ФС.2.1.0233.22. Фармакопейная статья. Изоникотиноилгидразин железа сульфат дигидрат
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 11.04.2022 № 246)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание»)
Примечание
В соответствии с Приказом Минздрава России от 11.04.2022 № 246 данный документ введен в действие с 01.04.2022. Взамен ВФС 42-2998-97.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Изоникотиноилгидразин железа сульфат дигидрат | ФС.2.1.0233.22 |
|---|---|
| Изоникотиноилгидразин железа сульфат | |
| Isonicotinoylhydrazini ferri sulfas dihydricus | Взамен ВФС 42-2998-97 |
(Изоникотиноилгидразино-O,N')железа (II) сульфат дигидрат
 | |
| C6H7N3O·FeSO4·2H2O | М.м. 325,08 |
Содержит не менее 98,0% и не более 102,0% изоникотиноилгидразина железа сульфата C6H7N3O·FeSO4 в пересчете на безводное вещество.
Содержит не менее 46,5% и не более 48,5% изониазида в пересчете на безводное вещество.
Содержит не менее 51,7% и не более 53,3% железа (II) сульфата FeSO4 в пересчете на безводное вещество.
Описание. Кристаллический порошок от оранжевого до оранжево-коричневого цвета с характерным запахом железа.
Растворимость. Мало растворим в хлористоводородной кислоты растворе 0,1 М, допускается образование мутных растворов; практически нерастворим в воде и спирте 96%.
1. Спектрофотометрия (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»). Спектр поглощения 0,005% раствора субстанции в хлористоводородной кислоты растворе 0,1 М в области длин волн от 220 до 300 нм должен иметь максимум при 266 нм и минимум при 235 нм.
2. Качественная реакция. В 2 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,1 М растворяют 10 мг субстанции и прибавляют 1 мл калия феррицианида раствора 5%. Полученный раствор должен давать характерную реакцию на железо (II) (ОФС «Общие реакции на подлинность»).
3. Качественная реакция. В 2 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,1 М растворяют 2 мг субстанции. Полученный раствор должен давать характерную реакцию на сульфаты (ОФС «Общие реакции на подлинность»).
Прозрачность раствора. Опалесценция раствора 0,11 г субстанции в 100 мл хлористоводородной кислоты раствора 0,1 М не должна превышать эталон сравнения IV (ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей»).
Родственные примеси. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).
Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля GF254.
Подвижная фаза (ПФ). Вода-ацетон-метанол-этилацетат 10:20:20:50.
Испытуемый раствор. Перемешивают 2,5 г субстанции и 35 мл ацетона на магнитной мешалке в течение 30 мин. Полученную смесь фильтруют. Осадок промывают 15 мл ацетона, фильтрат переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем ацетоном до метки.
Раствор стандартного образца изониазида (А). В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мг стандартного образца изониазида, растворяют в 60 мл ацетона и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Раствор стандартного образца изониазида (Б). К 4,0 мл раствора стандартного образца изониазида (А) прибавляют 1,0 мл ацетона.
Раствор стандартного образца изониазида (В). К 3,0 мл раствора стандартного образца изониазида (А) прибавляют 2,0 мл ацетона.
Раствор стандартного образца изониазида (Г). К 2,0 мл раствора стандартного образца изониазида (А) прибавляют 3,0 мл ацетона.
Раствор стандартного образца изониазида (Д). К 1,0 мл раствора стандартного образца изониазида (А) прибавляют 4,0 мл ацетона.
Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. К 0,5 мл раствора стандартного образца изониазида (А) прибавляют 4,5 мл ацетона.
На линию старта пластинки наносят по 4 мкл испытуемого раствора (200 мкг), раствора стандартного образца изониазида (А) (1 мкг), раствора стандартного образца изониазида (Б) (0,8 мкг), раствора стандартного образца изониазида (В) (0,6 мкг), раствора стандартного образца изониазида (Г) (0,4 мкг), раствора стандартного образца изониазида (Д) (0,2 мкг) и раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (0,1 мкг). Пластинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе в течение 5 мин, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе до удаления следов растворителей и просматривают в УФ свете при 254 нм.
Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы четко видна зона адсорбции основного вещества.
На хроматограмме испытуемого раствора допускается наличие одной дополнительной зоны адсорбции на уровне зоны адсорбции раствора стандартного образца изониазида (А), не превышающей его по интенсивности поглощения и величине (не более 0,5%).
Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля F254.
Подвижная фаза (ПФ). Хлористоводородной кислоты раствор 0,5 М-ацетон-метанол-этилацетат 10:20:20:50.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 10 мл помещают 0,8 г субстанции и 5 мл хлористоводородной кислоты раствора 1 М, перемешивают в течение 10 мин на ультразвуковой бане, охлаждают раствор до комнатной температуры и доводят объем раствора ацетоном до метки.
