---
title: "Без названия"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/bez-nazvaniya-919"
---

## Без названия

# Документ 8699

> [!NOTE]
> ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

```mermaid
flowchart LR
  n0["ГОСТ 30518-97"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/standart-122" "ГОСТ 30518-97. Межгосударственный стандарт. Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий) (введен в действие П"
  n1["ГОСТ Р 52816-2007"]:::rst
  click n1 "https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-52816-2007" "ГОСТ Р 52816-2007. Национальный стандарт Российской Федерации. Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных... (утв. и "
  n2["ГОСТ 31747-2012"]:::doc
  n1 --> n2
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;
```


<a id="p100001"></a>Введен в действие
Приказом Федерального
агентства по техническому
регулированию и метрологии
от 29 ноября 2012 г. N 1771-ст

<a id="p100002"></a>**МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ**

<a id="p100003"></a>**ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ**

<a id="p100004"></a>**МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА БАКТЕРИЙ ГРУППЫ**
**КИШЕЧНЫХ ПАЛОЧЕК (КОЛИФОРМНЫХ БАКТЕРИЙ)**

<a id="p100005"></a>Food products. Methods for detection and quantity
determination of coliformes

**(ISO 4831:2006, MOD)**
**(ISO 4832:2006, MOD)**

<a id="p100006"></a>**ГОСТ 31747-2012**
<a id="p100619"></a>Группа Н09

<a id="p100620"></a>**МКС 07.100.30**

<a id="p100007"></a>Дата введения
1 июля 2013 года

<a id="p100008"></a>Предисловие

<a id="p100009"></a>Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены".

<a id="p100010"></a>Сведения о стандарте

<a id="p100011"></a>1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт консервной и овощесушильной промышленности" (ГНУ "ВНИИКОП") на основе аутентичных переводов стандартов, указанных в пункте 4
<a id="p100012"></a>2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (ТК 335)
<a id="p100013"></a>3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 51 от 1 октября 2012 г.)
<a id="p100014"></a>За принятие проголосовали:


| <a id="p100015"></a>Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | <a id="p100016"></a>Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | <a id="p100017"></a>Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
| --- | --- | --- |
| <a id="p100018"></a>Армения | <a id="p100019"></a>AM | <a id="p100020"></a>Минэкономики Республики Армения |
| <a id="p100021"></a>Беларусь | <a id="p100022"></a>BY | <a id="p100023"></a>Госстандарт Республики Беларусь |
| <a id="p100024"></a>Кыргызстан | <a id="p100025"></a>KG | <a id="p100026"></a>Кыргызстандарт |
| <a id="p100027"></a>Молдова | <a id="p100028"></a>MD | <a id="p100029"></a>Молдова-Стандарт |
| <a id="p100030"></a>Российская Федерация | <a id="p100031"></a>RU | <a id="p100032"></a>Росстандарт |
| <a id="p100033"></a>Узбекистан | <a id="p100034"></a>UZ | <a id="p100035"></a>Узстандарт |


<a id="p100036"></a>4 Настоящий стандарт модифицирован по отношению к международным стандартам:
- <a id="p100037"></a>ISO 4831:2006 "Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection and enumeration of coliforms - Most probable number technique" (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод для выявления и подсчета количества колиформ. Метод наиболее вероятного числа);
- <a id="p100038"></a>ISO 4832:2006 "Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the enumeration of coliforms - Colony-count technique" (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод подсчета колиформ. Метод подсчета колоний) в части пищевых продуктов.
<a id="p100043"></a>При этом дополнительные положения и требования, включенные в текст стандарта для учета потребностей национальной экономики указанных выше государств и особенностей межгосударственной стандартизации, выделены в тексте стандарта курсивом.
<a id="p100044"></a>Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (пункт 3.6).
<a id="p100045"></a>Сравнение структуры настоящего стандарта со структурой указанных международных стандартов приведено в дополнительном приложении ДА.
<a id="p100046"></a>Степень соответствия - модифицированная (MOD).
<a id="p100047"></a>Стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 52816-2007
<a id="p100048"></a>5 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. N 1771-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31747-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.
<a id="p100049"></a>**6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ**

<a id="p100050"></a>Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта публикуется в указателе "Национальные стандарты".
<a id="p100051"></a>Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в указателе "Национальные стандарты", а текст изменений - в информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована в информационном указателе "Национальные стандарты"

<a id="p100052"></a>1 Область применения

<a id="p100053"></a>Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты, кроме молока и молочных продуктов, и устанавливает метод выявления в определенной навеске пищевого продукта колиформных бактерий и три метода определения их количества: метод наиболее вероятного числа (НВЧ) и методы посева в или на агаризованные селективно-диагностические среды.
<a id="p100054"></a>Метод определения НВЧ колиформных бактерий предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта менее 150 или в 1 см3 жидкого продукта менее 15 клеток колиформных бактерий.
<a id="p100055"></a>Метод определения количества колиформных бактерий посевом в агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта более 150 или в 1 см3 жидкого продукта более 15 колониеобразующих единиц (КОЕ) колиформных бактерий.
<a id="p100056"></a>Метод определения количества колиформных бактерий посевом на агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта более 1500 или в 1 см3 жидкого продукта более 150 КОЕ колиформных бактерий.
<a id="p100057"></a>Допускается использование хромогенных сред для предварительного выявления количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий) в масложировой продукции.

<a id="p100058"></a>2 Нормативные ссылки

<a id="p100059"></a>В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
<a id="p100060"></a>ГОСТ ISO 7218-2011 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям
<a id="p100061"></a>ГОСТ 9284-75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия
<a id="p100062"></a>ГОСТ 10444.1-84 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе
<a id="p100063"></a>ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования
<a id="p100064"></a>ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
<a id="p100065"></a>ГОСТ 26668-85 Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов
<a id="p100066"></a>ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов
<a id="p100067"></a>ГОСТ 26670-91 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов
<a id="p100068"></a>ГОСТ 29184-91 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий семейства Enterobacteriaceae
<a id="p100069"></a>*Примечание* - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю "Национальные стандарты", составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

<a id="p100070"></a>3 Термины и определения

<a id="p100071"></a>В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
<a id="p100072"></a>3.1 колиформные бактерии: Бактерии, которые при температуре 37 °C ферментируют лактозу с образованием газа по методам, приведенным в настоящем стандарте.
<a id="p100073"></a>3.2 выявление колиформных бактерий: Определение присутствия или отсутствия колиформных бактерий в определенной массе или объеме продукта в соответствии с настоящим стандартом.
<a id="p100074"></a>3.3 определение количества колиформных бактерий:
<a id="p100075"></a>3.3.1 Количество бактерий, содержащееся в 1 см3 или 1 грамме продукта, определенное путем посева продукта и (или) его разведений в или на агаризованную селективно-диагностическую среду, подсчете после инкубирования при температуре 37 °C типичных и атипичных колоний и определении возможности бактерий из этих колоний ферментировать лактозу с образованием газа по методам, приведенным в настоящем стандарте.
<a id="p100076"></a>При необходимости, подтверждают по биохимическим признакам принадлежности выделенных колоний к колиформным бактериям.
<a id="p100077"></a>3.3.2 Количество бактерий, содержащееся в 1 см3 или 1 грамме продукта, определенное по методу НВЧ, указанному в настоящем стандарте.

