---
title: "Без названия"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/bez-nazvaniya-2514"
---

## Без названия

# Документ 24219


<a id="p100001"></a>**МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ**

<a id="p100002"></a>**ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ**


| <a id="p100003"></a>Иммуногенность коклюшной суспензии и цельноклеточного коклюшного компонента комбинированных вакцин | <a id="p100004"></a>ОФС.1.7.2.0005.15<br>Вводится впервые |
| --- | --- |


<a id="p100005"></a>Настоящая общая фармакопейная статья предназначена для определения иммуногенности коклюшной суспензии и цельноклеточного коклюшного компонента комбинированных вакцин путем сравнения с иммуногенностью  референс-препарата коклюшной вакцины, откалиброванного в международных единицах (ME) по соответствующему международному стандартному образцу. Определение проводят на модели экспериментального менингоэнцефалита при внутримозговом введении иммунизированным мышам заражающей дозы тест-штамма Bordetella pertussis 18323 по методу Kendrick.


## <a id="p100006"></a>Материалы


<a id="p100007"></a>Животные. Здоровые мыши с массой тела () г чувствительной линии или аутбредные мыши, способные давать адекватный иммунный ответ. Используют мышей одного пола или самцов и самок, равномерно распределенных по группам. В 1 опыте различия массы тела отдельных животных не должны превышать 2 г. Перед проведением испытания за животными проводят наблюдение в течение 3 сут. При гибели более 10% мышей данную партию не используют.
<a id="p100008"></a>Референс-препараты:
- <a id="p100009"></a>стандартный образец иммуногенности коклюшной вакцины, калиброванный в ME по соответствующему международному стандартному образцу;
- <a id="p100010"></a>стандартный образец мутности 10 ME, калиброванный в международных оптических единицах (ME).
<a id="p100011"></a>Тест-штамм. В. pertussis 18323, хранят в лиофилизированном состоянии. Продолжительность хранения высушенного штамма не должна превышать 10 лет; биологические свойства лиофилизированного тест-штамма проверяют ежегодно.
<a id="p100012"></a>Среды. Используют среды Борде-Жангу, казеиново-угольный агар (КУА), их модификации или другие среды, адаптированные к коклюшному микробу.
<a id="p100013"></a>Среда Борде-Жангу.
<a id="p100014"></a>В 1500 мл воды очищенной последовательно растворяют ингредиенты:
- <a id="p100015"></a>калий фосфорнокислый двузамещенный - 2,25 г;
- <a id="p100016"></a>калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,75 г;
- <a id="p100017"></a>калий хлористый - 1,5 г;
- <a id="p100018"></a>магний сернокислый - 0,075 г;
- <a id="p100019"></a>натрий хлористый - 7,5 г.
<a id="p100020"></a>Полученный солевой раствор до внесения следующих ингредиентов должен иметь pH 7,4-7,5.
<a id="p100021"></a>Затем в солевой раствор вносят:
- <a id="p100022"></a>фильтрат картофельного отвара - 500 мл,
- <a id="p100023"></a>агар зарубежных фирм "Дифко" (США) или "Мерк" (Германия) - 60 г.
<a id="p100024"></a>Среду кипятят до полного растворения агара, устанавливают pH 7,1-7,2, разливают по () мл в стерильные флаконы вместимостью 500 мл и стерилизуют при температуре 110 °С в течение 30 мин. Среду Борде-Жангу хранят при температуре от 2 до 8 °С не более 3 мес.

