--- title: "Без названия" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/bez-nazvaniya-2267" --- ## Без названия # Документ 23729 **МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ** **ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ** | Вакцина для профилактики гепатита А культуральная очищенная концентрированная адсорбированная инактивированная жидкая | ФС.3.3.1.0029.15
Взамен ВФС 42-2743-96 | | --- | --- | Настоящая фармакопейная статья распространяется на вакцину для профилактики гепатита А культуральную, очищенную концентрированную адсорбированную инактивированную жидкую, предназначенную для профилактики гепатита А, которая представляет собой суспензию инактивированных вирионов вируса гепатита А (ВГА), выращенных на разрешенной для производства вакцин культуре перевиваемых клеток, очищенных, концентрированных и адсорбированных на геле алюминия гидроксида. Готовую форму вакцины выпускают в жидком виде в ампулах для внутримышечного введения. Препарат предназначен для профилактики вирусного гепатита А у взрослых (доза 1 мл) и детей (доза 0,5 мл). **ПРОИЗВОДСТВО** Для производства вакцины против гепатита А используют штамм вируса гепатита А (ВГА), адаптированный к перевиваемой культуре клеток. Производственный штамм вируса является исходным для приготовления посевного вируса. Его хранят в ампулах при температуре минус () °С с ежегодной проверкой инфекционного титра и антигенной активности. Производственный штамм должен быть депонирован. Производственный штамм контролируется не реже 1 раза в год. Посевной вирус получают путем заражения производственным штаммом перевиваемой культуры клеток. Посевным вирусом может служить сбор 1-го и 2-го пассажа производственного штамма в указанной выше культуре. Сбор вируса осуществляют на 21 сут. инкубации зараженной культуры клеток при температуре () °С. Зараженные клетки собирают в 0,01 М фосфатно-солевом буферном растворе, pH (), пятикратно замораживают при температуре минус () °С, оттаивают при температуре () °С. Посевной вирус должен быть свободным от контаминации бактериями (в том числе микоплазмами), грибами и посторонними вирусами; должен обладать антигенной специфичностью и репродуктивной активностью. Инфекционный титр вируса должен быть не ниже 105,5 ТЦД50/мл при заражении перевиваемой культуры клеток. Посевной вирус хранят при температуре не выше минус () °С с ежегодным контролем его инфекционного титра. Состав на 1 мл (1 прививочная доза для взрослых), если нет других указаний в нормативной документации: - инактивированный антиген вируса гепатита А - не менее 320 ИФА единиц; - алюминия гидроксид - от 0,35 до 0,65 мг; - формальдегид - не более 0,15 мг; - 0,01 М фосфатно-солевой буферный раствор - до 1 мл. Вакцина не содержит консервантов и антибиотиков. Состав на 0,5 мл (1 прививочная доза для детей), если нет других указаний в нормативной документации: - инактивированный антиген вируса гепатита А - не менее 160 ИФА единиц; - алюминия гидроксид - от 0,17 до 0,32 мг; - формальдегид - не более 0,07 мг; - 0,01 М фосфатно-солевой буферный раствор - до 0,5 мл. Вакцина не содержит консервантов и антибиотиков. **ИСПЫТАНИЯ** Описание. Слегка опалесцирующая суспензия, при отстаивании разделяющаяся на 2 слоя: верхний - прозрачная, бесцветная жидкость; нижний - осадок белого цвета, легко разбивающийся при встряхивании, без образования хлопьев и посторонних включений. Подлинность. Препарат должен быть идентичным антигену вируса гепатита А и должен индуцировать у мышей образование антител к вирусу гепатита А (ВГА), наличие которых определяют в соответствии с ОФС "Метод иммуноферментного анализа" с помощью коммерческих тест-систем для выявления антител к вирусу гепатита А. Извлекаемый объем. Не менее номинального. Определение проводят в соответствии с ОФС "Извлекаемый объем лекарственных форм для парентерального применения". Размер частиц. Суспензия должна свободно проходить в шприц через иглу N 0840. Определение проводят визуально в соответствии с ОФС "Лекарственные формы для парентерального применения". Время седиментационной устойчивости. Суспензия, образующаяся при встряхивании, не должна расслаиваться в течение не менее 5 мин. Определение проводят визуально в соответствии с ОФС "Лекарственные формы для парентерального применения". pH. От 7,0 до 7,6. Испытания проводятся потенциометрическим методом в соответствии с ОФС "Ионометрия". Стерильность. Препарат должен быть стерилен. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Стерильность". Пирогенность. Препарат должен быть апирогенным. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Пирогенность". Аномальная токсичность. Препарат должен быть нетоксичным. Испытания проводят в соответствии с ОФС "Аномальная токсичность". Специфическая активность. Испытания проводят путем определения содержания вирусного антигена гепатита А методом иммуноферментного анализа (ИФА) или по иммуногенной активности вакцины биологическим методом. Определение содержания вирусного антигена гепатита А (АГ ВГА) Содержание вирусного антигена должно быть не менее 320 ИФА единиц в 1 дозе вакцины для взрослых и не менее 160 ИФА единиц в 1 дозе вакцины для детей; определение проводят методом ИФА с использованием коммерческих тест-систем для выявления антигена ВГА. Определение содержания антигена ВГА в вакцине проводят параллельно с определением содержания антигена в стандартном образце (СО) вакцины. Отношение содержания АГ ВГА в 1 дозе вакцины к содержанию АГ ВГА в СО должно находиться в пределах от 0,66 до 1,66 при статистической обработке