<a id="p100078"></a>4 Метод выявления колиформных бактерий и определения количества по методу НВЧ

<a id="p100079"></a>Сущность методов
<a id="p100080"></a>Методы выявления и определения НВЧ колиформных бактерий основаны на высеве определенного количества продукта и (или) разведений навески продукта в жидкую селективную среду с лактозой, инкубировании посевов, учете положительных пробирок, пересеве культуральной жидкости в жидкую селективную среду для учета газообразования или пересева, при необходимости, культуральной жидкости на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды для подтверждения по биохимическим и культуральным признакам роста принадлежности выделенных колоний к колиформным бактериям.

#### <a id="p100081"></a>4.1 Метод выявления колиформных бактерий

<a id="p100082"></a>4.1.1 Пробирку с селективной обогатительной средой инокулируют продуктом или разведением навески продукта и инкубируют при температуре 37 °C 24 или 48 ч.
<a id="p100083"></a>4.1.2 Пробирку с подтверждающей средой инокулируют из пробирки, полученной по 4.1.1, где отмечено образование газа и/или помутнение, и инкубируют при температуре 37 °C 24 или 48 ч.
<a id="p100084"></a>4.1.3 Присутствие колиформных бактерий считается подтвержденным, в случае если отмечено помутнение и образование газа после осмотра пробирки, полученной по 4.1.2.

#### <a id="p100085"></a>4.2 Метод НВЧ - определение количества колиформных бактерий

<a id="p100086"></a>4.2.1 Три пробирки с жидкой обогатительной средой двойной концентрации инокулируют определенным количеством продукта, если исходный продукт жидкий, или определенным количеством исходной суспензии в случае другого продукта.
<a id="p100087"></a>4.2.2 Три пробирки с жидкой обогатительной средой нормальной концентрации инокулируют определенным количеством продукта и/или разведением продукта, если исходный продукт жидкий, или определенным количеством исходной суспензии и/или разведением в случае другого продукта.
<a id="p100088"></a>4.2.3 Посевы в пробирках, содержащие обогатительную среду двойной концентрации, инкубируют при температуре 37 °C 24 ч. Посевы в пробирках со средой нормальной концентрации инкубируют 24 или 48 ч, после этого в этих пробирках отмечают наличие газа и/или помутнения, мешающего выявлению образования газа.
<a id="p100089"></a>4.2.4 Пробирки с подтверждающей средой инокулируют культурами из пробирок с обогатительной селективной средой двойной концентрации и культурами из пробирок с обогатительной селективной средой нормальной концентрации, в которых отмечено образование газа и/или помутнение.
<a id="p100090"></a>Посевы в пробирках с подтверждающей средой инкубируют при температуре 37 °C 24 или 48 ч, после этого в пробирках отмечают образование газа.
<a id="p100091"></a>4.2.5 Наиболее вероятное число колиформных бактерий в 1 см3 или 1 г пробы продукта (НВЧ) рассчитывают исходя из числа пробирок с подтверждающей средой (4.2.4), показавших образование газа. Для определения наиболее вероятного числа пользуются таблицей ГОСТ 26670.

<a id="p100092"></a>5 Методы определения количества колиформных бактерий - подсчет колоний

<a id="p100093"></a>Сущность методов
<a id="p100094"></a>Методы определения количества колиформных бактерий посевом в или на агаризованные селективно-диагностические среды основаны на высеве определенного количества продукта и/или его разведений в или на агаризованную селективно-диагностическую среду с лактозой, инкубировании посевов, подсчете типичных и атипичных колоний, пересеве типичных колоний и атипичных колоний в жидкую селективную среду с лактозой для определения газообразования, подтверждения, при необходимости, по биохимическим признакам принадлежности выделенных колоний к колиформным бактериям.

#### <a id="p100095"></a>5.1 Метод посева в агаризованную селективно-диагностическую среду

<a id="p100096"></a>5.1.1 Для определения количества колиформных бактерий по 1 см3 продукта, если продукт жидкий, или по 1 см3 исходного разведения в случае другого продукта вносят в две стерильные чашки Петри.
<a id="p100097"></a>Другую пару чашек используют для других количеств - исходной суспензии и/или десятикратных разведений продукта.
<a id="p100098"></a>Чашки с внесенным в них продуктом или его разведением заливают агаризованной питательной средой.
<a id="p100099"></a>Посевы в чашках инкубируют при температуре 37 °C в течение 24 ч.
<a id="p100100"></a>5.1.2 Типичные и атипичные колонии подсчитывают и определяют у бактерий из типичных и атипичных колоний возможность ферментации лактозы.
<a id="p100101"></a>5.1.3 Число колоний на 1 см3 или на 1 г продукта рассчитывают по ГОСТ 26670 исходя из числа подтвержденных типичных и атипичных колоний, выросших на чашках.

#### <a id="p100102"></a>5.2 Метод посева на агаризованную селективно-диагностическую среду

<a id="p100103"></a>5.2.1 На подсушенную поверхность агаризованной селективно-диагностической среды в двух чашках Петри наносят 0,1 - 0,2 см3 продукта, если продукт жидкий, или исходной суспензии в случае другого продукта.
<a id="p100104"></a>Другую пару чашек используют для других количеств - исходной суспензии или десятикратных разведений продукта.
<a id="p100105"></a>Внесенный в чашки продукт или его разведения распределяют по поверхности агаризованной питательной среды стерильным шпателем.
<a id="p100106"></a>Посевы в чашках инкубируют при температуре 37 °C в течение 24 ч.
<a id="p100107"></a>5.2.2 Типичные и атипичные колонии подсчитывают и определяют у бактерий из этих колоний возможность ферментации лактозы.
<a id="p100108"></a>5.2.3 Число колоний на 1 см3 или на 1 г продукта подсчитывают по ГОСТ 26670 исходя из числа подтвержденных типичных и атипичных колоний, выросших на чашках.

<a id="p100109"></a>6 Питательные среды и реактивы

<a id="p100110"></a>Химические вещества, используемые для приготовления питательных сред и реактивов, должны быть аналитического качества.

#### <a id="p100111"></a>6.1 Селективная обогатительная среда (лаурил сульфат триптозный бульон)


##### <a id="p100112"></a>6.1.1 Состав среды приведен в таблице 1.


<a id="p100113"></a>Таблица 1


| <a id="p100114"></a>Состав среды | <a id="p100115"></a>а) Среда двойной концентрации | <a id="p100116"></a>б) Среда нормальной концентрации |
| --- | --- | --- |
| <a id="p100117"></a>Ферментативный перевар молока и животных протеинов, г | <a id="p100118"></a>40 | <a id="p100119"></a>20 |
| <a id="p100120"></a>Лактоза (C<sub>12</sub>H<sub>22</sub>O<sub>11</sub>·H<sub>2</sub>O), г | <a id="p100121"></a>10 | <a id="p100122"></a>5 |
| <a id="p100123"></a>Двузамещенный фосфорнокислый калий (K<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>), г | <a id="p100124"></a>5,5 | <a id="p100125"></a>2,75 |
| <a id="p100126"></a>Однозамещенный фосфорнокислый калий (KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>), г | <a id="p100127"></a>5,5 | <a id="p100128"></a>2,75 |
| <a id="p100129"></a>Натрий хлористый, г | <a id="p100130"></a>10 | <a id="p100131"></a>5 |
| <a id="p100132"></a>Натрий лаурил сульфат, г | <a id="p100133"></a>0,2 | <a id="p100134"></a>0,1 |
| <a id="p100135"></a>Вода, см3 | <a id="p100136"></a>1000 | <a id="p100137"></a>1000 |



##### <a id="p100138"></a>6.1.2 Приготовление

<a id="p100139"></a>При нагревании растворяют компоненты или дегидратированную готовую среду в воде. Устанавливают pH так, чтобы после стерилизации он составлял (6,8 +/- 0,2) при температуре 25 °C.
<a id="p100140"></a>Разливают среду по 10 см3 в пробирки размером приблизительно 16 х 160 мм, содержащие пробирки Дархама (поплавки), в случае использования среды нормальной концентрации, и в пробирки размером приблизительно 20 х 200 мм, не содержащие пробирки Дархама (поплавки), в случае использования среды двойной концентрации.
<a id="p100141"></a>Стерилизуют среду в автоклаве при температуре (121 +/- 1) °C в течение 15 мин. Пробирки Дархама (поплавки) после стерилизации не должны содержать пузырьков воздуха.

