--- title: "Без названия" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/bez-nazvaniya-487" --- ## Без названия # Документ 4642 > [!NOTE] > ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ ```mermaid flowchart LR n0["ГОСТ Р 52830-2007"]:::rst click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-r-52830-2007" "ГОСТ Р 52830-2007. Национальный стандарт Российской Федерации. Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий... (утв. " n1["ГОСТ 31708-2012"]:::doc n0 --> n1 classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000; classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000; classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000; ```
Введен в действие
Приказом Федерального агентства
по техническому регулированию
и метрологии
от 29 ноября 2012 г. N 1761-ст
**МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ** **МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ** **МЕТОД ОБНАРУЖЕНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ПРЕЗУМПТИВНЫХ** **БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI** **МЕТОД НАИБОЛЕЕ ВЕРОЯТНОГО ЧИСЛА** Microbiology of food and stuffs. Method for the detection and enumeration of presumptive Escherichia coli. Most probable number technique **(ISO 7251:2005, MOD)** **ГОСТ 31708-2012** **(ISO 7251:2005)** **МКС 67.040**
65.120 Дата введения
1 июля 2013 года
### Предисловие Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены". ### Сведения о стандарте 1. Подготовлен Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации (ОАО "ВНИИС") совместно с Государственным учреждением "Ярославская государственная испытательная лаборатория молочного сырья и продукции" на основе аутентичного перевода стандарта, указанного в пункте 4. 2. Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (ТК 335). 3. Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (Протокол N 51 от 1 октября 2012 г.).
За принятие проголосовали:
| Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации | | --- | --- | --- | | Армения | AM | Минэкономразвития Республики Армения | | Беларусь | BY | Госстандарт Республики Беларусь | | Казахстан | KZ | Госстандарт Республики Казахстан | | Кыргызстан | KG | Кыргызстандарт | | Молдова | MD | Молдова-Стандарт | | Российская Федерация | RU | Росстандарт | | Таджикистан | TJ | Таджикстандарт | 4. Настоящий стандарт модифицирован по отношению к международному стандарту ISO 7251:2005 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection and enumeration of presumptive Escherichia coli - Most probable number technique (Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа) путем изменения отдельных фраз (слов, значений показателей, ссылок), которые выделены в тексте курсивом. Международный стандарт разработан подкомитетом ISO/ТС 34/SC 9 "Микробиология" технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO). Перевод с английского языка (en). Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которых подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и межгосударственных стандартов, на которые даны ссылки, имеются в Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации.
Степень соответствия - модифицированная (MOD).
Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 52830-2007. 5. Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. N 1761-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31708-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г. 6. Введен впервые. Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта публикуется в указателе "Национальные стандарты". Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в указателе "Национальные стандарты", а текст изменений - в информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована в информационном указателе "Национальные стандарты". ### 1. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ Настоящий стандарт устанавливает метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli методом культивирования в жидких питательных средах и расчета наиболее вероятного числа (НВЧ) после инкубации при температуре 37 °C и 44 °C. Настоящий стандарт применяют при исследовании продуктов, предназначенных для употребления в пищу человеком и для кормления животных, а также образцов окружающей среды в местах производства и оборота пищевых продуктов. *Примечание.* Некоторые патогенные штаммы Escherichia coli не растут при температуре 44 °C. ### 2. НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты: ГОСТ ISO 7218-2011 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям ГОСТ ISO 11133-1-2011 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории ГОСТ ISO 11133-2-2011 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред ГОСТ 26668-85 Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов
ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов
*Примечание.* При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю "Национальные стандарты", составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку. ### 3. ТЕРМИНЫ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями: 3.1. Презумптивная Escherichia coli (presumptive Escherichia coli): бактерия, ферментирующая при температуре 44 °C лактозу с образованием газа и образующая индол из триптофана при проведении опыта в соответствии с методом, указанным в настоящем стандарте. 3.2. Количество презумптивных бактерий Escherichia coli: наиболее вероятное число E. coli в см3 или г образца при условии проведения опыта в соответствии с методом, указанным в настоящем стандарте. ### 4. ПРИНЦИП МЕТОДА #### 4.1 Метод качественного определения 4.1.1. Определенное количество первичного разведения образца вносят в пробирку с жидкой селективной обогатительной средой. 4.1.2. Пробирку инкубируют до 48 ч при температуре 37 °C. Для обнаружения газообразования пробирку проверяют через 24 и 48 ч инкубации. 4.1.3. При обнаружении затемнения, образования хлопьев или вспенивания среды проводят пересев в пробирку с жидкой селективной средой (ЕС-бульон). 4.1.4. После пересева согласно 4.1.3 пробирку инкубируют до 48 ч при температуре 44 °C. Для обнаружения газообразования пробирку проверяют через 24 и 48 ч инкубации. 4.1.5. При обнаружении вспенивания среды в пробирке после инкубации согласно 4.1.4 проводят пересев в пробирку с безиндольной пептонной водой. 4.1.6. После пересева согласно 4.1.5 пробирку инкубируют до 48 ч при температуре 44 °C. Пробирку проверяют для обнаружения образования индола при распаде триптофана в составе пептона. 4.1.7. Пробирки с затемнением, образованием хлопьев или газообразованием в жидкой селективной обогатительной среде (см. 4.1.1), при пересеве из которых в ЕС-бульон обнаружилось газообразование и образование индола в пептонной воде при температуре 44 °C, расценивают как содержащие презумптивную Escherichia coli. Результат выражается как "презумптивная Escherichia coli обнаружена" или "презумптивная Escherichia coli не обнаружена (отсутствует)" в граммах или см3 продукта. #### 4.2 Метод количественного определения 4.2.1. Определенное количество первичного разведения образца вносят в три пробирки с жидкой селективной обогатительной средой двойной концентрации. 4.2.2. Определенное количество первичного разведения образца вносят в три пробирки с жидкой обогатительной средой одинарной концентрации. Затем в аналогичных условиях определенные количества десятикратного разведения образца вносят в другие три пробирки с жидкой обогатительной средой одинарной концентрации. 4.2.3. Пробирки со средами двойной и одинарной концентрации инкубируют до 48 ч при температуре 37 °C. После 24 и 48 ч инкубации пробирки исследуют для обнаружения газообразования. 4.2.4. Из каждой пробирки со средой двойной концентрации, в которой обнаружено затемнение, образование хлопьев или вспенивание среды, а также из каждой пробирки со средой одинарной концентрации, в которой обнаружено вспенивание, осуществляют пересев в пробирку с жидкой селективной средой (ЕС-бульон). 4.2.5. После пересева согласно 4.2.4 пробирки инкубируют до 48 ч при температуре 44 °C. Для обнаружения газообразования пробирки проверяют через 24 и 48 ч инкубации. 4.2.6. При обнаружении вспенивания среды в пробирках после инкубации согласно 4.2.5 проводят пересев из них в пробирки с безиндольной пептонной водой. 4.2.7. После пересева согласно 4.2.6 пробирку инкубируют до 48 ч при температуре 44 °C. Пробирки проверяют для обнаружения образования индола при распаде триптофана в составе пептона. 4.2.8. Наиболее вероятное число Escherichia coli рассчитывают с помощью таблицы НВЧ (Приложение А), в зависимости от числа пробирок с селективной обогатительной средой одинарной и двойной концентрации, при пересеве из которых в ЕС-бульон обнаружилось газообразование и образование индола в пептонной воде при температуре 44 °C. ### 5. РАЗВЕДЕНИЕ, ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ И РЕАКТИВЫ Для текущей лабораторной практики применяют ГОСТ ISO 7218. #### 5.1 Разведения В общем случае согласно ГОСТ ISO 7218, для молочных продуктов - [1]. #### 5.2 Селективная обогатительная среда (бульон с лаурилсульфатом) ##### 5.2.1 Состав среды - в соответствии с таблицей 1. Таблица 1 | Состав среды | a)
