---
title: "Без названия"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/bez-nazvaniya-2516"
---

## Без названия

# Документ 24221


<a id="p100001"></a>**МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ**

<a id="p100002"></a>**ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ**


| <a id="p100003"></a>Определение содержания анатоксинов/токсинов в реакции флокуляции | <a id="p100004"></a>ОФС.1.7.2.0007.15<br>Вводится впервые |
| --- | --- |


<a id="p100005"></a>Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на реакцию флокуляции, которая предназначена для определения содержания анатоксинов или токсинов в растворах.
<a id="p100006"></a>Реакция флокуляции по Рамону (Ramon assay) основана на способности некоторых антигенов при соединении со специфическими антителами образовывать нерастворимый комплекс "антиген-антитело", который визуально выявляется в виде помутнения среды и образования хлопьев (флокулята). Характерной особенностью реакции флокуляции является феномен инициальной флокуляции, т.е. способность формирования флокулята в первую очередь в тех растворах, где содержание антигена и антител (токсина/анатоксина-антитоксина) эквивалентны.
<a id="p100007"></a>Для проведения испытания используют специфический антитоксин, калиброванный, в зависимости от использованного иммунохимического метода, в Международных единицах (ME) или Lf-эквивалентах (Lf-eq.). Предпочтительнее использовать антитоксины, калиброванные в единицах Lf-eq. против соответствующих международных референс-препаратов анатоксинов для флокуляционных тестов. За 1 Lf принимают количество анатоксина, которое вступает в реакцию флокуляции с 1 ME или 1 Lf-eq. антитоксина в наиболее короткий промежуток времени. Содержание токсина/анатоксина в растворе, определенное в реакции флокуляции, выражают в Lf/мл.

<a id="p100008"></a>**ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ**

<a id="p100009"></a>Специфический антитоксин в концентрации 100 ME или Lf-eq. в 1 мл вносят в возрастающих объемах (количествах МЕ/мл) в ряд пробирок, содержащих равные объемы испытуемого раствора токсина/анатоксина. Содержимое каждой пробирки доводят до равного объема 0,9% раствором натрия хлорида. Смеси перемешивают, избегая образования пены. Пробирки со смесями инкубируют на водяной бане при температуре 45-50 °С, периодически оценивая состояние растворов.
<a id="p100010"></a>Результат реакции оценивают в проходящем свете, при необходимости применяют лупу. Отмечают пробирки, в которых раньше других произошла флокуляция, и время наступления флокуляции (Kf). Пробирка, в которой раньше других наблюдается появление хлопьев (инициальная флокуляция), содержит эквивалентные или близкие к эквивалентным количества антигена и антител. Для расчета содержания антигена учитывают концентрацию антитоксина в этой пробирке. Если инициальная флокуляция наблюдается одновременно в 2 пробирках, для расчета берут среднее значение показателей концентрации антитоксина, содержащегося в этих пробирках. Если перед проведением реакции флокуляции испытуемый раствор был разведен, то для расчета содержания анатоксина в растворе полученный результат умножают на степень разведения.
<a id="p100011"></a>Показатель (Kf) является полезным индикатором качества антигена. Если при данных значениях температуры и концентраций анатоксина и антитоксина значение Kf при повторных испытаниях увеличивается по сравнению с наблюдавшимся ранее, это может свидетельствовать о разрушении антигена и снижении его иммуногенной активности.
<a id="p100012"></a>Определение содержания анатоксина в испытуемом образце представлено в табл.

