---
title: "Без названия"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/bez-nazvaniya-2512"
---

## Без названия

# Документ 24217


<a id="p100001"></a>**МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ**

<a id="p100002"></a>**ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ**


| <a id="p100003"></a>Иммуногенность адсорбированного дифтерийного анатоксина | <a id="p100004"></a>ОФС.1.7.2.0003.15<br>Вводится впервые |
| --- | --- |


<a id="p100005"></a>Настоящая общая фармакопейная статья предназначена для определения специфической (иммуногенной) активности адсорбированного дифтерийного анатоксина, входящего в состав комбинированных вакцин. Специфическую активность дифтерийного анатоксина определяют по его способности защищать иммунизированных животных от заражения дифтерийным токсином и выражают в количестве Международных единиц (ME) активности, содержащихся в 1 мл или в прививочной дозе (0,5 мл). Специфическую активность дифтерийного анатоксина в МЕ/мл рассчитывают путем сопоставления его количества и количества соответствующего референс-препарата, калиброванного в ME, необходимых для защиты 50% животных от летального заражения дифтерийным токсином (LD50). Для определения специфической активности используют метод множественных разведений. При стабильно воспроизводимых показателях специфической активности адсорбированного дифтерийного анатоксина и стандартной технологии производства возможно использование метода с одним разведением.

<a id="p100006"></a>Метод множественных разведений

<a id="p100007"></a>Разными дозами вакцины иммунизируют не менее 3 групп по 10 морских свинок в каждой группе. Не менее 3 аналогичных групп животных иммунизируют разными дозами референс-препарата, калиброванного в ME. Разведения вакцины и референс-препарата выбирают таким образом, чтобы наименьшая доза защищала от заражения не более 20%, а наибольшая доза - не менее 80% иммунизированных животных. Следует избегать разведений испытуемых образцов, при которых наблюдается гибель или выживаемость 100% иммунизированных животных.
<a id="p100008"></a>Через 28-30 сут иммунизированным животным вводят по 100 LD50 дифтерийного токсина. Наблюдение проводят в течение 5 сут, регистрируя число выживших животных в каждой группе, и рассчитывают для вакцины и референс-препарата величины ED50 (статистически определяемая доза вакцины или референс-препарата, защищающая от гибели 50% иммунизированных животных в течение 4 сут). На основании полученных результатов определяют количество ME в 1 мл вакцины.

<a id="p100009"></a>Материалы и животные:
- <a id="p100010"></a>референс-препарат (стандартный образец активности адсорбированного дифтерийного анатоксина, калиброванный в ME по соответствующему международному стандартному образцу);
- <a id="p100011"></a>испытуемая вакцина;
- <a id="p100012"></a>дифтерийный токсин с предварительно установленной дозой LD50 (статистически определяемая доза токсина, вызывающая гибель 50% животных в течение 4 сут);
- <a id="p100013"></a>морские свинки массой 250-350 г обоего пола.
<a id="p100014"></a>Примечания.
1. <a id="p100015"></a>Приготовление разведений референс-препарата. Референс-препарат разводят стерильным 0,9% раствором натрия хлорида () и готовят не менее 3 последовательных разведений с двойным шагом (например: 1, 2 и 4 МЕ/мл).
2. <a id="p100016"></a>Приготовление разведений вакцины. Разведения вакцины готовят, соблюдая те же условия, что и при приготовлении разведений референс-препарата.

<a id="p100017"></a>Иммунизация животных.
<a id="p100018"></a>Разведения референс-препарата и вакцины вводят морским свинкам по 1 мл подкожно в бок.

<a id="p100019"></a>Введение дифтерийного токсина.
<a id="p100020"></a>По истечении 28 сут всем иммунизированным животным вводят подкожно в область грудины 1 мл дифтерийного токсина, содержащего 100 LD50. Опыт сопровождают контролем величины LD50 дифтерийного токсина. Для этого неиммунизированным морским свинкам из той же партии, разделенным на 3 группы (не менее 5 свинок в каждой группе), вводят дифтерийный токсин в дозах 0,5, 1 и 2 LD50. За иммунизированными животными и животными контрольной группы наблюдают 4 сут, регистрируя число выживших в каждой группе.
<a id="p100021"></a>На основании полученных результатов производят расчет иммуногенной активности дифтерийного анатоксина с помощью статистических программ, включающих Probit analysis, или по формуле Кербера, определяя величины ED50 для референс-препарата (в ME) и испытуемой вакцины (в мл).
<a id="p100022"></a>Формула Кербера:

<a id="p100023"></a>,

<a id="p100024"></a>где: DN - величина максимальной из испытанных доз;
 - <a id="p100025"></a>логарифм кратности разведения (отношение большей дозы к следующей за ней меньшей дозе);
<a id="p100026"></a>Li - отношение количества выживших животных к общему числу животных, получивших данную дозу;
 - <a id="p100027"></a>сумма значений Li, найденных для всех испытуемых доз.
<a id="p100028"></a>LD50 токсина рассчитывают по той же формуле, в которой
<a id="p100029"></a>Li - отношение количества павших к общему числу животных, получивших данную дозу токсина.

