ФС.2.5.0062.18. Фармакопейная статья. Боярышника цветки

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том IV»)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск..."]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gf-xi-minzdrav-sssr-ministerstvo" "Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье"
  n1["ФС.2.5.0062.18"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/fs-2-5-0062-18" "ФС.2.5.0062.18. Фармакопейная статья. Боярышника цветки (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Собранные в начале цветения и высушенные соцветия дикорастущих и культивируемых кустарников или небольших деревьев: боярышника кровяно-красного — Crataegus sanguinea Pall.; боярышника сглаженного — C. laevigata (Poir.) DC. (боярышника колючего — C. oxyacantha sensu Pojark.); боярышника Королькова — C. korolkowii L. Henry; боярышника [алтайского — C. altaica (Loud.) Lange]; боярышника желтого — C. chlorocarpa Lenne et C. Koch; боярышника даурского — C. dahurica Koehne ex Schneid.; боярышника однопестичного — C. monogyna Jacq.; боярышника германского — C. alemanniensis Cin.; боярышника восточно-балтийского — C. orientobaltica Cin.; боярышника отогнуточашелистикового — C. curvisepala Lindm.; боярышника курземского — C. X curonica Cin.; боярышника даугавского — C. X dunensis Cin.; боярышника пятипестичного — C. pentagyna Waldst. et Kit., сем. розоцветных — Rosaceae.

ПОДЛИННОСТЬ

Внешние признаки. Цельное сырье. Смесь цельных щитковидных, реже зонтиковидных соцветий и их частей — отдельных цветков, бутонов, цветоножек, лепестков, тычинок и пыльников. Цветки правильные, с двойным околоцветником, состоящим из 5 продолговато-треугольных, треугольных или узких ланцетных зеленоватых чашелистиков и 5 овальных коричневато- или желтовато-белых лепестков; тычинок до 20, с красными пыльниками, столбиков 1 — 5; цветоножки обычно голые или слабо опушенные, длиной до 35 мм. Диаметр распустившихся цветков 10 — 15 мм, бутонов — 3 - 4 мм. Запах слабый, своеобразный. Вкус водного извлечения слабогорький.

Порошок. При рассмотрении порошка сырья под лупой (10x) или стереомикроскопом (16x) видна смесь частей цветоносов соцветий, бутонов, цветков, лепестков, чашелистиков, тычинок, пыльников и пыльцы, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. Цвет зеленый, беловато-желтый. Запах слабый, своеобразный. Вкус водного извлечения слабогорький.

Микроскопические признаки. Цельное сырье. При рассмотрении препаратов чашелистиков и лепестков с поверхности должны быть видны клетки эпидермиса, имеющие с наружной стороны прямые или слабо извилистые стенки и складчатую кутикулу. Устьица крупные, редкие, аномоцитного типа, расположенные на чашелистиках с наружной стороны. Клетки внутреннего эпидермиса лепестков имеют сосочковидные выросты. По краю чашелистиков расположены многоклеточные шаровидные железки (сидячие и на многоклеточных «ножках») с желтовато-коричневым содержимым; на поверхности — многочисленные простые, одноклеточные волоски с толстыми стенками, гладкие, на верхушке заостренные, прямые или слегка изогнутые, у основания слегка расширенные и окруженные розеткой из 5 эпидермальных клеток. В мезофилле чашелистиков и завязи имеются друзы, изредка встречаются призматические кристаллы оксалата кальция.

Рисунок — Боярышника цветки

1 — эпидермис верхней стороны прицветника: складчатость кутикулы (200x); 2 — эпидермис верхней стороны прицветника: простой, слегка изогнутый волосок, место прикрепления волоска (200x); 3 — эпидермис нижней стороны прицветника: простые волоски, складчатость кутикулы, устьица (200x); 4 — фрагмент жилки, друзы и одиночные кристаллы (200x); 5 — железки на многоклеточных ножках по краю прилистника (80x); 6 — эпидермис лепестка с наружной стороны: складчатость кутикулы, сосочковидные выросты (400x); 7 — эпидермис лепестка внутренней стороны: складчатость кутикулы, сосочковидные выросты (400x); 8 — чашелистик: железки и простые волоски (35x); 9 — эпидермис по краю чашелистика (35x); 10 — место прикрепления волоска; 11 — шаровидные железки на верхушке прицветника (35x); 12 — шаровидные железки по краю прицветника (90x)

Порошок. При рассмотрении микропрепаратов порошка с поверхности должны быть видны фрагменты цветков, чашелистиков и лепестков с клетками эпидермиса, имеющими с наружной стороны прямые или слабо извилистые стенки и складчатую кутикулу; крупные редкие устьица, аномоцитного типа. Также встречаются фрагменты лепестков, имеющие эпидермис с сосочковидными выростами. Встречаются фрагменты края чашелистиков с многоклеточными шаровидными железками (сидячие и на многоклеточных «ножках») с желтовато-коричневым содержимым. На поверхности фрагментов чашелистиков видны многочисленные простые, одноклеточные волоски с толстыми стенками, гладкие, на верхушке заостренные, прямые или слабоизогнутые, у основания слегка расширенные и окруженные розеткой из 5 эпидермальных клеток. В мезофилле чашелистиков, лепестков и завязи имеются друзы, реже призматические кристаллы оксалата кальция.

Определение основных групп биологически активных веществ

Тонкослойная хроматография

Приготовление растворов

Раствор стандартного образца (СО) гиперозида. Около 0,005 г СО гиперозида растворяют при нагревании в 10 мл спирта 96% при нагревании на водяной бане.

Раствор стандартного образца (СО) кверцетина. Около 0,005 г СО кверцетина растворяют при нагревании в 10 мл спирта 96% при нагревании на водяной бане.

