ФС.2.1.0147.18. Фармакопейная статья. Нитроглицерин, раствор спиртовой 1%. Нитроглицерин

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том III»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Нитроглицерин, раствор спиртовой 1%	ФС.2.1.0147.18
Нитроглицерин
Nitroglycerini solutio spirituosa 1%	Взамен ГФ X, ст. 625

(Пропан-1,2,3-триил)тринитрат
C3H5N3O9	М.м. 227,09

Настоящая фармакопейная статья распространяется на субстанцию нитроглицерина, растворенную в этаноле в концентрации 1%.

Содержит не менее 0,95% и не более 1,05% (м/м) нитроглицерина C3H5N3O9.

Описание. Прозрачная бесцветная жидкость.

Примечание. При приготовлении растворов нитроглицерина следует всегда использовать безводный этанол во избежание выделения из раствора капель чистого нитроглицерина.

По окончании работы все растворы, содержащие нитроглицерин, должны быть слиты в десятикратный избыток 8,5% раствора натрия гидроксида и выдержаны в нем на водяной бане в течение 5 минут.

Подлинность

1. ИК-спектрометрия. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру стандартного образца нитроглицерина.

50 мкл субстанции наносят на диск калия бромида и выпаривают растворитель в вакууме.

2. Тонкослойная хроматография

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля G.

Подвижная фаза (ПФ). Этилацетат — толуол 20:80.

Испытуемый раствор. 5 мл раствора субстанции доводят ацетоном до 100,0 мл.

Раствор сравнения. 50 мкл стандартного образца 1% раствора нитроглицерина растворяют в 1,0 мл ацетона.

На линию старта пластинки наносят по 5 мкл испытуемого раствора (2,5 мкг) и раствора сравнения (2,5 мкг). Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт подвижной фазы пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, опрыскивают свежеприготовленным раствором крахмала с калия йодидом, выдерживают 15 мин под ультрафиолетовым светом при 254 нм и анализируют при дневном свете.

Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, цвету и величине должна соответствовать основной зоне адсорбции на хроматограмме раствора сравнения.

3. Качественная реакция. Субстанция дает характерную реакцию A на нитраты (ОФС «Общие реакции на подлинность»).

<*> Прозрачность раствора. Раствор субстанции должен быть прозрачным (ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей»).

<*> Цветность раствора. Раствор субстанции должен быть бесцветным (ОФС «Степень окраски жидкостей», метод 2).

Плотность. Не более 0,829 г/см3 (ОФС «Плотность», метод 1).

Неорганические нитраты. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза (ПФ). Уксусная кислота ледяная — ацетон — толуол 15:30:60.

Испытуемый раствор. Образец субстанции.

Раствор сравнения А. 5 мг калия нитрата растворяют в 1 мл воды и доводят объем спиртом 96% до 100,0 мл.

Раствор сравнения Б. 5,0 мл раствора сравнения А доводят спиртом 96% до 20,0 мл.

На линию старта пластинки наносят по 10 мкл испытуемого раствора (100 мкг) и растворов сравнения А (0,5 мкг) и Б (0,125 мкг). Пластинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе в течение 5 мин, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, опрыскивают свежеприготовленным раствором крахмала с калия йодидом, выдерживают 15 мин под ультрафиолетовым светом при 254 нм и анализируют при дневном свете.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора сравнения Б должна наблюдаться зона адсорбции нитрата.

На хроматограмме испытуемого раствора зона адсорбции, находящаяся на уровне зоны адсорбции нитрата, по совокупности величины и интенсивности поглощения не должна превышать зону адсорбции на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5% в пересчете на калия нитрат).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).

Подвижная фаза А (ПФА). Вода для хроматографии.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Ацетонитрил.

Испытуемый раствор. Около 0,5 г (точная навеска) субстанции растворяют в ПФА и доводят объем раствора ПФ до 10,0 мл.

Раствор сравнения А. 1,0 мл испытуемого раствора доводят ПФА до 100,0 мл.

Раствор сравнения Б. 25 мкл стандартного образца нитроглицерина для проверки пригодности системы, содержащего примеси B, C, D и E, разводят в 0,5 мл ПФА.

Примечание.

Примесь B: (2,3-дигидроксипропил)нитрат, CAS 624-43-1;

примесь C: (1,3-дигидроксипропан-2-ил)нитрат, CAS 620-12-2;

примесь D: [(2RS)-3-гидроксипропан-1,2-диил]динитрат, CAS 27321-62-6;

примесь E: (2-гидроксипропан-1,3-диил]динитрат, CAS 27321-62-6.