Для среды двойной концентрации | b)
Для среды одинарной концентрации | | --- | --- | --- | | Ферментативный перевар растительных и животных тканей, г | 40,0 | 20,0 | | Лактоза, г | 10,0 | 5,0 | | Моногидрофосфат калия | 5,5 | 2,75 | | Дигидрофосфат калия | 5,5 | 2,75 | | Хлорид натрия, г | 10,0 | 5,0 | | Лаурилсульфат натрия | 0,2 | 0,1 | | Вода, см3 | 1000 | 1000 | ##### 5.2.2 Приготовление среды Растворяют компоненты среды или готовую дегидратированную питательную среду в воде, при необходимости подогревают. Устанавливают уровень pH, чтобы после стерилизации он соответствовал 6,8 +/- 0,2 при температуре 25 °C. Среду одинарной концентрации разливают по 9 см3 в пробирки 16 x 160 мм (см. 6.4) с пробирками-поплавками Дарема (Уленгута) (см. 6.6), среду двойной концентрации разливают по 10 см3 в пробирки 18 x 180 мм (см. 6.4) с пробирками-поплавками Дарема (Уленгута) (см. 6.6). Стерилизуют в автоклаве (см. 6.1) 15 мин при температуре 121 °C. После стерилизации пробирки-поплавки Дарема (Уленгута) не должны содержать пузырьков воздуха. #### 5.3 ЕС-бульон (селективная среда) ##### 5.3.1 Состав: ферментативный перевар казеина ................... 20,0 г; лактоза .......................................... 5,0 г; желчные соли N 3 [2] ............................. 1,5 г; моногидрофосфат калия (K HPO ) ................... 4,0 г; 2 4 дигидрофосфат калия (KH PO ) ..................... 1,5 г; 2 4 хлорид натрия .................................... 5,0 г; вода ............................................. 1000 см3. ##### 5.3.2 Приготовление среды Растворяют компоненты среды или готовую дегидратированную питательную среду в воде, при необходимости подогревают. Устанавливают уровень такой pH, чтобы после стерилизации он соответствовал 6,8 +/- 0,2 при температуре 25 °C. Среду разливают по 10 см3 в пробирки 16 x 160 мм (см. 6.4) с пробирками-поплавками Дарема (Уленгута) (см. 6.6). Стерилизуют в автоклаве (см. 6.1) 15 мин при температуре 121 °C. После стерилизации пробирки-поплавки Дарема (Уленгута) не должны содержать пузырьков воздуха. 5.3.3. Проверка пригодности и обеспечение качества питательных сред согласно ГОСТ ISO 11133-1 и ГОСТ ISO 11133-2. #### 5.4 Пептонная вода безиндольная ##### 5.4.1 Состав: ферментативный перевар казеина .................. 10,0 г; хлорид натрия ................................... 5,0 г; вода ............................................ 1000 см3. 5.4.2. Растворяют компоненты среды или готовую дегидратированную питательную среду в воде, при необходимости подогревают. Доводят pH, если необходимо, до такого значения, чтобы после стерилизации оно составляло (7,3 +/- 0,2) при температуре 25 °C. Среду разливают по 5 - 10 см3 в пробирки 16 x 160 мм (см. 6.4). Стерилизуют в автоклаве (см. 6.1) 15 мин при температуре 121 °C. #### 5.5 Реактив для определения индола (реактив Ковача) ##### 5.5.1 Состав: 4-диметиламинобензальдегид ......................... 5,0 г; 2-метилбутан-1-ол или пентан-1-ол .................. 75,0 см3; соляная кислота (ро 1,18 - 1,19 г/см3) ........... 25,0 см3. 20 ##### 5.5.2 Приготовление реактива Растворяют 4-диметиламинобензальдегид в 2-метилбутан-1-оле или пентан-1-оле при нагревании на водяной бане, поддерживающей температуру от 50 °C до 55 °C. Охлаждают и добавляют соляную кислоту. Хранят реактив, защищенный от света, при температуре около 4 °C. Цвет реактива должен быть от светло-желтого до светло-коричневого. *Примечание.* Допускается использовать готовые коммерческие реактивы. ### 6. ОБОРУДОВАНИЕ И ЛАБОРАТОРНАЯ ПОСУДА *Примечание.* При одинаковой спецификации одноразовое оборудование предпочтительнее многоразового. Обычное лабораторное оборудование, а также следующее: #### 6.1 Стерилизаторы сухожаровые (печи) или паровые (автоклавы). 6.2. Термостат, поддерживающий температуру (37 +/- 1) °C и (44 +/- 1) °C. #### 6.3 Водяная баня, поддерживающая температуру (44 +/- 1) °C.