результатов методом параллельных линий. Постановку контроля осуществляют в соответствии с инструкцией по применению используемой тест-системы. Перед постановкой ИФА проводят предварительную десорбцию АГ ВГА с алюминием гидроксида, центрифугируя 1000 мкл испытуемого образца вакцины и СО при 6000 об/мин в течение 5 мин при комнатной температуре. Из 900 мкл надосадочной жидкости готовят ряд последовательных двукратных разведений от 1:2 до 1:4 и осуществляют постановку ИФА с определением титра АГ ВГА в надосадочной жидкости (расчет N1). Осадок растворяют в 900 мкл буферного раствора для десорбции, тщательно перемешивают и оставляют на ночь при температуре от 2 до 8 °С. Затем центрифугируют при 6000 об/мин в течение 5 мин при комнатной температуре. Из надосадочной жидкости готовят ряд последовательных двукратных разведений от 1:2 до 1:64 и определяют титр АГ ВГА методом ИФА (расчет N2). Расчет N1 и N2 осуществляют по формуле: **N = (T · V1)V2,** где: N - расчетное количество ИФА единиц в 1 мл готовой формы вакцины; T - обратная величина титра антигена ВГА в ИФА; V1 - объем 1 дозы вакцины, мкл; V2 - объем исследуемого образца в ИФА, мкл. Суммарное содержание антигена ВГА в вакцине (N1 и N2) должно быть не менее 320 ИФА единиц в 1 дозе вакцины для взрослых и не менее 160 ИФА единиц в 1 дозе вакцины для детей. Примечание. Приготовление буферного раствора для десорбции. В градуированную посуду вместимостью 50 мл помещают 50 мг желатина, 7,16 г натрия фосфорнокислого двузамещенного, 55 мг трилона Б (ЭДТА), 50 мкл твина-20 и растворяют в 40 мл воды очищенной, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор хранят при комнатной температуре не более 1 мес. Определение иммуногенной активности ВГА Вакцина должна индуцировать образование антител к вирусу гепатита А у однократно иммунизированных белых нелинейных мышей (самцов) массой 18-20 г. Определение содержания антител к ВГА в сыворотке крови мышей проводят методом ИФА с определением ИД50, которая должна составлять не менее 6. В качестве образца сравнения используют СО вакцины. Отношение ИД50 в испытуемой вакцине к ИД50 в СО должно находиться в пределах от 0,33 до 3 (Р = 0,95) при статистической обработке результатов методом параллельных линий. Метод основан на определении дозы вакцины, способной вызвать образование антител к вирусу гепатита А у 50% мышей. Для проведения теста готовят серию разведений испытуемого образца и СО вакцины от 1:2 до 1:32. Для разведения используют плацебо, в состав которого входит 0,01 М фосфатно-солевой буферный раствор (pH 7,0-7,6) и гель алюминия гидроксида в концентрации от 0,35 до 0,65 мг/мл (по А1+3). Методом случайной выборки формируют опытные и контрольную группы по 10 мышей в каждой. Дополнительно 10 мышей оставляют интактными. Количество опытных групп должно соответствовать количеству используемых разведений. Мышам опытных групп вводят разведения вакцины в объеме 1 мл подкожно в 2 точки, используя 1 разведение препарата на 1 опытную группу. Мышам контрольной группы по той же схеме и тем же способом вводят плацебо. Через 28-30 дней животных обескровливают и готовят сыворотку. Каждый полученный образец сыворотки тестируют на наличие антител к вирусу гепатита А, используя коммерческие иммуноферментные тест-системы для выявления антител к вирусу гепатита А. Постановку и учет результатов осуществляют в соответствии с инструкцией по применению тест-системы. Результаты контроля учитывают, если все образцы сывороток интактных и контрольной групп мышей идентифицированы как отрицательные. В этом случае расчет ИД50 осуществляют по результатам, полученным в опытных группах, по методу Кербера в соответствии с формулой: , где: DN - максимальная величина вводимой дозы; lg DN - десятичный логарифм отношения каждой последующей дозы к предыдущей (десятичный логарифм кратности испытанных разведений); Li - отношение числа иммунных животных к числу всех вакцинированных животных конкретными разведениями; - сумма всех значений L. ИД50 = antilg(-lg ИД50), где: ИД50 - разведение вакцины, вызывающее выработку антител у 50% животных. Полнота сорбции антигена. Количество несвязанного антигена ВГА в вакцине должно быть не более 6% от общего количества антигена ВГА. Образец вакцины (1000 мкл) и СО центрифугируют при 6000 об/мин в течение 5 мин при комнатной температуре. Содержание несвязанного антигена определяют в надосадочной жидкости методом ИФА с использованием коммерческих тест-систем для определения антигена ВГА в соответствии с инструкцией по применению и выражают в процентах от общего количества антигена ВГА. Формальдегид. Не более 0,15 мг/мл. Определение проводят в соответствии с ОФС "Количественное определение формальдегида в иммунобиологических лекарственных препаратах". Алюминия гидроксид. От 0,35 до 0,65 мг/мл (в пересчете на А1+3). Испытания проводят в соответствии с ОФС "Определение ионов алюминия в сорбированных иммунобиологических лекарственных препаратах". Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные препараты". Дополнительная информация: указывается состав на 1 мл (1 прививочная доза для взрослых). Наносятся предупредительные надписи: "Перед употреблением встряхивать", "Хранить в не доступном для детей месте", "Для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических учреждений", "Не замораживать". Транспортирование и хранение. При температуре от 2 до 8 °С. Не замораживать. --- ## Иллюстрации $20 \pm 2$ $37 \pm 2$ $7,6 \pm 0,2$ $20 \pm 2$ $18 \pm 2$ $20 \pm 2$ $lg\text{ИД}_{50} = lgD_{N} - \delta(\sum Li - 0,5)$ $\sum Li$