Документ 24134

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск..."]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gf-xi-minzdrav-sssr-ministerstvo" "Государственная фармакопея СССР. XI издание. Выпуск 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье"
  n1["Государственная фармакопея Российской Федерации. XII..."]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/gf-xii" "Государственная фармакопея Российской Федерации. XII издание. Часть 1"
  n2["ОФС.1.2.4.0007.15"]:::rst
  n3["ОФС.1.2.4.0007.15 (от 31.10.2018 N 749)"]:::rst
  click n3 "https://bukva.ai/docs/prikaz-ofs-1-2-4-0007-15" "ОФС.1.2.4.0007.15. Общая фармакопейная статья. Испытание на гистамин (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749)"
  n4["ОФС.1.1.1.0019"]:::doc
  click n4 "https://bukva.ai/docs/ofs-1-1-1-0019" "ОФС.1.1.1.0019. Общая фармакопейная статья. Испытание на гистамин (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 11.04.2025 N 188)"
  n2 --> n4
  n2 --> n3
  n1 --> n2
  n0 --> n2
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Настоящая статья распространяется на определение содержания гистамина in vitro в лекарственных средствах для парентерального применения.

Подготовка изолированного органа

В опыт берут морскую свинку-самца массой тела 200-350 г. За 24 ч. до эксперимента животное лишают пищи, но оставляют свободный доступ к воде. После эвтаназии у свинки вскрывают брюшную полость от лонного сочленения до грудины и находят слепую кишку. Место ее перехода в ободочную кишку является ориентиром при поиске подвздошной кишки, которая отходит от слепой за 1-2 см до этого участка.

Для того чтобы извлечь подвздошную кишку, тупым зажимом или пинцетом плотно захватывают ее основание и отрезают ножницами. Отсеченный конец кишки слегка приподнимают, а затем без натяжения и, не перехватывая ее, отсекают ткань брыжейки маленькими разрезами при помощи тупоконечных ножниц. Остатки брыжейки удалять не следует. Все манипуляции с подвздошной кишкой следует проводить осторожно, не растягивая ее. Для эксперимента пригоден дистальный участок подвздошной кишки, исключая 10-15 см, ближайшие к слепой кишке.

Подвздошную кишку нарезают на равные части (около 6 см каждая) и помещают в чашку Петри с гипокальциевым раствором Тироде (примечание 1). Этим раствором осторожно промывают полученные отрезки с помощью шприца или резиновой груши с пастеровской пипеткой с затупленным концом до полного удаления содержимого кишечника. Промытые отрезки подвздошной кишки помещают в чистый гипокальциевый раствор Тироде. Они могут быть использованы сразу или храниться в течение 24 ч. при температуре от 2 до 4 °С (примечание 2).

Непосредственно перед экспериментом промытый отрезок кишки разрезают до длины, требуемой условиями эксперимента (10 мм при использовании электронного датчика или 20 мм при использовании механического рычага и кимографа).

Приготовление разведений стандартного и испытуемого образца

1. Разведение стандартного образца (СО)

В качестве СО используют гистамина дигидрохлорид в 3 разведениях: разведение 1 (1,25 · 10-6 г/мл); разведение 2 (2,50 · 10-6 г/мл) и разведение 3 (5,00 · 10-6 г/мл), вызывающие 50,75 и 100% сокращение кишки соответственно. В качестве растворителя используют 0,9% раствор натрия хлорида.

2. Разведение испытуемого образца (ИО)

Испытанию подвергают неразведенный ИО, когда максимально допустимая нормативной документацией концентрация гистамина в неразведенном препарате находится в диапазоне от 1,25 · 10-6 г/мл до 2,50 · 10-6 г/мл. При необходимости ИО разводят 0,9% раствором натрия хлорида таким образом, чтобы предполагаемая концентрация гистамина дигидрохлорида в разведении ИО составляла 2,50 · 10-6 г/мл.

Регистрирующая система

Для регистрации сокращений изолированного отрезка подвздошной кишки морской свинки в изотонических условиях в ответ на введение СО и ИО используют регистрирующую систему, состоящую из термостатируемой ванночки с гипокальциевым раствором Тироде при температуре 35 °С, а также электронного датчика с самописцем или механического рычага с кимографом. Ванночку аэрируют карбогеном (95% O2 и 5% CO2) или воздухом. Нагрузка обычно составляет 500-800 мг. В случае использования механического рычага для вычисления нагрузки следует применять правило равновесия:

Сила · Плечо силы = Нагрузка · Плечо нагрузки.

Проведение опыта

Изолированный отрезок подвздошный кишки помещают в ванночку и прикрепляют к регистрирующей системе с помощью лигатуры по диагонали за противоположные концы: один — к крючку на дне ванночки, а другой — к датчику или рычагу. Прикладывают к отрезку нагрузку и оставляют его в покое на 30 мин. За это время необходимо не менее 3 раз сменить в ванночке раствор Тироде.

1. Адаптация изолированного отрезка подвздошной кишки морской свинки к субмаксимальной дозе гистамина

В термостатируемую ванночку вводят CO в разведении 3 в объеме, равном 1/100 от ее емкости. Через 30 с. (время экспозиции) ванночку промывают тройным объемом раствора Тироде. После первого отмывания проводят второе таким же объемом раствора. Не менее чем через 4 мин. после первого введения снова повторяют цикл «введение-экспозиция-два отмывания». Эти циклы повторяют до тех пор, пока не получат не менее 2 одинаковых пиков. Их высоту принимают за 100% (примечание 3). Временные интервалы между введениями испытуемого вещества и между двумя отмываниями должны быть постоянными.