6.4. Пробирки размерами 16 x 160 мм и 18 x 180 мм или 20 x 200 мм.
6.5. Бактериологическая петля из платиноиридиевого или никельхромового сплава диаметром около 3 мм, вмещающая за один раз около 10 мм3 среды. 6.6. Пробирки-поплавки Дарема (Уленгута), свободно помещающиеся в пробирки (см. 6.4). #### 6.7 Пипетки с полным сливом номинальным объемом от 1 до 10 см3. 6.8. pH-метр с разрешением 0,01 единиц pH и точностью +/- 0,1 pH при температуре 25 °C. ### 7. ОТБОР ПРОБ В лабораторию направляют представительный образец. Образец не должен быть поврежден или изменен в процессе транспортирования или хранения. Отбор проб проводят в соответствии с ГОСТ 26668. Рекомендуется достижение соглашения заинтересованных сторон по отбору проб конкретного продукта при отсутствии соответствующего стандарта. ### 8. ПОДГОТОВКА ПРОБ Подготовку проб проводят в соответствии ГОСТ 26669. Рекомендуется достижение соглашения заинтересованных сторон по подготовке проб конкретного продукта при отсутствии соответствующего стандарта. ### 9. ПРОВЕДЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ #### 9.1 Метод качественного определения 9.1.1. Приготовление пробы и первичного разведения в зависимости от вида продукта согласно ГОСТ 26669, [3], [4], [5], [6] или [7]. Состав ЕС-бульона с лаурилсульфатом при определенной концентрации согласно таблице 1 a) и b). Добавляют 1 см3 первичного разведения к 9 см3 бульона с лаурилсульфатом одинарной концентрации (0,1 г или 0,1 см3 образца) или 10 см3 первоначального разведения к 10 см3 бульона с лаурилсульфатом двойной концентрации (1 г или 1 см3 образца). Для объемов пробы первичное разведение приготавливают добавлением 0,1 см3 или 0,1 г к 9 см3 разбавителя ([3], [4] или [7]), затем добавляют весь объем первичного разведения к 90 см3 бульона с лаурилсульфатом одинарной концентрации. Например, добавляют 5 см3 или 5 г образца к 45 см3 разбавителя и весь объем начальной суспензии вносят в 450 см3 бульона с лаурилсульфатом одинарной концентрации или вносят пробу в равный объем. ##### 9.1.2 Инкубация селективного обогатительного бульона (бульона с лаурилсульфатом) Инокулированный бульон с лаурилсульфатом одинарной или двойной концентрации (см. 5.2) инкубируют в термостате (см. 6.2) при температуре 37 °C в течение (24 +/- 2) ч. Если на этой стадии не обнаруживают ни газообразования, ни замутнения среды, затрудняющего определение газообразования, продолжают инкубацию до (48 +/- 2) ч. *Примечание.* Время инкубации проб живых моллюсков должно составлять (48 +/- 2) ч. При исследовании некоторых молочных продуктов (например, казеина) пробирки-поплавки Дарема могут застревать на дне пробирки с селективной обогатительной средой. Если после 48 ч инкубации в пробирке обнаруживают лишь помутнение без газообразования, то также осуществляют пересев в ЕС-бульон согласно 9.1.3. ##### 9.1.3 Инокуляция и инкубация селективной среды (ЕС-бульона) При обнаружении помутнения, выпадения осадка или видимого газообразования после инкубации (см. 9.1.2) селективной среды двойной концентрации или при обнаружении видимого газообразования после инкубации селективной среды одинарной концентрации с помощью бактериологической петли (см. 6.5) проводят пересев в пробирку с ЕС-бульоном. Инокулированный ЕС-бульон инкубируют на водяной бане (см. 6.3) или в термостате (см. 6.2) (24 +/- 2) ч при температуре 44 °C. Если на этой стадии не обнаруживают видимого газообразования в ЕС-бульоне (см. 5.3), то общее время инкубации продлевают до (48 +/- 2) ч. *Примечание.