---
title: "Без названия"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/bez-nazvaniya-2555"
---

## Без названия

# Документ 24260


<a id="p100001"></a>**МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ**

<a id="p100002"></a>**ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ**


| <a id="p100003"></a>Определение антикомплементарной активности лекарственных препаратов иммуноглобулинов человека для внутривенного введения | <a id="p100004"></a>ОФС.1.8.2.0007.15<br>Вводится впервые |
| --- | --- |


<a id="p100005"></a>Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на метод определения антикомплементарной активности лекарственных препаратов иммуноглобулинов человека для внутривенного введения.
<a id="p100006"></a>Метод определения антикомплементарной активности (АКА) в препаратах иммуноглобулинов человека основан на способности высокомолекулярных и денатурированных белков (агрегатов) связывать комплемент в отсутствие комплексов антиген-антитело и, таким образом, препятствовать лизису сенсибилизированных эритроцитов. Количество высокомолекулярных и денатурированных белков (агрегатов), обладающих антикомплементарной активностью, в препаратах иммуноглобулинов человека для внутривенного введения должно быть минимальным.
<a id="p100007"></a>Антикомплементарную активность испытуемого препарата иммуноглобулинов (в процентах) выражают как расход комплемента в испытуемом образце по отношению к контрольному комплементу, принятому за 100%. Допустимый предел связывания комплемента - не более 50% (т.е. не более 1 CH50/мг белка).


## <a id="p100008"></a>Методика определения


<a id="p100009"></a>Для определения антикомплементарной активности иммуноглобулина человека для внутривенного введения берут фиксированное количество испытуемого образца (10 мг иммуноглобулина в объеме 0,2 мл 5% раствора) и инкубируют с определенным количеством комплемента морских свинок (20 CH50); затем добавляют сенсибилизированные эритроциты барана и определяют количество несвязавшегося комплемента.
<a id="p100010"></a>Подготовка 5% суспензии эритроцитов барана. Эритроциты барана отделяют центрифугированием соответствующего объема стабилизированной крови барана в течение 5 мин. при 3000 об/мин. (1000 g). Осадок эритроцитов промывают не менее трех раз 10-кратным (к объему эритроцитов) объемом буферного раствора до получения бесцветной промывной жидкости. Отбирают определенный объем отмытых эритроцитов и смешивают с рассчитанным количеством буферного раствора для получения 5% суспензии (об/об).
<a id="p100011"></a>Плотность клеточной суспензии определяют следующим образом: 0,2 мл полученной суспензии эритроцитов прибавляют к 2,8 мл воды очищенной, перемешивают, центрифугируют полученный раствор в течение 5 мин. при 3000 об/мин., измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 541 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм (раствор сравнения - вода очищенная). Суспензия пригодна для испытания, если измеренная оптическая плотность супернатанта составляет .
<a id="p100012"></a>Корректируют плотность суспензии до указанного показателя добавлением необходимого количества отмытых эритроцитов, если оптическая плотность ниже 0,61, либо рассчитанным по формуле (1) количеством буферного раствора, если оптическая плотность выше 0,63:

<a id="p100013"></a>VБР = (VH x A/0,62) - VH,

<a id="p100014"></a>где: VБР - добавочный объем буферного раствора, мл;
<a id="p100015"></a>VH - начальный объем суспензии, мл;
<a id="p100016"></a>A - значение оптической плотности исходной суспензии;
<a id="p100017"></a>0,62 - целевое значение оптической плотности.


## <a id="p100018"></a>Титрование гемолитической сыворотки


<a id="p100019"></a>Готовят серию разведений гемолитической сыворотки, в соответствии с Таблицей 1 (значения разведений гемолитической сыворотки могут быть изменены).