Раствор стандартного образца (СО) рутина. Около 0,005 г СО рутина растворяют при нагревании в 10 мл спирта 96% при нагревании на водяной бане.

Около 0,5 г измельченного сырья (см. раздел «Количественное определение») помещают в круглодонную колбу и нагревают с 5 мл спирта 96% на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 15 мин. После охлаждения извлечение декантируют (испытуемый раствор).

На линию старта высокоэффективной хроматографической пластинки со слоем силикагеля наносят 10 мкл (0,01 мл) испытуемого раствора, рядом наносят 10 мкл (0,01 мл) раствора СО гиперозида, 10 мкл (0,01 мл) раствора СО кверцетина, 10 мкл (0,01 мл) раствора СО рутина. Пластинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе в течение 5 мин, помещают в камеру со смесью растворителей этилацетат-бутанон-2-муравьиная кислота-вода (30:10:5:5) и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет 80 — 90% от линии старта пластинки, ее вынимают из камеры, высушивают в вытяжном шкафу до удаления следов растворителей. Пластинку опрыскивают последовательно дифенилборилоксиэтиламина раствором 1% в спирте 96% и полиэтиленгликоля раствором 5% в спирте 96%, выдерживают при температуре 100 — 105 °C в течение 2 — 5 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.

На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться зона адсорбции с флуоресценцией желтого, оранжевого или оранжево-зеленого цвета на уровне зоны адсорбции СО кверцетина; две зоны адсорбции с флуоресценцией желтого цвета, одна из которых — на уровне зоны адсорбции СО гиперозида, другая — чуть выше; зона адсорбции с флуоресценцией желтого цвета на уровне зоны адсорбции СО рутина; зона адсорбции с флуоресценцией от голубого до синего цвета ниже зоны адсорбции СО гиперозида; зона адсорбции с флуоресценцией от голубого до синего цвета ниже зоны адсорбции СО кверцетина; допускается обнаружение других зон адсорбции.

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Цельное сырье, порошок — не более 14%.

Зола общая. Цельное сырье, порошок — не более 12%.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, порошок — не более 3,5%.

Измельченность сырья. Цельное сырье: измельченных частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, — не более 5%. Порошок: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, — не более 5%; измельченных частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, — не более 5%.

Посторонние примеси

Веточки, листья. Цельное сырье — не более 6%.

Цветков, утративших естественную окраску. Цельное сырье — не более 3%.

Органической примеси. Цельное сырье — не более 0,5%.

Минеральной примеси. Цельное сырье — не более 0,5%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».

Количественное определение. Цельное сырье, порошок: гиперозида не менее 0,5%.

Гиперозид

Приготовление растворов

Раствор стандартного образца (СО) гиперозида. Около 0,05 г (точная навеска) СО гиперозида, высушенного при температуре 100 — 105 °C до постоянной массы, помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 40,0 мл спирта 96% и нагревают на водяной бане в колбе с обратным холодильником до полного растворения кристаллов. После охлаждения раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора спиртом 96% до метки и перемешивают. Срок годности 30 сут.

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. Около 2,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, приливают 100,0 мл спирта 96%, взвешивают с погрешностью +/- 0,01 г, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры колбу вновь взвешивают и доводят до первоначальной массы спиртом 96%. Содержание колбы фильтруют через воронку диаметром 7 см с вложенным ватным тампоном толщиной не более 0,5 см, отбрасывая первые 30,0 мл фильтрата.

50,0 мл фильтрата переносят в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 100 мл и упаривают на ротационном испарителе под вакуумом до объема 2 — 3 мл. Упаренное извлечение количественно переносят в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора спиртом 96% до метки, перемешивают и дают осесть образовавшемуся аморфному осадку (испытуемый раствор).

На линию старта аналитической хроматографической пластинки размером 15 x 15 см наносят 80,0 мкл (0,08 мл) испытуемого раствора полосой длиной 5 см на расстоянии 1,5 см от края, рядом наносят 80,0 мкл (0,08 мл) 0,1% раствора СО гиперозида. Пластинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе в течение 5 мин и хроматографируют в системе хлороформ-метанол (8:2) без предварительного насыщения. Когда фронт растворителей дойдет до конца пластинки, ее вынимают из камеры, высушивают в вытяжном шкафу в течение 2 мин и повторно хроматографируют в той же системе, сушат до удаления следов растворителей и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм. Отмечают зоны адсорбции гиперозида на хроматограммах испытуемого раствора и раствора СО гиперозида. Вырезают участки пластинки с зонами адсорбции, а также чистый участок равной площади этой же пластинки для контрольного опыта, разрезают каждый на кусочки размером 0,3 — 0,5 см, помещают в колбы со шлифами вместимостью 50 мл, прибавляют по 10,0 мл смеси диоксан-вода (1:1), закрывают пробками и встряхивают в течение 1 ч. Содержимое колб переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют со скоростью 1000 об/мин в течение 5 мин. Оптическую плотность элюатов измеряют на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 365 нм. В качестве раствора сравнения используют элюат контрольного опыта.

Содержание гиперозида в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

(X) = \frac{A \cdot a_{o} \cdot 10 \cdot 100 \cdot P \cdot 100 \cdot 100}{A_{o} \cdot a \cdot 50 \cdot 50 \cdot (100 - W)} = \frac{A \cdot a_{o} \cdot P \cdot 4000}{A_{o} \cdot a \cdot (100 - W)} ,

где A — оптическая плотность испытуемого элюата;

Aо — оптическая плотность элюата СО гиперозида;

aо — навеска СО гиперозида, г;

P — содержание основного вещества в СО гиперозида, %;

a — навеска сырья, г;

W — влажность сырья, %.

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья».

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».