Раствор стандартного образца гидразина сульфата. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 80 мг стандартного образца гидразина сульфата, растворяют в 50 мл хлористоводородной кислоты раствора 1 М и доводят объем раствора ацетоном до метки. Раствор используют свежеприготовленным.
На линию старта пластинки наносят 5 мкл (400 мкг) испытуемого раствора, 1 мкл (0,2 мкг) и 0,5 мкл (0,1 мкг) раствора стандартного образца гидразина сульфата. Пластинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе в течение 5 мин, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, опрыскивают диметиламинобензальдегида спиртовым раствором и просматривают при дневном свете.
Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме раствора стандартного образца гидразина сульфата, содержащей 0,1 мкг гидразина сульфата, четко видна зона адсорбции основного вещества.
На хроматограмме испытуемого раствора допускается наличие одной дополнительной зоны адсорбции на уровне зоны адсорбции раствора стандартного образца гидразина сульфата, содержащей 0,2 мкг гидразина сульфата, не превышающей его по интенсивности окраски и величине (не более 0,05%).
Зону адсорбции на линии старта при оценке не учитывают.
Вода. Не более 14,0% (ОФС «Определение воды», метод 1). Для определения используют около 50 мг (точная навеска) субстанции и в качестве растворителя смесь 1 мл уксусной кислоты безводной и 5 мл метанола.
Тяжелые металлы. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжелые металлы», метод 2, в зольном остатке, полученном после сжигания 1 г субстанции, с использованием эталонного раствора 1.
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
Количественное определение. Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).
Испытуемый раствор. Около 0,1 г (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,1 М, при необходимости обрабатывая ультразвуком, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и фильтруют (раствор А). В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5,0 мл раствора А и доводят объем раствора хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М до метки.
Стандартный раствор. Около 42 мг (точная навеска) стандартного образца изониазида и около 0,12 г (точная навеска) железа (II) аммония сульфата помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,1 М и доводят объем раствора тем же растворителем до метки (раствор Б). В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 5,0 мл раствора Б и доводят объем раствора хлористоводородной кислоты раствором 0,1 М до метки. Раствор используют свежеприготовленным.
Измеряют оптическую плотность испытуемого и стандартного растворов на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 266 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, используя в качестве раствора сравнения хлористоводородной кислоты раствор 0,1 М.
Содержание изониазида в субстанции в пересчете на безводное вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{A_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 100 \cdot 100 \cdot 5 \cdot 100}{A_{0} \cdot a_{1} \cdot 100 \cdot 100 \cdot 5 \cdot (100 - W)} = \frac{A_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 100}{A_{0} \cdot a_{1} \cdot (100 - W)} ,
где A1 — оптическая плотность испытуемого раствора;
A0 — оптическая плотность стандартного раствора;
a0 — навеска стандартного образца изониазида, мг;
W — содержание воды в субстанции, %;
P — содержание изониазида в стандартном образце изониазида, %.
о-Фенантролина раствор 0,5%. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,5 г о-фенантролина сульфата, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,1 М и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. Раствор используют свежеприготовленным.
Натрия ацетата раствор 2,5%. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 25 мл натрия ацетата раствора 10% и доводят объем раствора водой до метки. Раствор используют свежеприготовленным.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2,0 мл раствора А (количественное определение изониазида), прибавляют 1 мл натрия ацетата раствора 2,5% и 2 мл о-фенантролина раствора 0,5%, выдерживают 1 ч и доводят объем раствора водой до метки.
Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2,0 мл раствора Б, прибавляют 1 мл натрия ацетата раствора 2,5% и 2 мл о-фенантролина раствора 0,5%, выдерживают 1 ч и доводят объем раствора водой до метки. Раствор используют свежеприготовленным.
Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1 мл натрия ацетата раствора 2,5% и 2 мл о-фенантролина раствора 0,5%, выдерживают 1 ч и доводят объем раствора водой до метки. Раствор используют свежеприготовленным.
Измеряют оптическую плотность испытуемого и стандартного растворов на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 510 нм в кювете с толщиной слоя 1 см.
Содержание железа (II) сульфата в субстанции в процентах (X) в пересчете на безводное вещество вычисляют по формуле:
X = \frac{A_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 100 \cdot 100 \cdot 2 \cdot 100 \cdot 0,3873}{A_{0} \cdot a_{1} \cdot 100 \cdot 100 \cdot 2 \cdot (100 - W)} = \frac{A_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 38,73}{A_{0} \cdot a_{1} \cdot (100 - W)} ,
где A1 — оптическая плотность испытуемого раствора;
A0 — оптическая плотность стандартного раствора;
a0 — навеска железа (II) аммония сульфата, мг;
W — содержание воды в субстанции, %;
P — содержание железа (II) сульфата в железа (II) аммония сульфате, %;
0,3873 — поправочный коэффициент.
3. Изоникотиноилгидразина железа сульфат
Содержание изоникотиноилгидразина железа сульфата рассчитывают как сумму содержания изониазида и железа (II) сульфата.
Хранение. В защищенном от света месте.