<a id="p100020"></a>Таблица 1

<a id="p100021"></a>Порядок приготовления разведений гемолитической сыворотки


<table>
<colgroup><col width="25%"><col width="24%"><col width="25%"><col width="25%"></colgroup>
<tr><td rowspan="3"><a id="p100022"></a>Разведение гемолитической сыворотки</td><td colspan="3"><a id="p100023"></a>Используемые растворы</td></tr>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100024"></a>Объем буферного раствора, мл</td><td colspan="2"><a id="p100025"></a>Гемолитическая сыворотка</td></tr>
<tr><td><a id="p100026"></a>Разведение</td><td><a id="p100027"></a>Объем, мл</td></tr>
<tr><td><a id="p100028"></a>1:50</td><td><a id="p100029"></a>4,9</td><td><a id="p100030"></a>Без разведения</td><td><a id="p100031"></a>0,1</td></tr>
<tr><td><a id="p100032"></a>1:100</td><td><a id="p100033"></a>1,0</td><td><a id="p100034"></a>1:50</td><td><a id="p100035"></a>1,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100036"></a>1:250</td><td><a id="p100037"></a>4,0</td><td><a id="p100038"></a>1:50</td><td><a id="p100039"></a>1,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100040"></a>1:500</td><td><a id="p100041"></a>2,0</td><td><a id="p100042"></a>1:250</td><td><a id="p100043"></a>2,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100044"></a>1:1000</td><td><a id="p100045"></a>2,0</td><td><a id="p100046"></a>1:500</td><td><a id="p100047"></a>2,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100048"></a>1:2000</td><td><a id="p100049"></a>1,5</td><td><a id="p100050"></a>1:1000</td><td><a id="p100051"></a>1,5</td></tr>
<tr><td><a id="p100052"></a>1:3000</td><td><a id="p100053"></a>2,0</td><td><a id="p100054"></a>1:1000</td><td><a id="p100055"></a>1,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100056"></a>1:4000</td><td><a id="p100057"></a>1,0</td><td><a id="p100058"></a>1:2000</td><td><a id="p100059"></a>1,0</td></tr>
</table>


<a id="p100060"></a>Далее из каждой пробирки с полученными разведениями гемолитической сыворотки переносят по 1,0 мл в новые пробирки, добавляют по 1,0 мл 5% суспензии эритроцитов и осторожно перемешивают. Пробы инкубируют при температуре  °С в течение 30 мин.
<a id="p100061"></a>По окончании инкубации по 0,2 мл каждой из этих инкубированных проб переносят в новые пробирки и прибавляют по 1,1 мл буферного раствора и по 0,2 мл предварительно приготовленного раствора комплемента (например, разведение 1:150). Испытание выполняют в двух повторностях.
<a id="p100062"></a>Для приготовления контрольных проб без гемолиза в три пробирки вносят по 1,4 мл буферного раствора и по 0,1 мл 5% суспензии эритроцитов.
<a id="p100063"></a>Для приготовления контрольных проб с полным гемолизом в три пробирки вносят по 1,4 мл воды очищенной и по 0,1 мл 5% суспензии эритроцитов.
<a id="p100064"></a>Пробы инкубируют в термостате при температуре  °С в течение 60 мин., затем охлаждают 10 мин. при температуре  °С и центрифугируют при 3000 об/мин. в течение 5 мин.
<a id="p100065"></a>Определяют оптическую плотность надосадочной жидкости на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 541 нм.
<a id="p100066"></a>Рассчитывают степень гемолиза в процентах (Y%) в каждой пробирке по формуле (2):

<a id="p100067"></a>,

<a id="p100068"></a>где: Aп - среднее значение оптической плотности разведений гемолитической сыворотки;
<a id="p100069"></a>Aо - среднее значение оптической плотности контрольных проб без гемолиза;
<a id="p100070"></a>Aк - среднее значение оптической плотности контрольных проб с полным гемолизом.
<a id="p100071"></a>Строят график, откладывая по оси ординат степень гемолиза в процентах, а по оси абсцисс - обратные значения соответствующего разведения гемолитической сыворотки.
<a id="p100072"></a>Результаты титрования гемолитической сыворотки считают достоверными, если максимальная степень гемолиза находится в пределах 50-70%. Если максимальная степень гемолиза не находится в этих пределах, титрование повторяют с использованием менее или более разбавленного раствора комплемента, соответственно.
<a id="p100073"></a>Определяют минимальное разведение, при котором дальнейшее повышение количества гемолитической сыворотки не вызывает существенного повышения степени гемолиза. Это разведение определяется как одна минимальная гемолитическая единица (1 МГЕ) в 1 мл.
<a id="p100074"></a>В дальнейшем для приготовления суспензии сенсибилизированных эритроцитов барана используют разведение гемолитической сыворотки, содержащее 2 МГЕ/мл (например, если за 1 МГЕ/мл принимают разведение 1:500, то 2 МГЕ/мл - 1:250).
<a id="p100075"></a>При проведении последующих испытаний с использованием образцов гемолитической сыворотки той же серии можно использовать данные, полученные ранее.
<a id="p100076"></a>Рекомендуется определять гемолитическую активность используемой серии гемолитической сыворотки не реже одного раза в 6 месяцев.