<a id="p100025"></a>Фильтрат картофельного отвара.
<a id="p100026"></a>В 1 л воды очищенной вносят 0,5 кг очищенного мелко нарезанного картофеля и нагревают до кипения. В момент закипания добавляют 40 мл глицерина и кипятят в закрытой посуде до полного разваривания картофеля в течение 1,0-1,5 ч. Доводят объем водой очищенной до первоначального уровня и процеживают через двухслойную марлевую салфетку. Картофельный отвар используют свежеприготовленным.
<a id="p100027"></a>Для получения среды Борде-Жангу с 30% крови содержимое флакона нагревают до температуры 50-55 °С, вносят 60 мл дефибринированной крови человека, перемешивают и разливают в чашки Петри. Срок хранения среды с кровью - 10 сут. при температуре от 2 до 8 °С.
<a id="p100028"></a>Примечание.
<a id="p100029"></a>Дефибринированную кровь получают на участках заготовки крови, где ее контролируют на отсутствие возбудителей инфекций, которые передаются при гемотрансфузиях, в соответствии с утвержденными уполномоченными органами РФ "Инструкцией по заготовке и консервированию донорской крови" и "Инструкцией по проведению донорского прерывистого плазмафереза". Срок хранения крови не более 2 сут.

<a id="p100030"></a>Среда КУА (казеиново-угольный агар).
<a id="p100031"></a>На 1 л среды добавляют:
- <a id="p100032"></a>гидролизат казеина - () мл (берется из расчета, чтобы в готовой среде содержание аминного азота составляло от 150 до 160 мг %);
- <a id="p100033"></a>дрожжевой диализат - () мл;
- <a id="p100034"></a>калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,5 г;
- <a id="p100035"></a>магний хлористый 6-водный - 0,4 г;
- <a id="p100036"></a>крахмал растворимый - 1,5 г;
- <a id="p100037"></a>кальций хлористый - 0,01 г или 1% раствор - 1 мл;
- <a id="p100038"></a>железо сернокислое 7-водное - 0,01 г или 0,5% раствор - 2 мл;
- <a id="p100039"></a>медь сернокислая 5-водная - 0,005 г или 0,2% раствор - 2 мл;
- <a id="p100040"></a>цистеин - 0,03 г или 1,5% раствор - 2 мл;
- <a id="p100041"></a>агар микробиологический - 30,0 г;
- <a id="p100042"></a>уголь активированный - 2 г.
<a id="p100043"></a>Содержание хлоридов в среде должно составлять ()%, аминного азота ( мг %); pH среды доводят до 7,0-7,1 с помощью 20% раствора натрия гидроксида.
<a id="p100044"></a>Среду разливают в матрацы по () мл, пробирки по () мл и флаконы вместимостью 500 мл по () мл, стерилизуют 30 мин при температуре 110 °С и хранят при температуре от 2 до 8 °С не более 1 мес. Для получения среды с 10% крови содержимое флакона растапливают, охлаждают до температуры 50-55 °С, вносят 20 мл дефибринированной крови человека и перемешивают. Срок хранения среды с кровью 10 сут. при температуре от 2 до 8 °С.
<a id="p100045"></a>Гидролизат казеина:
- <a id="p100046"></a>казеин (сухой) - 2000 г;
- <a id="p100047"></a>хлористоводородная кислота концентрированная - 1000 мл;
- <a id="p100048"></a>вода очищенная - 500 мл.
<a id="p100049"></a>Степень расщепления белка - не менее 93%. Аминный азот 850-1000 мг %, общий азот 910-1080 мг %, натрия хлорид 4-6%. Среду стерилизуют 30 мин при температуре 110 °С. Среду используют свежеприготовленной (при добавлении 0,5% хлороформа срок хранения 1 год при температуре от 2 до 8 °С).
<a id="p100050"></a>Дрожжевой диализат:
- <a id="p100051"></a>дрожжи хлебопекарные - 1000 г;
- <a id="p100052"></a>вода очищенная - 1000 мл;
- <a id="p100053"></a>хлороформ - 4 мл.
<a id="p100054"></a>Аминный азот - не менее 0,54 мг/мл. Срок хранения 3 мес. при температуре от 2 до 8 °С.
<a id="p100055"></a>1% раствор гидролизата казеина.
<a id="p100056"></a>Гидролизат казеина - 10 мл (аминный азот 8,5-10,0 мг/мл), натрий хлористый - 6,0 г (до концентрации хлоридов 0,6%), вода очищенная - до 1000 мл. С помощью 20% раствора натрия гидроксида pH доводят до (). Среду стерилизуют 15 мин при температуре 121 °С. Срок хранения 6 мес. Каждую серию гидролизата казеина проверяют на безвредность путем внутримозгового введения 5 мышам по 0,03 мл. Животные должны оставаться живыми и здоровыми в течение 3 сут.


