--- title: "Без названия" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/bez-nazvaniya-2286" --- ## Без названия # Документ 23748 **МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ** **ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ** | Пирогенал, раствор для внутримышечного введения | ФС.3.3.1.0047.15
Вводится впервые | | --- | --- | Настоящая фармакопейная статья распространяется на пирогенал, раствор для внутримышечного введения, который представляет собой липополисахарид, выделенный из клеток Salmonella typhi и растворенный в фосфатно-солевом буферном растворе. **ПРОИЗВОДСТВО** Технология получения липополисахарида (ЛПС) предусматривает культивирование производственного штамма (штамма-продуцента) в полусинтетической питательной среде, инактивацию микробных клеток формалином, поэтапное выделение и очистку ЛПС ферментативными методами. Производственный штамм Salmonella typhi Ty2 4446 должен обладать типичными морфологическими, культуральными, биохимическими свойствами: - на плотной питательной среде (мясопептонный агар) должен образовывать круглые, гладкие, выпуклые, блестящие колонии (S-форма); - на висмут-сульфитном агаре должен образовывать блестящие колонии черного цвета; - в мазках, окрашенных по Граму, должны присутствовать грамотрицательные палочки с закругленными концами; - должен ферментировать глюкозу, маннит и мальтозу с образованием кислоты без газа; - должен продуцировать сероводород; - не должен ферментировать лактозу и сахарозу; - не должен образовывать индол; - LD50 штамма при внутрибрюшинном заражении белых беспородных мышей должна быть не более 5 · 107 микробных клеток. Основные этапы производства препарата 1) Получение биомассы и ее инактивация; 2) Концентрирование методом сепарирования; 3) Поэтапное выделение и очистка ЛПС ферментативными методами; 4) Получение готовой лекарственной формы препарата. На этапе культивирования используют полусинтетическую питательную среду. Полученную биомассу проверяют на микробиологическую чистоту и типичность морфологии; проводят контроль биохимических свойств микроорганизмов; антигенные свойства проверяют в реакции агглютинации. Инактивацию микробных клеток проводят формалином, по окончании процесса инактивированную биомассу высевают на дифференциально-диагностическую питательную среду висмут-сульфитный агар для подтверждения отсутствия роста сальмонелл. Инактивированную культуральную жидкость подвергают ферментативному гидролизу и сепарированию; из гидролизата ферментативными методами поэтапно выделяют ЛПС, а затем лиофилизируют, получая субстанцию-лиофилизат очищенного ЛПС. На стадии производства субстанцию испытывают по следующим показателям: Описание. Порошок светло-кремового цвета. Определение проводят визуально. Белок. Не более 3%. Испытания проводят колориметрическим методом по методу Лоури в соответствии с ОФС "Определение белка колориметрическим методом (метод Лоури) в иммунобиологических лекарственных препаратах". Приготовление испытуемого образца ЛПС указывается в нормативной документации. Нуклеиновые кислоты. Не более 5%. Испытания проводят методом Спирина в соответствии с ОФС "Определение нуклеиновых кислот по методу Спирина в иммунобиологических лекарственных препаратах". Приготовление испытуемого образца липополисахарида указывается в нормативной документации. Углеводы. От 40 до 60%. Испытания проводят с антроновым реактивом в соответствии с ОФС "Определение сахаров спектрофотометрическим методом". Приготовление испытуемого образца ЛПС указывается в нормативной документации. Безвредность. Препарат должен быть безвредным. Испытания проводят на 5 здоровых белых мышах массой () г, которым внутрибрюшинно вводят 1 мл раствора ЛПС с концентрацией 100 мкг/мл; срок наблюдения за животными составляет 5 дней. Приготовление испытуемого образца ЛПС указывается в нормативной документации. Оптическая плотность. Показания оптической плотности раствора ЛПС при 256 нм не должны превышать 0,300; при 280 нм - не более 0,200. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимых областях". Приготовление испытуемого образца ЛПС указывается в нормативной документации. Потеря массы при высушивании. Не более 10%. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Потеря в массе при высушивании". Определение минимальной пирогенной дозы (МПД) рабочей серии ЛПС. Одна МПД должна составлять () мкг ЛПС. Предварительно готовят раствор ЛПС в концентрации 100 мкг/мл, затем путем последовательных десятикратных разведений получают раствор с концентрацией 0,01 мкг/мл и из него - раствор с концентрацией 0,0075 мкг/мл (к 9 мл испытуемого образца с концентрацией 0,01 мкг/мл прибавляют 3 мл 0,9% раствора натрия хлорида). Испытание проводят в соответствии с ОФС "Пирогенность". За 1 ч до опыта у каждого кролика дважды с интервалом не менее 30 мин измеряют ректальную температуру. Различия в показаниях температуры у одного и того же животного не должны превышать 0,2 °С. Животным вводят раствор препарата с концентрацией 0,0075 мкг/мл внутривенно из расчета 1 мл на 1 кг массы тела. Средний показатель повышения температуры должен составлять от 0,6 до 0,8 °С. В случае, если средний показатель повышения температуры будет ниже 0,6 °С, вводят раствор препарата с концентрацией 0,01 мкг/мл по 1 мл на 1 кг массы животного; если средний показатель повышения температуры будет выше 0,8 °С, вводят раствор препарата с концентрацией 0,005 мкг/мл по 1 мл на 1 кг массы животного. Повторный контроль проводят на том же количестве кроликов. Если при повторном испытании после введения растворов с концентрацией 0,01 или 0,005 мкг/мл средний показатель повышения температуры у животных составит ниже 0,6 °С или выше 0,8 °С соответственно, препарат бракуют. Минимальное количество вещества, вводимого внутривенно, на 1 кг массы кролика, вызывающее среднее повышение температуры тела на (0,6-0,8) °С, составляет минимальную пирогенную дозу (МПД). Одна МПД должна составлять () мкг ЛПС. **ИСПЫТАНИЯ** Описание. Прозрачная бесцветная жидкость. Определение проводят визуально. Подлинность. Препарат должен быть пирогенным. Одна минимальная пирогенная доза (МПД) должна составлять () мкг ЛПС (раздел "Специфическая активность"). Прозрачность. Должен быть прозрачным. Определение проводят в соответствии с ОФС "Прозрачность и степень мутности жидкостей". Цветность. Должен быть бесцветным. Определение проводят в соответствии с ОФС "Степень окраски жидкостей". pH. От 6,7 до 7,3. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС "Ионометрия". Извлекаемый объем. Не менее номинального. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Извлекаемый объем лекарственных форм для парентерального применения". Механические включения. Видимые механические включения должны соответствовать требованиям ОФС "Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах". Стерильность. Должен быть стерильным. Определяют методом прямого посева в соответствии с ОФС "Стерильность". Аномальная токсичность. Должен быть нетоксичным. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Аномальная токсичность". Мышам массой () г вводят внутрибрюшинно тест-дозу препарата объемом 1 мл. Период наблюдения за животными составляет 5 сут. Специфическая активность. При введении 1 МПД на 1 кг массы кролика средний показатель повышения температуры должен быть от 0,6 до 0,8 °С. Препарат, в зависимости от концентрации активного вещества, разводят стерильным 0,9% раствором натрия хлорида до концентрации 10 мкг/мл. Затем путем последовательных десятикратных разведений готовят раствор с концентрацией 0,01 мкг/мл и из него - раствор с концентрацией 0,0075 мкг/мл (к 9 мл раствора препарата с концентрацией 0,01 мкг/мл прибавляют 3 мл раствора натрия хлорида 0,9%). Испытание проводят в соответствии с ОФС "Пирогенность". За 1 ч до опыта у каждого кролика дважды с интервалом не менее 30 мин измеряют ректальную температуру. Различия в показаниях температуры у одного и того же животного не должны превышать 0,2 °С. Животным вводят раствор препарата с концентрацией 0,0075 мкг/мл внутривенно из расчета 1 мл на 1 кг массы тела. Средний показатель повышения температуры должен составлять от 0,6 до 0,8 °С. В случае, если средний показатель повышения температуры будет ниже 0,6 °С, вводят раствор препарата с концентрацией 0,01 мкг/мл по 1 мл на 1 кг массы животного; если средний показатель повышения температуры будет выше 0,8 °С, вводят раствор препарата с концентрацией 0,005 мкг/мл по 1 мл на 1 кг массы животного. Повторный контроль проводят на том же количестве кроликов. Если при повторном испытании после введения растворов с концентрацией 0,01 или 0,005 мкг/мл средний показатель повышения температуры у животных составит ниже 0,6 °С или выше 0,8 °С соответственно, препарат бракуют. Минимальное количество вещества, вводимого внутривенно, на 1 кг массы кролика, вызывающее среднее повышение температуры тела на 0,6-0,8 °С составляет МПД. Одна МПД должна составлять () мкг ЛПС. Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные препараты". Транспортирование и хранение. При температуре от 2 до 8 °С. --- ## Иллюстрации $17 \pm 1$ $0,0075 \pm 0,0025$ $0,0075 \pm 0,0025$ $0,0075 \pm 0,0025$ $15 \pm 1$ $0,0075 \pm 0,0025$