--- title: "Без названия" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/bez-nazvaniya-2256" --- ## Без названия # Документ 23717 **МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ** **ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ** | Вакцина сибиреязвенная комбинированная | ФС.3.3.1.0017.15
Взамен ГФ Х, ст. 713
ФС 42-3297-96 | | --- | --- | Настоящая фармакопейная статья распространяется на вакцину сибиреязвенную комбинированную, лиофилизат для приготовления суспензии для подкожного введения, представляющую собой лиофилизированную в стабилизирующей среде смесь взвеси живых спор вакцинного штамма Bacillus anthracis СТИ-1 и концентрированного протективного сибиреязвенного антигена (ПА), адсорбированного на геле алюминия гидроксида. Вакцина предназначена для профилактики сибирской язвы и обеспечивает развитие специфического иммунитета продолжительностью до 1 года. **ПРОИЗВОДСТВО** Вакцинный штамм В. anthracis СТИ-1 должен иметь типичные культуральные, морфологические, биохимические и генетические свойства; должен обладать остаточной вирулентностью для морских свинок (при введении 50 млн. спор) и белых мышей (10 млн. спор); должен вызывать гибель 50-70% животных; должен быть специфически безопасным для кроликов при введении им 250 млн. спор; индекс иммунитета для морских свинок должен быть не ниже 10000. Перед приготовлением очередной серии вакцинного штамма проводят его анимализацию путем пассажа через организм морской свинки с последующим отбором типичных колоний, выросших на плотной питательной среде при посеве селезенки. Технология изготовления вакцины сибиреязвенной комбинированной состоит из получения посевной культуры B. anthracis СТИ-1; глубинного культивирования посевной культуры B. anthracis СТИ-1 для получения нативной споровой культуры; приготовления концентрированной споровой взвеси; приготовления концентрированного протективного антигена (ПА) методом сепарирования нативной культуры штамма B. anthracis СТИ-1 с последующим концентрированием и стерилизующей фильтрацией на установках ультрафильтрации или методом микрофильтрации; сорбции концентрированного ПА на геле алюминия гидроксида; стабилизации сорбированного ПА формальдегидом с последующей отмывкой 0,9% раствором натрия хлорида; смешивания сорбированного концентрированного ПА с концентратом споровой культуры B. anthracis СТИ-1 с последующим розливом, замораживанием, сублимационным высушиванием, герметизацией и упаковкой препарата. В качестве стабилизатора используется сахароза, разрешенная для использования при производстве иммунобиологических лекарственных препаратов. На стадиях приготовления посевной и нативных культур контролируют pH, концентрацию спор, отсутствие посторонней микрофлоры. Качество ПА определяют по следующим показателям: стерильность, pH, содержание общего азота, алюминия гидроксида и формальдегида. **ИСПЫТАНИЯ** Описание. Пористая масса серовато-белого цвета. Восстановленный препарат - гомогенная суспензия серовато-бежевого цвета без посторонних примесей и включений. Подлинность. Определение подлинности вакцинного штамма В. anthracis СТИ-1 проводят микроскопическим методом. В мазках, окрашенных по Цилю-Нильсену, должны наблюдаться овальные споры розового цвета с красным ободком по периферии. Определение подлинности ПА проводят методом иммунодиффузии в агаре по Оухтерлони с иммуноглобулином противосибиреязвенным лошадиным. Методика изложена в разделе "Специфическая активность". Время растворения. Вакцина должна полностью растворяться течение 5 мин в 5 мл 0,9% раствора натрия хлорида при встряхивании. Время седиментационной устойчивости. Суспензия не должна расслаиваться в течение 5 мин. Определение проводят в соответствии с ОФС "Лекарственные формы для парентерального применения". Размер частиц. Суспензия должна свободно проходить в шприц через иглу N 0840. Определение проводят в соответствии с ОФС "Лекарственные формы для парентерального применения". pH. От 7,1 до 7,3. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС "Ионометрия". Для испытания используют содержимое 5 ампул (флаконов) препарата, разведенного в 25 мл 0,9% раствора натрия хлорида, pH (). Средняя масса и отклонение от средней массы. Коэффициент вариации массы вакцины в ампулах (флаконах) должен быть не более 5%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Однородность массы дозированных лекарственных форм". Потеря в массе при высушивании. Не более 5,0%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Потеря в массе при высушивании". Общий азот. Не более 0,4 мг/мл. Определение проводят в соответствии с ОФС "Определение общего азота с реактивом Несслера в иммунобиологических лекарственных препаратах". Алюминия гидроксид. Не более 2,7 мг/мл алюминия (III). Определение проводят в соответствии с ОФС "Определение ионов алюминия в сорбированных иммунобиологических лекарственных препаратах". Формальдегид. Не более 0,001%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Количественное определение формальдегида в иммунобиологических лекарственных препаратах". Полнота сорбции антигена. Надосадочная жидкость должна содержать не более 25 ЕА/мл (единиц активности в мл). Содержимое ампулы (флакона) ресуспендируют в 5 мл 0,9% раствора натрия хлорида, перемешивают и отделяют осадок центрифугированием при 2000 об/мин в течение 30 мин. Отбирают 1 мл надосадочной жидкости и разводят в 2; 4 и 8 раз 0,2 М фосфатным буферным раствором, pH (). Определение полноты сорбции антигена проводят в реакции иммунодиффузии в агаре по Оухтерлони с иммуноглобулином противосибиреязвенным лошадиным. Приготовление агара, постановку реакции и расчет результатов анализа проводят, как описано в разделе "Специфическая активность". Полноту сорбции оценивают по максимальному разведению супернатанта, при котором еще образуется видимая линия преципитации с иммуноглобулином противосибиреязвенным, и выражают в единицах активности, содержащихся в 1 мл (ЕА/мл). Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов. Вакцина не должна содержать посторонних микроорганизмов и грибов. Определение проводят, в соответствии с ФС "Вакцина сибиреязвенная живая". Специфическая безопасность. Вакцина должна быть безопасной. Вакцину растворяют в 5 мл 0,9% натрия хлорида для инъекций. Испытание проводят по методике, описанной в ФС "Вакцина сибиреязвенная живая". Животным вводят вакцину подкожно в область внутренней поверхности каждого бедра в объеме 1,25 мл (общий объем - 2,5 мл). Специфическая активность 1. Количество живых спор. Процент живых спор на плотной питательной среде должен составлять не менее 30 от расчетной концентрации. В 1 мл препарата после ресуспендирования расчетная концентрация составляет () млн. спор B. anthracis СТИ-1. В каждую из 3 ампул (флаконов) вносят 5 мл воды очищенной, встряхивают до образования гомогенной взвеси. Далее определение проводят по методике в соответствии с ФС "Вакцина сибиреязвенная живая". 2. Активность (ПА. Активность ПА должна быть не менее 50 ЕА/мл. Определение проводят методом иммунодиффузии в агаре по Оухтерлони с иммуноглобулином противосибиреязвенным лошадиным. Для приготовления агара к 1 л 0,1 М фосфатного буферного раствора, pH () добавляют 1% агара, 1% желатина и 0,25% раствор фенола. Агар стерилизуют 15 мин при температуре () °С и в горячем виде осветляют центрифугированием при 2000 об/мин в течение 5 мин. Готовый агар разливают в чашки Петри, помещенные на строго горизонтальную поверхность, слоем толщиной 6 мм. Стерильным штампом-пробойником вырезают 1 центральную и 6 радиальных лунок, расстояние между центрами которых составляет 10 мм (можно выполнять этот этап по трафарету). Агар из лунок удаляют. Вакцину последовательно разводят 0,2 М фосфатным буферным раствором, pH (), до разведений 1:2; 1:4; 1:6; 1:8. В центральную лунку вносят 0,04 мл цельного иммуноглобулина противосибиреязвенного лошадиного, а в радиальные лунки по часовой стрелке - все разведения вакцины, начиная с цельного неразведенного препарата. Чашки помещают в эксикатор, содержащий воду очищенную, при температуре () °С в течение 3 сут. Предварительный учет результатов проводят через 24 ч, окончательный - на 3 сут. Активность ПА оценивают по максимальному разведению вакцины, при котором образуется видимая линия преципитации с иммуноглобулином противосибиреязвенным, и выражают в единицах активности (ЕА/мл). Расчет ПА (А) в ЕА/мл проводят по формуле: , где: T - разведение вакцины, при котором наблюдается видимая линия преципитации; V - объем пробы, внесенный в лунку, мл. 3. Иммуногенность для морских свинок. Индекс иммунитета должен быть не менее 25000 (отношение величины LD50 заражающего тест-штамма B. anthracis 71/12 для иммунизированных животных к величине LD50 для неиммунизированных животных). В 4 образца с вакциной вносят по 5 мл 0,9% раствора натрия хлорида для инъекций, встряхивают до образования гомогенной взвеси. Иммунизирующую дозу в объеме 0,5 мл вводят морским свинкам подкожно в область внутренней поверхности бедра. Далее определение проводят в соответствии с ФС "Вакцина сибиреязвенная живая". 4. Иммуногенность для кроликов. Препарат должен предохранять от гибели не менее 8 из 10 кроликов, привитых подкожно одной человеческой дозой вакцины, при подкожном инфицировании 100 LD50 вирулентного штамма сибиреязвенного микроба. Испытание проводят на кроликах обоего пола массой () кг. Животных иммунизируют однократно подкожно в область внутренней поверхности бедра в объеме 0,5 мл (одна человеческая доза вакцины). Одновременно 3 контрольным кроликам вводят по 0,5 мл стерильного 0,9% раствора натрия хлорида. Для определения LD50 тест-культуры B. anthracis Ч-7 интактных кроликов инфицируют дозами 101; 102; 103 и 104 спор. Каждую дозу вводят не менее чем 3 кроликам подкожно в паховую область задней конечности в объеме 1 мл. Наблюдение за животными проводят в течение 10 сут. Рассчитывают LD50 по методу Кербера в модификации И.П.Ашмарина. Через 10 сут. кроликов (10 иммунизированных и 3 контрольных - неиммунизированных) заражают 100 LD50 споровой культуры B. anthracis Ч-7. Наблюдение за животными проводят в течение 10 сут. Погибших животных вскрывают и делают посев 0,1 мл крови из сердца на чашки Петри с агаром Хоттингера, pH (). Сибиреязвенную инфекцию подтверждают в случае обнаружения роста, характерного для сибиреязвенного микроба. Зараженные контрольные (неиммунизированные) кролики должны погибнуть в течение 3 сут. Растворители, выпускаемые в комплекте с препаратом. 0,9% раствор натрия хлорида. Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС "Иммунобиологические лекарственные препараты". Транспортирование и хранение. При температуре от 2 до 8°С. --- ## Иллюстрации $7,1 \pm 0,1$ $7,2 \pm 0,1$ $100 \pm 20$ $7,8 \pm 0,1$ $115 \pm 2$ $7,2 \pm 0,1$ $19 \pm 1$ $A = \frac{T}{V}$ $2,25 \pm 0,25$ $7,2 \pm 0,1$