## <a id="p100077"></a>Титрование комплемента


<a id="p100078"></a>Готовят исходное разведение комплемента (например, 1:250) с помощью буферного раствора, затем из него готовят ряд разведений в двух повторностях в соответствии с Таблицей 2:

<a id="p100079"></a>Таблица 2

<a id="p100080"></a>Порядок приготовления разведений комплемента


| <a id="p100081"></a>Номера пробирок | <a id="p100082"></a>Объем разведения комплемента (например, 1:250), мл | <a id="p100083"></a>Объем буферного раствора, мл |
| --- | --- | --- |
| <a id="p100084"></a>1 | <a id="p100085"></a>0,1 | <a id="p100086"></a>1,2 |
| <a id="p100087"></a>2 | <a id="p100088"></a>0,2 | <a id="p100089"></a>1,1 |
| <a id="p100090"></a>3 | <a id="p100091"></a>0,3 | <a id="p100092"></a>1,0 |
| <a id="p100093"></a>4 | <a id="p100094"></a>0,4 | <a id="p100095"></a>0,9 |
| <a id="p100096"></a>5 | <a id="p100097"></a>0,5 | <a id="p100098"></a>0,8 |
| <a id="p100099"></a>6 | <a id="p100100"></a>0,6 | <a id="p100101"></a>0,7 |
| <a id="p100102"></a>7 | <a id="p100103"></a>0,7 | <a id="p100104"></a>0,6 |
| <a id="p100105"></a>8 | <a id="p100106"></a>0,8 | <a id="p100107"></a>0,5 |
| <a id="p100108"></a>9 | <a id="p100109"></a>0,9 | <a id="p100110"></a>0,4 |
| <a id="p100111"></a>10 | <a id="p100112"></a>1,0 | <a id="p100113"></a>0,3 |
| <a id="p100114"></a>11 | <a id="p100115"></a>1,1 | <a id="p100116"></a>0,2 |
| <a id="p100117"></a>12 | <a id="p100118"></a>1,2 | <a id="p100119"></a>0,1 |


<a id="p100120"></a>Для приготовления контрольных проб без гемолиза в три пробирки вносят по 1,3 мл буферного раствора.
<a id="p100121"></a>Для приготовления контрольных проб с полным гемолизом в три пробирки вносят по 1,3 мл воды очищенной.
<a id="p100122"></a>Затем в каждую пробирку (с разведениями комплемента пробирки 1-12 и контрольными пробами) добавляют по 0,2 мл гемолитической системы (состоит из суспензии эритроцитов барана и гемолитической сыворотки), тщательно перемешивают и инкубируют в термостате при температуре °С в течение 60 мин.; затем охлаждают 10 мин. при температуре  °С и центрифугируют при 3000 об/мин. в течение 5 мин.
<a id="p100123"></a>Измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости на спектрофотометре в кюветах с толщиной слоя 10 мм при длине волны 541 нм. Раствор сравнения - буферный раствор.
<a id="p100124"></a>Рассчитывают степень гемолиза (Y) по формуле (3):

<a id="p100125"></a>,

<a id="p100126"></a>где: Aп - среднее значение оптической плотности испытуемой пробы;
<a id="p100127"></a>Aо - среднее значение оптической плотности контрольной пробы без гемолиза;
<a id="p100128"></a>Aк - среднее значение оптической плотности контрольной пробы с полным гемолизом.
<a id="p100129"></a>С помощью программного обеспечения или на миллиметровой бумаге с логарифмическим масштабом строят график со значениями Y/(1-Y) по оси абсцисс и количеством разведенного комплемента (в мл) по оси ординат. Получают оптимизированную кривую (при построении графика учитываются значения степени гемолиза, находящиеся в диапазоне от 0,15 до 0,85; значения, находящиеся за пределами указанного диапазона не учитываются), соответствующую нанесенным точкам, и определяют ординату для дозы комплемента, приводящей к 50% гемолизу, т.е. Y/(1-Y)=1.
<a id="p100130"></a>Вычисляют активность комплемента в исходном растворе, выраженную в гемолитических единицах (CH50/мл), по формуле (4):

<a id="p100131"></a>,

<a id="p100132"></a>где: B - величина, обратная степени разведения комплемента;
<a id="p100133"></a>C - объем разведенного комплемента (мл), вызывающий 50% гемолиз (Y/(1-Y)=1);
<a id="p100134"></a>5 - множитель для учета количества эритроцитов.
<a id="p100135"></a>Результат титрования комплемента считают достоверным при условии, что наклон прямой составляет от 0,15 до 0,40, предпочтительно в интервале 0,18-0,30.