Хроматографические условия

Колонка	25,0 x 0,46 см, эндкепированный октадецилсилил силикагель (C18), 5 мкм;
Температура колонки	40 °C;
Скорость потока	1,5 мл/мин;
Детектор	спектрофотометрический, 210 нм;
Объем пробы	20 мкл.

Режим хроматографирования

Время, мин	ПФА, %	ПФБ, %
0 — 2	90	10
2 — 10	90 \rightarrow 50	10 \rightarrow 50
10 — 20	50	50
20 — 25	50 \rightarrow 90	50 \rightarrow 10

Хроматографируют испытуемый раствор и растворы сравнения А и Б.

Пригодность хроматографической системы с использованием раствора сравнения Б определяется в соответствии с ОФС «Хроматография» со следующим уточнением: разрешение (R) как между пиками примесей C и B, так и между пиками примесей E и D должно быть не менее 1,5.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей B, C, D и E используются хроматограмма, поставляемая со стандартным образцом нитроглицерина для проверки пригодности системы, и хроматограмма раствора сравнения Б.

Относительные времена удерживания соединений. Нитроглицерин — 1 (около 15,5 мин); примесь C — около 0,19; примесь B — около 0,21; примесь E — около 0,63; примесь D — около 0,65.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

• площадь пика каждой из примесей B, C, D и E должна быть не более 0,5 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения А (не более 0,5%);
• площадь пика любой другой единичной примеси должна быть не более 0,1 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения А (не более 0,1%);
• суммарная площадь пиков всех примесей не должна более чем в 1,5 раза превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения А (не более 1,5%).

Не учитывают пики, площадь которых составляет менее 0,05 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения А (менее 0,05%).

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».

<*> Бактериальные эндотоксины. Не более 19,4 ЕЭ на 1 мг субстанции (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

---

<*> Контроль по показателям качества «Прозрачность раствора», «Цветность раствора» и «Бактериальные эндотоксины» проводят в субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

Количественное определение. Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Испытуемый раствор. Около 0,25 г (точная навеска) раствора субстанции доводят ледяной уксусной кислотой до 25,0 мл.

Раствор стандартного образца калия нитрата. Около 0,225 г (точная навеска) стандартного образца калия нитрата растворяют в 1,0 мл воды и доводят ледяной уксусной кислотой до 50,0 мл. 1,0 мл полученного раствора доводят ледяной уксусной кислотой до 25,0 мл. Срок годности раствора — 5 сут.

Контрольный раствор. Уксусная кислота ледяная.

В три мерные колбы вместимостью 25 мл помещают: в первую — 1 мл испытуемого раствора, во вторую — 1 мл раствора стандартного образца калия нитрата, в третью — 1 мл уксусной кислоты ледяной. В каждую колбу прибавляют по 2 мл сернокислого раствора фенолдисульфоновой кислоты, перемешивают и оставляют на 15 мин. Затем в каждую колбу осторожно по стенкам прибавляют по 8 мл воды, перемешивают, добавляют небольшими порциями при охлаждении на льду аммиака раствор концентрированный (32%; около 8 мл) до щелочной реакции среды по универсальному индикатору (pH 9 — 10), охлаждают до 20 °C, доводят объемы растворов водой до метки, перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые 15 мл фильтрата.

Определяют величину оптической плотности испытуемого раствора и раствора стандартного образца на спектрофотометре при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 1 см по отношению к обработанному контрольному раствору.

Содержание нитроглицерина C3H5N3O9 в растворе субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

X = \frac{0,7487 \cdot A_{1} \cdot a_{0} \cdot 1 \cdot 1 \cdot 25 \cdot 25 \cdot 100}{A_{0} \cdot a_{1} \cdot 50 \cdot 25 \cdot 25 \cdot 1} = \frac{A_{1} \cdot a_{0} \cdot 1,4974}{A_{0} \cdot a_{1}} ,

где 0,7487 — коэффициент пересчета калия нитрата на нитроглицерин;

A1 — оптическая плотность обработанного испытуемого раствора;

A0 — оптическая плотность обработанного стандартного образца калия нитрата;

a1 — навеска стандартного образца калия нитрата, г;

a0 — навеска испытуемой субстанции, г.

Примечание. Приготовление сернокислого раствора фенолдисульфоновой кислоты. В коническую колбу помещают 12 г фенола, прибавляют 74 мл серной кислоты концентрированной и нагревают на водяной бане в течение 15 мин. Охлаждают полученную смесь до 20 °C, затем осторожно прибавляют 6 мл воды и перемешивают. Срок годности раствора 6 мес при хранении в хорошо закрытых склянках из темного стекла (прозрачная жидкость на воздухе темнеет, приобретая светло-бурую окраску).

Хранение. В защищенном от света месте при температуре от 8 до 15 °C.

---