## <a id="p100057"></a>Метод исследования иммуногенной активности коклюшной вакцины


<a id="p100058"></a>Мышей распределяют в группы по 18-20 животных в каждой: по 2 группы для испытуемого и референс-препаратов. Одновременно для контроля вирулентности заражающего штамма B. pertussis 18323 (определение LD50 культуры) из этой же партии животных формируют 4 группы по 10 мышей в каждой.
<a id="p100059"></a>Необходимо соблюдать принцип случайного распределения животных по группам, случайными должны быть и расположение клеток на полках, и порядок введения разрешающей дозы.

<a id="p100060"></a>Иммунизация мышей.
<a id="p100061"></a>Готовят по 3 пятикратных разведения испытуемого и референс-препаратов. В качестве растворителя используют 0,9% раствор натрия хлорида, pH (). В интервале используемых разведений каждого образца должна содержаться средняя эффективная доза ED50.
<a id="p100062"></a>В ампулу с референс-препаратом вносят стерильный растворитель из такого расчета, чтобы в 1 мл содержалась 1 ME (разведение I). Из разведения I делают 2 последующих пятикратных разведения по схеме (табл. 1).

<a id="p100063"></a>Таблица 1

<a id="p100064"></a>*Пример* разведения референс-препарата


<table>
<colgroup><col width="14%"><col width="15%"><col width="17%"><col width="15%"><col width="23%"><col width="15%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100065"></a>Разведение</td><td rowspan="2"><a id="p100066"></a>Объем вносимого разведения I референс-препарата, мл</td><td rowspan="2"><a id="p100067"></a>Объем вносимого растворителя, мл</td><td rowspan="2"><a id="p100068"></a>Разведения референс-препарата<br>(в 0,5 мл)</td><td colspan="2"><a id="p100069"></a>Иммунизирующая доза - 0,5 мл</td></tr>
<tr><td><a id="p100070"></a>Количество исходного референс-препарата, мл</td><td><a id="p100071"></a>Количество ME</td></tr>
<tr><td><a id="p100072"></a>I</td><td><a id="p100073"></a>15</td><td><a id="p100074"></a>0</td><td><a id="p100075"></a>1:60</td><td><a id="p100076"></a>0,0167</td><td><a id="p100077"></a>0,5</td></tr>
<tr><td><a id="p100078"></a>II</td><td><a id="p100079"></a>2,5</td><td><a id="p100080"></a>10,0</td><td><a id="p100081"></a>1:300</td><td><a id="p100082"></a>0,0033</td><td><a id="p100083"></a>0,1</td></tr>
<tr><td><a id="p100084"></a>III</td><td><a id="p100085"></a>0,5</td><td><a id="p100086"></a>12,0</td><td><a id="p100087"></a>1:1500</td><td><a id="p100088"></a>0,00066</td><td><a id="p100089"></a>0,02</td></tr>
</table>


<a id="p100090"></a>Образец испытуемой вакцины разводят в 14 раз (разведение I). Из разведения I делают 2 последующих пятикратных разведения по схеме (табл. 2). Если полученное в опыте значение ED50 испытуемой вакцины будет больше значений использованных доз, необходимо изменить разведение I (например, 1:10). Последующие 2 разведения делают по вышеприведенной схеме.
<a id="p100091"></a>Приготовленные разведения вакцины и референс-препарата хранят при температуре от 2 до 8 °С и используют в течение не более 4 ч.

