--- title: "Без названия" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/bez-nazvaniya-2261" --- ## Без названия # Документ 23723 **МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ** **ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ** | Вакцина чумная живая, таблетки для рассасывания | ФС.3.3.1.0021.15
Взамен ФС 42-3346-96 | | --- | --- | Настоящая фармакопейная статья распространяется на вакцину чумную живую, таблетки для рассасывания, представляющую собой лиофилизированную живую культуру вакцинного штамма чумного микроба Yersinia pestis EV линии НИИЭГ. Вакцина предназначена для профилактики чумы и вызывает развитие специфического иммунитета длительностью до 1 года. **ПРОИЗВОДСТВО** Все этапы производства вакцины должны гарантировать соблюдение установленных надлежащих правил, а также качество лекарственного препарата, гарантирующее его безопасность для человека. Вакцинный штамм Y. pestis EV линии НИИЭГ должен обладать типичными морфологическими, культуральными и биохимическими свойствами; содержать плазмиды pFra, пестициногенности (pPst) и кальций зависимости (pCad) с молекулярными массами 60, и MDa соответственно; не должен вызывать гибели морских свинок и потери их массы при введении им дозы 15 · 109 микробных клеток (м.к.). Иммуногенность штамма по величине ED50 при подкожном введении не должна превышать для морских свинок 1 · 103 м.к., для белых мышей - 1 · 104 м.к. Перед приготовлением очередной серии вакцинного штамма Y. pestis EV линии НИИЭГ проводят его пассаж через организм морской свинки с последующим отбором типичных колоний, выросших на чашках Петри из посевов селезенки или регионарных лимфатических узлов. Технология изготовления вакцины предусматривает получение посевных культур Y. pestis EV линии НИИЭГ I, II и III генераций; процесса накопления биомассы, необходимой для приготовления микробной взвеси определенной концентрации; последующий розлив, замораживание, сублимационное высушивание; приготовление гранулята и таблеток; фасовку и упаковку препарата. В зависимости от технологии приготовления вакцины в процессе производства используются вспомогательные вещества, разрешенные для использования в иммунобиологической промышленности: лактоза, декстрин, тиомочевина, аскорбиновая кислота, глюкоза, ментол, крахмал картофельный, какао-порошок, ванилин, кальция стеарат. На стадиях приготовления посевных культур определяют pH, концентрацию микробных клеток и отсутствие посторонней микрофлоры. **ИСПЫТАНИЯ** Описание. Таблетка светло-коричневого цвета правильной круглой формы с цельными краями, ровной и плоской поверхностью. Имеет запах какао, ванилина и ментола. Определение проводят визуально. Подлинность. Должна содержать чистую культуру вакцинного штамма Y. pestis EV линии НИИЭГ. Определение проводят иммунофлуоресцентным методом. Таблетку вакцины растирают в ступке, добавляют 49 мл 0,9% раствора натрия хлорида и тщательно перемешивают. Из полученной суспензии готовят три мазка, которые окрашивают иммуноглобулинами чумными диагностическими флуоресцирующими и просматривают под фазовоконтрастным и люминесцентным микроскопами не менее 50 полей зрения в каждом. В мазках из препарата микробные клетки должны светиться по периферии ярко-зеленым цветом. Допускается наличие не более 1 неокрашенной микробной клетки в 50 полях зрения. Распадаемость. Таблетка должна распадаться в течение 15 мин. Определение проводят в соответствии с ОФС "Распадаемость таблеток и капсул". Средняя масса. От 0,6 до 1,0 г. Определение проводят в соответствии с ОФС "Однородность массы дозированных лекарственных форм". pH растворенного препарата. От 6,8 до 7,4. Таблетку растворяют в 50 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС "Ионометрия". Потеря в массе при высушивании. Не более 10,0%. Определение проводят гравиметрическим методом в соответствии с ОФС "Потеря в массе при высушивании". На каждый из двух параллельных анализов используют навеску из 3 измельченных таблеток. Микробиологическая чистота. Таблетка может содержать не более 1 · 103 микробных клеток (м.