#### <a id="p100142"></a>6.2 Бриллиантовый зеленый лактозный желчный бульон


##### <a id="p100143"></a>6.2.1 Состав:



| <a id="p100144"></a>ферментативный перевар казеина | <a id="p100145"></a>10 г; |
| --- | --- |
| <a id="p100146"></a>лактоза (C<sub>12</sub>H<sub>22</sub>O<sub>11</sub>·H<sub>2</sub>O) | <a id="p100147"></a>10 г; |
| <a id="p100148"></a>желчь | <a id="p100149"></a>20 г; |
| <a id="p100150"></a>бриллиантовый зеленый | <a id="p100151"></a>0,0133 г<br>(или 2,66 см3 раствора, приготовленного по 6.2.3, в случае приготовления среды из отдельных компонентов); |
| <a id="p100152"></a>вода | <a id="p100153"></a>1000 см3. |



##### <a id="p100154"></a>6.2.2 Приготовление

<a id="p100155"></a>При нагревании растворяют компоненты или дегидратированную готовую среду в воде. Устанавливают pH так, чтобы после стерилизации он составлял (7,2 +/- 0,2) при температуре 25 °C. Разливают и стерилизуют среду по 6.1.2.

##### <a id="p100156"></a>6.2.3 Раствор бриллиантового зеленого


###### <a id="p100157"></a>6.2.3.1 Состав:



| <a id="p100158"></a>бриллиантовый зеленый | <a id="p100159"></a>0,5 г; |
| --- | --- |
| <a id="p100160"></a>вода | <a id="p100161"></a>100 см3. |



###### <a id="p100162"></a>6.2.3.2 Приготовление

<a id="p100163"></a>Бриллиантовый зеленый переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят водой до метки.

#### <a id="p100164"></a>6.3 Селективная обогатительная среда (бульон Мак-Конки)


##### <a id="p100165"></a>6.3.1 Состав бульона Мак-Конки приведен в таблице 2.


<a id="p100166"></a>Таблица 2


| <a id="p100167"></a>Состав среды | <a id="p100168"></a>а) Среда двойной концентрации | <a id="p100169"></a>б) Среда нормальной концентрации |
| --- | --- | --- |
| <a id="p100170"></a>Пептон, г | <a id="p100171"></a>40 | <a id="p100172"></a>20 |
| <a id="p100173"></a>Лактоза (C<sub>12</sub>H<sub>22</sub>O<sub>11</sub>·H<sub>2</sub>O), г | <a id="p100174"></a>20 | <a id="p100175"></a>10 |
| <a id="p100176"></a>Желчь, г | <a id="p100177"></a>10 | <a id="p100178"></a>5 |
| <a id="p100179"></a>Раствор бромкрезолового пурпурового, см3 | <a id="p100180"></a>2 | <a id="p100181"></a>1 |
| <a id="p100182"></a>Натрий хлористый, г | <a id="p100183"></a>10 | <a id="p100184"></a>5 |
| <a id="p100185"></a>Вода, см3 | <a id="p100186"></a>1000 | <a id="p100187"></a>1000 |



##### <a id="p100188"></a>6.3.2 Приготовление

<a id="p100189"></a>При нагревании растворяют компоненты в воде. Нагревают на слабом огне до кипения, кипятят 1 - 2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, доводят объем до 1 дм3, охлаждают до 45 °C - 55 °C и устанавливают pH так, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 °C (7,2 +/- 0,1).
<a id="p100190"></a>Разливают среду по 6.1.2 и стерилизуют в автоклаве при температуре (115 +/- 1) °C в течение 20 мин.

##### <a id="p100191"></a>6.3.3 Раствор бромкрезолового пурпурового


###### <a id="p100192"></a>6.3.3.1 Состав:



| <a id="p100193"></a>бромкрезоловый пурпурный | <a id="p100194"></a>1 г; |
| --- | --- |
| <a id="p100195"></a>раствор гидроокиси натрия с (NaOH) = 0,1 моль/дм3 | <a id="p100196"></a>19 см3; |
| <a id="p100197"></a>вода | <a id="p100198"></a>80 см3. |



###### <a id="p100199"></a>6.3.3.2 Приготовление

<a id="p100200"></a>Бромкрезоловый пурпуровый переносят в фарфоровую ступку с 19 см3 раствора гидроокиси натрия с (NaOH) = 0,1 моль/дм3 и после растворения добавляют воду.

#### <a id="p100201"></a>6.4 Селективная обогатительная среда (среда Кесслера)


##### <a id="p100202"></a>6.4.1 Состав среды Кесслера приведен в таблице 3.


<a id="p100203"></a>Таблица 3


| <a id="p100204"></a>Состав среды | <a id="p100205"></a>а) Среда двойной концентрации | <a id="p100206"></a>б) Среда нормальной концентрации |
| --- | --- | --- |
| <a id="p100207"></a>Пептон, г | <a id="p100208"></a>20 | <a id="p100209"></a>10 |
| <a id="p100210"></a>Лактоза (C<sub>12</sub>H<sub>22</sub>O<sub>11</sub>·H<sub>2</sub>O), г | <a id="p100211"></a>5 | <a id="p100212"></a>2,5 |
| <a id="p100213"></a>Желчь, г | <a id="p100214"></a>10 | <a id="p100215"></a>5 |
| <a id="p100216"></a>Раствор кристаллического фиолетового, см3 | <a id="p100217"></a>4 | <a id="p100218"></a>2 |
| <a id="p100219"></a>Вода, см3 | <a id="p100220"></a>1000 | <a id="p100221"></a>1000 |



##### <a id="p100222"></a>6.4.2 Приготовление

<a id="p100223"></a>При нагревании растворяют компоненты в воде. Нагревают на слабом огне до кипения, кипятят 1 - 2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, доводят объем до 1 дм3, охлаждают до 45 °C - 55 °C и устанавливают pH так, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 °C (7,2 +/- 0,1).
<a id="p100224"></a>Разливают среду по 6.1.2 и стерилизуют в автоклаве при температуре (115 +/- 1) °C в течение 20 мин.

##### <a id="p100225"></a>6.4.3 Раствор кристаллического фиолетового


###### <a id="p100226"></a>6.4.3.1 Состав:



| <a id="p100227"></a>кристаллический фиолетовый | <a id="p100228"></a>1 г; |
| --- | --- |
| <a id="p100229"></a>вода | <a id="p100230"></a>100 см3. |



###### <a id="p100231"></a>6.4.3.2 Приготовление

<a id="p100232"></a>Кристаллический фиолетовый переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят водой до метки.