<a id="p100030"></a>Испытание считается проведенным правильно, если:
- <a id="p100031"></a>вычисленные значения ED50 для вакцины и референс-препарата находятся между значениями наибольшей и наименьшей дозы препаратов, введенных животным;
- <a id="p100032"></a>пределы доверительного интервала (Р = 0,95) не менее 50% и не более 200% от величины вычисленной активности;
- <a id="p100033"></a>разрешающая доза введенного дифтерийного токсина приблизительно равна 100 LD50.

<a id="p100034"></a>Метод с одним разведением

<a id="p100035"></a>Если при испытании не менее 10 серий вакцины подтверждена стабильность и соответствие требованиям нормативной документации показателя иммуногенности дифтерийного анатоксина, возможно использование метода с одним разведением. Принцип метода заключается в сравнении активности единичных разведений вакцины и референс-препарата, калиброванного в ME.
<a id="p100036"></a>По результатам ранее проведенных испытаний с 3 разведениями выбирают дозу референс-препарата, обеспечивающую выживаемость 10-20% иммунизированных животных при заражении разрешающей дозой токсина. Разведение вакцины осуществляют с таким расчетом, чтобы получить подтверждение того, что ее активность значительно выше минимально требуемой.
<a id="p100037"></a>Животных делят на 2 группы (не менее 12 животных в каждой), одну из которых иммунизируют вакциной, а другую - референс-препаратом. Препараты вводят подкожно в объеме 1 мл. Через 28 сут всем иммунизированным животным вводят разрешающую дозу дифтерийного токсина, равную 100 LD50, в объеме 1 мл. Опыт сопровождают контролем величины LD50 дифтерийного токсина. За животными наблюдают 4 сут, регистрируя число выживших в каждой группе. Результаты выражают как
<a id="p100038"></a>отношение числа выживших к общему числу морских свинок в группе, иммунизированных вакциной или референс-препаратом. В опытной группе количество выживших животных должно быть достоверно выше, чем в контроле. Достоверность различия определяют с помощью точного критерия Фишера (одностороннего, P < 0,05). При значении  различия считаются недостоверными (табл.).

<a id="p100039"></a>Таблица

<a id="p100040"></a>Расчет значения доверительного интервала (P)


<table>
<colgroup><col width="29%"><col width="25%"><col width="21%"><col width="25%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100041"></a>Группа</td><td colspan="3"><a id="p100042"></a>Количество испытуемых животных</td></tr>
<tr><td><a id="p100043"></a>Выжило</td><td><a id="p100044"></a>Пало</td><td><a id="p100045"></a>Всего</td></tr>
<tr><td><a id="p100046"></a>Опыт</td><td><a id="p100047"></a>a</td><td><a id="p100048"></a>b</td><td><a id="p100049"></a>T</td></tr>
<tr><td><a id="p100050"></a>Контроль</td><td><a id="p100051"></a>c</td><td><a id="p100052"></a>d</td><td><a id="p100053"></a>R</td></tr>
<tr><td><a id="p100054"></a>Всего</td><td><a id="p100055"></a>n+</td><td><a id="p100056"></a>n</td><td><a id="p100057"></a>N</td></tr>
</table>


<a id="p100058"></a>Вычисление P проводят по формуле:

<a id="p100059"></a>,

<a id="p100060"></a>где: ! - знак факториала (означает произведение всех натуральных чисел от 1 до числа, стоящего перед знаком "!" включительно).

<a id="p100061"></a>Если показатель иммуногенности дифтерийного анатоксина при испытании методом с одним разведением не соответствует требованиям нормативной документации, испытание повторяют методом множественных разведений.



<a id="p100062"></a>

---



## Иллюстрации

$pH7,0 \pm 0,2$

$lgED_{50} = lgD_{N} - \sigma(\Sigma Li - 0,5)$

$\sigma$

$\Sigma Li$

$\text{Р } \geq 0,05$

$P = \frac{(n +)!(n -)!T!R!}{a!b!c!d!N!}$