---
title: "Без названия"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/bez-nazvaniya-2536"
---

## Без названия

# Документ 24241


<a id="p100001"></a>**МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ**

<a id="p100002"></a>**ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ**


| <a id="p100003"></a>Определение белкового азота с реактивом Несслера с предварительным осаждением белкового материала в иммунобиологических лекарственных препаратах | <a id="p100004"></a>ОФС.1.7.2.0026.15<br>Вводится впервые |
| --- | --- |


<a id="p100005"></a>Настоящая общая фармакопейная статья предназначена для определения белкового азота в иммунобиологических лекарственных препаратах (ИЛП). Метод основан на свойстве реактива Несслера давать цветную реакцию с ионами аммония, образующимися после минерализации белковых продуктов.
<a id="p100006"></a>Для количественного определения содержания белкового азота используются колориметрические методы:
- <a id="p100007"></a>метод с предварительным осаждением белковых компонентов с использованием трихлоруксусной кислоты (ТХУ), рекомендуемый для определения белкового азота в вирусных вакцинах, анатоксинах и инфекционных аллергенах (методы А и В).
- <a id="p100008"></a>метод с предварительным осаждением белковых компонентов с использованием фосфорновольфрамовой кислоты, рекомендуемый для определения белкового азота в неинфекционных аллергенах.


## <a id="p100009"></a>Метод с использованием трихлоруксусной кислоты для определения содержания белкового азота от 0,01 до 0,4 мг/мл (метод А)


<a id="p100010"></a>В центрифужную пробирку вместимостью 10 мл вносят необходимое количество испытуемого образца (А), прибавляют раствор ТХУ до конечной концентрации 10% и перемешивают (табл.).

<a id="p100011"></a>Таблица

<a id="p100012"></a>Соотношение содержания белкового азота,
объема анализируемого образца, реагента и минерализата
для колориметрирования


<table>
<colgroup><col width="23%"><col width="21%"><col width="16%"><col width="20%"><col width="20%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100013"></a>Содержание белкового азота в анализируемом образце, мг/мл</td><td rowspan="2"><a id="p100014"></a>Объем анализируемого образца (А), мл</td><td colspan="2"><a id="p100015"></a>Трихлоруксусная кислота</td><td rowspan="2"><a id="p100016"></a>Объем минерализата (В), мл</td></tr>
<tr><td><a id="p100017"></a>объем, мл</td><td><a id="p100018"></a>исходная концентрация, %</td></tr>
<tr><td><a id="p100019"></a>0,010-0,016</td><td><a id="p100020"></a>5</td><td><a id="p100021"></a>0,72</td><td><a id="p100022"></a>80</td><td><a id="p100023"></a>2,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100024"></a>0,016-0,030</td><td><a id="p100025"></a>3</td><td><a id="p100026"></a>0,43</td><td><a id="p100027"></a>80</td><td><a id="p100028"></a>2,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100029"></a>0,030-0,050</td><td><a id="p100030"></a>3</td><td><a id="p100031"></a>0,43</td><td><a id="p100032"></a>80</td><td><a id="p100033"></a>1,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100034"></a>0,050-0,080</td><td><a id="p100035"></a>2</td><td><a id="p100036"></a>2,00</td><td><a id="p100037"></a>20</td><td><a id="p100038"></a>1,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100039"></a>0,080-0,200</td><td><a id="p100040"></a>1</td><td><a id="p100041"></a>1,00</td><td><a id="p100042"></a>20</td><td><a id="p100043"></a>1,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100044"></a>0,200-0,400</td><td><a id="p100045"></a>1</td><td><a id="p100046"></a>1,00</td><td><a id="p100047"></a>20</td><td><a id="p100048"></a>0,5</td></tr>
</table>