## <a id="p100136"></a>Определение антикомплементарной активности испытуемого образца иммуноглобулина


<a id="p100137"></a>Проверяют pH испытуемого образца иммуноглобулина потенциометрическим методом в соответствии с ОФС "Ионометрия". При pH менее 7,0 его доводят до значений 7,0-7,3 с помощью 0,1 М раствора натрия гидроксида (если нет иных указаний в фармакопейной статье). Определяют содержание белка в испытуемом образце иммуноглобулина колориметрическим методом с биуретовым реактивом в соответствии с ОФС "Определение белка". - Готовят пробу испытуемого образца иммуноглобулина, в зависимости от содержания белка. Например, при содержании белка в испытуемом образце иммуноглобулина 50 мг/мл, к 0,2 мл раствора иммуноглобулина добавляют 0,6 мл буферного раствора. Если содержание белка в испытуемом образце иммуноглобулина отличается от 50 мг/мл, используют большие или меньшие объемы испытуемого образца иммуноглобулина. Точный объем испытуемого образца иммуноглобулина (V) в мл рассчитывают по формуле (5):

<a id="p100138"></a>,

<a id="p100139"></a>где: 50 - необходимое содержание белка в испытуемом образце иммуноглобулина, мг/мл;
<a id="p100140"></a>0,2 - объем испытуемого образца иммуноглобулина, взятый для испытания, мл;
<a id="p100141"></a>C - фактическое содержание белка в испытуемом образце иммуноглобулина, мг/мл.
<a id="p100142"></a>Объем пробы доводят буферным раствором до 0,8 мл.
<a id="p100143"></a>Подготовку положительного и отрицательного контролей с использованием стандартного образца иммуноглобулина человека (BRP или аналогичного) проводят в соответствии с инструкцией по его применению.
<a id="p100144"></a>Для приготовления пробы с контролем комплемента в пробирку вносят 0,8 мл буферного раствора.
<a id="p100145"></a>Во все приготовленные пробы добавляют по 0,2 мл раствора комплемента, содержащего 100 CH50/мл. Конечный объем проб - 1 мл.
<a id="p100146"></a>Пробирки инкубируют в термостате при температуре  °С в течение 60 мин.
<a id="p100147"></a>По истечении срока инкубации готовят разведения 1:50 для проб с контролем комплемента и испытуемым образцом иммуноглобулина. Разведения контрольных образцов (положительный и отрицательный контроль) проводят в соответствии с инструкцией по применению к стандартному образцу.
<a id="p100148"></a>Проводят определение остаточной активности комплемента (в двух повторностях) в соответствии с Таблицей 3.

<a id="p100149"></a>Таблица 3

<a id="p100150"></a>Порядок подготовки проб для определения остаточной
активности комплемента


| <a id="p100151"></a>Номера пробирок | <a id="p100152"></a>Объем пробы, мл | <a id="p100153"></a>Объем буферного раствора, мл |
| --- | --- | --- |
| <a id="p100154"></a>1 | <a id="p100155"></a>0,1 | <a id="p100156"></a>1,2 |
| <a id="p100157"></a>2 | <a id="p100158"></a>0,2 | <a id="p100159"></a>1,1 |
| <a id="p100160"></a>3 | <a id="p100161"></a>0,3 | <a id="p100162"></a>1,0 |
| <a id="p100163"></a>4 | <a id="p100164"></a>0,4 | <a id="p100165"></a>0,9 |
| <a id="p100166"></a>5 | <a id="p100167"></a>0,5 | <a id="p100168"></a>0,8 |
| <a id="p100169"></a>6 | <a id="p100170"></a>0,6 | <a id="p100171"></a>0,7 |
| <a id="p100172"></a>7 | <a id="p100173"></a>0,7 | <a id="p100174"></a>0,6 |
| <a id="p100175"></a>8 | <a id="p100176"></a>0,8 | <a id="p100177"></a>0,5 |
| <a id="p100178"></a>9 | <a id="p100179"></a>0,9 | <a id="p100180"></a>0,4 |
| <a id="p100181"></a>10 | <a id="p100182"></a>1,0 | <a id="p100183"></a>0,3 |
| <a id="p100184"></a>11 | <a id="p100185"></a>1,1 | <a id="p100186"></a>0,2 |
| <a id="p100187"></a>12 | <a id="p100188"></a>1,2 | <a id="p100189"></a>0,1 |