#### <a id="p100233"></a>6.5 Кристалл виолет нейтральный красный желчный лактозный агар (VRBL-агар)


##### <a id="p100234"></a>6.5.1 Состав:



| <a id="p100235"></a>ферментативный перевар животных тканей | <a id="p100236"></a>7 г; |
| --- | --- |
| <a id="p100237"></a>дрожжевой экстракт | <a id="p100238"></a>3 г; |
| <a id="p100239"></a>лактоза (C<sub>12</sub>H<sub>22</sub>O<sub>11</sub>·H<sub>2</sub>O) | <a id="p100240"></a>10 г; |
| <a id="p100241"></a>хлористый натрий | <a id="p100242"></a>5 г; |
| <a id="p100243"></a>желчные соли | <a id="p100244"></a>1,5 г; |
| <a id="p100245"></a>нейтральный красный | <a id="p100246"></a>0,03 г<br>(или 1 см3 раствора, приготовленного по 6.5.3, в случае приготовления среды из отдельных компонентов); |
| <a id="p100247"></a>кристаллический фиолетовый | <a id="p100248"></a>0,002 г<br>(или 0,2 см3 раствора, приготовленного по 6.4.3, в случае приготовления среды из отдельных компонентов); |
| <a id="p100249"></a>агар | <a id="p100250"></a>12 - 18 г<br>(зависит от желирующей способности агара); |
| <a id="p100251"></a>вода | <a id="p100252"></a>1000 см3. |



##### <a id="p100253"></a>6.5.2 Приготовление

<a id="p100254"></a>Основная цель правильного приготовления среды - получение необходимой селективной способности и специфичности среды.
<a id="p100255"></a>Тщательно размешивают компоненты или дегидратированную готовую среду в воде и оставляют на несколько минут. Устанавливают pH так, чтобы после кипения он составлял (7,4 +/- 0,2) при температуре 25 °C. Нагревают до кипения, помешивая время от времени. После 2 мин кипения немедленно охлаждают в водяной бане при температуре 44 °C - 47 °C. Избегают перегрева среды, не применяя вторичного нагревания. Среду не стерилизуют в автоклаве. Контролируют стерильность среды во время использования. Используют среду в течение 4 ч после приготовления.

##### <a id="p100256"></a>6.5.3 Раствор нейтрального красного


###### <a id="p100257"></a>6.5.3.1 Состав:



| <a id="p100258"></a>нейтральный красный | <a id="p100259"></a>3 г; |
| --- | --- |
| <a id="p100260"></a>вода | <a id="p100261"></a>100 см3. |



###### <a id="p100262"></a>6.5.3.2 Приготовление

<a id="p100263"></a>Нейтральный красный переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят водой до метки.

#### <a id="p100264"></a>6.6 Агар лактозный с бриллиантовым зеленым и феноловым красным


##### <a id="p100265"></a>6.6.1 Состав:



| <a id="p100266"></a>мясной экстракт | <a id="p100267"></a>3 г; |
| --- | --- |
| <a id="p100268"></a>пептон | <a id="p100269"></a>10 г; |
| <a id="p100270"></a>лактоза (C<sub>12</sub>H<sub>22</sub>O<sub>11</sub>·H<sub>2</sub>O) | <a id="p100271"></a>10 г; |
| <a id="p100272"></a>хлористый натрий | <a id="p100273"></a>5 г; |
| <a id="p100274"></a>двузамещенный фосфорнокислый калий (K<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>) | <a id="p100275"></a>0,5 г; |
| <a id="p100276"></a>раствор фенолового красного по 6.6.3 | <a id="p100277"></a>40 см3; |
| <a id="p100278"></a>раствор бриллиантового зеленого по 6.2.3 | <a id="p100279"></a>2 см3; |
| <a id="p100280"></a>агар | <a id="p100281"></a>12 - 18 г<br>(зависит от желирующей способности агара); |
| <a id="p100282"></a>вода | <a id="p100283"></a>1000 см3. |



##### <a id="p100284"></a>6.6.2 Приготовление

<a id="p100285"></a>При нагревании растворяют в воде компоненты. При отсутствии мясного экстракта допускается использовать вместо мясного экстракта, пептона и дистиллированной воды мясопептонный бульон, приготовленный по ГОСТ 10444.1. Смесь нагревают до полного растворения компонентов, доводят объем до 1 дм3, охлаждают до 45 °C - 55 °C, устанавливают pH так, чтобы после стерилизации он составлял при температуре 25 °C (7,0 +/- 0,1), разливают мерно в колбы или флаконы. Среду стерилизуют при температуре (115 +/- 1) °C в течение 20 мин, затем охлаждают до 45 °C - 55 °C. После стерилизации прибавляют раствор фенолового красного и раствор бриллиантового зеленого.

##### <a id="p100286"></a>6.6.3 Раствор фенолового красного


###### <a id="p100287"></a>6.6.3.1 Состав:



| <a id="p100288"></a>феноловый красный | <a id="p100289"></a>0,2 г; |
| --- | --- |
| <a id="p100290"></a>вода | <a id="p100291"></a>100 см3. |



###### <a id="p100292"></a>6.6.3.2 Приготовление

<a id="p100293"></a>Феноловый красный переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переливают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят водой до метки.

#### <a id="p100294"></a>6.7 Агар Эндо

<a id="p100295"></a>Среду готовят по прописи, указанной на этикетке.

#### <a id="p100296"></a>6.8 Среда Гисса с лактозой

<a id="p100297"></a>Среду готовят по инструкции на этикетке или по ГОСТ 10444.1.

#### <a id="p100298"></a>6.9 ГРМ-агар (сухой питательный агар на основе гидролизата рыбной муки для культивирования бактерий)

<a id="p100299"></a>Среду готовят по инструкции на этикетке.

#### <a id="p100300"></a>6.10 Мясопептонный агар

<a id="p100301"></a>Среду готовят по ГОСТ 10444.1.
<a id="p100302"></a>6.11 При использовании для приготовления питательных сред натуральной говяжьей желчи ей заменяют сухую (1 г сухой желчи равен 10 см3 натуральной желчи). При этом количество дистиллированной воды, используемой для приготовления сред, уменьшают на количество натуральной желчи (т.е. общий объем должен быть равен 1 дм3).
<a id="p100303"></a>6.12 Растворы, приготовленные по 6.2.3, 6.3.3, 6.4.3, 6.5.3 и 6.6.3, хранят в закрытых сосудах из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.

#### <a id="p100304"></a>6.13 Растворы и реактивы для окраски по Граму готовят по ГОСТ 10444.1.

<a id="p100305"></a>6.14 Допускается использование готовых и дегидратированных питательных сред, в т.ч. хромогенных, зарегистрированных на территории государства, принявшего стандарт.