* Общее время инкубации проб живых моллюсков должно составлять (24 +/- 2) ч. ##### 9.1.4 Инокуляция и инкубация пептонной воды При обнаружении видимого газообразования после инкубации согласно 9.1.3 с помощью бактериологической петли (см. 6.5) производят пересев в пробирку с пептонной водой (см. 5.4), предварительно прогретой до температуры 44 °C. Инкубируют (48 +/- 2) ч при температуре 44 °C. ##### 9.1.5 Обнаружение образования индола В пробирку с пептонной водой (см. 5.4) после инкубации согласно 9.1.4 добавляют 0,5 см3 реактива на индол (см. 5.5). После интенсивного перемешивания через 1 мин проводят оценку реакции. Красное окрашивание в спиртовой фазе свидетельствует о наличии индола. ##### 9.1.6 Оценка результатов При обнаружении видимого газообразования в пробирке с ЕС-бульоном и образования индола в пробирке с пептонной водой (см. 9.1.2 - 9.1.4) селективную обогатительную среду оценивают как положительную (презумптивная Escherichia coli обнаружена). #### 9.2 Метод количественного определения 9.2.1. Приготовление пробы и первичного разведения в зависимости от вида продукта по ГОСТ 26669. Подготавливают достаточное число разведений, чтобы в максимальном разведении с уверенностью получить отрицательный результат. ##### 9.2.2 Инокуляция и инкубация селективного обогатительного бульона (бульона с лаурилсульфатом) 9.2.2.1. Подготавливают ряд последовательных разведений, по три пробирки на каждое разведение. Для проб живых моллюсков и некоторых других особых продуктов, а также для получения большей точности результатов необходимо использовать по пять пробирок на каждое разведение (см. Приложение А). 9.2.2.2. Берут три пробирки с селективной обогатительной средой двойной концентрации [см. таблицу 1 a)] и, используя стерильную пипетку (см. 6.7), в каждую пробирку вносят по 10 см3 первичного разведения. Таким образом, каждая пробирка этого ряда будет содержать по 1 г образца. 9.2.2.3. Берут три пробирки с селективной обогатительной средой одинарной концентрации [см. таблицу 1 b)] и, используя новую стерильную пипетку (см. 6.7), в каждую пробирку вносят по 1 см3 первичного разведения. Таким образом, каждая пробирка этого ряда будет содержать по 0,1 г образца. 9.2.2.4. Для каждого последующего разведения (соответствующего 0,01 г, 0,001 г и т.д. продукта на пробирку) повторяют процедуру, как в 9.2.2.3, используя для каждого разведения новую пипетку. Инокулят и среду тщательно перемешивают. 9.2.2.5. Инокулированные среды с лаурилсульфатом двойной по 9.2.2.1 или одинарной концентрации по 9.2.2.3 и 9.2.2.4 инкубируют в термостате (см. 6.2) при температуре 37 °C в течение (24 +/- 2) ч. Если на этой стадии не обнаруживают ни газообразования, ни замутнения среды, затрудняющего определение газообразования, продолжают инкубацию до (48 +/- 2) ч. *Примечание.