Методические указания по определению имазаметабенз-метила в воде, почве, растительных объектах газожидкостной хроматографией
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6261-91)
29 июля 1991 г. № 6261-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ИМАЗАМЕТАБЕНЗ-МЕТИЛА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, РАСТИТЕЛЬНЫХ ОБЪЕКТАХ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
Калинин В.А. — к.с.н., профессор, зав. кафедры ТСХА; Пушкина Г.П. — к.б.н.
Российский институт лекарственных культур: Борисов Г.С. — зав. КТЛ РРСТАЗР: Федорова Н.Е. — к.х.н., МНИИГ им. Эрисмана.
Настоящие методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕПАРАТА
Химическое название — имазаметабенз-метил.
Смесь изомеров: метил-6-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-m-толуат; метил-6-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-p-толуат (смесь изомеров). Торговое название Ассерт, ф. Цианамид, США.
Эмпирическая формула: C_{16}H_{20}N_{2}O_{3}
Соотношение изомеров: p:m = 63:37 (не более)
Рекомендован для применения на зерновых культурах.
2. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИМАЗАМЕТАБЕНЗ-МЕТИЛА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, РАСТИТЕЛЬНЫХ ОБЪЕКТАХ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на экстракции пестицида из анализируемых проб 1%-ным раствором соляной кислоты в смеси органических растворителей (ацетон + метанол = 1:1), очистке экстракта н-гексаном, перераспределении пестицида из ацетоно-метанольной среды в хлороформ при pH = 3,5 и дальнейшем определении препарата методом газожидкостной хроматографии с использованием детектора по захвату электронов.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
Число параллельных определений — 5.
Относительное стандартное отклонение:
Доверительный интервал среднего при n = 5, P = 0,95:
Предел обнаружения — 0,01 мг/кг (почва, растения); 0,005 мг/л (вода).
2.2. Реактивы и растворы
Ацетон, ос.ч., ТУ 6-09-3513-86.
н-гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.
Имазаметабенз, ан. стандарт, фирма Цианамид.
Натрий хлористый, насыщенный водный раствор.
Натрий сернокислый, безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76, промытый ацетоном и н-гексаном.
Соляная кислота, 1%-ный водный раствор и 0,5 М раствор
Стандартный раствор имазаметабенз-метила в ацетоне — 0,5 мкг/мл.
Смесь для экстракции: 1%-ная хлористо-водородная кислота в смеси ацетона и метанола (1:1): к 1 л метанола прибавляют 1 л ацетона и 20 мл концентрированной HCl и смешивают.
2.3. Посуда и оборудование
Воронки химические фильтровальные, ГОСТ 8613-75, d = 90 мм.
Воронки делительные, 250 мл, ГОСТ 8313-75.
Колбы конические, 100, 250 мл, ГОСТ 8613-75.
Мерные пипетки, 1, 2, 5, 10, 50 мл.
Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74.
Колбы грушевидные, ГОСТ 10394-72.
Стеклянная колонка длиной 1 м, диаметр 3 мм, заполненная неподвижной фазой SE-30 (5%) на хроматоне N-AW DMCS (0,16 — 0,20 мм).
Хроматограф «Цвет», «Кристалл-2000» или аналогичный, снабженный детектором по захвату электронов.
Испаритель ротационный, ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.
2.4. Отбор и хранение проб
2.4.1. Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» от 21.08.79 г., № 2051-79.
Пробы хранят при необходимости в холодильнике.
2.5. Описание определения
2.5.1 Экстракция
Почва. Почву сушат на воздухе, просеивают через сито (100 меш), берут навеску в количестве 50 г, помещают в коническую колбу, прибавляют 100 мл смеси для экстракции (1%-ная HCl, метанол + ацетон = 1:1) и энергично встряхивают на аппарате для встряхивания 15 мин.