<a id="p100306"></a>7 Аппаратура, посуда, материалы и реактивы

<a id="p100307"></a>Приемлемой альтернативой посуде многоразового применения является одноразовая посуда, если она отвечает соответствующим требованиям.
<a id="p100308"></a>Используют обычное лабораторное оборудование и реактивы для микробиологических исследований по ГОСТ ISO 7218, ГОСТ 10444.1 со следующими дополнениями:
- <a id="p100309"></a>весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания 200 г (для взвешивания реактивов) с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более +/- 0,01 мг по ГОСТ 24104;
- <a id="p100310"></a>весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания 1 кг (для взвешивания продукта) с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более +/- 20 мг по ГОСТ 24104;
- <a id="p100311"></a>микроскоп биологический, обеспечивающий просмотр в проходящем свете, с увеличением 900х - 1000х;
- <a id="p100312"></a>прибор для мембранной фильтрации;
- <a id="p100313"></a>бактериологическая петля платино-иридиевая или никель-хромовая приблизительно 3 мм в диаметре;
- <a id="p100314"></a>стекла предметные по ГОСТ 9284;
- <a id="p100315"></a>пробирки размером приблизительно 16 х 160 мм и 20 х 200 мм по ГОСТ 25336;
- <a id="p100316"></a>пробирки Дархам (поплавки) размером, подходящим для использования в пробирках размером 16 х 160 мм;
- <a id="p100317"></a>термостат с диапазоном рабочих температур 28 °C - 55 °C, позволяющий поддерживать заданную температуру с допустимой погрешностью +/- 1 °C;
- <a id="p100318"></a>бриллиантовый зеленый;
- <a id="p100319"></a>желчь говяжья сухая или натуральная;
- <a id="p100320"></a>мясной экстракт;
- <a id="p100321"></a>нейтральный красный;
- <a id="p100322"></a>триптический гидролизат желатины;
- <a id="p100323"></a>триптоза;
- <a id="p100324"></a>феноловый красный;
- <a id="p100325"></a>ферментативный перевар животных тканей;
- <a id="p100326"></a>ферментативный перевар казеина;
- <a id="p100327"></a>ферментативный перевар молока и животных протеинов;
- <a id="p100328"></a>дрожжевой экстракт.

<a id="p100329"></a>8 Отбор и подготовка проб

<a id="p100330"></a>Отбор и подготовка проб по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669.
<a id="p100331"></a>Важно, чтобы для испытания поступила представительная проба, не поврежденная и не измененная в ходе транспортировки или хранения.

<a id="p100332"></a>9 Проведение испытания

<a id="p100333"></a>Схема проведения испытания приведена в приложении А.

#### <a id="p100334"></a>9.1 Метод выявления колиформных бактерий


##### <a id="p100335"></a>9.1.1 Навеска и исходное разведение

<a id="p100336"></a>Отбор навесок и приготовление исходного разведения - по ГОСТ 26669.

##### <a id="p100337"></a>9.1.2 Инокуляция и инкубация

<a id="p100338"></a>9.1.2.1 В зависимости от требуемых пределов выявления x см3 жидкой пробы или x см3 исходной суспензии при использовании других продуктов переносят в пробирку, содержащую 10 см3 обогатительной селективной среды двойной концентрации [см. таблицы 1а, 2а, 3а], когда , или в пробирку, содержащую 10 см3 обогатительной селективной среды нормальной концентрации [см. таблицы 1б, 2б, 3б], если
<a id="p100339"></a>При испытании высококислотных продуктов для предотвращения резкого снижения pH (на 0,5 и более) питательных сред после внесения в них продукта или его разведения pH питательных сред доводят до допустимых значений с помощью стерильного раствора гидроокиси натрия, приготовленного по ГОСТ 10444.1, или при приготовлении питательных сред pH устанавливают выше заданного с учетом его последующего снижения при внесении продукта. Количество добавляемого стерильного раствора гидроокиси натрия или величину, на которую необходимо увеличить pH при приготовлении питательных сред, устанавливают опытным путем.
<a id="p100340"></a>Допускается доводить pH до нейтрального значения с помощью стерильного раствора гидроокиси натрия в самом высококислотном продукте.
<a id="p100341"></a>9.1.2.2 Пробирки с посевами в среду двойной концентрации (см. 9.1.2.1) инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 2) ч.
<a id="p100342"></a>9.1.2.3 Пробирки с посевами в среду нормальной концентрации (см. 9.1.2.1) инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 2) ч. Если нет образования газа или помутнения, затрудняющего выявление газа, продолжают инкубацию еще (24 +/- 2) ч.

##### <a id="p100343"></a>9.1.3 Подтверждение

<a id="p100344"></a>9.1.3.1 Из пробирок (см. 9.1.2.2) после инкубации инокулируют петлей подтверждающую среду нормальной концентрации (см. 6.1 - 6.4). Посевы инкубируют в термостате при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 2) ч, если нет образования газа, то продолжают наблюдение до (48 +/- 2) ч.
<a id="p100345"></a>В качестве арбитражной среды используют бриллиантовый зеленый лактозный желчный бульон.
<a id="p100346"></a>9.1.3.2 Повторяют процедуру, описанную в 9.1.3.1, для пробирок после инкубации по 9.1.2.3, в которых отмечено образование газа или помутнение, препятствующее выявлению образования газа, после (24 +/- 2) ч или после (48 +/- 2) ч инкубирования.

##### <a id="p100347"></a>9.1.4 Оценка результатов

<a id="p100348"></a>Возможные случаи оценки результатов приведены в приложении А.
<a id="p100349"></a>Пробирки по 9.1.3.1 или 9.1.3.2, в которых отмечено образование газа после (24 +/- 2) ч или после (48 +/- 2) ч, считают положительными.
<a id="p100350"></a>При выявлении колиформных бактерий отмечают присутствие их в навеске x г или x см3 продукта.

#### <a id="p100351"></a>9.2 Метод НВЧ - определение количества колиформных бактерий

<a id="p100352"></a>При определении количества колиформных бактерий по методу НВЧ высевают не менее трех последовательных навесок продукта и (или) его разведений, отличающихся по количеству продукта в них в 10 раз.

##### <a id="p100353"></a>9.2.1 Навеска, исходная суспензия и разведения

<a id="p100354"></a>Отбор навесок, приготовление исходного разведения и десятикратных разведений проводят по ГОСТ 26669.
<a id="p100355"></a>Готовят достаточное число разведений по ГОСТ 26669, гарантируя, что все пробирки, соответствующие конечному разведению, покажут отрицательный результат.

##### <a id="p100356"></a>9.2.2 Инокуляция и инкубация

<a id="p100357"></a>9.2.2.1 Используют три пробирки для каждой навески продукта и (или) его разведения.
<a id="p100358"></a>9.2.2.2 Стерильной пипеткой переносят в каждую из трех пробирок с одной из селективных обогатительных сред двойной концентрации [см. таблицы 1а, 2а, 3а] 10 см3 пробы, если она жидкая, или 10 см3 исходной суспензии в случае других продуктов.
<a id="p100359"></a>Каждую навеску продукта в трехкратной повторности высевают в среду двойной концентрации в пробирки размером 20 х 200 мм.
<a id="p100360"></a>Соотношение между количеством высеваемого продукта и питательной средой двойной концентрации 1:1.
<a id="p100361"></a>9.2.2.3 Другой стерильной пипеткой переносят в каждую из трех пробирок с одной из селективных обогатительных сред нормальной концентрации [см. таблицы 1б), 2б), 3б)] 1 см3 пробы, если продукт жидкий, или 1 см3 исходной суспензии в случае других продуктов.
<a id="p100362"></a>Каждую навеску продукта и (или) его разведения в трехкратной повторности высевают в пробирки размером 16 х 160 мм.
<a id="p100363"></a>Соотношение между количеством высеваемого продукта или его разведением и питательной средой 1:10.
<a id="p100364"></a>9.2.2.4 Каждое последующее разведение высевают в соответствии с 9.2.2.3, используя новую стерильную пипетку. Осторожно перемешивают инокулум и среду.
<a id="p100365"></a>9.2.2.5 Пробирки с посевами в среду двойной концентрации (см. 9.2.2.2) инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 2) ч.
<a id="p100366"></a>9.2.2.6 Пробирки с посевами в среду нормальной концентрации (см. 9.2.2.3 и 9.2.2.4) инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 2) ч. Если нет образования газа и/или помутнения, препятствующего выявлению образования газа, продолжают инкубирование еще (24 +/- 2) ч.

