--- title: "Без названия" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/bez-nazvaniya-2274" --- ## Без названия # Документ 23736 **МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ** **ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ** | Вакцина оспенная эмбриональная живая | ФС.3.3.1.0035.15
Взамен ФС 42-3110-95 | | --- | --- | Настоящая фармакопейная статья распространяется на вакцину оспенную эмбриональную живую, таблетки жевательные для орального применения. Вакцина представляет собой вирус вакцины, выращенный в хорионаллантоисной оболочке (ХАО) и плодике куриного эмбриона (КЭ), и высушенный со стабилизатором без консерванта. В таблетке содержится вируссодержащий материал и вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению. Вакцина оспенная эмбриональная живая предназначена для профилактики натуральной оспы и заболеваний, вызываемых вирусами оспы животных, патогенными для человека. **ПРОИЗВОДСТВО** Все этапы производства вакцины должны осуществляться с соблюдением установленных требований к правилам организации производства и контролю качества лекарственного препарата, гарантирующих его качество и безопасность для человека. Производство вакцины оспенной эмбриональной живой должно проводиться в отдельных изолированных помещениях, в которых не допускается производство других лекарственных средств. Условия производства должны соответствовать требованиям Санитарных правил "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней". Основные этапы производства: - получение вируссодержащего материала путем введения посевного вируса на ХАО КЭ; - инкубирование инфицированных эмбрионов, извлечение плодика и ХАО из эмбриона; - гомогенизация материала; - приготовление жидкой вакцины и добавление стабилизатора; - лиофильная сушка материала; - подготовка и расчет вспомогательных веществ для получения таблеток; - прессование таблеток. Характеристика материалов животного происхождения, используемых в производстве. В качестве продуцента для производства вакцины и посевного материала используют 12-суточные куриные эмбрионы пород "Леггорн", "Роменбраун", "Родонит", "Изобраун", "Русская белая", кросс 46, линия П4, П6. Яйца куриные инкубационные получают из птицехозяйств, свободных от вирусных и других заболеваний, патогенных для человека. Требования к производственному штамму. Для производства вакцины оспенной эмбриональной живой используют штамм вируса осповакцины БИЭМГ (Б-51). Для приготовления вакцины используется посевной вирус первых 10 пассажей. Штамм должен отвечать следующим требованиям: - формировать на ХАО КЭ два вида (специфических образований) оспин: не менее 80% белых плотных оспин размером 1-5 мм ("белый" клон) и не более 20% сероватых расплывчатых поверхностных оспин размером 1-3 мм ("серый" клон); - при культивировании на ХАО КЭ при температуре () °С в течение (42-48) ч вирус вакцины должен накапливаться в концентрации 108 ООЕ/мл (ООЕ - оспообразующие единицы); - не вызывать некроз кожи кроликов при внутрикожном введении в дозе 104 ООЕ в 0,1 мл; - не вызывать гибели кроликов при внутримозговом введении в дозе 106 ООЕ в 0,1 мл; - быть безвредным (нетоксичным) для морских свинок и белых мышей в дозах соответственно 3 · 107 и 1,2 · 106 ООЕ/мл при подкожном введении. Допустимое количество микроорганизмов в пересчете на 1 мл: - общее число аэробных бактерий - не более 103; - общее число грибов - не более 102; - должны отсутствовать Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus. Производственный штамм контролируется на каждом пассажном уровне. **ИСПЫТАНИЯ** Описание. Таблетки жевательные круглые двояковыпуклые с риской и цельными краями диаметром 8-13 мм светло-коричневого цвета с запахом ванили. Определение проводят органолептически. По внешнему виду таблетки должны соответствовать требованиям ОФС "Таблетки". Подлинность. Вакцина должна вызывать на хорионаллантоисных оболочках 12-суточных КЭ характерные специфические образования (оспины) 2 видов: не менее 80% белых плотных оспин размером 1-5 мм ("белый" клон), не более 20% расплывчатых сероватых поверхностных оспин размером 1-3 мм ("серый" клон). Контроль проводят