Документ 24372

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Земляники лесной листья Fragariae vescae folia	ФС.2.5.0016.15 Взамен ФС 42-0144-05

Собранные в фазу цветения, высушенные листья дикорастущего многолетнего травянистого растения земляники лесной — Fragaria vesca L., сем. розоцветных — Rosaceae.

ПОДЛИННОСТЬ

Внешние признаки. Цельное сырье. Листья сложные цельные или частично измельченные, тройчатые, с остатком черешка длиной до 1 см. Отдельные листочки сложного листа длиной от 1,5 до 6 см, шириной от 1,6 до 4 см. Средний листочек на коротком черешке, яйцевидной или ромбической формы, боковые листочки округлоромбические с крупными, треугольными или почти округлыми зубцами с каждой стороны, конечный зубец листочка несколько уже соседних зубцов и не выдается над ними. Жилкование перистое. Жилки, средняя и первого порядка, сильно выступающие с нижней стороны листочков. Цвет сверху зеленый или темно-зеленый, снизу серовато-зеленый.

При рассмотрении под лупой (10x) или стереомикроскопом (16x) на листочках заметны сероватые волоски (редкие на верхней стороне и более многочисленные на нижней поверхности). Волоски прямые или изогнутые у основания, направленные к верхушке листа. С нижней стороны листа выступают жилки желтоватого цвета. Черешок густо покрыт сероватыми волосками. Запах слабый. Вкус водного извлечения горьковатый, слегка вяжущий.

Измельченное сырье. Кусочки листьев различной формы и черешков, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 7 мм.

При рассмотрении под лупой (10x) или стереомикроскопом (16x) видны кусочки листьев зеленого или серовато-зеленого цвета и фрагменты черешка серовато-зеленого цвета. На фрагментах листовых пластинок заметны сероватые волоски (редкие на верхней стороне и более многочисленные на нижней поверхности) и выступающие с одной стороны листа желтоватые жилки. Фрагменты черешка густо покрыты сероватыми волосками.

Цвет зеленый или серовато-зеленый. Запах слабый. Вкус водного извлечения горьковатый, слегка вяжущий.

Порошок. Кусочки листьев и черешков, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 2 мм.

При рассмотрении под лупой (10x) или стереомикроскопом (16x) видны фрагменты листьев зеленого или серовато-зеленого цвета и фрагменты черешка серовато-зеленого цвета. На фрагментах листовых пластинок заметны сероватые волоски (редкие на верхней стороне и более многочисленные на нижней поверхности) и выступающие с одной стороны листа желтоватые жилки. Фрагменты черешка густо покрыты сероватыми волосками.

Цвет зеленый или серовато-зеленый. Запах слабый. Вкус водного извлечения горьковатый, слегка вяжущий.

Микроскопические признаки. Цельное, измельченное сырье. При рассмотрении микропрепаратов листа с поверхности должны быть видны клетки верхнего эпидермиса 5-7-угольные, со слабо извилистыми боковыми стенками, местами имеют четко видные утолщения; клетки нижнего эпидермиса более извилистостенные. Устьица округлые, погруженные, окружены 4-6 околоустьичными клетками (аномоцитный тип), расположены, в основном, на нижнем эпидермисе. Замыкающие клетки устьиц имеют почковидную форму. Встречаются волоски простые и головчатые. Простые волоски многочисленные, особенно на нижней стороне листа, прямые или изогнутые у основания, направленные к верхушке листа, одноклеточные, толстостенные, с ровной или слегка волнистой поверхностью. Полость волоска расширенная у основания, суживается в кончике до нитевидной.

Головчатые волоски встречаются преимущественно на нижней стороне листа, на верхней — редко, тонкостенные, имеют 2-3-клеточную ножку и 1-клеточную головку. Головка продолговатоовальная или шарообразная, иногда со светло-коричневым содержимым. В местах прикрепления волосков клетки эпидермиса образуют розетку. В паренхиме листа, особенно вдоль жилок, содержатся включения оксалата кальция преимущественно в виде друз, реже — в виде ромбических кристаллов.

