06 мл) испытуемого раствора (см. раздел «Количественное определение арбутина», раствор А; 10 мл раствора А пропускают через колонку с алюминия оксидом нейтральным для хроматографии и используют для хроматографирования), рядом наносят 10 мкл (0,01 мл) раствора СО арбутина. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе в течение 5 мин, помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение не менее 30 мин смесью растворителей: этилацетат-кислота муравьиная-вода (88:6:6) и хроматографируют восходящим способом.

Когда фронт растворителей пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, обрабатывают натрия фосфорномолибдата раствором 10%, выдерживают в сушильном шкафу при температуре 100 — 105 °C в течение 10 мин и просматривают при дневном свете.

На хроматограмме раствора СО арбутина должна обнаруживаться зона адсорбции синего цвета.

На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться зона адсорбции синего цвета на уровне зоны арбутина и 2 зоны адсорбции синего цвета ниже и выше арбутина; допускается обнаружение дополнительных зон адсорбции.

Качественные реакции

Около 0,5 г сырья, измельченного до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, помещают в колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 10,0 мл воды и кипятят в течение 2 — 3 мин, затем фильтруют через бумажный фильтр.

К 1 мл фильтрата (в фарфоровой чашке) прибавляют 4,0 мл раствора аммиака и по каплям 1,0 мл натрия фосфорномолибдата раствор 10%; должно наблюдаться синее окрашивание (арбутин).

К 2 мл фильтрата (в фарфоровой чашке) прибавляют 0,1 мл железа (III) аммония сульфата раствора 1%; должно наблюдаться зеленовато-черное окрашивание (дубильные вещества).

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 13%.

Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 7%.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 0,5%.

Измельченность сырья. Цельное сырье: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм, — не более 2%. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм, — не более 5%. Частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, — не более 5%. Порошок: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, — не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, — не более 5%.

Посторонние примеси

Листьев почерневших и потемневших с обеих сторон. Цельное сырье — не более 7%.

Кусочков почерневших и потемневших листьев. Измельченное сырье, порошок — не более 7%.

Других частей растения. Цельное сырье — не более 1%.

Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 1%.

Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 0,5%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».

Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок: содержание арбутина — не менее 4,5%, экстрактивных веществ, извлекаемых водой — не менее 18%.

Арбутин

Приготовление раствора СО арбутина. Около 0,1 г (точная навеска) СО арбутина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 80 мл спирта 70% и нагревают на водяной бане до полного растворения. Затем раствор охлаждают, доводят объем тем же спиртом до метки и перемешивают (раствор А СО арбутина). Срок годности раствора 3 мес.

7,0 мл раствора А СО арбутина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят спиртом 70% до метки и перемешивают (раствор Б СО арбутина).

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм.

Около 0,5 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 100,0 мл спирта 70% и взвешивают с погрешностью +/- 0,01 г. Колбу присоединяют к обратному холодильнику, нагревают на кипящей водяной бане в течение 45 мин, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Затем колбу с содержимым охлаждают до комнатной температуры, взвешивают и при необходимости доводят до первоначальной массы спиртом 70%. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр, смоченный тем же спиртом, отбрасывая первые 10,0 мл фильтрата (раствор А испытуемого раствора).

Для очистки полученного извлечения от сопутствующих веществ, 3 мл раствора А испытуемого раствора пропускают через стеклянную хроматографическую колонку диаметром 1,5 см и высотой 25 см, заполненную 3,0 г алюминия оксида нейтрального для хроматографии (L 40/250 мкм), предварительно промытую 5 мл спирта 70%. Колонку элюируют 15,0 мл спирта 70%. Элюат собирают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора спиртом 70% до метки и перемешивают (раствор Б испытуемого раствора).

Оптическую плотность раствора Б испытуемого раствора измеряют на спектрофотометре при длине волны 285 нм в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют спирт 70%, который предварительно пропускают через колонку с алюминия оксидом.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора Б СО арбутина. В качестве раствора сравнения используют спирт 70%.

Содержание арбутина в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по следующей формуле:

X = \frac{A \cdot a_{0} \cdot 100 \cdot 25 \cdot 7 \cdot 100 \cdot 100 \cdot P}{A_{o} \cdot a \cdot 3 \cdot (100 - W) \cdot 100 \cdot 100 \cdot 100} = \frac{A \cdot a_{0} \cdot 175 \cdot P}{A_{o} \cdot a \cdot 3 \cdot (100 - W)} ,

где A — оптическая плотность раствора Б испытуемого раствора;

Aо — оптическая плотность раствора Б СО арбутина;

a — навеска сырья, г;

a0 — навеска СО арбутина, г;

W — влажность сырья, %;

P — содержание основного вещества в СО арбутина, %.

Допускается содержание арбутина в сырье вычислять с использованием удельного показателя поглощения по следующей формуле:

X = \frac{A \cdot 100 \cdot 25 \cdot 100}{A_{1\text{см}}^{1\%} \cdot a \cdot 3 \cdot (100 - W)} ,

где A — оптическая плотность раствора Б испытуемого раствора;

A_{1\text{см}}^{1\%} — удельный показатель поглощения арбутина, равный 72,23;

a — навеска сырья, г;

W — влажность сырья, %.

Определение экстрактивных веществ, извлекаемых водой, проводят в соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах» (навеска сырья — 1,0 г, экстрагент — вода очищенная).

Примечание. Определение арбутина проводят в сырье, предназначенном для производства лекарственных растительных препаратов (пачка, фильтр-пакеты), экстрактивных веществ, извлекаемых водой в сырье, предназначенном для производства экстрактов.

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».