2. Испытание ИО на гистамин

2.0 Предварительное испытание

После достижения постоянной величины ответа отрезка кишки на введение CO в разведении 3 проводят испытание ИО на гистамин. Для этого с интервалом не менее 4 мин. однократно в случайном порядке вводят CO в разведениях 1 и 3 и неразведенный ИО. Циклы «введение-экспозиция-два отмывания» такие же, как и при проведении адаптации органа к субмаксимальной дозе.

В случае, если пик, полученный в ответ на введение ИО, по высоте не меньше, чем пик CO в разведении 1, проводят количественное определение содержания гистамина в ИО (см. п. 2.1). Если пик, полученный в ответ на введение ИО, меньше пика CO в разведении 1 или вообще отсутствует, проводят контрольное испытание (см. п. 2.2).

2.1 Количественное испытание ИО на гистамин

В случайном порядке поочередно вводят CO в разведениях 1 и 3 и ИО до получения не менее 4 пиков в ответ на введение каждого раствора. Находят среднее значение ответа отрезка кишки на каждый раствор. С помощью регрессионного анализа вычисляют параметры линейной зависимости среднего ответа кишки на введение CO от логарифма его концентрации. Затем, подставляя полученные значения этих параметров в уравнение регрессии, вычисляют концентрацию гистамина в том разведении ИО, которому соответствует средняя высота его пика, и, исходя из этого, рассчитывают содержание гистамина в неразведенном ИО.

ИО считают прошедшим испытание, если найденное содержание гистамина не превышает максимально допустимое, указанное в нормативной документации (коэффициент пересчета гистамина дигидрохлорида на гистамин-основание равен 0,6038).

2.2 Контрольное испытание

Схема проведения контрольного испытания такая же, как и при количественном определении содержания гистамина в ИО, только вместо ИО используют CO в разведении 2. Если средняя высота его пика соответствует вводимой концентрации гистамина дигидрохлорида в данном разведении (2,50 · 10-6 г/мл), то результаты опыта следует признать достоверными.

Результаты опыта следует признать недостоверными в каждом из следующих случаев:

1. Если средняя высота пика CO в разведении 2 не соответствует вводимой концентрации гистамина дигидрохлорида в данном разведении (2,50 · 10-6 г/мл).

2. Если при количественном определении содержания гистамина в ИО отсутствует воспроизводимость ответов отрезка кишки на введение ИО.

3. Если в процессе эксперимента наблюдается статистически значимое снижение высоты пиков в ответ на серию введений одного и того же раствора (примечание 4).

В каждом из этих 3 случаев следует провести испытание ИО на вещества депрессорного действия в соответствии с ОФС «Испытание на депрессорные вещества».

Примечания

1. Гипокальциевый раствор Тироде.

Приготовление

В мерном цилиндре вместимостью 1 л. растворяют в воде очищенной навески NaCl, NaHCO3 и D-глюкозы в любом порядке. Доводят объем раствора тем же растворителем до метки, перемешивают и переливают содержимое цилиндра в 10-литровую стеклянную емкость с притертой пробкой или полиэтиленовый сосуд того же объема с завинчивающейся крышкой.

Таким же образом, но по отдельности, каждую из оставшихся навесок растворяют в 1 л. воды очищенной и по очереди переносят в тот же 10-литровый сосуд, строго придерживаясь следующего порядка:

1. KCl,

2. CaCl2 · 2H2O,

3. MgCl2 · 6H2O,

4. NaH2PO4 · H2O.

Затем доливают воду очищенную до отметки 10 л. и вновь тщательно перемешивают.

Полученный раствор может храниться при температуре от 3 до 5 °С не более 24 ч. Помутнение недопустимо.

Помутневший раствор следует вылить, тщательно промыть сосуд в проточной воде и прополоскать водой очищенной. Поверхностно активные моющие средства применять нельзя.

2. Сосуд, в котором находятся отрезки подвздошной кишки при хранении, плотно не закрывают, а затягивают двойным слоем марли, чтобы обеспечить доступ воздуха. Перед использованием в опыте отрезки следует подготовить. Для этого сосуд в течение 10 мин. держат при комнатной температуре, а затем в течение 20 мин. при температуре 35 °С в термостате. После нагревания из отрезка следует удалить слизь. Это достигается легкими поглаживающими движениями в продольном направлении.

3. Струя вводимого раствора должна быть направлена не прямо на изолированный отрезок кишки, а в сторону стенки ванночки, причем направление струи не должно меняться. Скорость введения должна быть максимально высокой и постоянной.

Регистрацию сокращений проводят непрерывно (скорость ленты 2 мм/мин.). В случае использования механического рычага и кимографа писчик во время отмывания можно отводить и прекращать запись.

4. Каждую серию, состоящую не менее чем из 4 пиков, полученных в результате введения одного и того же раствора, следует проверять с помощью теста Нойманна на дрейф:

,

где:

x — высота пика на введение одного и того же раствора;

n — число пиков, полученных в результате введения одного и того же раствора.

Значение D при Р = 95% должно быть: при n = 4 — меньше 0,78;

при n = 5 — меньше 0,82; при n = 6 — меньше 0,89.

Иллюстрации

D = \frac{n \sum_{i = 1}^{n - 1} (x_{i} - x_{i + 1})^{2}}{n \sum_{i = 1}^{n} x^{2} - (\sum x_{i})^{2}}