Клетки эпидермиса черешка прозенхимной формы, 5-7-угольные, с прямыми стенками, вытянуты вдоль черешка. Волоски эпидермиса черешка простые и головчатые, имеют строение, аналогичное волоскам листа. В паренхиме черешка, особенно вдоль жилок, встречаются друзы оксалата кальция.

Порошок. При рассмотрении микропрепаратов порошка должны быть видны фрагменты эпидермиса с извилистыми клетками верхнего эпидермиса и нижнего эпидермиса, местами имеющими четко видные утолщения; устьица аномоцитного типа, округлые, погруженные, окружены 4-6 околоустьичными клетками (аномоцитный тип), расположены, в основном, на нижнем эпидермисе. Замыкающие клетки устьиц имеют почковидную форму. Волоски простые — многочисленные прямые или изогнутые у основания, одноклеточные, толстостенные, с ровной или слегка волнистой поверхностью, с расширенной у основания полостью, суживающейся в кончике до нитевидной; фрагменты паренхимы листа с жилками и включениями оксалата кальция преимущественно в виде друз, реже — в виде ромбических кристаллов.

Встречаются фрагменты клеток эпидермиса черешка прозенхимной формы, 5-7-угольные, с прямыми стенками; с простыми одноклеточными, толстостенными волосками с ровной поверхностью, заостренными на верхушке и друзами оксалата кальция.

Рисунок — Земляники лесной листья. 1 — фрагмент эпидермиса листа с простыми волосками, направленными к верхушке (90x); 2 — клетки верхнего эпидермиса со слабоизвилистыми стенками (140x 140); 3 — клетки нижнего эпидермиса с извилистыми стенками (а), простые волоски (б), друзы (в) и ромбические кристаллы (г) оксалата кальция (280x); 4 — фрагмент нижнего эпидермиса листа с головчатым (а) и простыми (б) волосками (280x); 5 — фрагмент нижнего эпидермиса листа с извилистыми стенками (а) и устьицами аномоцитного типа (б) (300x); 6 — розетка эпидермальных клеток вокруг основания простого волоска (280x); 7 — фрагмент клеток эпидермиса черешка с прямыми стенками (300x); 8 — фрагмент эпидермиса черешка с друзами (140x); 9 — фрагмент эпидермиса черешка с простыми (а) и головчатыми (б) волосками (140x)

Определение основных групп биологически активных веществ

Тонкослойная хроматография

На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля с флуоресцентным индикатором на алюминиевой подложке размером 10x15 см наносят 70 мкл испытуемого раствора (см. раздел «Количественное определение. Сумма флавоноидов» приготовление раствора А испытуемого раствора) в виде полосы длиной 10 мм и шириной не более 2 мм и рядом 5 мкл раствора стандартного образца (CO) рутина (см. раздел «Количественное определение. Сумма флавоноидов» приготовление раствора А CO рутина). Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру со смесью растворителей: этилацетат-муравьиная кислота безводная-вода (70:15:15) и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80-90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей (в вытяжном шкафу) и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.

На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться зона адсорбции темного цвета на уровне зоны на хроматограмме раствора CO рутина, одна зона темного цвета — ниже и 2 зоны темного цвета — выше зоны на хроматограмме раствора CO рутина.

Затем пластинку обрабатывают алюминия хлорида спиртовым раствором 5%, нагревают при температуре 100-105 °С в сушильном шкафу в течение 2-3 мин, после чего просматривают при дневном свете.

На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться зоны желтого цвета, в УФ-свете при длине волны 365 нм зоны с флуоресценцией желтого цвета.

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 13%.

Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 10%.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 3%.

Измельченность сырья. Цельное сырье: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм, — не более 5%. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм, — не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, — не более 5%. Порошок: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, — не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, — не более 5%.