<a id="p100190"></a>Для приготовления контрольных проб без гемолиза в три пробирки вносят по 1,3 мл буферного раствора.
<a id="p100191"></a>Для приготовления контрольных проб с полным гемолизом в три пробирки вносят по 1,3 мл воды очищенной.
<a id="p100192"></a>Затем в каждую пробирку (пробирки 1-12 и пробирки с контрольными пробами) добавляют по 0,2 мл гемолитической системы, тщательно перемешивают и инкубируют в термостате при температуре  °С в течение 60 мин., затем охлаждают 10 мин. при температуре  °С и центрифугируют при 3000 об/мин. в течение 5 мин.
<a id="p100193"></a>Измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 541 нм. Раствор сравнения - буферный раствор. Рассчитывают степень гемолиза (Y) по формуле (3) и строят график, как и при титровании комплемента.
<a id="p100194"></a>Если центрифугирование и/или считывание результатов не может быть проведено немедленно, пробы хранят при температуре  °С не более 1 ч.


## <a id="p100195"></a>Учет и интерпретация результатов


<a id="p100196"></a>Вычисляют по формуле (4) активность комплемента в гемолитических единицах (CH50/мл) для испытуемого образца иммуноглобулина, контрольных образцов (положительный и отрицательный контроли) и контроля комплемента.
<a id="p100197"></a>Антикомплементарную активность испытуемого образца иммуноглобулина (в %) и контрольных образцов (положительный и отрицательный контроли) вычисляют относительно АКА в контроле комплемента, принятой за 100%, по формуле (6):

<a id="p100198"></a>,

<a id="p100199"></a>где: b - активность комплемента (CH50/мл) в контроле комплемента, рассчитанная по формуле (4);
<a id="p100200"></a>a - активность комплемента (CH50/мл) в испытуемом образце иммуноглобулина и в контрольных образцах (положительный и отрицательный контроли), рассчитанная по формуле (4).
<a id="p100201"></a>Антикомплементарную активность испытуемого образца иммуноглобулина в CH50/мг белка рассчитывают по формуле (7):

<a id="p100202"></a>,

<a id="p100203"></a>где: 20 CH50 - количество комплемента, взятого для испытания;
<a id="p100204"></a>b - активность комплемента (CH50/мл) в контроле комплемента, рассчитанная по формуле (4);
<a id="p100205"></a>a - активность комплемента (CH50/мл) в испытуемом образце иммуноглобулина и в контрольных образцах (положительный и отрицательный контроли), рассчитанная по формуле (4);
<a id="p100206"></a>10 - количество белка иммуноглобулина (мг), взятого для испытания.
<a id="p100207"></a>Результаты испытания препарата иммуноглобулина считают достоверными, если:
1. <a id="p100208"></a>Антикомплементарная активность отрицательного и положительного контролей находится в пределах, лимитируемых в инструкции по применению к стандартному образцу;
2. <a id="p100209"></a>Активность комплемента в контроле комплемента находится в пределах от 80 до 120 CH50/мл.
<a id="p100210"></a>В противном случае проводят повторный анализ.

<a id="p100211"></a>Примечания
1. <a id="p100212"></a>Приготовление буферных растворов (желатин-солевого или желатин-барбиталового).
<a id="p100213"></a>1.1. Приготовление желатин-солевого раствора. В мерную колбу вместимостью 250 мл помещают 1 г желатина, прибавляют примерно 200 мл воды очищенной и оставляют набухать. Смесь нагревают при температуре  °С до полного растворения. Полученный прозрачный раствор охлаждают до комнатной температуры.
<a id="p100214"></a>В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 8,5 г натрия хлорида, 0,1 г кальция хлорида безводного, 0,04 г магния хлорида 6-водного, растворяют в небольшом количестве воды очищенной и прибавляют приготовленный раствор желатина. Общий объем раствора доводят водой очищенной до метки и перемешивают. Доводят pH раствора до 7,2-7,3 с помощью 0,1 М раствора натрия гидроксида. Раствор используют свежеприготовленным.