<a id="p100013"></a>Таблица

<a id="p100014"></a>Определение содержания анатоксина в испытуемом образце


<table>
<colgroup><col width="54%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100015"></a>Испытуемый раствор</td><td colspan="5"><a id="p100016"></a>N пробирки</td></tr>
<tr><td><a id="p100017"></a>1</td><td><a id="p100018"></a>2</td><td><a id="p100019"></a>3</td><td><a id="p100020"></a>4</td><td><a id="p100021"></a>5</td></tr>
<tr><td><a id="p100022"></a>Объем раствора испытуемого анатоксина, мл</td><td><a id="p100023"></a>1</td><td><a id="p100024"></a>1</td><td><a id="p100025"></a>1</td><td><a id="p100026"></a>1</td><td><a id="p100027"></a>1</td></tr>
<tr><td><a id="p100028"></a>Объем внесенного раствора соответствующего антитоксина, мл</td><td><a id="p100029"></a>0,35</td><td><a id="p100030"></a>0,40</td><td><a id="p100031"></a>0,45</td><td><a id="p100032"></a>0,50</td><td><a id="p100033"></a>0,55</td></tr>
<tr><td><a id="p100034"></a>Активность внесенного антитоксина, МЕ/мл</td><td><a id="p100035"></a>35</td><td><a id="p100036"></a>40</td><td><a id="p100037"></a>45</td><td><a id="p100038"></a>50</td><td><a id="p100039"></a>55</td></tr>
<tr><td><a id="p100040"></a>Объем внесенного 0,9% раствора натрия хлорида, мл</td><td><a id="p100041"></a>0,65</td><td><a id="p100042"></a>0,60</td><td><a id="p100043"></a>0,55</td><td><a id="p100044"></a>0,50</td><td><a id="p100045"></a>0,45</td></tr>
</table>


<a id="p100046"></a>В данном примере раньше других наблюдалась флокуляция в пробирке N 3, следовательно, в этой пробирке содержание анатоксина близко или эквивалентно количеству внесенного антитоксина. В данном случае - 45 Lf/мл. Если испытуемый раствор был разведен в 10 раз, содержание анатоксина в нем равно 450 (45 · 10) Lf/мл. Если инициальная флокуляция произошла в пробирке N 1 или N 5, результаты не учитывают, а тест повторяют, изменив количество вносимого антитоксина или разведение испытуемого раствора токсина/анатоксина. Для выполнения повторной реакции объемы вносимого в пробирки антитоксина следует выбирать с учетом того, чтобы крайняя пробирка (N 1 или N 5), в которой наблюдалась инициальная флокуляция, оказалась в середине ряда.
<a id="p100047"></a>Для получения более точных результатов повторяют тест, выполняя реакцию флокуляции с объемами вносимого антитоксина, близкими по значению к эквивалентной концентрации, используя меньшие различия во вносимых объемах. Например: если инициальная флокуляция произошла в пробирке N 3, следует для уточнения эквивалентной концентрации повторить реакцию, внося в пробирки ряда антитоксин в объемах 0,41; 0,43; 0,45; 0,47; 0,49 мл.
<a id="p100048"></a>Для подтверждения полученных результатов тест повторяют при тех же условиях. Результаты считаются приемлемыми, если в повторных тестах наблюдаются различия не более чем на 1 разведение антитоксина. За окончательное значение принимают среднее арифметическое повторных измерений.

<a id="p100049"></a>Реакция флокуляции для растворов с низкой концентрацией
анатоксинов/токсинов

<a id="p100050"></a>Для растворов анатоксинов или токсинов с низкой концентрацией (менее 5 Lf/мл) предпочтительнее использовать метод смешанной флокуляции, поскольку Lf смеси анатоксинов равен сумме их Lf (при условии их гомогенности). Метод заключается в сравнении значений Lf раствора анатоксина с предварительно установленной концентрацией с Lf этого же анатоксина в смеси с испытуемым анатоксином низкой концентрации.
<a id="p100051"></a>Если токсины/анатоксины не гомогенны, может возникать ложная картина с 2 флокуляционными максимумами. Например: анатоксин с известным содержанием разводят 0,9% раствором натрия хлорида в соотношении 1:1. Тот же анатоксин смешивают с раствором испытуемого анатоксина низкой концентрации в равных соотношениях. Каждую из смесей разливают по 1 мл в ряд пробирок. В пробирки обоих рядов вносят в возрастающих объемах антитоксин с концентрацией 100 МЕ/мл и 0,9% раствор натрия хлорида для доведения общего объема в каждой из пробирок до постоянной величины. Инкубируют пробирки на водяной бане при температуре 45-50 °С, периодически оценивая состояние раствора. Отмечают пробирки с инициальной флокуляцией в каждом ряду. Разница значений показателей инициальной флокуляции обоих рядов указывает на содержание анатоксина в испытуемом растворе.



<a id="p100052"></a>

---