одновременно с определением специфической активности (раздел "Специфическая активность"). Средняя масса и отклонение от средней массы. От 0,2 до 1 г. Определение проводят в соответствии с ОФС "Таблетки". Распадаемость. Должны распадаться в течение 1 ч. Определение проводят в соответствии с ОФС "Распадаемость таблеток и капсул". Потеря в массе при высушивании. Не более 3,0%. На 2 параллельных анализа используют не менее 7 таблеток. Определение проводят по ОФС "Потеря в массе при высушивании". Микробиологическая чистота. Допустимое количество в пересчете на 1 г таблеток: - общее число аэробных бактерий - не более 103; - общее число грибов - не более 102; - должны отсутствовать Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus. Определение проводят по ОФС "Микробиологическая чистота". Масса исследуемых таблеток должна быть не менее 3 г. Таблетки в асептических условиях помещают в фарфоровую ступку с пестиком, растирают и суспендируют в 0,004 М стерильном фосфатно-цитратном буферном (ФЦБ) растворе Мак-Ильвейна в соотношении 1:10 (1 г в 10 мл). Примечания. 1. Приготовление ФЦБ раствора Мак-Илвейна 0,004 М (pH 7,2-7,4). Готовят растворы 1 и 2. Раствор 1: Лимонная кислота - 2,1 г; Вода очищенная - 100 мл. Раствор 2: В мерной колбе вместимостью 1000 мл в воде очищенной растворяют 28,4 г натрия гидрофосфата безводного или 35,6 г натрия гидрофосфата дигидрата или 71, 6 г натрия гидрофосфата додекагидрата, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают. Смешивают 2 мл раствора 1 и 18 мл раствора 2 в мерной колбе вместимостью 1000 мл, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Полученный раствор должен иметь pH 7,2-7,4. Если pH полученного раствора более 7,4, его доводят до нормы раствором 1. В случае, если pH полученного раствора меньше 7,2, приготовление раствора повторяют. Буферный раствор стерилизуют при температуре () °С и давлении () МПа в течение 8-30 мин (в зависимости от объема) или фильтруют через мембраны с диаметром пор 0,22 мкм и хранят при температуре от 2 до 8 °С. Срок хранения от 10 до 30 сут. в зависимости от способа укупорки флаконов (способ укупорки флаконов должен быть указан в нормативной документации). Аномальная токсичность. Препарат должен быть нетоксичен для морских свинок массой 250-300 г и белых мышей массой 18-20 г при подкожном введении 1 и 1/25 прививочной дозы соответственно. Испытания проводят по ОФС "Аномальная токсичность". Для определения токсичности используют не менее 4 таблеток. Таблетки растирают в стерильной ступке и суспендируют в 0,9% стерильном растворе натрия хлорида из расчета 5 мл на таблетку. После отстаивания в течение 45-60 мин вводят 5 мл надосадочной жидкости (по 2,5 мл в каждый бок) 2 морским свинкам и по 0,2 мл 5 беспородным белым мышам в холку. Наблюдение за животными проводят в течение 7 сут. В случае развития абсцесса или гибели хотя бы 1 животного производят повторный анализ на удвоенном количестве животных. Если при повторном анализе вновь регистрируются вышеперечисленные явления, серию препарата бракуют. Специфическая активность. Одна прививочная доза препарата должна содержать не менее 1 · 106 и не более 3 · 107 ООЕ вируса вакцины. Испытания проводят биологическим методом на ХАО 12-дневных КЭ от кур породы "Леггорн", "Роменбраун", "Родонит-2", "Изобраун" или "Хайсек", или пород кур, эмбрионы которых чувствительны к вирусу осповакцины. Объем выборки составляет не менее 7 прививочных доз (4 таблетки). Куриные эмбрионы получают из хозяйств, свободных от вирусных и других возбудителей, патогенных для человека. Подготовка КЭ. Проводят овоскопию КЭ в затемненном помещении. Каждый эмбрион просматривают в направленном пучке света. Свет должен падать сверху на тупой конец яйца. Яйцо с погибшим эмбрионом или с кровоизлиянием под оболочкой бракуют. В центре воздушного мешка на тупом конце яйца и на боковой поверхности яйца, на участке между сосудами и их ответвлениями карандашом делают отметку. В местах отметок с соблюдением правил асептики пропиливают бормашиной с абразивным диском отверстия (щели) длиной 3-4 мм и шириной 1,5 мм, не повреждая оболочки. Яйцо укладывают так, чтобы