к.) бактерий непатогенных микроорганизмов. Таблетку берут стерильным пинцетом, помещают во флакон вместимостью 100 мл, содержащий 49 мл стерильного 0,9% раствора натрия хлорида. Флакон закрывают стерильной пробкой, устанавливают на платформу шуттель-аппарата и тщательно перемешивают до полного растворения таблетки и по 0,5 мл засевают на 5 чашек Петри с агаром Хоттингера, pH (). Посевы инкубируют при температуре () °С в течение 5 сут., после чего подсчитывают число выросших колоний. Количество живых микробных клеток (N) непатогенных микроорганизмов в таблетке рассчитывают по формуле: , где: - суммарное количество колоний, выросших на чашках Петри; 49 - объем 0,9% раствора натрия хлорида, использованного для растворения таблетки, мл; m - количество чашек Петри, использованных для посева; шт.; 0,5 - объем суспензии, высеваемой на 1 чашку, мл. При обнаружении хотя бы в одной таблетке более 1 · 103 живых м.к. испытание повторяют на удвоенном количестве таблеток. Если при повторном испытании число посторонних микроорганизмов в таблетке превышает 1x10 м.к., препарат считают не выдержавшим испытание. Специфическая безопасность. Вакцина должна быть специфически безопасной. Испытание проводят на морской свинке массой () г. Таблетку вакцины растирают в ступке, добавляют 49 мл 0,9% раствора натрия хлорида и тщательно перемешивают., Полученную суспензию разводят до концентрации 15 · 109 м.к./мл и вводят подкожно 1 мл одной морской свинке в область внутренней поверхности бедра. На 6-е сутки морскую свинку взвешивают, подвергают эвтаназии, отмечают патологоанатомические изменения, обнаруживаемые при вскрытии. Печень, селезенку, легкие, регионарные лимфатические узлы, кровь и ткани из места введения высевают методом отпечатков на чашку Петри с агаром Хоттингера, pH (), с добавлением натрия сернистокислого в количестве 0,25 г на 1 л среды, и чашку Петри с агаром Хоттингера, pH (), с добавлением генцианвиолета в количестве 0,05 г на 1 л среды. Посевы инкубируют при температуре () °С в течение 3 сут. Вакцина не должна вызывать у морской свинки потери массы к 6 сут. после введения больше, чем на 20%, не должна вызывать видимых патологоанатомических изменений в легких - кровоизлияний, очагов воспаления, гранулем, абсцессов; в посевах крови и легких не должно быть роста чумного микроба. В месте введения допускается развитие кровоизлияния и инфильтрата подкожной клетчатки, переходящих в некроз. Во внутренних органах (селезенка и печень) допустимо развитие ограниченной узелковой реакции. Специфическая активность. 1. Содержание живых микробных клеток. Таблетка должна содержать от 30 · 109 до 50 · 109 живых микробных клеток вакцинного штамма Y. pestis EV линии НИИЭГ. При определении количества живых микробных клеток в вакцине используют концевые химически чистые пипетки, пробирки с 0,9% раствором натрия хлорида должны быть охлаждены до температуры 2 до 8 °С. Таблетку растирают в ступке, добавляют 49 мл 0,9% раствора натрия хлорида и тщательно перемешивают. Полученную суспензию вакцины разводят в 0,9% растворе натрия хлорида последовательно десятикратно от 10-1 до 10-7, используя для каждого разведения отдельную пипетку. Из разведения 10-7 высевают по 0,1 мл на 5 чашек Петри с агаром Хоттингера с добавлением стимулятора роста (кровь гемолизированная до 1% концентрации или натрий сернистокислый (0,25 г на 1 л среды). Посевы инкубируют в течение 3 сут. при температуре () °С, затем подсчитывают общее количество колоний на 5 чашках Петри. Количество живых микробных клеток (N) в таблетке рассчитывают по формуле: , где: - суммарное количество колоний, выросших на чашках; 108 - степень разведения; 49 - объем 0,9% раствора натрия хлорида, использованного для растворения таблетки, мл; m - количество чашек Петри, используемых для посева. 2. Иммуногенность. ED50 для морских свинок не должна превышать 1 · 104, для белых мышей - 4 · 104 живых микробных клеток. Испытания проводят на морских свинках массой () г и на белых нелинейных мышах массой () г 3 таблетки вакцины чумной живой растирают в ступке и растворяют в 0,9% растворе натрия хлорида. Объем растворителя определяют, исходя из заранее определенного количества живых клеток в таблетке, с таким расчетом, чтобы 1 мл вакцины содержал 1 · 109 живых м.к. Далее определение проводят в соответствии с методикой, изложенной в ФС "Вакцина чумная живая". Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные препараты". Хранение и транспортирование. При температуре от 2 до 8 °С. --- ## Иллюстрации $\approx 6$ $\approx 47$ $7,1 \pm 0,1$ $37 \pm 1$ $N = \frac{\sum_{n} \cdot 49}{0,5 \cdot m}$ $\sum n$ $275 \pm 25$ $7,2 \pm 0,1$ $7,2 \pm 0,1$ $27 \pm 1$ $27 \pm 1$ $N = \frac{\sum_{n} \cdot 10^{8} \cdot 49}{m}$ $\sum n$ $275 \pm 25$ $19 \pm 1$