<a id="p100049"></a>Пробу оставляют на 18-20 ч при температуре 4-8 °С. Образовавшийся осадок отделяют от надосадочной жидкости центрифугированием при 2000 об./мин. при температуре 4-6 °С в течение 30 мин. Далее осадок промывают 1 мл 10% раствора ТХУ и вновь центрифугируют в аналогичных условиях. К осадку прибавляют ОД мл серной кислоты концентрированной. Пробирку закрывают стеклянным колпачком и минерализуют на песочной бане при температуре 190-210 °С. Одновременно в аналогичных условиях минерализуют контрольную пробу, содержащую 0,1 мл серной кислоты концентрированной. Для ускорения минерализации используют водорода пероксид, который периодически добавляют по 1-2 капли в предварительно охлажденную пробирку. Минерализацию продолжают не менее 10 ч до обесцвечивания содержимого пробирки. К полученному минерализату добавляют 9,9 мл воды очищенной и перемешивают.
<a id="p100050"></a>В химическую пробирку вносят необходимое количество минерализата (В) (табл.), содержащего 8-20 мкг азота, доводят объем раствора до 9,5 мл водой очищенной, перемешивают, прибавляют 0,5 мл реактива Несслера и вновь перемешивают.
<a id="p100051"></a>Измеряют оптическую плотность испытуемого и калибровочных растворов при 400 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм по сравнению с контрольным раствором, приготовленным аналогичным образом из контрольной пробы.
<a id="p100052"></a>Одновременно с испытуемым образцом для подтверждения правильности методики проводят анализ стандартного образца (CO) "Содержание белкового азота". Анализ проводят при каждом определении.
<a id="p100053"></a>Построение калибровочного графика. В химические пробирки вносят 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 мл стандартного раствора N 2 (0,05 мг/мл аммония сульфата), доводят объем растворов водой очищенной до 9,5 мл, перемешивают (содержание азота 5; 10; 15; 20; 25 мкг соответственно), прибавляют по 0,5 мл реактива Несслера и вновь перемешивают. Измеряют оптическую плотность, как указано выше. В качестве контрольного раствора используют 9,5 мл воды очищенной и 0,5 мл реактива Несслера. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество белкового азота (мкг), а по оси ординат - среднее значение оптической плотности.
<a id="p100054"></a>Калибровочный график воспроизводят при каждом анализе.
<a id="p100055"></a>Содержание белкового азота (X, мг/мл) вычисляют по формуле:

<a id="p100056"></a>,

<a id="p100057"></a>где: a - количество азота, рассчитанное по калибровочному графику, мкг;
<a id="p100058"></a>A - объем анализируемого образца, мл;
<a id="p100059"></a>B - объем минерализата, мл;
<a id="p100060"></a>1000 - перевод мкг в мг;
<a id="p100061"></a>10 - разведение минерализата.

<a id="p100062"></a>Содержание белка по белковому азоту (Y, мг/мл) вычисляют по формуле:

<a id="p100063"></a>Y = X · 6,25,

<a id="p100064"></a>где: X - содержание белкового азота, мг/мл;
<a id="p100065"></a>6,25 - коэффициент пересчета белкового азота на белок.
<a id="p100066"></a>Содержание белкового азота, полученное по методу А, должно составлять от 0,01 до 0,4 мг/мл.

<a id="p100067"></a>Примечания.
1. <a id="p100068"></a>Испытуемый раствор 1, 2, 3 или 5 мл раствора испытуемого образца (согласно Таблице 1) (содержание белкового азота в анализируемой пробе должно быть 0,08-0,4 мг).
2. <a id="p100069"></a>Основной стандартный раствор аммония сульфата 0,1 мг/мл (раствор N 1). В мерной колбе вместимостью 500 мл в воде очищенной растворяют 0,2357 г аммония сульфата, доведенного до постоянной массы в эксикаторе над безводным кальция хлоридом, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Основной раствор хранят при температуре 4-8 °С в колбе с притертой пробкой в течение 1 года.
3. <a id="p100070"></a>Стандартный раствор аммония сульфата 0,05 мг/мл (раствор N 2). В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 50 мл раствора N 1, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре 4-8 °С в колбе с притертой пробкой в течение 3 мес.
4. <a id="p100071"></a>Стандартный образец (CO) "Содержание белкового азота".
5. <a id="p100072"></a>Приготовление 80% раствора ТХУ. Растворяют 150 г ТХУ в 100 мл воды очищенной. После этого 1 мл раствора титруют 1М раствором натрия гидроксида (индикатор - фенолфталеин).
<a id="p100073"></a>Концентрацию ТХУ (X) в % в анализируемом растворе рассчитывают по формуле:

<a id="p100074"></a>X = a · 0,1634 · 100 = a · 16,34,

<a id="p100075"></a>где: a - количество 1М раствора натрия гидроксида, израсходованное на титрование испытуемого образца, мл;
<a id="p100076"></a>0,1634 - количество ТХУ, соответствующее 1 мл 1М раствора натрия гидроксида, г.
<a id="p100077"></a>Концентрация ТХУ должна быть 80-90%.
<a id="p100078"></a>Раствор ТХУ разводят до концентрации 80% и хранят в емкости из темного стекла в течение 6 мес. (растворы ТХУ меньших концентраций готовят соответствующим разведением 80% раствора). Перед каждым использованием раствора ТХУ проводят проверочное определение ее процентной концентрации.