##### <a id="p100367"></a>9.2.3 Подтверждение

<a id="p100368"></a>9.2.3.1 Из каждой пробирки после инкубации по 9.2.2.5 инокулируют петлей подтверждающую среду (6.1б - 6.4б). Посевы инкубируют в термостате при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 2) ч. Если нет образования газа и/или помутнения, то продолжают инкубирование еще (24 +/- 2) ч.
<a id="p100369"></a>В качестве арбитражной среды используют бриллиантовый зеленый лактозный желчный бульон.
<a id="p100370"></a>9.2.3.2 Повторяют процедуру, описанную в 9.2.3.1 для пробирок после инкубации по 9.2.2.6, показавших образование газа или помутнение после (24 +/- 2) ч или после (48 +/- 2) ч.
<a id="p100371"></a>Допускается не проводить пересев на жидкую подтверждающую среду при явном газообразовании на жидких средах нормальной концентрации, считая при этом эти посевы положительными.

##### <a id="p100372"></a>9.2.4 Оценка результатов

<a id="p100373"></a>Возможные случаи оценки результатов приведены в приложении А.
<a id="p100374"></a>Для каждой навески продукта и/или его разведения подсчитывают число пробирок, в которых обнаружено образование газа (положительные пробирки) после (24 +/- 2) ч и (если использовали) после (48 +/- 2) ч.

##### <a id="p100375"></a>9.2.5 Подсчет и выражение результатов

<a id="p100376"></a>Подсчитывают наиболее вероятное число исходя из числа положительных пробирок в каждой навеске продукта и/или его разведении. По ГОСТ 26670 определяют НВЧ колиформных бактерий в 1 г или 1 см3 продукта.

#### <a id="p100377"></a>9.3 Метод определения количества колиформных бактерий - подсчет колоний


##### <a id="p100378"></a>9.3.1 Навеска и исходное разведение

<a id="p100379"></a>Отбор навесок и приготовление исходного разведения - по ГОСТ 26669.

##### <a id="p100380"></a>9.3.2 Инокуляция и инкубация

<a id="p100381"></a>9.3.2.1 Для посева жидкого продукта и/или каждого разведения используют две параллельные чашки Петри. Переносят стерильной пипеткой 1 см3 жидкого продукта или соответствующего разведения в центр каждой чашки. При посеве жидкого продукта и/или каждого разведения в чашку Петри используют отдельную стерильную пипетку.
<a id="p100382"></a>9.3.2.2 В каждую чашку Петри (9.3.2.1) наливают около 15 см3 одной из сред (6.5 - 6.7) температурой 44 °C - 47 °C. Время, прошедшее между посевом продукта и/или его разведения в чашку Петри и заливкой среды, не должно превышать 15 мин.
<a id="p100383"></a>Аккуратно перемешивают инокулят со средой и оставляют смесь для застывания, для этого чашки Петри помещают на холодную горизонтальную поверхность.
<a id="p100384"></a>В качестве арбитражной среды используют VRBL-агар.
<a id="p100385"></a>Параллельно для контроля стерильности агаризованной среды в стерильную чашку Петри наливают приблизительно 15 см3 среды и инкубируют вместе с посевами.
<a id="p100386"></a>9.3.2.3 После застывания среды в чашках Петри на ее поверхность наливают около 4 см3 использованной агаризованной среды (6.5 - 6.7) температурой 44 °C - 47 °C для создания второго слоя. Добавленная среда должна затвердеть, как описано в 9.3.2.2.
<a id="p100387"></a>9.3.2.4 При определении колиформных бактерий посевом на агаризованные селективно-диагностические среды (6.5 - 6.7) по 0,1 или 0,2 см3 навески продукта или его разведения наносят на поверхность одной из этих сред, разлитых в две параллельные чашки Петри. Подготовку чашек Петри со средой к посеву и посев проводят по ГОСТ 26670.
<a id="p100388"></a>При применении метода мембранных фильтров по ГОСТ 26670 фильтры переносят на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды, избегая образования пузырьков воздуха между средой и фильтром. Поверхность фильтра с осевшими на ней бактериями должна быть обращена вверх.
<a id="p100389"></a>При посеве методом мембранных фильтров подсчитывают количество колоний и в том случае, если их менее 15.
<a id="p100390"></a>9.3.2.5 Переворачивают крышкой вниз приготовленные чашки по 9.3.2.3 и 9.3.2.4 и инкубируют в термостате при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 2) ч.

##### <a id="p100391"></a>9.3.3 Подсчет количества колоний

<a id="p100392"></a>После инкубации по 9.3.2.5 отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 колоний. Посевы просматривают и отмечают рост типичных и атипичных колоний.
<a id="p100393"></a>На VRBL-агаре типичные колонии колиформных бактерий пурпурно-красные диаметром не менее 0,5 мм, иногда окружены красноватой зоной преципитата (осадка) желчи.
<a id="p100394"></a>На агаре с бриллиантовым зеленым и феноловым красным типичные колонии колиформных бактерий зеленоватые, окруженные яркой желто-зеленой зоной.
<a id="p100395"></a>На среде Эндо типичные колонии колиформных бактерий от розового до красного цвета, часто с металлическим блеском.
<a id="p100396"></a>Атипичные колонии отличаются от типичных по цвету и размеру. К атипичным относят также все типичные колонии, выросшие в результате ферментации сахаров, за исключением лактозы, содержащихся в пищевых продуктах. Такие колонии не будут принадлежать к колиформным бактериям.
<a id="p100397"></a>Подсчитывают на агаризованных средах отдельно количество типичных и атипичных колоний.

##### <a id="p100398"></a>9.3.4 Подтверждение принадлежности бактерий из колоний к колиформным бактериям

<a id="p100399"></a>Отбирают не менее чем по пять атипичных и типичных колоний. Каждую отобранную колонию пересевают в пробирки с одной из жидких питательных сред, приготовленной по 6.1 - 6.4.
<a id="p100400"></a>В качестве арбитражной среды используют лактозный бульон с бриллиантовым зеленым и желчью.
<a id="p100401"></a>Рост с газообразованием при температуре (37 +/- 1) °C в течение 24 ч указывает на принадлежность бактерий из атипичных и типичных колоний к колиформным.

##### <a id="p100402"></a>9.3.5 Подсчет и выражение результатов

<a id="p100403"></a>Если при подтверждении типичных или атипичных колоний в 80% случаев, то есть не менее чем из пяти колоний, подтвержден рост колиформных бактерий, то считают, что все колонии, выросшие на чашке Петри (см. 9.3.3), принадлежат к колиформным бактериям. В остальных случаях количество колиформных бактерий определяют исходя из процентного отношения подтвержденных колоний к общему количеству колоний, взятых для подтверждения.
<a id="p100404"></a>Пересчет количества колиформных бактерий, определенного посевом в или на агаризованные среды, на 1 г (см3) продукта проводят по ГОСТ 26670.
<a id="p100405"></a>Результаты определения количества колиформных бактерий и выявления их в определенной навеске продукта записывают по ГОСТ 26670.
<a id="p100406"></a>9.3.6 Допускается также выявление колиформных бактерий проводить посевом в или на агаризованную среду при условии, что навеску продукта, в которой предусматривается выявление, возможно посеять по этому методу.
<a id="p100407"></a>При выявлении колиформных бактерий посевом в или на агаризованную среду подсчета количества колоний не проводят.