<a id="p100092"></a>Таблица 2

<a id="p100093"></a>*Пример* разведения испытуемой вакцины


<table>
<colgroup><col width="14%"><col width="16%"><col width="17%"><col width="16%"><col width="17%"><col width="20%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100094"></a>Разведение</td><td rowspan="2"><a id="p100095"></a>Объем вносимого<br>I разведения вакцины, мл</td><td rowspan="2"><a id="p100096"></a>Объем вносимого растворителя, мл</td><td rowspan="2"><a id="p100097"></a>Кратность разведений исходной вакцины<br>(в 0,5 мл)</td><td colspan="2"><a id="p100098"></a>Иммунизирующая доза в объеме 0,5 мл</td></tr>
<tr><td><a id="p100099"></a>Количество исходной вакцины, мл</td><td><a id="p100100"></a>Количество ME (предполагаемое содержание)</td></tr>
<tr><td><a id="p100101"></a>I</td><td><a id="p100102"></a>14</td><td><a id="p100103"></a>0</td><td><a id="p100104"></a>1:28</td><td><a id="p100105"></a>0,0357</td><td><a id="p100106"></a>0,5</td></tr>
<tr><td><a id="p100107"></a>II</td><td><a id="p100108"></a>2,5</td><td><a id="p100109"></a>10,0</td><td><a id="p100110"></a>1:140</td><td><a id="p100111"></a>0,0071</td><td><a id="p100112"></a>0,1</td></tr>
<tr><td><a id="p100113"></a>III</td><td><a id="p100114"></a>0,5</td><td><a id="p100115"></a>12,0</td><td><a id="p100116"></a>1:700</td><td><a id="p100117"></a>0,00142</td><td><a id="p100118"></a>0,02</td></tr>
</table>


<a id="p100119"></a>Каждой мыши в каждой группе внутрибрюшинно вводят по 0,5 мл одного из разведений испытуемой вакцины или референс-препарата. К моменту введения заражающей дозы не менее 94% иммунизированных мышей должно остаться в живых и без признаков заболевания. Если гибель животных превышает указанную величину, то опыт не подлежит учету.

<a id="p100120"></a>Приготовление заражающей суспензии тест-штамма B. pertussis 18323.
<a id="p100121"></a>Бактериальную суспензию B. pertussis 18323, используемую для заражения, готовят из 20-24-часовой культуры второго-третьего пассажа, выращенной на среде Борде-Жангу, с кровью человека или КУА с кровью человека или на других, адаптированных к коклюшному микробу средах.
<a id="p100122"></a>Выросшую культуру контролируют путем микроскопии мазков, окрашенных по Граму. Микробные клетки B. pertussis 18323 должны быть морфологически однородны. Посторонняя микрофлора должна отсутствовать.
<a id="p100123"></a>Готовят бактериальную суспензию микробных клеток с концентрацией, соответствующей 10 ME по стандартному образцу мутности (разведение 1А). Все дальнейшие разведения микробной суспензии делают в 1% растворе гидролизата казеина, содержащего 0,6% раствор натрия хлорида, pH ().
<a id="p100124"></a>Полученную суспензию разводят последовательно так, чтобы получить заражающую дозу, содержащую 100000 микробных клеток (рабочая суспензия) в объеме 0,03 мл (100-1000 LD50). Из рабочей суспензии готовят разведения 1/10, 1/50, 1/250 и 1/1250 для определения LD50 тест-штамма и проверки жизнеспособности микробов в суспензии (табл. 3).

