---
title: "Без названия"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/bez-nazvaniya-2533"
---

## Без названия

# Документ 24238


<a id="p100001"></a>**МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ**

<a id="p100002"></a>**ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ**


| <a id="p100003"></a>Определение белка колориметрическим методом (метод Лоури) в иммунобиологических лекарственных препаратах | <a id="p100004"></a>ОФС.1.7.2.0023.15<br>Вводится впервые |
| --- | --- |


<a id="p100005"></a>Настоящая фармакопейная статья предназначена для определения белка колориметрическим методом (метод Лоури) в иммунобиологических лекарственных препаратах с использованием стандартного образца. Общие принципы метода, требования к стандартному, контрольному и испытуемому образцам изложены в ОФС "Определение белка".
<a id="p100006"></a>Для определения белка в иммунобиологических лекарственных препаратах применяют следующие модификации метода Лоури:
- <a id="p100007"></a>метод без предварительного осаждения белка (Метод I) для определения содержания белка от 0,04 до 0,16 мг/мл;
- <a id="p100008"></a>метод с предварительным осаждением белка (Метод II) для определения содержания белка от 0,1 до 0,13 мг/мл;
- <a id="p100009"></a>метод для сорбированных препаратов (Метод III) для определения содержания белка от 0,02 до 0,16 мг/мл;
- <a id="p100010"></a>метод для сорбированных препаратов (Метод IV) для определения содержания белка от 0,01 до 0,02 мг/мл.


## <a id="p100011"></a>Метод I (без предварительного осаждения белка)


<a id="p100012"></a>Метод рекомендован для определения белка в химических вакцинах и иммунобиологических лекарственных препаратах (ИЛП), в составе которых отсутствуют компоненты, влияющие на результаты анализа.
<a id="p100013"></a>Определение белка без предварительного осаждения проводят в соответствии с методикой, указанной в ОФС "Определение белка" (метод Лоури, метод А). В качестве контрольного раствора используют 1 мл воды очищенной или буферного раствора, указанного в фармакопейной статье или нормативной документации.
<a id="p100014"></a>Содержание белка в препарате рассчитывают по калибровочному графику.
<a id="p100015"></a>Построение калибровочного графика. К 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 мл стандартного раствора, добавляют воду очищенную до 1 мл (концентрация белка: 0,04; 0,08; 0,12; 0,16 мг/мл соответственно), перемешивают и далее проводят определение по методу А (без предварительного осаждения белка) в соответствии с ОФС "Определение белка" (Метод Лоури, метод А).
<a id="p100016"></a>Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество белка в мг, а по оси ординат - среднее значение оптической плотности. Калибровочный график воспроизводят при каждом анализе.
<a id="p100017"></a>Примечания.
1. <a id="p100018"></a>Испытуемый раствор. 1 мл испытуемого раствора, содержащий от 0,04 до 0,16 мг/мл белка.
2. <a id="p100019"></a>Стандартный раствор <*>. Стандартный образец (CO) с аттестованным значением содержания белка разводят до концентрации 0,2 мг/мл в соответствии с инструкцией по применению.

<a id="p100020"></a>

---

<a id="p100021"></a><*> В случае отсутствия CO, стандартный раствор может быть приготовлен, как указано в ОФС "Определение белка".


## <a id="p100022"></a>Метод II (с предварительным осаждением белка)


<a id="p100023"></a>Метод рекомендован для ИЛП, содержащих компоненты, влияющие на результаты анализа (тиомерсал, ароматические аминокислоты, сахара и т.п.)
<a id="p100024"></a>К 1 мл испытуемого раствора прибавляют 1 мл 20% раствора трихлоруксусной кислоты и перемешивают на вихревой мешалке. Пробу выдерживают при температуре от 2 до 8 °С в течение 18-20 ч. Осадок отделяют центрифугированием при температуре 4-8 °С при 2000 об./мин. в течение 30 мин., промывают 1 мл 10% раствора трихлоруксусной кислоты и центрифугируют в аналогичных условиях. Надосадочную жидкость удаляют, осадок растворяют в 0,2 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида, доводят объем раствора водой до 1 мл и перемешивают. К 0,5 мл полученного раствора прибавляют 0,5 мл воды очищенной, перемешивают на вихревой мешалке, прибавляют 5 мл реактива В, вновь перемешивают на вихревой мешалке и выдерживают при комнатной температуре в течение 10 мин. Далее анализ проводят по методу В в соответствии с ОФС "Определение белка" (метод Лоури, метод В).
<a id="p100025"></a>Примечания.
1. <a id="p100026"></a>Испытуемый раствор. 1 мл испытуемого раствора, содержащий от 0,1 до 0,13 мг/мл белка.
2. <a id="p100027"></a>Приготовление реактива В указано в ОФС "Определение белка" (Метод Лоури, метод А).
3. <a id="p100028"></a>Приготовление 10% и 20% растворов трихлоруксусной кислоты (ТХУ). Растворы готовят соответствующим разведением 80% раствора ТХУ.
4. <a id="p100029"></a>Приготовление 80% раствора (ТХУ). Растворяют 150 г ТХУ в 100 мл воды очищенной. Титруют 1 мл полученного раствора 1 М раствором натрия гидроксида, (индикатор фенолфталеин).
<a id="p100030"></a>Концентрацию ТХУ (X), выраженную в процентах, рассчитывают по формуле:

<a id="p100031"></a>X = a · 0,1634 · 100 = a · 16,34,

<a id="p100032"></a>где: a - объем 1 М раствора натрия гидроксида, пошедший на титрование испытуемого раствора, мл;
<a id="p100033"></a>0,1634 - количество ТХУ, соответствующее 1 мл 1 М раствора натрия гидроксида, г.
<a id="p100034"></a>Раствор ТХУ разводят в соответствии с полученными данными до концентрации 80%. Титр раствора проверяют не реже 1 раза в мес. При изменении установленной концентрации раствор готовят заново.
5. <a id="p100035"></a>Приготовление фосфорномолибденово-вольфрамового реактива. Перед использованием 2 N фосфорномолибденово-вольфрамовый реактив (2 N коммерческий реактив Фолина) разводят в 2 раза водой очищенной или готовят реактив в соответствии с ОФС "Реактивы. Индикаторы".


## <a id="p100036"></a>Метод III (для сорбированных препаратов с содержанием белка 0,02-0,16 мг/мл)


<a id="p100037"></a>В центрифужную пробирку отбирают 1 или 2 мл испытуемого раствора, тщательно перемешанного на вихревой мешалке, центрифугируют при температуре 4-5 °С при 3500 об./мин. в течение 30 мин. Надосадочную жидкость удаляют, осадок промывают 2 мл воды очищенной и вновь центрифугируют в тех же условиях, после чего надосадочную жидкость вновь сливают.
<a id="p100038"></a>К осадку прибавляют 1 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида, перемешивают, выдерживают 30 мин. при комнатной температуре, затем прибавляют 5 мл реактива В и снова перемешивают. Через 10 мин. прибавляют 0,5 мл фосфорномолибденово-вольфрамового реактива. Смесь перемешивают и центрифугируют при температуре 4-5 °С при 3500 об./мин. в течение 20 мин. Надосадочную жидкость сливают в пробирку и через 10 мин. измеряют оптическую плотность по методике, указанной в ОФС "Определение белка" (метод Лоури, метод А).
<a id="p100039"></a>В качестве контрольного раствора используют 1 или 2 мл воды очищенной или буферного раствора, указанного в фармакопейной статье или нормативной документации, прибавляют 1 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида, 5 мл реактива В и 0,5 мл фосфорномолибденово-вольфрамового реактива.
<a id="p100040"></a>Содержания белка рассчитывают по калибровочному графику, как указано в методе I. Калибровочный график воспроизводят при каждом определении.
<a id="p100041"></a>Примечания.
1. <a id="p100042"></a>Испытуемый раствор. 1 мл испытуемого раствора, содержащего от 0,04 до 0,16 мг/мл белка или 2 мл испытуемого раствора, содержащего от 0,02 мг/мл до 0,04 мг/мл белка.
2. <a id="p100043"></a>Приготовление стандартного раствора - указано в методе I.


## <a id="p100044"></a>Метод IV (для сорбированных препаратов с содержанием белка 0,01-0,02 мг/мл)


<a id="p100045"></a>2 мл испытуемого раствора центрифугируют при 3500 об./мин. при температуре 4-5 °С в течение 30 мин. Надосадочную жидкость удаляют, осадок промывают 2 мл воды очищенной и центрифугируют в тех же условиях. Затем надосадочную жидкость вновь удаляют.
<a id="p100046"></a>К осадку прибавляют 0,4 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида, перемешивают, выдерживают при комнатной температуре в течение 30 мин., затем прибавляют 2 мл реактива В и вновь перемешивают. Через 10 мин. прибавляют 0,2 мл фосфорномолибденово-вольфрамового реактива. Смесь перемешивают и центрифугируют при температуре 4-5 °С при 3500 об./мин. в течение 20 мин. Надосадочную жидкость сливают в пробирку и через 10 мин. измеряют оптическую плотность по методике, указанной в ОФС "Определение белка" (метод Лоури, метод А).
<a id="p100047"></a>В качестве контрольного раствора используют 2 мл воды очищенной или буферного раствора, указанного в фармакопейной статье или нормативной документации, прибавляют 0,4 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида, 2 мл реактива В и 0,2 мл фосфорномолибденово-вольфрамового реактива.
<a id="p100048"></a>Содержание белка рассчитывают по калибровочному графику, как указано в методе I.
<a id="p100049"></a>Построение калибровочного графика. К 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 мл, (концентрация белка: 0,02; 0,04; 0,06; 0,08 мг/мл соответственно) добавляют воду очищенную до объема 0,4 мл перемешивают, добавляют 2,0 мл фосфорномолибденово-вольфрамового реактива и вновь перемешивают. Далее определение проводят по методике, указанной в ОФС "Определение белка" (Метод Лоури, Метод А).
<a id="p100050"></a>Примечания.
1. <a id="p100051"></a>Испытуемый раствор. 2 мл испытуемого раствора с содержанием белка от 0,01 до 0,02 мг/мл.
2. <a id="p100052"></a>Приготовление стандартного раствора указано в методе I. При определении белка в сорбированных препаратах в фармакопейной статье или в нормативной документации может быть указан коэффициент, учитывающий не полную десорбцию белка.
<a id="p100053"></a>В случае, если в исходном препарате содержание белка выше, чем указано в методах I, II и III, его предварительно разводят до необходимой концентрации. Способ разведения и растворитель указывают в нормативной документации. При вычислении конечного результата учитывают степень разведения.



<a id="p100054"></a>

---