<a id="p100408"></a>10 Дополнительное подтверждение принадлежности выявленных бактерий к колиформным бактериям

<a id="p100409"></a>10.1 При необходимости для дополнительного подтверждения принадлежности бактерий, выросших на жидких средах (там, где отмечено газообразование), к колиформным бактериям делают пересевы по ГОСТ 26670 на поверхность одной из агаризованных селективно-диагностических сред (6.5 - 6.7). Посевы инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 3) ч. После термостатирования отмечают рост типичных и атипичных колоний.
<a id="p100410"></a>10.2 Для дополнительного подтверждения принадлежности выросших бактерий к колиформным бактериям отбирают не менее чем по пять типичных и атипичных колоний из чашек Петри с посевами по 9.3.3.
<a id="p100411"></a>Атипичные колонии отбирают те, в которых подтверждено наличие колиформных бактерий посевом в жидкую подтверждающую среду.
<a id="p100412"></a>10.3 Каждую отобранную для подтверждения колонию пересевают на поверхность скошенного питательного агара по 6.9 или 6.10, посевы термостатируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 3) ч.
<a id="p100413"></a>Принадлежность к колиформным бактериям определяют по отношению к окраске по Граму, по отсутствию оксидазы, по ферментации лактозы на среде Гисса.

##### <a id="p100414"></a>10.3.1 Окраска по Граму

<a id="p100415"></a>Приготовление мазков из культур, выросших на скошенной поверхности питательного агара, и окраску их по Граму проводят по ГОСТ 30425. Колиформные бактерии являются грамотрицательными палочками.
<a id="p100416"></a>Допускается окраску по Граму заменять тестом Грегорсена, для этого на предметном стекле в капле 3% водного раствора калия гидроокиси эмульгируют культуру микроорганизмов, взятую из колонии с плотной среды. Если через несколько секунд взвесь ослизняется и за петлей тянутся слизистые нити, то это указывает на принадлежность испытуемой культуры к грамотрицательному виду. У грамположительных бактерий слизистых нитей не образуется.

##### <a id="p100417"></a>10.3.2 Определение отсутствия оксидазы

<a id="p100418"></a>Определение отсутствия оксидазы проводят по ГОСТ 29184.
<a id="p100419"></a>Для определения оксидазы допускается использование дисков и растворов промышленного производства, зарегистрированных на территории государства, принявшего стандарт. Для контроля качества дисков и растворов используют музейные оксидазоположительные и оксидазоотрицательные культуры.

##### <a id="p100420"></a>10.3.3 Определение ферментации лактозы

<a id="p100421"></a>Для определения ферментации лактозы испытуемую культуру высевают уколом в среду Гисса с лактозой.
<a id="p100422"></a>Посевы термостатируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 3) ч.
<a id="p100423"></a>Колиформные бактерии ферментируют лактозу с образование кислоты (цвет среды меняется) и газа.
<a id="p100424"></a>10.4 По результатам дополнительного подтверждения к колиформным бактериям относят аэробные и факультативно-анаэробные не образующие спор грамотрицательные оксидазоотрицательные палочки, сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа.

<a id="p100425"></a>11 Протокол испытания

<a id="p100426"></a>Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.
<a id="p100427"></a>Протокол испытания должен включать:
- <a id="p100428"></a>всю информацию, необходимую для полной идентификации продукта;
- <a id="p100429"></a>используемый метод в соответствии с настоящим стандартом;
- <a id="p100430"></a>все детали испытания, не установленные этим стандартом;
- <a id="p100431"></a>полученный(е) результат(ы).





<a id="p100432"></a>Приложение А
(справочное)

<a id="p100433"></a>**СХЕМА ВЫЯВЛЕНИЯ КОЛИФОРМНЫХ БАКТЕРИЙ**



<a id="p100435"></a>Рисунок А.1





<a id="p100436"></a>Приложение ДА
(справочное)

<a id="p100437"></a>**СРАВНЕНИЕ СТРУКТУРЫ НАСТОЯЩЕГО СТАНДАРТА СО СТРУКТУРАМИ**
**ПРИМЕНЕННЫХ В НЕМ МЕЖДУНАРОДНЫХ СТАНДАРТОВ**

<a id="p100438"></a>ДА.1 Сравнение структуры настоящего стандарта со структурой ISO 4831:2006 приведено в таблице ДА.1.

<a id="p100439"></a>Таблица ДА.1


<table>
<colgroup><col width="18%"><col width="14%"><col width="18%"><col width="19%"><col width="14%"><col width="18%"></colgroup>
<tr><td colspan="3"><a id="p100440"></a>Структура международного стандарта ISO 4831:2006</td><td colspan="3"><a id="p100441"></a>Структура настоящего стандарта</td></tr>
<tr><td><a id="p100442"></a>Раздел</td><td><a id="p100443"></a>Пункты</td><td><a id="p100444"></a>Подпункты</td><td><a id="p100445"></a>Раздел</td><td><a id="p100446"></a>Пункты</td><td><a id="p100447"></a>Подпункты</td></tr>
<tr><td><a id="p100448"></a>1 Область распространения</td><td><a id="p100449"></a>-</td><td><a id="p100450"></a>-</td><td><a id="p100451"></a>1 Область применения</td><td><a id="p100452"></a>-</td><td><a id="p100453"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100454"></a>2 Нормативные ссылки</td><td><a id="p100455"></a>-</td><td><a id="p100456"></a>-</td><td><a id="p100457"></a>2 Нормативные ссылки</td><td><a id="p100458"></a>-</td><td><a id="p100459"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100460"></a>3 Термины и определения</td><td><a id="p100461"></a>3.1 - 3.3</td><td><a id="p100462"></a>-</td><td><a id="p100463"></a>3 Термины и определения</td><td><a id="p100464"></a>3.1 - 3.3</td><td><a id="p100465"></a>3.3.2</td></tr>
<tr><td><a id="p100466"></a>4 Сущность метода</td><td><a id="p100467"></a>4.1 - 4.2</td><td><a id="p100468"></a>4.1.1 - 4.1.3, 4.2.1 - 4.2.6</td><td><a id="p100469"></a>4 Методы выявления колиформных бактерий и определение количества по методу НВЧ</td><td><a id="p100470"></a>4.1, 4.2</td><td><a id="p100471"></a>4.1.1 - 4.1.3, 4.2.1 - 4.2.5</td></tr>
<tr><td><a id="p100472"></a>5 Питательные среды и разведения</td><td><a id="p100473"></a>5.1 - 5.4</td><td><a id="p100474"></a>-</td><td><a id="p100475"></a>6 Питательные среды и реактивы</td><td><a id="p100476"></a>6.1 - 6.14</td><td><a id="p100477"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100478"></a>6 Аппаратура и посуда</td><td><a id="p100479"></a>6.1 - 6.7</td><td><a id="p100480"></a>-</td><td><a id="p100481"></a>7 Аппаратура, посуда, материалы и реактивы</td><td><a id="p100482"></a>-</td><td><a id="p100483"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100484"></a>7 Отбор проб</td><td><a id="p100485"></a>-</td><td><a id="p100486"></a>-</td><td rowspan="2"><a id="p100487"></a>8 Отбор и подготовка проб</td><td rowspan="2"><a id="p100488"></a>-</td><td rowspan="2"><a id="p100489"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100490"></a>8 Приготовление проб</td><td></td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100491"></a>9 Испытание</td><td><a id="p100492"></a>9.1, 9.2</td><td><a id="p100493"></a>9.1.1 - 9.1.4, 9.2.1 - 9.2.4</td><td><a id="p100494"></a>9 Проведение испытания</td><td><a id="p100495"></a>9.1, 9.2</td><td><a id="p100496"></a>9.1.1 - 9.1.4, 9.2.1 - 9.2.5</td></tr>
<tr><td><a id="p100497"></a>10 Подсчет и выражение результатов</td><td><a id="p100498"></a>-</td><td><a id="p100499"></a>-</td><td><a id="p100500"></a>10 Дополнительное подтверждение принадлежности выявленных бактерий к колиформным бактериям</td><td><a id="p100501"></a>10.1 - 10.4</td><td><a id="p100502"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100503"></a>11 Точность</td><td><a id="p100504"></a>-</td><td><a id="p100505"></a>-</td><td><a id="p100506"></a>-</td><td><a id="p100507"></a>-</td><td><a id="p100508"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100509"></a>12 Протокол испытания</td><td><a id="p100510"></a>-</td><td><a id="p100511"></a>-</td><td><a id="p100512"></a>11 Протокол испытания</td><td><a id="p100513"></a>-</td><td><a id="p100514"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100515"></a>Приложение А</td><td><a id="p100516"></a>-</td><td><a id="p100517"></a>-</td><td><a id="p100518"></a>Приложение А (справочное)</td><td><a id="p100519"></a>-</td><td><a id="p100520"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100521"></a>-</td><td><a id="p100522"></a>-</td><td><a id="p100523"></a>-</td><td><a id="p100524"></a>Приложение ДА (справочное)</td><td><a id="p100525"></a>-</td><td><a id="p100526"></a>-</td></tr>
</table>