<a id="p100125"></a>Таблица 3

<a id="p100126"></a>*Пример* разведения тест-штамма B. pertussis 18323


<table>
<colgroup><col width="13%"><col width="14%"><col width="23%"><col width="16%"><col width="18%"><col width="16%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100127"></a>Номер пробирки</td><td><a id="p100128"></a>Кратность разведения</td><td><a id="p100129"></a>Объем переносимой суспензии из предыдущей пробирки в последующую, мл</td><td><a id="p100130"></a>Объем внесенного растворителя, мл</td><td><a id="p100131"></a>Полученная суспензия содержит<br>в 0,03 мл (эквивалентно)</td><td><a id="p100132"></a>Назначение</td></tr>
<tr><td><a id="p100133"></a>1</td><td><a id="p100134"></a>1A:3</td><td><a id="p100135"></a>1</td><td><a id="p100136"></a>2</td><td><a id="p100137"></a>100 млн</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100138"></a>2</td><td><a id="p100139"></a>11:10</td><td><a id="p100140"></a>0,5</td><td><a id="p100141"></a>4,5</td><td><a id="p100142"></a>10 млн</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100143"></a>3</td><td><a id="p100144"></a>12:10</td><td><a id="p100145"></a>0,5</td><td><a id="p100146"></a>4,5</td><td><a id="p100147"></a>1 млн</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100148"></a>4</td><td><a id="p100149"></a>13:10</td><td><a id="p100150"></a>2</td><td><a id="p100151"></a>18</td><td><a id="p100152"></a>100000</td><td><a id="p100153"></a>Разливают в 3 пробирки для заражения - рабочая суспензия</td></tr>
<tr><td><a id="p100154"></a>5</td><td><a id="p100155"></a>14:10</td><td><a id="p100156"></a>0,5</td><td><a id="p100157"></a>4,5</td><td><a id="p100158"></a>10000</td><td rowspan="4"><a id="p100159"></a>Для определения LD50 штамма</td></tr>
<tr><td><a id="p100160"></a>6</td><td><a id="p100161"></a>15:5</td><td><a id="p100162"></a>1,0</td><td><a id="p100163"></a>4,0</td><td><a id="p100164"></a>2000</td></tr>
<tr><td><a id="p100165"></a>7</td><td><a id="p100166"></a>16:5</td><td><a id="p100167"></a>1.0</td><td><a id="p100168"></a>4,0</td><td><a id="p100169"></a>400</td></tr>
<tr><td><a id="p100170"></a>8</td><td><a id="p100171"></a>17:5</td><td><a id="p100172"></a>1,0</td><td><a id="p100173"></a>4,0</td><td><a id="p100174"></a>80</td></tr>
</table>


<a id="p100175"></a>Из пробирки 8 сразу после приготовления разведения делают посев по 0,1 мл на 3 чашки Петри со средой Борде-Жангу или КУА с кровью с целью подсчета количества содержащихся в ней живых клеток, выраженного в колониеобразующих единицах (КОЕ). Культуру помещают в термостат с температурой () °С на 3-4 сут. Для определения количества КОЕ в 30 мкл проводят подсчет выросших колоний на 3 чашках, и полученное значение делят на 10. В 0,03 мл разведения из пробирки 8 должно быть не более 50 КОЕ.
<a id="p100176"></a>При разведении и в процессе заражения суспензию хранят в холодной водяной бане (вода со льдом). Продолжительность работы с микробной суспензией не должна превышать 2,5 ч с момента приготовления смыва культуры.
<a id="p100177"></a>Если в испытании используют высокочувствительную к коклюшным антигенам линию мышей, то заражающую дозу тест-штамма 18323 следует уменьшить до содержания 100-1000 LD50 в объеме 0,03 мл.

<a id="p100178"></a>Заражение иммунизированных животных.
<a id="p100179"></a>Мышам, иммунизированным испытуемой вакциной и референс-препаратом, через 14-17 сут. интрацеребрально вводят по 0,03 мл рабочей суспензии живой культуры тест-штамма B. pertussis 18323 (пробирка 4) путем прокола лобной кости в точке, расположенной в 2 мм от средней линии и на 2 мм выше глаза. Для заражения используют туберкулиновые шприцы с ценой деления 0,01 мл, используя иглу N 27, имеющую короткий срез и муфту; длина свободного конца иглы от края муфты до среза должна составлять от 3 до 4 мм. Для определения величины LD50 разведения заражающей дозы (пробирки 5, 6, 7, 8) вводят контрольным мышам соответствующих групп интрацеребрально по 0,03 мл.
<a id="p100180"></a>Мышей, погибших в течение 3 сут. после заражения, исключают из опыта (неспецифическая гибель); в каждой клетке оставляют по 16 мышей.
<a id="p100181"></a>За зараженными животными наблюдают 14 сут. с ежедневной регистрацией их гибели. В день учета результатов (14-е сут.) в число погибших включают также всех парализованных мышей.
<a id="p100182"></a>Вычисление величины LD50 (табл. 4) культуры тест-штамма производят по формуле Кербера:

<a id="p100183"></a>,

<a id="p100184"></a>где: DN - максимальная из испытуемых доз;
 - <a id="p100185"></a>логарифм кратности разведения (отношение большей дозы к следующей за ней меньшей дозе);
<a id="p100186"></a>Li - отношение числа животных, погибших при введении данной дозы культуры, к общему числу животных, которым эта доза была введена;
 - <a id="p100187"></a>сумма значений Li, найденных для всех испытанных доз.

<a id="p100188"></a>Таблица 4

<a id="p100189"></a>*Пример* расчета величины LD50 культуры
тест-штамма B. pertussis 18323


<table>
<colgroup><col width="19%"><col width="16%"><col width="26%"><col width="13%"><col width="9%"><col width="17%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100190"></a>Доза культуры (число микробных клеток) 0,03 мл</td><td><a id="p100191"></a>Число зараженных животных</td><td><a id="p100192"></a>Число погибших (парализованных) из общего числа зараженных животных</td><td><a id="p100193"></a>Значения Li</td><td><a id="p100194"></a>LD50</td><td><a id="p100195"></a>Кол-во колоний в заражающей дозе 80 клеток</td></tr>
<tr><td><a id="p100196"></a>104</td><td><a id="p100197"></a>10</td><td><a id="p100198"></a>9/10</td><td><a id="p100199"></a>0,9</td><td rowspan="4"><a id="p100200"></a>648</td><td rowspan="4"><a id="p100201"></a>23</td></tr>
<tr><td><a id="p100202"></a>2 · 103</td><td><a id="p100203"></a>10</td><td><a id="p100204"></a>7/10</td><td><a id="p100205"></a>0,7</td></tr>
<tr><td><a id="p100206"></a>4 · 102</td><td><a id="p100207"></a>10</td><td><a id="p100208"></a>4/10</td><td><a id="p100209"></a>0,4</td></tr>
<tr><td><a id="p100210"></a>80</td><td><a id="p100211"></a>10</td><td><a id="p100212"></a>2/10</td><td><a id="p100213"></a>0,2</td></tr>
<tr><td colspan="3"></td><td></td><td colspan="2"></td></tr>
</table>


<a id="p100215"></a>lg LD50 = lg · 104 - lg 5 · (2,2 - 0,5) = 4,0 - 0,699 · 1,7 = 2,8117
<a id="p100216"></a>LD50 = 648 микробных клеток.
<a id="p100217"></a>В заражающей дозе (105 микробных клеток) содержится 648 = 154 LD50.


## <a id="p100218"></a>Оценка иммуногенной активности испытуемой вакцины


<a id="p100219"></a>Расчет иммуногенной активности испытуемого препарата проводят по методу Вильсона и Вустера с использованием таблиц Национального института здоровья США (для n = 16) или статистическим методом с помощью программы Probit-analysis. Для проведения расчета в таблице Вильсона-Вустера (табл. 5) по вертикальной оси отмечают величину, равную сумме выживших мышей от всех 3 доз препарата (А), по горизонтальной оси - разницу между числом мышей, выживших от наибольшей и наименьшей доз, взятых в опыт (В). В месте пересечения прямых, проведенных от соответствующих величин А и В, находят ED50 (верхняя цифра) и ее стандартные отклонения, выраженные в процентах (нижние цифры). Найденное значение соответствует ED50 для средней иммунизирующей дозы, равной 100 мл. Для определения величины ED50 в опыте, найденную в таблице величину ED50 делят на 100 и умножают на значение средней иммунизирующей дозы в данном опыте. Результаты опыта считают достоверными, если стандартное отклонение средней иммунизирующей дозы не ниже 64% и не выше 157% от найденного значения ED50.
<a id="p100220"></a>Примеры расчета количества ME в 1 мл по методу Вильсона и Вустера приведены в табл. 6.