#### <a id="p100215"></a>1.2 Приготовление желатин-барбиталового буферного раствора.

<a id="p100216"></a>1.2.1. Приготовление исходного раствора кальция и магния хлорида. В мерной колбе вместимостью 100 мл растворяют в небольшом количестве воды очищенной 4,412 г кальция хлорида дигидрата и 20,332 г магния хлорида 6-ти водного, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре  °С в течение 1 мес.
<a id="p100217"></a>1.2.2. Приготовление исходного барбиталового буферного раствора (pH 7,3). В мерной колбе вместимостью 2000 мл растворяют, постоянно перемешивая, 83,0 г натрия хлорида и 10,192 г барбитала натрия в 1700 мл воды очищенной. Показатель pH доводят до 7,31 М с помощью раствора хлористоводородной кислоты. Добавляют 5 мл исходного раствора кальция и магния хлорида, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре  °С в течение 1 мес.
<a id="p100218"></a>1.2.3. Приготовление раствора желатина. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 1,25 г желатина, прибавляют 500 мл воды очищенной и тщательно перемешивают. Полученную смесь нагревают при температуре  °С до полного растворения желатина. Полученный раствор охлаждают до комнатной температуры, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Используют только свежеприготовленный раствор.
<a id="p100219"></a>1.2.4. Приготовление желатин-барбиталового буферного раствора. Прибавляют 4 части раствора желатина к 1 части исходного барбиталового буферного раствора, тщательно перемешивают и доводят pH до 7,2-7,3 с помощью 1 М раствора натрия гидроксида или 1 М раствором хлористоводородной кислоты. Раствор используют свежеприготовленным.
2. <a id="p100220"></a>Подготовка контрольных образцов. Подготовку отрицательного и положительного контролей осуществляют в соответствии с прилагаемой инструкцией по применению к стандартному образцу (CO) иммуноглобулина человека.
3. <a id="p100221"></a>Приготовление стабилизированной крови барана. Берут один объем крови барана и один объем цитратного раствора, перемешивают. Хранят при температуре  °С. Стабилизированную кровь барана можно использовать в течение 28 дней, но не ранее чем через 7 дней после взятия.
4. <a id="p100222"></a>Приготовление цитратного раствора. Растворяют в 750 мл воды очищенной 20,5 г глюкозы, 8,0 г натрия лимоннокислого трехзамещенного и 4,2 г натрия хлорида, устанавливают pH раствора 6,1 раствором лимонной кислоты (100 г/л), доводят объем раствора до 1000 мл водой очищенной. Стерилизуют текучим паром в течение 30 мин. при температуре 100 °С. Хранят при температуре  °С в течение 1 мес.
5. <a id="p100223"></a>Приготовление гемолитической системы (суспензии сенсибилизированных эритроцитов барана). Гемолитическая сыворотка - иммунная сыворотка против эритроцитов барана, которую получают путем иммунизации кроликов. (Такие гемолитические сыворотки предлагаются рядом коммерческих источников).
<a id="p100224"></a>Для получения гемолитической системы гемолитическую сыворотку, разведенную до 2 МГЕ/мл, добавляют к 5% суспензии эритроцитов барана в соотношении 1:1. Инкубируют в термостате при температуре  °С в течение 15 минут, после чего хранят при температуре  °С и используют в течение 6 часов.
6. <a id="p100225"></a>Комплемент морских свинок. Готовят пул сыворотки из крови не менее 10 морских свинок. Сыворотку отделяют от сгустка крови центрифугированием при температуре 4 °С. Хранят в небольших количествах при температуре ниже минус 70 °С.
7. <a id="p100226"></a>Приготовление раствора комплемента, содержащего 100 CH50/мл. В зависимости от исходной активности комплемента 1 мл раствора комплемента разбавляют буферным раствором до содержания 100 CH50/мл.



<a id="p100227"></a>

---



## Иллюстрации

$0,62 \pm 0,01$

$37 \pm 0,5$

$37 \pm 0,5$

$5 \pm 3$

$Y_{\%} = \frac{A_{\text{п}} - A_{\text{о}}}{A_{\text{к}} - A_{\text{о}}} \times 100\%$

$37 \pm 0,5$

$5 \pm 3$

$Y = \frac{A_{\text{п}} - A_{\text{о}}}{A_{\text{к}} - A_{\text{о}}}$

$CH_{50}/\text{мл} = \frac{B}{C \times 5}$

$V = \frac{50 \times 0,2}{C}$

$37 \pm 0,5$

$37 \pm 0,5$

$5 \pm 3$

$5 \pm 3$

$\text{АКА } = \frac{b - a}{b} \times 100\%$

$\text{АКА }(CH_{50}/\text{мг белка}) = \frac{20CH_{50} \times (\frac{b - a}{b})}{10}$

$45 \pm 3$

$5 \pm 3$

$5 \pm 3$

$45 \pm 3$

$5 \pm 3$

$5 \pm 3$

$37 \pm 0,5$

$5 \pm 3$