Методические указания по определению фенапанила в воде, почве, растениях методом хроматографии в тонком слое
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6257-91)
29 июля 1991 г. № 6257-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ФЕНАПАНИЛА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, РАСТЕНИЯХ МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИИ В ТОНКОМ СЛОЕ
Калинин В.А. — к.с.н., профессор, зав. кафедры ТСХА; Пушкина Г.П. — к.б.н.
Российский институт лекарственных культур: Борисов Г.С. — зав. КТЛ РРСТАЗР: Федорова Н.Е. — к.х.н., МНИИГ им. Эрисмана.
Настоящие методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕПАРАТА
Фенапанил является действующим веществом препарата «Систан», ф. Ром Хаас, США. Название по номенклатуре ИЮПАК: альфа-n-бутил-альфа фенил-1Н-имидазол-1-пропан-нитрил.
Эмпирическая формула: C_{16}H_{18}N_{3} .
Т. кип. 200 °C (75 мм рт. ст.). Растворимость: вода — 1%; ксилол, ацетон > 50%; этиленгликоль > 25%. Давление паров при 25 °C 1 \cdot 10^{- 3}\text{мм рт}.\text{ст}. \text{ЛД}_{50} технического продукта для крыс — 1590 мг/кг. Фунгицид и протравитель семян с широким спектром действия.
РАСТЕНИЯХ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на хроматографическом определении фенапанила в слое силикагеля после извлечения органическим растворителем.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
2.1.3 Избирательность метода
Определению могут мешать фунгициды и протравители из группы замещенных триазолов.
2.2. Реактивы и растворы
н-Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.
Фенапанил, аналитический стандарт, фирма Ром Хаас.
Сульфат натрия безводный, ч., ГОСТ 4166-81.
Хлористоводородная кислота, ч.д.а., ГОСТ 3118-77; 0,1 № раствор.
Проявляющий реактив — раствор бромфенолового синего (БФС) и нитрата серебра.
Раствор А: 100 мг бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона.
Раствор Б: 1 г нитрата серебра растворяют в 40 мл воды и прибавляют 120 мл ацетона.
Растворы А и Б сливают в мерную колбу на 200 мл и доводят ацетоном до метки. После обработки БФС пластинку обесцвечивают 2%-м раствором лимонной кислоты.
Стандартный раствор фенапанила с концентрацией 200 мкг/мл в ацетоне. Хранят в холодильнике не более 2-х месяцев.
2.3. Приборы и посуда
Посуда мерная по ГОСТ 1770-74.
Делительные воронки емкостью 500 мл, ГОСТ 10054-75.
Колбы конические емкостью 250 мл, ГОСТ 9737-75.
Ротационный испаритель с набором колб, ИР-1М, ТУ 25-11-917-76 (или аналогичного типа).
Камера хроматографическая, ГОСТ 10565-75.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-74.
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды», утвержденными МЗ СССР № 2051-79 от 21.08.79 г.
2.5. Проведение определения
2.5.1 Экстракция
Вода. 500 мл анализируемой пробы воды помещают в делительную воронку, подкисляют хлористоводородной кислотой до pH 5 — 5,5; образец хорошо перемешивают и препарат экстрагируют хлороформом трижды по 30 мл. Хлороформенные экстракты объединяют, сушат безводным сульфатом натрия и растворитель упаривают до объема 0,2 — 0,3 мл. Далее проводят определение методом ТСХ.
Почва, растения. Пробу (10 г почвы и 20 г растений) помещают в коническую колбу, заливают до полного покрытия пробы смесью ацетон:вода (7:3). Встряхивают периодически 30 мин. Сливают раствор, экстракцию повторяют дважды. Объединяют водно-ацетоновый раствор, переносят в делительную воронку, прибавляют 100 мл дистиллированной воды, перемешивают. Фенапанил экстрагируют хлороформом трижды по 30 мл, хлороформный экстракт объединяют, сушат безводным сульфатом натрия, упаривают до объема 0,2 — 0,3 мл. Далее проводят определение методом ТСХ.
2.5.2 Хроматографирование
Подготовленную пробу количественно наносят при помощи капиллярной пипетки на хроматографическую пластинку так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Центр пятна должен быть на расстоянии 2 см от нижнего края пластинки. Колбу с экстрактом 2 — 3 раза смывают небольшими порциями хлороформа, который также наносят в центр пятна. Справа и слева от пробы наносят серию стандартных растворов, содержащих 3, 5, 10 мкг пестицида. Пластинку с нанесенными растворами помещают в хроматографическую камеру, содержащую смесь растворителей хлороформ: ацетон (5:1). После поднятия фронта растворителя на 10 см пластинку вынимают и оставляют на несколько минут на воздухе для испарения растворителя. Затем пластинку обрабатывают раствором БФС. Фон пластинки обесцвечивают 2%-м раствором лимонной (уксусной кислоты). Фенапанил проявляется в виде пятна голубого цвета. Величина R_{f} = 0,45 \pm 0,05 .
Количественное определение пестицида проводят путем сравнения интенсивности окраски и площади пятна пробы и стандартного раствора. Прямолинейная зависимость между площадью, интенсивностью окраски пятна и концентрацией препарата в пятне соблюдается в интервале 3 — 10 мкг.
где X — содержание фенапанила в пробе, мг/кг, мг/л;
A — содержание фенапанила, найденное в хроматографируемом объеме, мкг;
3. ТРЕБОВАНИЯ ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ
Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.