отверстие на боковой стороне было обращено вверх. Подскорлупную оболочку в центре воздушного мешка прорывают плоской полукруглой хирургической иглой. Затем на отверстие, расположенное на боковой поверхности, вносят 0,1 мл стерильного 0,004 М раствора ФЦБ Мак-Илвейна, подогретого до температуры () °С, и той же иглой осторожно продавливают подскорлупную оболочку. После этого практически вся капля раствора проходит под подскорлупную оболочку и частично отслаивает ХАО. Из отверстия (в месте пропила) в центре воздушного мешка резиновой грушей осторожно отсасывают воздух до полного опускания ХАО. Яйца с опущенной ХАО помещают на лотки отверстием на боковой поверхности вверх и помещают в камеру с температурой () °С. Через 2 ч проводят овоскопию и бракуют эмбрионы с кровоизлияниями и воздушными мешками под ХАО или без воздушных мешков. Приготовление десятикратных разведений. Таблетки взвешивают с точностью до 0,001 г, растирают в фарфоровой ступке и добавляют стерильный ФЦБ из расчета 10 мл на 1 г таблеток (соотношение 1:10 - "исходное разведение пробы"). В полученной взвеси дают отстояться грубым частицам в течение 45 мин. Из надосадочной жидкости пробы готовят 2 параллельных ряда последовательных десятикратных разведений. С этой целью отбирают по 0,5 мл испытуемого образца и вносят в 2 пробирки, содержащие 4,5 мл стерильного ФЦБ, получают разведение 10-1. Содержимое пробирок перемешивают с помощью пипеток не менее 30 раз. Из каждой пробирки с разведением 10-1 по 0,5 мл разведенного материала пипеткой переносят в последующую пробирку с 4,5 мл ФЦБ, не касаясь жидкости пипеткой, получают разведение 10-2, и т.д. до разведения 10-5, меняя пипетки после каждого разведения. Примечание. В используемый ФЦБ (раздел "Микробиологическая чистота") добавляют бензилпенициллин калия или натрия и стрептомицина сульфат из расчета 250 ед. активности каждого антибиотика в 1 мл ФЦБ. Инфицирование КЭ. Для инфицирования КЭ используют разведения вакцины 10-3, 10-4 и 10-5, предварительно объединенные из 2 параллельных рядов. Каждое разведение материала вводят на ХАО 15 КЭ по () мл в отверстие на боковой поверхности яйца. Круговым вращением яйца вирус равномерно распределяют по ХАО. Инокулированные эмбрионы инкубируют при температуре () °С в течение 42-48 ч. По окончании инкубации КЗ вскрывают, изолируют ХАО, промывают ее в воде, раскладывают на темном фоне и подсчитывают количество оспин на ХАО для каждого разведения. Из испытания исключают КЭ с поврежденной ХАО и погибшие. Учет результатов. Вычисляют среднее арифметическое количество оспин на ХАО КЭ, инфицированных разведением вакцины, вызвавшим образование не менее 10 оспин (допускается расчет по максимальному разведению, содержащему не менее 80% таких КЭ). Расчет специфической активности (А) в ООЕ проводят по формуле: , где: 10 - коэффициент исходного разведения пробы; B - среднее арифметическое количество оспин на ХАО КЭ; C - разведение исходной пробы; d - объем инокулята, вводимого в КЭ; e - количество таблеток (доз) в 1 г анализируемого образца. Для определения чувствительности КЭ к вирусу вакцины параллельно с определением специфической активности на той же партии КЭ проводят определение специфической активности стандартного образца (СО) активности специфичности и некротической активности оспенной вакцины в соответствии с инструкцией по применению. На каждое разведение используют 15 КЭ. Если полученная величина специфической активности СО отличается от указанной в паспорте, то вычисляют поправочный коэффициент (Kn) чувствительности данной партии КЭ к вирусу вакцины по формуле: , где: Ac - специфическая активность СО, указанная в паспорте, ООЕ/мл; А1 - полученная специфическая активность СО, ООЕ/мл. Результаты определения специфической активности испытуемой серии препарата умножают на поправочный коэффициент Kn. Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные препараты". Транспортирование и хранение. При температуре от 2 до 8 °С. --- ## Иллюстрации $37 \pm 1$ $120 \pm 1$ $0,1 \pm 0,01$ $50 \pm 5$ $37 \pm 1$ $0,10 \pm 0,05$ $37 \pm 1$ $A = 10 \cdot \frac{B}{C \cdot d \cdot e}$ $K_{n} = \frac{A_{c}}{A_{1}}$