Декантируют пробу через бумажный фильтр («синяя лента»), а к пробе снова приливают смесь для экстракции (100 мл) и встряхивают 15 мин. Фильтруют пробу на воронке Бюхнера, используя бумажный фильтр («синяя лента»). Промывают пробу почвы на фильтре смесью для экстракции. Фильтраты объединяют, переносят в делительную воронку емкостью 500 мл, прибавляют 50 мл н-гексана, энергично встряхивают 30 секунд. Ждут, когда фазы разделятся. Нижнюю ацетоно-метанольную фазу переносят в другую аналогичную делительную воронку, снова прибавляют 50 мл н-гексана, встряхивают 30 сек. Гексан отбрасывают, когда слои разделятся. Нижний слой переносят в коническую колбу емкостью 500 мл. С помощью 5 M р-ра NaOH устанавливают pH раствора равной 3,5. После этого данный раствор переносят в делительную воронку, прибавляют 80 мл хлороформа и 50 мл дистиллированной воды, встряхивают в течение 5 минут. Ждут, когда фазы разделятся, и отделяют нижнюю хлороформенную фазу. Еще дважды повторяют экстракцию ацетоно-метанольной фазы 80 мл хлороформа. Хлороформенные экстракты объединяют, добавляют 50 мл 0,5 M раствора HCl и производят переэкстракцию пестицида в солянокислый раствор, встряхивая при этом растворы в течение 5 мин.
Когда слои разделятся, нижний хлороформенный слой переносят в другую делительную воронку, прибавляют 50 мл 0,5 M раствора соляной кислоты, встряхивают в течение 5 мин. Нижний хлороформенный слой отбрасывают, а солянокислый объединяют с предыдущим. Устанавливают pH среды, доводят ее значение до величины, равной 3,5, с помощью 5 M раствора NaOH. Из солянокислого раствора производят переэкстракцию пестицида снова в хлороформ. Для этого солянокислый раствор переносят в 500 мл делительную воронку, прибавляют 50 мл хлороформа, встряхивают 5 мин. Нижний хлороформенный слой отделяют, а к солянокислому снова прибавляют 50 мл хлороформа, встряхивают 5 мин.
Нижний слой отделяют. Хлороформенные экстракты объединяют, сушат безводным сульфатом натрия, упаривают на ротационном испарителе досуха. К сухому остатку добавляют 1 мл ацетона. Из этого раствора аликвоту 2 — 3 мкл вводят в газовый хроматограф.
Растения (пшеница, ячмень, солома).
Анализируемые объекты измельчают, солому режут ножом. Берут навеску 20 г, помещают ее в коническую колбу емкостью 250 мл, прибавляют 50 мл смеси для экстракции (1% HCl, метанол + ацетон = 1:1). Навеску соломы заливают таким количеством смеси, чтобы она была полностью покрыта растворителем. Пробы энергично встряхивают на аппарате для встряхивания 15 мин. Дальнейшие процедуры аналогичны таковым, описанным для анализа пестицида в почве.
Вода. В делительную воронку емкостью 250 мл помещают 100 мл анализируемой воды. Устанавливают pH = 3,5 с помощью 0,5 M раствора HCl. Прибавляют 50 мл хлороформа, встряхивают в течение 5 мин. После разделения слоев нижний хлороформенный слой отделяют, а к водной фазе прибавляют снова 50 мл хлороформа и встряхивают 5 мин. Нижний слой отделяют. Хлороформенные экстракты объединяют, сушат безводным сернокислым натрием и растворитель упаривают на ротационном испарителе досуха. К сухому остатку добавляют 1 мл ацетона. Аликвоту этого раствора (2 — 3 мкл) вводят в хроматограф.
2.5.2 Условия хроматографирования:
- рабочая шкала электрометра 20 \cdot 10^{- 12}A .
- скорость протяжки ленты 240 мм/час
- температура термостата колонки — 240 °C
- температура термостата детектора — 250 °C
- температура термостата испарителя — 275 °C
- скорость газа-носителя — азота через колонку — 40 мл/мин
2.6. Расчет результатов анализа
Количество пестицида (X), мг/кг или мг/л вычисляют по формуле:
X = \frac{C \cdot H_{2} \cdot V \cdot 100}{H_{1} \cdot V_{1} \cdot p \cdot K_{1}} , где
C — количество пестицида в стандартном растворе, введенном в хроматограф, мкг;
H_{1} — высота пика стандартного раствора пестицида, введенного в хроматограф, мм;
H_{2} — высота пика пестицида в пробе, мм;
V_{1} — объем экстракта, введенного в хроматограф, мкл;
p — масса анализируемой пробы, мл или г;
K_{1} — процент определения пестицида в данном виде почв, растений, обусловленный потерями при проведении анализа.
3. ТРЕБОВАНИЯ ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ
Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.