## <a id="p100079"></a>Метод с использованием кислоты трихлоруксусной для определения содержания белкового азота от 2,5 до 10 мкг/мл (метод В)


<a id="p100080"></a>В центрифужную пробирку емкостью 10 мл вносят 5 мл испытуемого образца, прибавляют 0,72 мл 80% раствора ТХУ и перемешивают. Далее проводят минерализацию испытуемого образца по методу А. Одновременно в аналогичных условиях минерализуют контрольную пробу, содержащую 0,1 мл серной кислоты концентрированной. Объем минерализата доводят до 5 мл водой очищенной и перемешивают. Отбирают в пробирку 1 мл полученного раствора, доводят объем раствора водой очищенной до 9,5 мл, перемешивают, прибавляют 0,5 мл реактива Несслера и вновь перемешивают. Измеряют оптическую плотность испытуемого и калибровочных растворов при длине волны 400 нм в кюветах с толщиной слоя 20 мм по сравнению с контрольным раствором, приготовленным аналогичным образом из контрольной пробы.
<a id="p100081"></a>Содержание белкового азота (X) в мг/мл вычисляют по формуле:

<a id="p100082"></a>,

<a id="p100083"></a>где: а - количество азота, рассчитанное по калибровочному графику, мкг;
<a id="p100084"></a>5а - разведение минерализата, мл;
<a id="p100085"></a>5б - объем испытуемого образца, взятый на минерализацию, мл;
<a id="p100086"></a>1 - объем минерализата, взятый на колориметрирование, мл;
<a id="p100087"></a>1000 - перевод в миллиграммы.
<a id="p100088"></a>Построение калибровочного графика. В химические пробирки вносят 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6 мл стандартного раствора N 3 (содержание белкового азота 2; 4; 6; 8; 10; 12 мкг соответственно), доводят объем раствора водой очищенной до 9,5 мл, перемешивают, прибавляют по 0,5 мл реактива Несслера и вновь перемешивают. В качестве контрольного раствора используют 9,5 мл воды очищенной и 0,5 мл реактива Несслера. Измеряют оптическую плотность растворов, как указано выше. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество белкового азота (мкг), а по оси ординат - среднее значение оптической плотности.
<a id="p100089"></a>Калибровочный график воспроизводят при каждом анализе.
<a id="p100090"></a>Содержание белкового азота, полученное по методу В, должно составлять от 2,5 до 10 мкг/мл.

<a id="p100091"></a>Примечания.
1. <a id="p100092"></a>Основной стандартный раствор аммония сульфата 0,1 мг/мл (раствор N 1). Приготовление указано в методе А.
2. <a id="p100093"></a>Стандартный раствор аммония сульфата 0,02 мг/мл (раствор N 3). В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мл раствора N 1, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре 4-8 °С в колбе с притертой пробкой в течение 3 мес.
3. <a id="p100094"></a>Приготовление 80% раствор ТХУ. Приготовление указано в методе А.


## <a id="p100095"></a>Метод определения белкового азота с использованием фосфорновольфрамовой кислоты


<a id="p100096"></a>Определение проводят по ОФС "Определение белка" (метод В) с использованием фосфорновольфрамовой кислоты.
<a id="p100097"></a>Содержание белкового азота в неинфекционных аллергенах должно быть от 0,01 до 0,4 мг/мл.
<a id="p100098"></a>Построение калибровочного графика аналогично изложенному в методе А.
<a id="p100099"></a>Одновременно с испытуемым образцом для подтверждения правильности методики проводят анализ стандартного образца (CO) "Содержание белкового азота в неинфекционных аллергенах". Анализ проводят при каждом определении.
<a id="p100100"></a>Примечание.
<a id="p100101"></a>Стандартный образец (CO) "Содержание белкового азота в неинфекционных аллергенах". Определение проводят в соответствии с инструкцией по применению.



<a id="p100102"></a>

---



## Иллюстрации

$X = \frac{a \cdot 10}{A \cdot B \cdot 1000} = \frac{a}{A \cdot B \cdot 100}$

$X = \frac{a \cdot 5^{a}}{5^{\text{б}} \cdot 1 \cdot 1000} = \frac{a}{1000}$