--- title: "Без названия" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/bez-nazvaniya-2287" --- ## Без названия # Документ 23749 **МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ** **ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ** | Пирогенал, суппозитории ректальные | ФС.3.3.1.0048.15
Вводится впервые | | --- | --- | Настоящая фармакопейная статья распространяется на лекарственное средство пирогенал, суппозитории ректальные, которое представляет собой липополисахарид (ЛПС), выделенный из клеток Salmonella typhi. **ПРОИЗВОДСТВО** Технология получения ЛПС предусматривает культивирование производственного штамма (штамма-продуцента) в полусинтетической питательной среде, инактивацию микробных клеток формалином, поэтапное выделение и очистку ЛПС ферментативными методами. Производственный штамм Salmonella typhi Ty2 4446 должен обладать типичными морфологическими, культуральными, биохимическими свойствами: - на плотной питательной среде (мясопептонный агар) должен образовывать круглые, гладкие, выпуклые, блестящие колонии (S-форма); - на висмут-сульфитном агаре должен образовывать блестящие колонии черного цвета; - в мазках, окрашенных по Граму, должны присутствовать грамотрицательные палочки с закругленными концами; - должен ферментировать глюкозу, маннит и мальтозу с образованием кислоты без газа; - должен продуцировать сероводород; - не должен ферментировать лактозу и сахарозу; - не должен образовывать индол; - LD50 штамма при внутрибрюшинном заражении белых беспородных мышей должна быть не более 5 · 107 микробных клеток. Основные этапы производства препарата 1) Получение биомассы и ее инактивация; 2) Концентрирование методом сепарирования; 3) Поэтапное выделение и очистка ЛПС ферментативными методами; 4) Получение готовой лекарственной формы препарата. На этапе культивирования используют полусинтетическую питательную среду. Полученную биомассу проверяют на микробиологическую чистоту и типичность морфологии; проводят контроль биохимических свойств микроорганизмов; антигенные свойства проверяют в реакции агглютинации. Инактивацию микробных клеток проводят формалином, по окончании процесса инактивированную биомассу высевают на дифференциально-диагностическую питательную среду висмут-сульфитный агар для подтверждения отсутствия роста сальмонелл. Инактивированную культуральную жидкость подвергают ферментативному гидролизу и сепарированию; из гидролизата ферментативными методами поэтапно выделяют ЛПС, а затем лиофилизируют, получая субстанцию-лиофилизат очищенного ЛПС. На стадии производства субстанцию испытывают по следующим показателям: Описание. Порошок светло-кремового цвета. Определение проводят визуально. Белок. Не более 3%. Испытания проводят колориметрическим методом по методу Лоури в соответствии с ОФС "Определение белка колориметрическим методом (метод Лоури) в иммунобиологических лекарственных препаратах". Приготовление испытуемого образца ЛПС указывается в нормативной документации. Нуклеиновые кислоты. Не более 5%. Испытания проводят методом Спирина в соответствии с ОФС "Определение нуклеиновых кислот по методу Спирина в иммунобиологических лекарственных препаратах". Приготовление испытуемого образца ЛПС указывается в нормативной документации. Углеводы. От 40 до 60%. Испытания проводят с антроновым реактивом в соответствии с ОФС "Определение сахаров спектрофотометрическим методом". Приготовление испытуемого образца ЛПС указывается в нормативной документации. Безвредность. Препарат должен быть безвредным. Испытания проводят на 5 здоровых белых мышах массой () г, которым внутрибрюшинно вводят 1 мл раствора ЛПС с концентрацией 100 мкг/мл; срок наблюдения за животными составляет 5 дней. Приготовление испытуемого образца ЛПС указывается в нормативной документации. Оптическая плотность. Показания оптической плотности раствора липополисахарида при 256 нм не должны превышать 0,300; при 280 нм - не более 0,200. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимых областях". Приготовление испытуемого образца ЛПС указывается в нормативной документации. Потеря массы при высушивании. Не более 10%. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Потеря в массе при высушивании". Определение минимальной пирогенной дозы (МПД) рабочей серии ЛПС. Одна МПД должна составлять () мкг ЛПС. Предварительно готовят раствор ЛПС в концентрации 100 мкг/мл, затем путем последовательных десятикратных разведений получают раствор с концентрацией 0,01 мкг/мл и из него - раствор с концентрацией 0,0075 мкг/мл (к 9 мл испытуемого образца с концентрацией 0,01 мкг/мл прибавляют 3 мл 0,9% раствора натрия хлорида). Испытание проводят в соответствии с ОФС "Пирогенность". За 1 ч до опыта у каждого кролика дважды с интервалом не менее 30 мин измеряют ректальную температуру. Различия в показаниях температуры у одного и того же животного не должны превышать 0,2 °С. Животным вводят раствор препарата с концентрацией 0,0075 мкг/мл внутривенно из расчета 1 мл на 1 кг массы тела. Средний показатель повышения температуры должен составлять от 0,6 до 0,8 °С. В случае, если средний показатель повышения температуры будет ниже 0,6 °С, вводят раствор препарата с концентрацией 0,01 мкг/мл по 1 мл на 1 кг массы животного; если средний показатель повышения температуры будет выше 0,8 °С, вводят раствор препарата с концентрацией 0,005 мкг/мл по 1 мл на 1 кг массы животного. Повторный контроль проводят на том же количестве кроликов. Если при повторном испытании после введения растворов с концентрацией 0,01 или 0,005 мкг/мл средний показатель повышения температуры у животных составит ниже 0,6 °С или выше 0,8 °С соответственно, препарат бракуют. Минимальное количество вещества, вводимого внутривенно, на 1 кг массы кролика, вызывающее среднее повышение температуры тела на 0,6-0,8 °С составляет МПД. Одна МПД должна составлять () мкг ЛПС. Субстанцию - лиофилизат очищенного ЛПС используют для получения лекарственного препарата пирогенал, суппозитории ректальные. **ИСПЫТАНИЯ** Описание. Суппозитории желтовато-белого цвета однородной консистенции, цилиндрической формы с заостренным концом, диаметром не более 10 мм. Подлинность. Должен быть пирогенным. Одна МПД должна составлять () мкг ЛПС (раздел "Специфическая активность"). Средняя масса и отклонение от средней массы. . Определение проводят в соответствии с ОФС "Однородность массы дозированных лекарственных форм". Температура и время плавления. Не более 20 мин. Один суппозиторий, залитый 50 мл воды очищенной, подогретой до температуры () °С, помещенный в конической колбе вместимостью 100 мл в термостат при температуре () °С, должен расплавиться в течение не более 20 мин. Микробиологическая чистота. В 1 суппозитории допускается не более 300 колониеобразующих единиц (КОЕ) микробов-сапрофитов при отсутствии патогенных, условно-патогенных микроорганизмов и грибов. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота". Безвредность. Должен быть безвредным. Для испытания отбирают 4 суппозитория. Испытуемые образцы помещают в пробирку вместимостью 20 мл и расплавляют на водяной бане при температуре 40-45 °С в течение 15-20 мин. Расплавленную массу вводят 5 беспородным белым мышам массой () г по 1 мл внутрибрюшинно со скоростью 0,1 мл/с шприцем вместимостью 1 см3. В течение 5 сут. животные должны оставаться живыми. В случае гибели хотя бы 1 животного опыт повторяют на удвоенном количестве мышей. Если при повторном испытании мыши остались живы, препарат считают прошедшим испытание. В противном случае препарат бракуют. Специфическая активность. Должен быть пирогенным. При введении 1 МПД на 1 кг массы кролика средний показатель повышения температуры должен составлять 0,6-0,8 °С. Для определения специфической активности берут 3 суппозитория. В коническую колбу вместимостью 500 мл наливают 295 мл 0,9% раствора натрия хлорида и доводят его до закипания. В раствор опускают 3 суппозитория и ставят колбу на разогретую магнитную мешалку. Экстракцию пирогенала из суппозиториев проводят в течение 60 мин при интенсивном перемешивании, чтобы жировой слой разбивался на мельчайшие капельки, затем содержимое отстаивают в течение 10-15 мин. В результате полученный раствор пирогенала считают разведенным в 100 раз, т.е. до 0,5; 1; 1,5; 2 мкг/мл в зависимости от исходного содержания пирогенала в 1 суппозитории. Далее из нижнего слоя раствора делают разведение до 0,0075 мкг/мл. Трем кроликам вводят препарат в концентрации 0,0075 мкг/мл внутривенно из расчета 1 мл на 1 кг массы. Испытание проводят в соответствии с ОФС "Пирогенность". Средний показатель повышения температуры должен составлять 0,6-0,8 °С. Если повышение температуры будет ниже 0,6 °С или выше 0,8 °С, то испытуемый образец вводят повторно в концентрации 0,01 или 0,005 мкг/мл. Если при этом средний показатель повышения температуры будет ниже 0,6 °С или выше 0,8 °С, серию бракуют. Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные препараты". Транспортирование и хранение. При температуре от 2 до 8 °С. --- ## Иллюстрации $17 \pm 1$ $0,0075 \pm 0,0025$ $0,0075 \pm 0,0025$ $0,0075 \pm 0,0025$ $1,6\text{г } \pm 5\%$ $37 \pm 1$ $37 \pm 1$ $15 \pm 1$