<a id="p100527"></a>Б.2 Сравнение структуры настоящего стандарта со структурой ISO 4832:2006 приведено в таблице ДА.2.

<a id="p100528"></a>Таблица ДА.2


<table>
<colgroup><col width="18%"><col width="14%"><col width="17%"><col width="20%"><col width="14%"><col width="18%"></colgroup>
<tr><td colspan="3"><a id="p100529"></a>Структура международного стандарта ISO 4832:2006</td><td colspan="3"><a id="p100530"></a>Структура настоящего стандарта</td></tr>
<tr><td><a id="p100531"></a>Раздел</td><td><a id="p100532"></a>Пункты</td><td><a id="p100533"></a>Подпункты</td><td><a id="p100534"></a>Раздел</td><td><a id="p100535"></a>Пункты</td><td><a id="p100536"></a>Подпункты</td></tr>
<tr><td><a id="p100537"></a>1 Область распространения</td><td><a id="p100538"></a>-</td><td><a id="p100539"></a>-</td><td><a id="p100540"></a>1 Область применения</td><td><a id="p100541"></a>-</td><td><a id="p100542"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100543"></a>2 Нормативные ссылки</td><td><a id="p100544"></a>-</td><td><a id="p100545"></a>-</td><td><a id="p100546"></a>2 Нормативные ссылки</td><td><a id="p100547"></a>-</td><td><a id="p100548"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100549"></a>3 Термины и определения</td><td><a id="p100550"></a>3.1</td><td><a id="p100551"></a>-</td><td><a id="p100552"></a>3 Термины и определения</td><td><a id="p100553"></a>3.1 - 3.3</td><td><a id="p100554"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100555"></a>4 Сущность метода посева в агаризованную среду</td><td><a id="p100556"></a>4.1 - 4.4</td><td><a id="p100557"></a>-</td><td><a id="p100558"></a>5 Методы определения количества колиформных бактерий - подсчет колоний</td><td><a id="p100559"></a>5.1, 5.2</td><td><a id="p100560"></a>5.1.1 - 5.1.3, 5.2.1 - 5.2.3</td></tr>
<tr><td><a id="p100561"></a>5 Питательные среды и разведения</td><td><a id="p100562"></a>5.1 - 5.4</td><td><a id="p100563"></a>-</td><td><a id="p100564"></a>6 Питательные среды и реактивы</td><td><a id="p100565"></a>6.1 - 6.14</td><td><a id="p100566"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100567"></a>6 Аппаратура и посуда</td><td><a id="p100568"></a>6.1 - 6.11</td><td><a id="p100569"></a>-</td><td><a id="p100570"></a>7 Аппаратура, посуда, материалы и реактивы</td><td><a id="p100571"></a>-</td><td><a id="p100572"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100573"></a>7 Отбор проб</td><td><a id="p100574"></a>-</td><td><a id="p100575"></a>-</td><td rowspan="2"><a id="p100576"></a>8 Отбор и подготовка проб</td><td rowspan="2"><a id="p100577"></a>-</td><td rowspan="2"><a id="p100578"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100579"></a>8 Подготовка проб</td><td><a id="p100580"></a>-</td><td><a id="p100581"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100582"></a>9 Испытание с подтверждением принадлежности только атипичных колоний к колиформным бактериями</td><td><a id="p100583"></a>9.1 - 9.4</td><td><a id="p100584"></a>9.2.1 - 9.2.4</td><td><a id="p100585"></a>9 Проведение испытания</td><td><a id="p100586"></a>9.3</td><td><a id="p100587"></a>9.3.1 - 9.3.6</td></tr>
<tr><td><a id="p100588"></a>10 Выражение результатов</td><td><a id="p100589"></a>-</td><td><a id="p100590"></a>-</td><td><a id="p100591"></a>10 Дополнительное подтверждение принадлежности выявленных бактерий к колиформным бактериям</td><td><a id="p100592"></a>10.1 - 10.4</td><td><a id="p100593"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100594"></a>11 Точность</td><td><a id="p100595"></a>-</td><td><a id="p100596"></a>-</td><td><a id="p100597"></a>-</td><td><a id="p100598"></a>-</td><td><a id="p100599"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100600"></a>12 Протокол испытания</td><td><a id="p100601"></a>-</td><td><a id="p100602"></a>-</td><td><a id="p100603"></a>11 Протокол испытания</td><td><a id="p100604"></a>-</td><td><a id="p100605"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100606"></a>-</td><td><a id="p100607"></a>-</td><td><a id="p100608"></a>-</td><td><a id="p100609"></a>Приложение А</td><td><a id="p100610"></a>-</td><td><a id="p100611"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100612"></a>-</td><td><a id="p100613"></a>-</td><td><a id="p100614"></a>-</td><td><a id="p100615"></a>Приложение ДА (справочное)</td><td><a id="p100616"></a>-</td><td><a id="p100617"></a>-</td></tr>
</table>







<table>
<colgroup><col width="41%"><col width="26%"><col width="11%"><col width="21%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100621"></a>УДК 663/.664:543.9:006.354</td><td><a id="p100622"></a>МКС 07.100.30</td><td><a id="p100623"></a>Н09</td><td><a id="p100624"></a>MOD</td></tr>
<tr><td colspan="4"><a id="p100625"></a>Ключевые слова: колиформные бактерии, колониеобразующие единицы (КОЕ, типичные и атипичные колонии, питательные среды, инкубирование посевов, оксидаза, окраска по Граму, наиболее вероятное число (НВЧ)</td></tr>
</table>




<a id="p100618"></a>

---



## Иллюстрации

$1\text{см}^{3}<x \leq 10\text{см}^{3}$

$x \leq 1\text{см}^{3}.$

![](https://i.bukva.ai/aZMzyVLn/img_0.png)