<a id="p100221"></a>Таблица 5

<a id="p100222"></a>Таблица Вильсона-Вустера



<a id="p100224"></a>Таблица 6

<a id="p100225"></a>*Пример* расчета иммуногенной активности вакцины


<table>
<colgroup><col width="13%"><col width="13%"><col width="15%"><col width="17%"><col width="15%"><col width="12%"><col width="16%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100226"></a>Препарат</td><td colspan="3"><a id="p100227"></a>Доза препарата в 0,5 мл</td><td rowspan="2"><a id="p100228"></a>Количество выживших мышей/ общее число зараженных в группе</td><td rowspan="2"><a id="p100229"></a>Величины А/В и ED50 по таблице</td><td rowspan="2"><a id="p100230"></a>ED50 (стандартные отклонения в опыте)</td></tr>
<tr><td><a id="p100231"></a>Разведение</td><td><a id="p100232"></a>Количество исходного препарата, мл</td><td><a id="p100233"></a>Количество ME в иммунизирующей дозе</td></tr>
<tr><td rowspan="3"><a id="p100234"></a>Референс-препарат</td><td><a id="p100235"></a>1:60</td><td><a id="p100236"></a>0,0167</td><td><a id="p100237"></a>0,5</td><td><a id="p100238"></a>14/16</td><td rowspan="3"><a id="p100239"></a>27/11<br>71,3<br>72-139</td><td rowspan="3"><a id="p100240"></a>0,0023<br>(0,00327 - 0,00169)</td></tr>
<tr><td><a id="p100241"></a>1:300</td><td><a id="p100242"></a>0,0033</td><td><a id="p100243"></a>0,1</td><td><a id="p100244"></a>10/16</td></tr>
<tr><td><a id="p100245"></a>1:1500</td><td><a id="p100246"></a>0,00066</td><td><a id="p100247"></a>0,02</td><td><a id="p100248"></a>3/16</td></tr>
<tr><td rowspan="3"><a id="p100249"></a>Вакцина</td><td><a id="p100250"></a>1:28</td><td><a id="p100251"></a>0,0357</td><td></td><td><a id="p100252"></a>13/16</td><td rowspan="3"><a id="p100253"></a>23/11<br>111,75<br>72-139</td><td rowspan="3"><a id="p100254"></a>0,0079<br>(0,011 - 0,0057)</td></tr>
<tr><td><a id="p100255"></a>1:140</td><td><a id="p100256"></a>0,0071</td><td></td><td><a id="p100257"></a>8/16</td></tr>
<tr><td><a id="p100258"></a>1:700</td><td><a id="p100259"></a>0,00142</td><td></td><td><a id="p100260"></a>2/16</td></tr>
</table>


<a id="p100261"></a>Средняя иммунизирующая доза референс-препарата, выраженная в мл (0,0033 мл), содержит 0,1 ME (табл. 6). При определении ED50 референс-препарата используют значение средней иммунизирующей дозы, выраженное в ME.

<a id="p100262"></a> ME,

<a id="p100263"></a> ME,

<a id="p100264"></a> ME,

<a id="p100265"></a> мл,

<a id="p100266"></a> мл,

<a id="p100267"></a> мл.

<a id="p100268"></a>Количество ME в 1 мл вакцины определяют по формуле:

<a id="p100269"></a>,

<a id="p100270"></a> МЕ/мл.

<a id="p100271"></a>Доверительный интервал значения иммуногенности (МЕ/мл) препарата рассчитывают по формулам:

<a id="p100272"></a>;

<a id="p100273"></a>Rмакс = R · K,

<a id="p100274"></a>где: R - количество ME в 1 мл препарата;
<a id="p100275"></a>Rмин - нижний предел доверительного интервала;
<a id="p100276"></a>Rмакс - верхний предел доверительного интервала;
<a id="p100277"></a>K - доверительный коэффициент.