Посторонние примеси

Сырье, изменившее окраску (пожелтевшее и потемневшее). Цельное сырье, измельченное сырье — не более 2%.

Другие части земляники. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 5%.

Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 1%.

Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 0,5%.

Тяжелые металлы. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».

Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок: сумма флавоноидов в пересчете на рутин — не менее 1%; экстрактивных веществ, извлекаемых водой, — не менее 25%.

Сумма флавоноидов.

Приготовление растворов.

Раствор CO рутина. Около 0,05 г (точная навеска) CO рутина, предварительно высушенного при температуре 130-135 °С в течение 3 часов, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 85 мл спирта 70% и нагревают на водяной бане до полного растворения. Затем охлаждают до комнатной температуры, доводят объем раствора до метки тем же спиртом и перемешивают (раствор А CO рутина),

1,0 мл раствора А CO рутина помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 5 мл алюминия хлорида раствора 5% в спирте 70% и через 10 мин 1 мл раствора кислоты уксусной 3%, объем раствора доводят тем же спиртом до метки и перемешивают (раствор Б CO рутина).

Срок годности растворов 30 сут. при хранении в хорошо укупоренной упаковке, в прохладном, защищенном от света месте.

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Около 1,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 100 мл спирта 70% и взвешивают с погрешностью г. Колбу присоединяют к обратному холодильнику, нагревают на водяной бане в течение 1,5 ч, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Колбу с содержимым охлаждают до комнатной температуры, взвешивают и при необходимости доводят до первоначальной массы спиртом 70%. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр, смоченный тем же спиртом, отбрасывая первые 10 мл фильтрата (раствор А испытуемого раствора).

2,0 мл раствора А испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 5 мл алюминия хлорида раствора 5% в спирте 70% и через 10 мин 1 мл уксусной кислоты раствора 3%, объем раствора доводят тем же спиртом до метки и перемешивают (раствор Б испытуемого раствора).

Оптическую плотность раствора Б испытуемого раствора измеряют через 30 мин на спектрофотометре при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 2 мл раствора А испытуемого раствор, 1 мл уксусной кислоты раствора 3%, доведенный спиртом 70% до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Параллельно измерят оптическую плотность раствора Б CO рутина в таких же условиях. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1 мл раствора А CO рутина, 1 мл уксусной кислоты раствора 3%, доведенный спиртом 70% до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

,

где: A — оптическая плотность раствора Б испытуемого раствора;

A0 — оптическая плотность раствора Б CO рутина;

a — навеска сырья, г;

a0 — навеска CO рутина, г;

P — содержание основного вещества в CO рутина, %;

W — влажность сырья, %.

Допускается содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин вычислять с использованием удельного показателя поглощения комплекса рутина с алюминия хлоридом по формуле:

,

где: A — оптическая плотность раствора Б испытуемого раствора;

• удельный показатель поглощения комплекса рутина с алюминия хлоридом при длине волны 410 нм, равный 260;

a — навеска сырья, г;

W — влажность сырья, %.

Экстрактивные вещества. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах» (метод 1, экстрагент — вода).

Примечание. Определение суммы флавоноидов в пересчете на рутин и экстрактивных веществ, извлекаемых водой, проводят для сырья, предназначенного для производства лекарственных растительных препаратов (пачки, фильтр-пакеты).

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

---

Иллюстрации

\pm 0,01

X = \frac{A \cdot 100 \cdot 25 \cdot a_{0} \cdot 1 \cdot P \cdot 100}{A_{0} \cdot a \cdot 2 \cdot 100 \cdot 25 \cdot 100 \cdot (100 - W)} \cdot 100

X = \frac{A \cdot 100 \cdot 25 \cdot 100}{A_{1\text{см}}^{1\%} \cdot a \cdot 2 \cdot (100 - W)}

A_{1\text{см}}^{1\%}