* Время инкубации проб живых моллюсков должно составлять (48 +/- 2) ч. При исследовании некоторых молочных продуктов (например, казеина) пробирки-поплавки Дарема могут застревать на дне пробирки с селективной обогатительной средой. Если после 48 ч инкубации в пробирке обнаруживают лишь помутнение без газообразования, то также осуществляют пересев в ЕС-бульон согласно 9.2.3. ##### 9.2.3 Инокуляция и инкубация селективной среды (ЕС-бульона) 9.2.3.1. При обнаружении помутнения, выпадения осадка или видимого газообразования после инкубации селективной среды двойной концентрации [см. таблицу 1 a)] согласно 9.2.2.5 или при обнаружении видимого газообразования после инкубации селективной среды одинарной концентрации [см. таблицу 1 b)] согласно 9.2.2.5 с помощью бактериологической петли (см. 6.5) проводят пересев в пробирку с ЕС-бульоном (см. 5.3). 9.2.3.2. Инокулированный согласно 9.2.3.1 ЕС-бульон инкубируют на водяной бане (см. 6.3) или в термостате (см. 6.2) (24 +/- 2) ч при температуре 44 °C. Если на этой стадии не обнаруживают видимого газообразования в ЕС-бульоне (см. 5.3), то общее время инкубации продлевают до (48 +/- 2) ч. *Примечание.* Общее время инкубации проб живых моллюсков должно составлять (24 +/- 2) ч. ##### 9.2.4 Инокуляция и инкубация пептонной воды При обнаружении видимого газообразования после инкубации согласно 9.2.3.2 с помощью бактериологической петли (см. 6.5) производят пересев в пробирку с пептонной водой (см. 5.4), предварительно прогретой до температуры 44 °C. Инкубируют (48 +/- 2) ч при температуре 44 °C. ##### 9.2.5 Обнаружение образования индола В пробирку с пептонной водой (см. 5.4) после инкубации согласно 9.2.4 добавляют 0,5 см3 реактива на индол (см. 5.5). После интенсивного перемешивания через 1 мин проводят оценку реакции. Красное окрашивание в спиртовой фазе свидетельствует о наличии индола. ##### 9.2.6 Оценка результатов При обнаружении видимого газообразования в пробирке с ЕС-бульоном и образования индола в пробирке с пептонной водой (см. 9.2.2 - 9.2.4) селективную обогатительную среду оценивают как положительную (презумптивная Escherichia coli обнаружена). Для каждого разведения определяют число положительных результатов для среды двойной концентрации [см. таблицу 1 a)] и одинарной концентрации [см. таблицу 1 b)]. ### 10. РЕЗУЛЬТАТЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ #### 10.1 Метод качественного определения Исходя из оценки результатов (см. 9.1.6), конечный результат определения выражают как "презумптивная Escherichia coli обнаружена" или "не обнаружена (отсутствует)" в данном объеме пробы, указывая массу пробы в граммах или объем пробы в см3. #### 10.2 Метод количественного определения Расчет НВЧ проводят согласно Приложению А. *Пример.* При исследовании твердого образца и использовании трех пробирок на разведение для 95% случаев доверительный интервал составляет от 13 до 200 презумптивных Escherichia coli в грамме при НВЧ 7,4 x 10 презумптивных Escherichia coli в грамме и от 4 до 99 презумптивных Escherichia coli в грамме при НВЧ 2,4 x 10 презумптивных Escherichia coli в грамме. ### 11. ПРОТОКОЛ ИСПЫТАНИЯ В протоколе испытания указывают: - всю информацию, необходимую для полной идентификации образца; - метод отбора пробы, если известен; - использованный метод испытания со ссылкой на настоящий стандарт; - все детали исследования, не оговариваемые в настоящем стандарте, или рассматриваемые как необязательные, а также детали иного свойства, могущие оказать влияние на результаты исследований; - полученные результаты.
Приложение А
(обязательное)
**РАСЧЕТ НАИБОЛЕЕ ВЕРОЯТНОГО ЧИСЛА (НВЧ)**
А.1. Расчет НВЧ при использовании трех пробирок - по ГОСТ ISO 7218.
А.2. Расчет НВЧ при использовании пяти пробирок представлен в таблице А.1.