<a id="p100278"></a>,

<a id="p100279"></a>где: S1 = (lg ED50)макс. - lg ED50 для более иммуногенного препарата при избранном уровне существенности различия - 95 или 99%;
<a id="p100280"></a>S2 = lg ED50 - (lg ED50)мин. для менее иммуногенного препарата.
<a id="p100281"></a>Для примера:



<a id="p100283"></a>.
<a id="p100284"></a>K = 1,6
<a id="p100285"></a>Отсюда:

<a id="p100286"></a>; т.е.  МЕ

<a id="p100287"></a>Rмакс = R · K; т.е. 9,0 ME · 1,6 = 14,4 ME

<a id="p100288"></a>Таким образом, в 1 мл вакцины содержится 9,0 ME с доверительным интервалом от 5,6 до 14,4 ME.
<a id="p100289"></a>Если в первом опыте активность препарата не соответствует установленным требованиям, опыт повторяют. В этом случае при вычислении количества ME в 1,0 мл препарата учитывают результаты всех достоверных опытов (не более 3). Используют расчет средней геометрической (Xгеом.) величины значения по формуле:

<a id="p100290"></a>,

<a id="p100291"></a>где: ПX - произведение усредняемых величин;
<a id="p100292"></a>n - число определений.

<a id="p100293"></a>Критерии достоверности теста:
- <a id="p100294"></a>ED50 референс-препарата и испытуемой вакцины лежит в интервале между наибольшей и наименьшей иммунизирующими дозами;
- <a id="p100295"></a>LD50 не превышает 1000 микробных клеток;
- <a id="p100296"></a>заражающая доза микробных клеток содержит не менее 100 и не более 1000 LD50;
- <a id="p100297"></a>в 0,03 мл разведения из пробирки 8 содержится не более 50 КОЕ.



<a id="p100298"></a>

---



## Иллюстрации

$11 \pm 1$

$200 \pm 5$

$170 \pm 5$

$90 \pm 10$

$0,75 \pm 0,15$

$155 \pm 10$

$250 \pm 10$

$11 \pm 1$

$200 \pm 5$

$7,1 \pm 0,2$

$7,1 \pm 0,2$

$7,1 \pm 0,2$

$36 \pm 0,5$

$lgLD_{50} = lgD_{N} - \delta(\Sigma Li - 0,5)$

$\delta$

$\Sigma Li$

$\Sigma Li = 2,2$

![](https://i.bukva.ai/RlYZc1I7/img_0.png)

$ED_{50}\text{референс} = \frac{71,3 \cdot 0,1}{100} = 0,0713$

$ED_{50}\text{макс}. = \frac{0,0713 \cdot 139}{100} = 0,0991$

$ED_{50}\text{мин } = \frac{0,0713 \cdot 72}{100} = 0,0513$

$ED_{50}\text{вакцины } = \frac{111,75 \cdot 0,0071}{100} = 0,0079$

$ED_{50}\text{макс}. = \frac{0,0079 \cdot 139}{100} = 0,011$

$ED_{50}\text{мин } = \frac{0,0079 \cdot 72}{100} = 0,0057$

$X = \frac{ED_{50}\text{референс}}{ED_{50}\text{вакцины}}$

$X = \frac{0,0713}{0,0079} = 9,0$

$R_{\text{мин}} = \frac{R}{K}$

$K = \text{анти}lg \sqrt{(S_{1}^{2} + S_{2}^{2})}$

$K = \text{анти}lg \sqrt{[- 2,4855 - (- 2,6289)]^{2} + [- 2,1007 - (- 2,2441)]^{2}} =$

$= \text{анти}lg \sqrt{0,0206 + 0,0206} = \text{анти}lg \sqrt{0,0412} = \text{анти}lg0,203$

$R_{\text{мин}} = \frac{R}{K}$

$\frac{9,0ME}{1,6} = 5,6$

$X\text{геом}. = \sqrt[n]{\text{П}_{X}}$