Таблица А.1
Число положительных пробирок трех выбранных разведенийНВЧКатегория <*> оценки для одновременно проанализированных проб в количествеДействительное число микроорганизмов в 1 г (см3) с вероятностью
95%99%
1,00,10,01123510отдоотдо
000< 0,18-----0,000,650,000,93
0010,18222110,000,650,000,93
0100,18222110,010,650,000,93
0110,36333220,070,990,021,40
0200,37322210,070,990,021,40
0210,55000330,171,400,092,10
0300,56033330,171,400,092,10
1000,20111110,020,990,011,40
1010,40211110,071,000,021,40
1020,60003330,171,400,092,10
1100,40111110,071,100,031,40
1110,61322210,171,400,092,10
1120,81000030,332,200,202,80
1200,61211110,181,400,092,10
1210,82333320,332,200,202,80
0,83333320,332,200,202,80
1311,0000030,32,20,22,8
1401,1000030,32,20,22,8
2000,45111110,081,40,042,10
2010,68211110,181,500,092,10
2020,91033330,332,200,202,80
2100,68111110,191,700,102,30
2110,92221110,332,200,202,80
2121,2003330,42,50,23,4
2200,93111110,342,200,202,80
2211,2332220,42,50,23,4
2221,4000030,63,40,44,4
2301,2322210,42,50,23,4
2311,4033330,63,40,44,4
2401,5033330,63,40,44,4
3000,78111110,212,200,122,80
3011,1111110,42,20,22,9
3021,3333220,63,40,44,4
3101,1111110,42,50,23,4
3111,4211110,63,40,44,4
3121,7333320,63,40,44,4
3201,4111110,63,40,44,4
3211,7222110,73,90,55,1
3222,0033330,73,90,55,2
3301,7221110,73,90,55,2
3312,1333220,73,90,55,2
3322,4000331,06,60,79,4
3402,1332220,74,00,55,2
3412,4033331,06,60,79,4
3502,5000331,06,60,79,4
4001,3111110,43,40,34,4
4011,7111110,53,40,44,4
4022,1322220,73,90,55,2
4032,5000031,06,60,79,4
4101,7111110,63,90,45,1
4112,1111110,74,10,55,3
4122,6332221,06,60,79,4
4133,1000031,06,60,79,4
4202,2111110,74,80,56,1
4212,6211111,06,60,79,4
4223,2333221,06,60,79,4
4233,8000031,310,00,914,7
4302,7111111,06,60,79,4
4313,3221111,06,60,79,4
4323,9333321,310,00,914,7
4403,4221111,310,00,914,7
4414,0332221,310,00,914,7
4424,7000331,411,30,914,7
4504,1333321,310,00,914,7
4514,8003331,411,30,914,7
5002,3111110,76,60,59,4
5013,1111111,06,60,79,4
5024,3322210,310,00,914,7
5035,8000332,114,91,420,0
5103,3111111,010,00,714,7
5114,6111111,411,30,914,7
5126,3221112,114,91,420,0
5138,4333323,411,02,127,0
5204,9111111,514,90,920,0
5217,0111112,216,81,423,0
5229,4221113,422,02,128,0
5231233222324232
5241500003635445
5307,9111112,322,01,527,0
5311111111324232
5321411111535345
5331732221739451
5342133332739451
5401311111335345
5411711111639451
5422211111744457
54328211111070692
54435222111070692
5454300333151069150
5502411111770492
5513511111101066150
55254111111516610223
55392111112325315338
554160111114046020620
555> 16011111----
<*> Для объяснения категорий см. ГОСТ ISO 7218.
Примечание. Приведенные результаты основаны на данных источника [7].
## БИБЛИОГРАФИЯ
[1]ISO 8261:2001Молоко и молочные продукты. Общие руководящие указания по приготовлению проб для испытаний, исходных суспензий и растворов, разведенных 1/10, для микробиологических исследований
[2]ICMSF Microorganisms in Food, 1988, Vol. 1, p. 280, University of Toronto Press, Toronto, Canada
[3]ISO 6887-1:1999Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 1. Общие правила приготовления исходной суспензии и десятичных разведений)
[4]ISO 6887-2:2003Microbiology of food and animal feeding stuffs - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 2: Specific rules for the preparation of meat and meat products (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка проб, исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологических исследований. Часть 2. Специальные правила подготовки мяса и мясных продуктов)
[5]ISO 6887-3:2003Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка образцов для испытания, исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 3. Специальные правила для подготовки рыбы и рыбопродуктов
[6]ISO 6887-4:2003Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка образцов для испытания, исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 4. Специальные правила для подготовки продуктов, кроме молока и молочных продуктов, мяса и мясных продуктов и рыбы и рыбопродуктов
[7]De Man, J.C. MPN tables, corrected. Eur. J. Appl. Biotechnol., 1983, 17, pp. 301 - 305
--- ## Иллюстрации $(K_{2}HPO_{4}),\text{г}$ $(KH_{2}PO_{4}),\text{г}$ $[CH_{3}(CH_{2})_{11}OSO_{3}Na],\text{г}$ - `бульших`